RNA干扰药物对大脑：进展和挑战.doc

RNA干扰药物对大脑：进展和挑战*埃德加多罗德里格斯勒布朗，瑞安L.布德罗，1，1，：富康属戴维森1，2，3作者信息文章指出版权和许可证信息抽象RNAi的干扰（RNAi）是一个功能强大的基因沉默技术治疗人类疾病，抑制疾病相关的基因可能提供临床受益浩大的，具有巨大的潜力。在这里，我们回顾RNAi技术的发展，神经退行性疾病，影响中枢神经系统（CNS）作为一种治疗方式。我们概述前途的应用RNAi在中枢神经系统的临床前数据，并讨论关键的挑战（如交付和特异性），仍然是这些方法过渡到诊所。简介早在十几年前，安德鲁消防和克雷格梅洛描述双链RNA分子的能力来抑制线虫的基因表达，生物研究（1）打开一个新的前沿。这个高度特异性，在当时，百思不得其解观察被称为RNA干扰（RNAi）。在2001年，托马斯Tuschl领导的小组发现，小的双链RNA（21个核苷酸），可以在培养的哺乳动物细胞介导的RNAi，因此，他们提出，作为一个特定基因治疗人类疾病（2）RNAi技术可以适用。次年，几组取得有力的RNAi介导的基因抑制体内，最值得一提的是，成年小鼠的肝脏和大脑（3，4）。总之，这些研究结果已经点燃了RNAi的发展成一系列的收购和继承人类疾病的关键基因的表达可能会抑制临床获益的治疗方法。值得注意的是，刚刚过去的一年，戴维斯等人的研究。（5）成功RNAi介导的沉默在人类提供了第一个分子证据。RNA干扰作为一种治疗干预的前景提供了一个机会，以治疗多种疾病的有效选项目前不可用或有限。特别是，基于RNAi疗法正在研究的疾病，影响中枢神经系统（CNS），包括偶发性和遗传神经系统疾病，翻译多年的科学家和临床医生带来了挑战。最近的研究利用动物模型已经承诺支持RNA干扰（RNAi）疗法可以改善神经病理学和行为的表型的概念证明型数据。在这里，我们简要概述RNAi途径，并介绍了各种手段，通过它可以被操纵，以达到特定基因沉默。此外，我们讨论在中枢神经系统中的应用RNAi技术，并突出其潜在的治疗神经退行性疾病。最后，我们在一些关键的挑战，仍然是RNAi技术过渡到诊所反映。转到：RNAi技术的运作RNAi是一种重要的分子机制细胞命运决定，增殖和许多生物学过程（6）。细胞的RNAi机制结合的小分子RNA在调节基因的表达，并作为一种与生俱来的细胞反应病毒的入侵和转座子活动（图1）（7）。内源性RNA干扰基因调控主要是通过基因组编码小分子RNA称为小分子RNA（miRNAs）的发生。成熟的miRNA（19-25nt）从初级miRNA的转录（PRI-miRNA的），它含有茎环结构（即发夹）（8）处理。PRI-miRNA的表达后，裂解Drosha酶-DGCR8核微处理器的复杂，生产中间发夹RNA（6070元），被称为前驱体微RNA（前体miRNA），（9，10）。前的miRNA，其后Exportin将他们在那里进一步处理用的Dicer的含络合物，从而解放了小miRNA双链区域（11，12）的细胞质-5贩卖。将所得双工甲单链（指南的反义链），然后引入到RNA诱导的沉默复合物（RISC），然后结合并沉默目标靶基因（13，14）。目标压制的模式，主要取决于的互补程度近乎完美的靶转录裂解所需的碱基配对，而不完善的绑定（通常在一个目标3-UTR）诱导翻译抑制mRNA的降解。后者的情况代表了典型的基于miRNA的机制，值得注意的是，互补短绵延少6-7个基点可能足以引发基因沉默（15）的。图1。图内源性RNAi途径和手段增选机械。我们请读者最近的miRNA的生物合成和功能（7）深入审查。利用RNAi途径在过去的十年中，我们进一步了解miRNA的生物合成和基因沉默机制的发展促进了各种策略增选细胞的RNAi机制直接几乎所有基因的特异性沉默。这些基于RNAi技术已成为宝贵的分子工具来研究基因的功能，并正在调查许多人类疾病的治疗试剂。人为地诱导基因沉默的潜力取决于我们好好搞RNAi机制抑制RNA的设计能力，向他们介绍到靶细胞或组织。中央的RNAi效应，被称为小干扰RNAs（siRNAs），本质上是设计模仿成熟的miRNA双链，但表现出完美的互补预定目标成绩单触发有力裂解沉默机制与导向链（图1）。值得注意的是，选择强有力的和高度特异性的siRNA序列是不完全琐碎，和众多的大规模siRNA敲除研究的实证评估研究人员定义多个的siRNA设计指南（14，16）。例如，一个重要的考虑因素是，siRNA序列应选择或操纵到RISC中，使有义链被降解（17，18），促进导的反义链的精确的载荷。此外，某些核苷酸的GC含量和位置的喜好也影响siRNA的疗效。最佳的siRNA设计的多面性，引导读者到其它文献的主题（19，20）。使用改进的稳定性和特异性，并减少免疫刺激性质（21）的经修饰的碱基的siRNA可通过化学合成。一旦进入细胞的胞内摄取和逃生或通过电的siRNAs从事Dicer酶-RISC阶段（图1）的RNAi途径。此外，siRNAs的可以表达为基础的系统纳入序列嵌入到设计模仿初级的miRNA（人造的miRNA）或前体miRNA（短发夹RNA的shRNA）（22，23）的茎环结构。这些RNA干扰触发器可以集成到各种表达系统的shRNA经典的转录聚合酶III启动子（如U6和H1），提供严格的控制开始和停止人工miRNA的转录位点，而更适合基于聚合酶II-系统，它使组织特异性表达策略（24）。基于这些发夹RNA干扰基板表达，通过RNAi途径处理，从而释放他们的siRNA序列。基于表达式的RNAi载体得起独特的基于病毒的输送系统，稳定的长期抑制基因和更好地控制时空沉默就业机会，其中与转基因方法等相关优势。迄今为止，非病毒和病毒的方法已被成功地达到RNAi介导的基因沉默在多种组织中，包括脑和脊髓。对于治疗的发展，很大程度上取决于交付方式有针对性的组织或细胞的人口和所需的时间间隔沉默。可以通过直接实质内注射（25）合成的siRNA的局灶性交纳。此方法只限于小分子RNA的能力，扩散和渗透整个组织的靶细胞。此外，基因沉默的持续时间是有限的相对短的半衰期的siRNA，慢性击倒需要重复注射或留置续的或脉冲的输液装置。另外，长期的抑制基因的一个单一的设计，以表达茎环结构的RNA（26，27）的病毒注射后，是可以实现的。至于与非病毒性的战略，组织和转导靶细胞内病毒扩散的能力同样限制了他们的RNAi的交付能力（28）。慢病毒，能够整合到基因组中，针对增殖细胞时是有利的，因此，治疗性基因的表达可以通过细胞分裂维持，如果需要的话。与此相反，腺相关病毒（自动增值服务）可能是优选的，针对非分裂细胞（如神经元）。自动增值服务通常不整合，而是，游离基因仍然存在，因此，不易发生在宿主基因组中（29）之内引起的插入突变。陪同的文章在这个问题上的基因治疗中进一步讨论了基于病毒传递系统。随着各种RNAi的触发器和交付可供选择，研究人员必须决定哪个组合将产生一个合适的抑制RNA剂量，以实现强有力的和具体的沉默，在他们的实验设置。考虑到潜在的RNAi治疗诱导细胞毒性剂量优化仍然是一个重要的考虑因素。高水平的外生供给的RNAi基板，可能会干扰细胞功能的饱和RNAi机制，从而破坏天然miRNA介导的基因调控（30-32）。此外，人工抑制RNA的结合并调节意想不到的靶mRNA，称为脱靶基因沉默（33）的效果的潜力。关目标，主要发生在种子区域（2-8个核苷酸的siRNA）对意外的mRNA的3-UTR序列和指导平移镇压和不稳定的那些成绩单，类似的规范基于miRNA的沉默机制（34） 。总之，这些潜在副作用，可能产生严重的后果，例如，格林等人。（30）报告，高层次的shRNA表达，典型强聚合酶III发起人，在小鼠肝引起的病死率。随后的工作表明，从我们的实验室人工miRNA可能具有较低的毒性潜力。在比较研究中，我们发现的shRNA是更有效的，但在体外和在体内诱导毒性，而人工miRNA的表达在容忍的范围内较低的水平，同时保持强有力的基因沉默的能力（32，35）。总之，这些结果强调有必要考虑和监测RNAi实验的剂量。合成的siRNA的剂量是相当简单的。然而，最终抑制RNA水平表达为基础的系统，取决于许多因素（例如，载体平台，交付方式，选择启动子，发夹结构的RNAi途径组件的可用性），这很可能是唯一的每个实验设置。然而，科学家工具箱提供了一个广泛的RNAi的手段来确定合适的组合来追求他们的研究目标。转到：沉默中枢神经系统疾病对于主机的神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症（AD），帕金森（PD）和多聚谷氨酰胺（多聚谷氨酰胺）重复疾病，错误折叠的蛋白质出现异常积累中发挥核心作用，在疾病的发生和发展（36）。因此，神经毒性蛋白质的水平适度减少，预计将提供显着的治疗救灾。利用RNAi为基础的方法，调查人员已经成功地抑制疾病的表达，造成蛋白质在细胞和动物模型的神经退行性疾病，在很多情况下，改善神经病理学和行为的表型。阿耳茨海默氏病（AD）最常见的神经退行性疾病和全球性痴呆的一个首要原因，AD，其特征在于由大脑内的（37）的淀粉样蛋白斑和神经原纤维缠结（NFTs的）的存在下。淀粉样蛋白斑是由错误折叠的A肽，它是由淀粉样前体蛋白（APP）的蛋白水解加工。RNA干扰策略已经用于通过瞄准的APP的蛋白水解加工所需的酶的表达（例如，BACE1），或通过直接针对APP的表达（38，39），以减少A肽在体内。在每一种情况下，具有改进的神经病理学和存储器有关的表型相关的A肽水平的明显减少。其他AD的病理特征，NFTs的，是由过度磷酸化的头AD（41）（40），另一种治疗的目标。头不出现哺乳动物的脑功能是必不可少的，并在许多神经变性疾病（42）被牵连。值得注意的是，tau蛋白的基因敲除小鼠抗人A诱导的脑功能障碍（43，44）。虽然没有研究直接针对头表达的小鼠模型中的AD，彼德拉伊塔等。（41）最近阻止生产NFTS三重转基因AD小鼠沉默细胞周期蛋白依赖性激酶5（CDK5），这是需要tau蛋白磷酸化。因此，本研究验证CDK5的，间接的，可行的RNAi目标AD头。帕金森氏病（PD）的PD是第二个最常见的神经退行性疾病，病人的大脑往往充斥着路易体，主要包括-突触核蛋白（-SYN）（45，46）的蛋白质聚集。有趣的是，在- 顺式，以及基因的重复或三次重复的-syn型基因（SCNA）的单点突变与遗传性帕金森病（47）。这些数据导致调查针对-Syn的表达，RNA干扰作为一个合理的治疗帕金森病的方法（48-50）。至目前为止，研究已经取得了相互矛盾的结果，关于这一战略的有效性和耐受性，与黑质纹状体变性后大鼠脑消耗-Syn的水平（51）至少有一组报告。这是否是一个模型或特定序列的效果仍是未知。同时，作为遗传研究发现额外公认的治疗目标（即富含亮氨酸重 复激酶2），RNA干扰的方法可以用来验证它们在遗传和零星的PD模型。多聚谷氨酰胺重复疾病的家庭的多聚谷氨酰胺重复疾病的家庭由9显性遗传的单基因遗传性疾病：亨廷顿氏病（HD），齿状pallidoluysian萎缩，脊髓延髓肌肉萎缩和6的脊髓小脑性共济失调（SCA1-3，6，7和17）（52审阅-55）。在每一种情况下，否则不相关的基因在其编码区扩增的CAG三核苷酸重复伸展海港表达后产生突变蛋白包含一个扩展的多聚谷氨酰胺舒展。多聚谷氨酰胺扩展增益功能赋予了有毒各自的突变多聚谷氨酰胺的蛋白质，随着时间的推移肆虐 不同的神经元群体，致命地破坏了许多重要的细胞通路。polyQ蛋白介导的发病的确切机制尚不清楚，但是，对于每一个障碍，polyQ蛋白膨胀突变蛋白的表达驱动疾病的表现，从而使他们明显的单基因沉默为基础的治疗目标。因此，这个家族一直神经退行性疾病的在RNAi治疗发展的前沿，针对中枢神经系统，并鼓励概念证明的结果已被观察到的几个实例。鉴于这类研究已广泛评论别处（56，57），在这里我们着重突出一些最新进展。2004年，夏等人。（58）首次公布他们的开创性工作，展示的RNAi转基因小鼠模型SCA1的治疗潜力。从那时起，许多实验室曾用不同的RNAi策略抑制突变的多聚谷氨酰胺在啮齿类动物模型（59-65）的蛋白表达。在每一个研究，研究者取得可测量的表型校正，贷款多聚谷氨酰胺疾病的新型治疗方法的临床应用RNAi技术的大力支持。早期成功的基础上，调查人员目前正集中，优化交付，效力和安全性的RNAi触发器和评估靶基因的耐受性击倒。如果目的基因提供了重要的细胞功能，后者仍然是一个重要的考虑因素。基因敲除小鼠基因正常中枢神经系统的发育和功能的要求提供了关键证据。然而，RNAi为基础的战略很少能达到100的目标基因的抑制，观察击倒，和当前的发送限制防止击倒在整个大脑。事实上，最近的独立报告显示，非等位基因特异性沉默野生型和突变亨廷顿在成年啮齿类高清机型芨耐受性良好治疗效果，并提供动物（64，65），尽管亨廷顿敲的小鼠非可行的（66，67），去除神经元表达亨廷顿在早期产后期间导致迟发性神经退行性疾病（68）。这个例子突出了时空的方式治疗策略有关部分靶基因的表达减少的影响进行评估。研究人员也正在开发RNAi试剂，可以优先沉默突变的等位基因（即等位基因特异性沉默），减少突变蛋白的毒性，而野生型蛋白维持可接受的水平的目标。对于一些多聚谷氨酰胺疾病（如SCA3，SCA7和HD），调查已取得CAG扩大等位基因（69-72）的单核苷酸多态性（SNP）位点的连锁不平衡冲着利用RNAi序列的等位基因特异性沉默。虽然这种方法持有的承诺，定位的疾病相关的单核苷酸多态性在患者人群中的患病率呈现一个重要的限制因素。高清，研究人员已经确定了几个SNP位点，可能会允许覆盖85的欧洲-高加索高清人口（71，72）;然而，相关的siRNA在动物模型中的疗效和安全性仍有待评估。然而，他们的初步调查结果需要额外的SNP分型在其他高清种群中，和其他多聚谷氨酰胺疾病。通过一个替代方法，胡等人。（73）最近报道polyQ蛋白膨胀亨廷顿优惠沉默的miRNA模拟，结合CAG扩张不完全，妨碍蛋白质的生产，想必干扰核糖体合成能力。此方法依赖于抑制剂的概率增加扩增的CAG道绑定，CAG重复长度的野生型和突变型之间需要一个可辨别的差异。从药物开发的角度来看，这一结果提出了使用单一等位基因特异性RNAi试剂对待所有9个多聚谷氨酰胺疾病的可能性，我们预计未来在啮齿类动物中测试这一策略的有效性和安全性的研究。最后，第三个等位基因的选择性抑制的方法，包括针对多聚谷氨酰胺相关剪接亚型。这种战术显然是适用于SCA6，其中两个全功能的CAv2.1亚型（一个缺乏一个含有多聚谷氨酰胺域）在受影响的小脑浦肯野神经元（74）表示。总之，这些等位基因特异性沉默的方法和电流伴随的结果是有希望的，但是，为达到足够的选择性，能力控制抑制RNA在体内给药将是至关重要的。此外，无论是等位基因特异性沉默将被要求为这些和其他疾病仍在审查和辩论，从而值得继续发展的选择性和非选择性的沉默策略，以确保所有的测试途径，我们在努力发展有效和安全的RNAi为基础的治疗。转到：治疗的RNAi挑战RNAi的发现周围的热情，有预期RNAi为基础的疗法迅速到达诊所，让人联想起早年在基因为基础的药物研究。然而，早期的成功的期望，因为被婉转许多悬而未决以前由其他基于核酸技术所面临的挑战。要实现RNA干扰的治疗潜力，正在制订策略，以规避交付的天然屏障，避免免疫/非免疫毒性，并实时监测的交付和治疗指数。对中枢神经系统的抑制性RNA交付，部分由于血脑屏障是一项艰巨的任务。正如前面所指出的，最合适的RNAi的送货方式将取决于通过我们的了解疾病的发病机制（如发病，发展和受影响的组织/细胞类型）和所需的基因沉默的持续时间。交付的非病毒核酸（如“裸”或络合合成的siRNA）可以访问的中枢神经系统：通过血管，脑脊液或直接进入脑实质内交付使用三大项航线。对于这一点，包括siRNA的配合物的稳定性和穿透无刺激免疫反应的靶细胞的能力的限制因素。最初的努力来解决这些挑战，专注于将化学修饰siRNA双链（21）糖，骨干或碱。一定的修改导致增加稳定性，从 而有效地降低了所需的剂量来实现可衡量的和可重复的基因沉默。但是，内部的修改未能改善中枢神经系统录入和全身给药后吸收。相反，新的努力，已经走向测试脂质体，纳米颗粒和细胞穿透肽，除其他外，稳定和导航到整个大脑的siRNAs（62，75，76）。调查也有共轭脑寻肽或全身给药后，增加脑摄取脂质体和纳米粒子（77-80）的抗体。未来的研究有可能把重点放在利用存在的疾病相关的抗原决定簇为手段，进一步提高疗效，特异性和非病毒siRNA传递到大脑的效力。最后，潜在的不良免疫反应的RNA干扰（RNAi）疗法是一个重要的考虑因素，特别是在受影响的大脑的神经退行性疾病，已经在一个“高度警戒状态，因为它涉及与慢性促炎症信号通路。一般来说，先天免疫反应的非病毒交付的siRNA介导的Toll样受体家族的成员，或者由两个不同的双链RNA传感蛋白：维甲酸诱导基因-1或双链RNA结合蛋白激酶（81）。这些相互作用可发生期间内（内体或溶酶体车厢）的siRNA分子或细胞内释放剂量和序列依赖性的。重要的是，化学改性或纳米粒子包裹的siRNA双链避免使用这些途径的刺激。病毒传递方法所面临的挑战，目前正在评估在实验室和神经内科就诊的基因治疗上的文章中讨论这个问题。未来发现在RNAi生物学将继续引导开发基于RNAi的疗法。最近一个令人兴奋的发现是观察一些miRNA存在于血浆和其他细胞外体液（82-84）。这些研究工作的基础上Valadi和他的同事们（83）上首次报道的外来细胞通过（微泡释放许多类型的细胞，包括神经元，神经胶质细胞和癌细胞）的mRNA和miRNA之间的交流。最近的数据显示，分泌的miRNA可以吸收邻近细胞（85，86）基因表达沉默后。有团体建议的途径确定的各个组成部分，但机制和酶的复合物，参与细胞与细胞的miRNA贩运仍是未知（85，87）。然而，分泌RNAi为基础的战略是显着的治疗前景及认股权证进一步调查。利用RNAi的神经科学家所面临的另一个挑战是我们目前无法监测，实时发送，在大脑中的RNAi分子的活性和特异性。后处理采样在大脑中是不切实际的，皮肤疾病，感染和许多肿瘤不同。因此，模型系统需要建立基因沉默之间的效力和特定剂量的毒性的相关性。特别是正在研究的神经退行性疾病的生物标志物提供了最好的方式来监测治疗的RNAi的一个一致响应，虽然许多疾病远离已知一个给定的生物标志物的有效性，代表特定疾病阶段。最后，跟踪在体内的RNA与量子点在成像技术的进步的承诺（88）。资金支持这项工作是由美国国家卫生研究院（NS050210 NS067111，HD44093），遗传性疾病基金会，和罗伊卡弗信托。参考1。消防A.，徐SQ，科斯塔斯蒙哥马利MK，SA，驱动SE，梅洛CC强有力的和具体的双链RNA基因干扰线虫自然。1998年391:806-811。12。新篇章SM，J. Harborth，W. Lendeckel，A.亚尔钦，韦伯K.，Tuschl T.复式的21个核苷酸的RNA介导的RNA干扰在培养的哺乳动物细胞中。自然。2001年411:494-498。2麦卡弗里AP，默兹L.，范TT，康克林DS，汉农GJ，凯马RNA干扰技术在成年小鼠自然。2002;418:38-39。14夏H.，毛泽东问：保尔森HL戴维森BL siRNA介导的基因沉默在体外和体内纳特。生物工程2002年20:1006-1010。15，财，朱克曼JE戴维斯ME CH，D.塞利格森，A. Tolcher，阿拉比CA，颜华，海德尔JD，里巴斯A. RNAi在人类全身给药的siRNA通过针对性的纳米粒子的证据。自然2010464PMC免费文章:1067-1070。26卡林顿JC，安布罗斯五角色的microRNA在植物和动物的发展。科学2003;301:336-338。17克罗尔J. Loedige一，Filipowicz W.的广泛调控的microRNA生物合成，功能和衰变。纳特。遗传学牧师2010年11:597-610。18，金金S.李Y.，全K.，李JT，的VN微RNA成熟逐步处理和亚细胞定位。EMBO J.2002;21:4663-4670。文章考研9。严，金，彩H.李Y.，安贞焕C.，韩J. J.，J.，J.李，教务长P. O. Radmark，金S.等。核的RNase III Drosha酶启动microRNA的加工性质。2003年425:415-419。110格雷戈里RI，严KP，库奇G. Amuthan，T. Chendrimada，B. Doratotaj，N.，Shiekhattar R.微处理器复杂介导的microRNA的起源。自然。2004年432:235-240。111。易河，秦勇，马卡拉IG，脐周BR Exportin-5 microRNA和短发夹RNA介导的核出口。基因开发2003年17:3011-3016。文章考研EMBO J.12。教务长P.，D. Dishart，杜塞J.，D. Frendewey，Samuelsson先生B.，Radmark O.核糖核酸酶的活性和RNA的重组人类Dicer酶具有约束力。2002年21:5864-5874。PMC免费文章213。施瓦茨DS，G. Hutvagner，杜T.，徐Z.，阿罗南N.，赛摩PD不对称的RNAi酶复合物的组装。细胞2003年115:199-208。114Khvorova A.，雷诺A.贾亚塞纳SD功能的siRNA和miRNA表现出链偏置细胞2003年115:209-216。1比尔格15。刘易斯BP，CB，巴特尔DP守恒种子配对，往往两侧腺苷，表明成千上万的人类基因的microRNA目标。细胞2005年120:15-20。216。O.马特维瓦，Y. Nechipurenko，罗西L.穆尔B.，P. Saetrom，AY奥克尔佐夫，阿特金斯JF，Shabalina SA比较合理的siRNA设计方法，导致一种新的高效和透明的方法。核酸研究。2007年35：E63。PMC无文章217Matranga C.泊华，新光C.巴特尔DP，赛摩PD客运链断裂促进Ago2的含RNA干扰酶复合物组装的siRNA进入细胞。2005年123:607-620。118PJ，劳希纳SL Ameres，郭志强S.，J.马丁内斯在RISC装配在人类细胞中的siRNA客运链裂解。2006年EMBO众议员日;7:314-320。PMC无文章219，雷诺，沙利文K.安德森E.伯明翰A. A.，问：BOESE，利克D. J. Karpilow，Khvorova A.具有高功能性和特异性的siRNA设计的一种协议。纳特。2007年协议传输。:2068-2078。120。杰克逊AL，林斯利PS认识和避免siRNA的脱靶效应进行目标识别和治疗中的应用。纳特。与药物探索牧师2010年9:57-67。1马Behlke化学修饰的siRNA在体内使用寡核苷酸。2008年18:305-319。121。好PD22。保罗CP，温纳一，恩格尔克DR有效的人类细胞中表达的小分子干扰RNA。纳特。生物工程2002年20:505-508。123。曾勇，瓦格纳EJ，脐周BR自然和设计的微型RNA的抑制同源基因的表达，在人类细胞中表达时，摩尔。细胞2002年9:1327-1333。124，布德罗RL，MAS Monteys A.戴维森BL减少变量之间的发夹RNAi载体揭示RNA的shRNA的效力。2008年14:1834-1844。PMC无文章225沃尔夫JA Budker五裸DNA吸收和表达的机制。进阶。基因2005年54:3-20。126。鲁宾逊DA，杨良，狄龙CP，可归结为AV，西弗斯C. J. Kopinja，鲁尼DL，MM Ihrig，麦克马纳斯MT，格特勒FB 等。基于慢病毒系统，通过RNA干扰主哺乳动物细胞，干细胞和转基因小鼠的基因沉默功能。NAT基因2003年33:401-406。127。戴维森BL哈珀SQ重组短发夹RNA病毒交付。酶学方法。2005年392:145-173。128。戴维森BL，Breakefield XO病毒载体的基因传递到神经系统。纳特。2003年神经科学;4:353-364。1海尔布隆R.，29。Weger S.病毒载体转基因：基因疗法的当前状态。Handb。地契。药理学，2010年197:143-170。230格林D.，Streetz的KL，风暴TA乔普林CL，潘迪K.戴维斯CR，马里昂P.，萨拉萨尔楼，凯MA病死率在小鼠由于细胞microRNA的过饱和/短发夹RNA途径。自然2006441:537-541。131，李H.，林格曼，樱井K. Castanotto D. R. L.夏夫利，L. AAGAARD，H. Soifer，A.加蒂尼奥尔，A.芮格斯，罗西JJ组合交付小干扰RNA降低RNAi的疗效选择性纳入RISC核酸研究2007年35:5154-5164。文章考研32。布德罗RL，马丁斯一，作为siRNA的梭戴维森BL人工小分子RNA：改进的安全性相比，在体外和体内。分子中的shRNA。疗法2009年17:169-175。PMC无文章233，巴茨SR杰克逊AL J. Schelter，小林SV，J.布尔夏德，毛泽东M.，李B.，Cavet G.林斯利PS表达谱揭示通过RNAi纳特脱靶基因的调控。生物工程2003年21:635-637。134，利克D.伊尔斯利泰里D.伯明翰A.安德森EM，雷诺A.费奥多罗夫华乐成行S.，马克西莫娃E.，罗宾逊K. J. Karpilow，等。3UTR种子的比赛，但不是整体形象，都与RNAi的关闭目标。纳特。方法：2006年3:199-204。135，布莱德JL，布德罗RL，哈珀SQ，PD Staber，上午Monteys，马丁斯一，吉尔摩BL，伯斯坦H.培鲁索RW，B. Polisky，等。人工miRNA的减轻在大脑的shRNA介导的毒性：影响治疗的RNAiPROC开发。Natl科学院。SCI收录。2008年美国105:5868-5873。PMC无文章236。阿古兹A.奥康纳T.蛋白质聚集疾病：致病性和治疗的观点。纳特。与药物探索牧师2010年9:237-248。137伯特伦L.，莉儿CM潭子RE阿尔茨海默病遗传学：回到未来。神经元2010年68:270-281。138。歌手O.，马尔RA，E. Rockenstein，船员L.，吴Coufal，量具FH，维尔马IM，Masliah E.目标BACE1的siRNAs可改善阿尔茨海默病转基因模型中的神经病理学。纳特。神经科学2005年8:1343-1349。139。罗德里格斯勒布朗E.摩尔SA，戴维森BL，保尔森HL等位基因特异性RNAi Gouvion CM，减少表型的阿尔茨海默氏症的转基因模型进展。摩尔。钍。J.。SOC。基因治疗。2009年17:1563-1573PMC无文章240。LaFerla FM，奥多阿尔茨海默氏病：Abeta的，tau蛋白和突触功能障碍。趋势摩尔。2005年11:170-176。141彼德拉伊塔D.，埃尔南德斯一，洛佩兹托邦A.费奥多罗夫D.小原B.，曼朱纳特BS，布德罗RL，戴维森B.，Laferla F.，加列戈-戈麦斯JC等。沉默CDK5降低阿尔茨海默氏症的转基因小鼠的神经元纤维缠结。J.神经科学2010年30:13966-13976。PMC无文章242。Brunden KR，Trojanowski JQ，李的VM进展专注于tau蛋白药物发现阿尔茨海默氏病和相关的tau蛋白。纳特。与药物探索牧师2009年8:783-793。PMC无文章2罗伯逊ED43。，Scearce莱维K.，帕洛普JJ，燕楼，郑IH，吴T.，格斯坦H.，于GQ，穆克L.减少内源性tau蛋白在阿尔茨海默氏症小鼠模型的改善淀粉样蛋白诱导赤字科学。2007;316:750-754。244。罗伯逊ED，钦，姚柳JW B. Halabisky，J.，J.，燕楼，吴T.，P. Hamto，N. Devidze，于GQ，等。网络和认知障碍突触Amyloid-beta/Fyn-induced，取决于对tau水平在多个阿尔茨海默氏症小鼠模型的研究神经科学201131:700-711。PMC无文章245哈利迪GM，麦肯H.在帕金森氏症的病理进展。安。纽约科学院。科技2010年，1184:188-195。146，李VM，施密特ML Spillantini MG，Trojanowski JQ，杰克斯R.，M.-突触核蛋白在路易体Goedert。自然。1997年388:839-840。6哈迪J.遗传分析的途径帕金森病神经元。2010年68:201-206。47。PMC无文章248，霍根S. MK萨普鲁，耶茨JW，江雷，沃特J.，博恩MC沉默的人-突触核蛋白在体外和大鼠脑使用慢病毒介导的RNA干扰。地契。神经学，2006年，198:382-390。149Fountaine TM，韦德马丁斯R. RNA干扰介导的击倒-突触核蛋白保护人体多巴胺神经母细胞瘤细 胞MPP（+）的毒性和减少多巴胺交通。J.神经科学住宅2007年85:351-363。150杨刘DM，金伦，王华，赵红艳，赵CL，H. RNA干扰介导的沉默的-突触核蛋白在的MN9D细胞和其对细胞活力，神经科学。通报2008年24:96-104。151Gorbatyuk操作系统，李偲，纳什K.，M. Gorbatyuk，卢因，沙利文LF，曼德尔RJ，陈文，迈尔斯C. FP Manfredsson，等在体内RNAi介导的-突触核蛋白沉默诱导黑质纹状体变性摩尔。疗法2010年18:1450-1457。PMC无文章2柳叶刀神经学，大不里士SJ亨廷顿氏病52。罗斯CA：从分子发病机制，临床治疗。2011年10:83-98。153杜尔A.常染色体显性遗传小脑性共济失调：多聚谷氨酰胺扩展和超越。柳叶刀神经病学神经。2010年9:885-894。154。Finsterer J.肯尼迪氏病的观点。J.神经学。科学2010年298:1-10。155米，M. Shimohata，山田佐藤吨，高桥，辻S. H.多聚谷氨酰胺疾病：神经病理学齿状pallidoluysian的萎缩的最新进展。神经病理学2006年26:346-351。156。趋势，木材MJ Scholefield J.多聚谷氨酰胺疾病治疗的基因沉默的策略。基因2010年26:29-38。157，布德罗RL，戴维森BL RNAi疗法中枢神经系统疾病。脑住宅20101338:112-121。158。亚森SL，毛泽东问：夏H.哈珀SQ，马丁斯IH，奥尔HT，保尔森HL，杨良，KOTIN RM，戴维森BL RNAi技术抑制多聚谷氨酰胺诱导的神经退行性疾病的小鼠模型SCA1。纳特。2004年10:816-820。159哈珀SQ，PD Staber，他X的，亚森SL，马丁斯一，毛泽东问：杨良，RM KOTIN，保尔森HL，戴维森BL RNA干扰提高了电机和一个亨廷顿氏病小鼠模型中的神经病理学异常。PROC 。Natl科学院。SCI收录。2005年美国102:5820-5825。PMC无文章260。罗德里格斯勒布朗E.，Denovan赖特EM，纳什K.勒温AS，曼德尔RJ纹状体腺相关病毒介导的抗亨廷顿的shRNA诱导部分逆转疾病进展R6 / 1亨廷顿氏症的转基因小鼠。摩尔。2005年12:618-633。PMC无文章261。：王元龙，刘炜，和田E.，村田M.，和田K.，金泽一救援亨廷顿氏病的小鼠模型的siRNA临床病理。神经科学。2005年53:241-249。162，萨普，大通K.塞纳M. DiFiglia，埃斯特维斯M. E.，菲斯特E.，萨斯M.，尤德J.，里夫斯P.潘迪RK，拉杰夫。KG，等。治疗用siRNA沉默突变亨廷顿衰减纹状体和皮质的神经病理学和行为缺陷。PROC。Natl科学院。SCI收录。2007年美国104:17204-17209。PMC无文章263菲茨西蒙斯HL Franich NR，芳DM，M. Klugmann，在MJ，年轻D.腺相关病毒载体介导的RNAi突变亨廷顿表达亨廷顿氏病的一种新的基因大鼠模型的神经保护摩尔。进一步2008年16:947-956。164布德罗RL，麦克布赖德JL，马丁斯一，沉S.，邢华，卡特BJ，戴维森的BL Nonallele特异性沉默突变体和野生型亨廷顿证明疗效在亨廷顿氏病小鼠。摩尔。疗法2009年17:1053-1063。PMC无文章265杜洛埃五，五，佩兰，杜福尔Hassig R. N.，阿尔维斯S.，Auregan G. G. Bonvento，E. Brouillet，Luthi -卡特R. P. Hantraye，等。持续影响特定nonallele的亨廷顿沉默。安。神经学，2009年65:276-285。166都咬MP，奥尔巴赫AB，瑞恩A.佩尔西凯蒂楼，巴恩斯GT，麦克尼尔SM，葛P. JP Vonsattel，摩根富林明Gusella等，乔伊纳AL等。灭活鼠标亨廷顿氏病基因同源HDH科学。1995;269:407-410。267。纳西尔J.，台股期货与现货之价格及报酬率长短期关联JR OKusky，SB Floresco，VM，里奇曼JM，J. Zeisler，博罗夫斯基A.马斯JD，菲利普斯公司，海登MR亨廷顿氏病的基因在胚胎致死的结果有针对性的破坏和行为杂合子的形态学变化。细胞1995年81:811-823。168。Dragatsis一，蔡特林莱文MS HDH灭活渐进的神经功能障碍和不育小鼠的大脑和睾丸的结果。纳特。基因2000年26:300-306。169。阿尔维斯纳西门托-费雷拉一，G. Auregan，R. Hassig，杜福尔N.，E. Brouillet，佩德罗索德利马MC，P. Hantraye，佩雷拉德阿尔梅达L.，Deglon N.等位基因特异性RNA突变的ataxin-3介导的神经保护作用的马查多-约瑟夫病大鼠模型的沉默。2008年PLoS ONE的;3：e3341。PMC无文章270Scholefield J.，格林伯格LJ，温伯格MS，亚毕诺PB，Abdelgany A.木MJ的ataxin-7突变特异性沉默和校正的SCA7型发夹RNAi技术设计，2009年PLoS ONE的;4：e7232。PMC无文章271。菲斯特EL，肯宁顿L. J.斯托布哈尔，S. Wagh，刘炜，M. DiFiglia，B. Landwehrmeyer，JP Vonsattel，赛摩PD，阿罗南N.五siRNA靶向三个单核苷酸多态性可能提供治疗的四分之三亨廷顿氏症患者。当前。生物学2009年19:774-778PMC无文章272，雅斯贝尔斯L.隆巴迪MS C. Spronkmans，C. Gellera，楼Taroni，迪马利亚E.，多纳托SD，Kaemmerer WF亨廷顿氏病的患者大部分可能是个性化的等位基因特异性RNA干扰治疗。地契。神经学，2009年，217:312-319。173。胡J.，J.，刘科DR等位基