我国玉米核心种质磷胁迫蛋白质表达差异和基因组SSR分析-硕士论文

王896s I 弓3 Ad i s s e r t a t i o ns u b m i t t e dt o Z h e n g z h o uU n i v e r s i t y f o rt h ed e g r e eo fM a s t e r T h eD i f f e r e n c e so fP r o t e i nE x p r e s s i o n sU n d e r P h o s p h o r u s S t r e s sa n dS S RA n a l y s i so fM a i z e C o r eC o l l e c t i o no fO u r C o u n t r y B yY a n l i n gW a n g S u p e r v i s o r ：P r o f B a o m i n g T i a n C o S u p e r v i s o r ：P r o f S h u a n g g u i T i e C r o pG e n e t i c sa n dB r e e d i n g D e p a r t m e n t o fB i o e n g i n e e r i n g M a y 2 0 10 学位论文原创性声明 l U lI II II I II II II II I I I I I I l Y 18 3 3 5 3 4 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：五j ；爹硝金日期：l 啤6 月1 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：王秀论 日期：沙。年6 月J 日 摘要 摘要 磷是植物生长发育所必须的大量元素之一，它在植物体内是一系列重要化 合物如核苷酸、核酸、核蛋白、磷脂、A T P 酶等的重要组成部分。同时，磷在植 物体内以多种形式参与能量代谢，光合作用，信号传导等几乎所有的生命活动， 对作物高产及保持品种的优良特质具有重要意义。植物体内的磷主要通过根系 吸收土壤中的可溶性磷酸盐来满足其营养需求。据全国土壤普查资料估计，我 国有1 3 - 1 2 的土壤缺磷。为解决土壤中有效磷不足的问题，生产上通过施肥来 解决土壤缺磷问题。施入土壤的大量磷肥在土壤中以无效状态储存起来，磷肥 的当季利用率一般只有1 0 2 5 t 。同时，大量施用磷肥，不仅耗竭有效的磷资 源，而且带来环境污染，破坏生态平衡1 2 1 。因此，利用作物固有的生物学特性， 挖掘作物自身对土壤磷元素高效吸收利用的潜力，培育磷高效作物品种，是农 业可持续发展的一条重要途径p J 。 玉米( Z e am a y sL ) 是世界上种植面积最为广泛的作物之一，仅次于小麦 和水稻，。缺磷是限制玉米生物产量和籽粒产量的重要因素。目前玉米品种的选 育主要集中在产量和品质性状上，选育的品种磷利用效率一般不高。玉米苗期 缺磷，即使后期供给充足的磷也难以弥补早期缺磷的不良影响。因此，深入研 究玉米苗期磷胁迫机制，对于提高玉米品质和产量，获得磷高效基因型玉米提 供了依据。近年来，国内外关于玉米耐低磷研究非常活跃，主要集中在玉米的 形态，生理和根系特征的变化【4 - 9 1 。 蛋白质作为细胞功能的执行者，直接反映植物的生命活动，据作者所知， 现在较少有涉及玉米叶片的蛋白质水平的研究。为进一步揭示玉米耐低磷机理 以及其耐低磷性的遗传基础，本实验以以河南省农业科学院培育杂交种郑单9 5 8 及其亲本自交系郑5 8 及昌7 2 为材料，在磷胁迫条件下，分析培养基条件下生长 玉米苗期叶片的蛋白质表达差异，为进一步深入研究磷胁迫响应基因，培育磷 高效作物提供重要的资料。 杂种优势是生物界普遍存在的一种现象，指杂合体在一种或者多种性状上 优于两个亲本的现象。利用杂种优势原理进行作物新品种的培育是现在育种的 主要方法。近年来，人们对杂种优势的D N A 和R N A 水平研究取得了巨大的成就， 但在蛋白质水品的研究很少。为了进一步研究郑单9 5 8 在杂种优势上的表现，本 摘要 实验利用双向电泳技术对郑单9 5 8 及其亲本在缺磷条件下进行蛋白质组学分析， 同时在D N A 水平上对郑5 8 、郑单9 5 8 及其亲本进行S S R 多态性分析，从而对郑单 9 5 8 的杂种优势进行分析。 在实验室原有技术基础上以国审玉米品种郑单9 5 8 及其亲本昌7 - 2 和郑5 8 的成熟胚分别于缺磷M S 培养基和完全培养基生长一月期的幼苗为材料，对其蛋 白质进行2 D 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，同时对掖4 7 8 、郑单9 5 8 及其亲本昌7 2 和郑5 8 进行S S R 多态性标记筛选，从而对郑5 8 和掖4 7 8 玉米自交系基因组差 异性进行分析，为进一步分析郑单9 5 8 的杂种优势提供理论基础。主要研究结 果如下： 1 、本实验郑单9 5 8 及其亲本自交系郑5 8 及昌7 2 的成熟胚为材料，并同于幼 胚，各自分别在M S 缺磷培养基及M S 完全培养基上生长一月期，结果表明，成熟 胚在M S 缺磷及M S 完全培养基上成活率较低，分别约为1 0 和2 0 ，成活幼苗茎 杆较为粗壮，植株较高；幼胚在M S 缺磷及M S 完全培养基上成活率较高，分别约 为7 0 和9 0 ，成活幼苗茎杆瘦弱，植株较矮小。 2 、研究优化了玉米组培绿苗蛋白提取过程中技术环节，克服了叶绿素、酚 和醌类物质对提取蛋白质量的影响，为建立稳定的重复性好的绿色叶片蛋白质 提取技术体系和蛋白质双向电泳技术体系，奠定了技术基础。 3 、经过对完全培养基生长幼苗和缺磷培养基生长的幼苗蛋白质双向电泳凝 胶图片的分析，对1 8 个差异性较大的蛋白质点进行3 D 图分析，以位点体积值计 算，完全培养基生长幼苗和缺磷培养基生长幼苗蛋白质差异位点体积值差异明 显，揭示出有磷和无磷幼苗蛋白质的关键差异位点。 4 、应用I m a g e M a s t e r2 DP l a t i n u m ( V e r s i o n 6 0 ) 软件对完全培养基生长幼苗 和缺磷培养基生长幼苗蛋白质图谱进行分析，以前者为对照，其中郑单9 5 8 对照 及其缺磷处理幼苗蛋白质分别有6 1 7 和5 8 0 个蛋白质点，匹配点2 2 0 个，其中9 3 个 蛋白点表达量上调，1 2 7 个蛋白点表达量下调；郑5 8 对照及其缺磷处理幼苗蛋白 质分别有5 5 5 和4 3 1 个蛋白质点，匹配点2 2 4 个，其中7 8 个蛋白点表达量上调，1 4 6 个蛋白点表达量下调；昌7 2 对照及其缺磷处理幼苗蛋白质分别有2 1 8 和2 1 3 个蛋 白质点，匹配点1 0 7 个，其中3 8 个蛋白点表达量上调，6 9 个蛋白点表达量下调； 同时在郑单9 5 8 及其亲本之间存在一些明显差异位点，对研究植物缺磷条件下杂 种优势提供了重要的蛋白质组学信息。 5 、选择玉米成熟胚幼苗叶片提取蛋白质，通过p H 3 1 0I P G 胶条进行蛋白质 n 摘要 组学分析，并利用质谱技术分别鉴定郑单9 5 8 、昌7 2 及郑5 8 在缺磷及正常条件 下生长所表达的差异蛋白质。在郑单9 5 8 、昌7 - 2 及郑5 8 幼苗处理前后差异表达 蛋白质中共鉴定出1 2 个、五种类型蛋白质，其中涉及蛋白质参与的转录调控、 翻译、植物修复、能量合成、光合作用。其中A T P 合成酶8 亚基在郑5 8 中发生表 达下调，A T P 合成酶6 亚基在昌7 2 中发生表达下调现象，但在郑单9 5 8 中并没有 出现A T P 合成酶的明显差异性表达，这可能暗示了郑单9 5 8 在磷胁迫的环境适应 方面的杂种优势。 6 、通过2 0 0 对S S R 引物对掖4 7 8 、郑单9 5 8 及其亲本郑5 8 和昌7 2 进行 多态性筛选和杂交优势分析，发现在2 0 0 对引物中有6 0 对引物在郑单9 5 8 及其 亲本之间表现多态性，4 7 对引物在郑5 8 和掖4 7 8 之间表现多态性，S S R 多态性 标记在不同染色体上呈现不均匀性分布，且在同染色体上呈现不均匀性分布， 并且表现出引物集中现象。这些变异很可能揭示出特定的染色体易于发生遗传 重组和变异，这些变异有可能与产量配合比有关。 关键词：玉米磷胁迫蛋白质组学杂种优势 I I I A b s t r a c t ， A b s t r a c t P h o s p h o r u s ( P ) i so n eo ft h ei m p o r t a n tm i n e r a ln u t r i e n t sf o rp l a n tg r o w t ha n d d e v e l o p m e n ti nh i g h e rp l a n t s I t i sa ni m p o r t a n tp a r to fas e r i e so fi m p o r t a n t c o m p o u n d s ，s u c h a sn u c l e o t i d e ，n u c l e i ca c i d ，n u c l e o p r o t e i n ，p h o s p h o l i p i d ，A T P e n z y m e s ，i np l a n t s P h o s p h o r u si np l a n t si n v o l v e di nv a r i o u sf o r m so fl i f ea c t i v i t i e s ， s u c ha Se n e r g ym e t a b o l i s m ，p h o t o s y n t h e s i s ，s i g n a lt r a n s d u c t i o n ，e t c ，a n dh a st h e p r o p e r t yo fh i 曲y i e l da n dg o o dq u a l i t yf o rc r o p P l a n t sa b s o r bs o l u b l ep h o s p h a t ei n t h es o i lm a i n l yt h r o u g hr o o tt om e e tt h e i rn u t r i t i o n a ln e e d s A c c o r d i n gt oe s t i m a t e so f s o i ls u r v e yd a t a ，1 3 - 1 2o fs o i li nC h i n af a c e sp h o s p h o r u sd e f i c i e n c y T os o l v et h e p r o b l e mo fi n s u f f i c i e n ta v a i l a b l ep h o s p h o r u si nt h es o i l ，f e r t i l i z a t i o n i su s e di n p r o d u c t i o n Al a r g en u m b e ro fp h o s p h a t i cf e r t i l i z e r sa p p l i e di nt h es o i lw e r ef o u n di n a ni n v a l i ds t a t e ，a n dt h eu s i n ge f f i c i e n c yw a so n l y10 - 2 5 L a r g ea m o u n to f p h o s p h a t eF e r t i l i z e ra d d e dt os o i l sc a u s e sd e p l e t i o no fp h o s p h o r u sr e s o u r c e s ，a n d b r i n g sp o l l u t i o nt oe n v i r o n m e n t a la n dd a m a g e de c o l o g i c a lb a l a n c e T h e r e f o r e ，t h eU S e o ft h ei n h e r e n tb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c si nc r o p s ，d i g g i n gp h o s p h o r u sa b s o r p t i o n p o t e n t i a li nc r o p s ，c u l t i v a t i n gp h o s p h o r u se f f i c i e n c yc r o pv a r i e t i e si s a ni m p o r t a n t w a y t od e v e l o ps u s t a i n a b l ea g r i c u l t u r e M a i z e ( Z e am a y sL ) i st h em o s tw i d e l yc r o pi nt h ew o r l d ，j n s tf o l l o w i n gt h e w h e a ta n dr i c e Pd e f i c i e n c yi sa ni m p o r t a n tl i m i tf a c t o rt ot h eb i o m a s sa n dg r a i n y i e l do fc o r n C u r r e n t l y , m a i z eB r e e d i n gf o c u s e do ny i e l da n dq u a l i t y , l i t t l ev a r i e t i e s p o s s e s sh i 曲p h o s p h o r u su s ee f f i c i e n c y D e f i c i e n tp h o s p h o r u ss u p p l i e di ns e e d l i n g w i l lg i v er i s et oa d v e r s ee f f e c t s ，t h o u g hp r o v i d e de n o u g hp h o s p h o r u si n t h el a t e rs t a g e T h e r e f o r e ，i n d e p t hs t u d yo fp h o s p h o r u ss t r e s s m e c h a n i s mi nm a i z es e e d l i n g s p r o v i d e dt h e o r e t i c a lb a s i s f o ri m p r o v i n gt h eq u a l i t ya n dy i e l do fm a i z ea n dg a i n p h o s p h o r u se f f i c i e n c ym a i z e I nr e c e n ty e a r s ，r e s e a r c ho nm a i z ep h o s p h o r u st o l e r a n c e a th o m ea n da b r o a da r ev e r ya c t i v e ，m a i n l yf o c u s i n go nm o r p h o l o g y , p h y s i o l o g ya n d c h a n g e si nr o o tc h a r a c t e r i s t i c s P r o t e i n sr e f l e c tt h ep l a n tl i f ea c t i v i t yd i r e c t l y 雒c e l lf u n e t i o np e r f o r m e r T ot h e b e s to fm y k n o w l e d g e ，t h e r ea r ef e wr e s e a r c hi n v o l v e di np r o t e o m i c so f m a i z el e a f I V A b s t r a c t T of u r t h e rr e v e a lt h el o wp h o s p h o r u st o l e r a n c em e c h a n i s ma n di t sg e n e t i cb a s i so f m a i z e ，t h i ss t u d y s e l e c t e d Z h e n g d a n 9 58 ，c u l t i v a t e db y H e n a nA c a d e m yo f A g r i c u l t u r a lS c i e n c e s ，a n di t sp a r e n t sa sm a t e r i a l sa n da n a l y s e dt h el e a fp r o t e o m i c so f t h e s em a i z eg r o w ni nc u l t u r em e d i u mf o ro n em o n t hu n d e rp h o s p h o r u ss t r e s s O u r r e s u l t s p r o v i d e di m p o r t a n t i n f o r m a t i o nf o rI n d e p t h s t u d yo fp h o s p h o r u s s t r e s s r e s p o n s eg e n e sa n dc u l t i v a t i o no fp h o s p h o r u se f f i c i e n c yc r o p s H e t e r o s i si sac o m m o np h e n o m e n o n ，m e a n i n gt h a ta to n eo rm u l t i p l et r a i t s ， h e t e r o z y g o t e sa r eb e a e rt h a nt h et w op a r e n t s U s i n gt h ep r i n c i p l eo fh e t e r o s i so fi s n o wt h em a i nm e t h o do fc r o p sb r e e d i n g I nr e c e n ty e a r s ，p e o p l eh a sm a d eg r e a t a c l f i e v e m e n t so nh e t e r o s i sr e s e a r c hi nD N Aa n dR N Al e v e l ，h o w e v e rl i t t l eh a sb e e n d o n ei np r o t e i n I nt h i s s t u d y , t w o d i m e n s i o n a le l e c t r o p h o r e s i st e c h n o l o g yw a s a p p l i c a t e dt os t u d y t h ep r o t e o m i eo fZ h e n g D a n 9 5 8a n di t s p a r e n t s u n d e rt h e c o n d i t i o n so fP d e f i c i e n c y A tt h es a m et i m e ，p o l y m o r p h i s ma n a l y s i sW a sc o n d u c e t e d i nZ h e n 9 5 8 ，Z h e n g D a n 9 5 8a n di t sp a r e n t s B a s e do nt h eo r i g i n a ll a b o r a t o r yt e c h n o l o g y , t h i ss t u d yc o n d u c t e d2 - D Et o a n a l y s et h ep r o t e o m ec h a n g e so fs e e d i n gl e a fc o m i n gf r o mZ h e n g d a n 9 5 8a n di t s p a r e n t sr e s p e c t i v e l yg r o w ni nM Sa n dM S - P A tt h es a m et i m e ，w ea n a l y z e dt h e g e n o m i cd i f f e r e n c e so fY e 4 7 8 ，z h e n g d a n 9 5 8a n di t sp a r e n t su s i n gS S R m a r k e r s T h e r e s u l t sl i s t e d 嬲f o l l o w ： 1 M a t u r ee m b r y oa n di m m a t u r ee m b r y oo fZ h e n g D a n 9 58a n di t sp a r e n t sw e r e g r o w ni nM Sa n dM S Pr e s p e c t i v e l y T h er e s u l t ss h o w e dt h a ts u r v i v a lr a t eo fm a t u r e e m b r y oi nM Sa n dM S Pw a sl o w e r , r e s p e c t i v e l y10 a n d2 0 T h ep l a n t sg r o w i n g u ps h o w e dh i g h e ra n ds t r o n g e r T h es u r v i v a lr a t eo fi m a t u r ee m b r y oi nM S a n dM S - P w a sr a l a t i v l yh i g h e r , r e s p e c t i v e l y7 0 a n d9 0 T h ep l a n t sg r o w i n gu ps h o w e d d w a r f i s ha n dw e a k 2 P r o t e i ne x t r a c t i o nt e c h n o l o g yo ft i s s u ec u l t u r eo fm a i z es e e d l i n g sW a S o p t i m i z e dt oi n c r e a s ep r o t e i nq u a l i t ya f f e c t e du s u a l l yb yt h ec h l o r o p h y l l ，p h e n o l sa n d q u i n i n e s T h i sl a i dt h et e c h n i c a lf o u n d a t i o nf o rt h ee s t a b l i s h m e n to fas t a b l ea n d r e p r o d u c i b l es y s t e mo fp r o t e i ne x t r a c t i o na n d2 - D Es y s t e mo fg r e e nl e a f 3 12s i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n tp r o t e i ns p o t sw e r ea n a l y z e db y3 Dm a pf o l l o w i n g a n a l y z a t i o no f2 一D Ef i g u r e so fs e e d l i n g sf r o mM Sa n dM S Pm e d i u m T h ev o l u m eo f V d i f f e r e n tp r o t e i ns p o t sv a r i e dg r e a t l y , r e v e a l i n gt h ek e yd i f f e r e n c e sb e t w e e np r o t e i n s o fs e e d l i n g sf r o mM Sa n dM S Pm e d i u m 4 P r o t e i n sf r o ms e e d l i n g sg r o w i n g0 1 1c o m p l e t em e d i u ma n dPd e f i c i e n c y m e d i u mw e r ea n a l y z e db yI m a g e M a s t e r2 DP l a t i n u m ( V e r s i o n 6 0 ) ，617a n d5 8 0 p r o t e i ns p o t sw e r ed e t e c t e d o nm a po fZ h e n g D a n 9 5 8C Ka n dPd e f i c i e n c y Z h e n g D a n 9 5 8 2 2 0p r o t e i ns p o t sw e r em a t c h e d ，o fw h i c h9 3w e r eu p - r e g u l a t e da n d 1 2 7w e r ed o w n r e g u l a t e d 5 5 5a n d4 3I p r o t e i ns p o t sw e r ed e t e c t e d o nm a po f Z h e n 9 5 8C K a n dP d e f i c i e n c yZ h e n 9 5 8 2 2 4p r o t e i ns p o t sw e r em a t c h e d ，o fw h i c h7 8 w e r eu p - r e g u l a t e da n d14 6w e r ed o w n - r e g u l a t e d 218a n d213p r o t e i ns p o t sw e r e d e t e c t e do nm a po fC h a n 9 7 2C Ka n dP d e f i c i e n c yC h a n 9 7 - 2 10 7p r o t e i ns p o t sw e r e m a t c h e d ，o fw h i c h38w e r eu p r e g u l a t e da n d6 9w e r ed o w n - r e g u l a t e d S o m ed i f f e r e n t p r o t e i ns p o t sw e r ed e t e c t e da m o n gZ h e n g D a n 9 58a n di t sp a r e n t s ，w h i c hp r o v i d e d i m p o r t a n ti n f o r m a t i o no fp r o t e o m i c sf o rt h ef u t h e rs t u d yo fh e t e r o s i so fp l a n tu n d e r p h o s p h o r u sd e f i c i e n c yc o n d i t i o n s 5 P r o t e i nW Se x t r a c t e df r o mm a i z es e e d l i n g sg r o w i n gu pb ym a t u r ee m b r y o s P r o t e o m i c sa n a l y s i sw a sc o n d u c t e db yp H 3 - 10I P Ga n df o l l o w e db ym a s ss p e c t r u m ( M S ) t oi d e n t i f yt h ed i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dp r o t e i n s B e f o r ea n da f t e rt r e a t m e n t ，12 p r o t e i n s ，b e l o n g i n gt o 5t y p e s ，w e r ei d e n t i f i e d T h e s ep r o t e i n sp a r t i c i p a t e d i n t r a n s c r i p t i o n a lr e g u l a t i o n , t r a n s l a t i o n ，p h y t o r e m e d i a t i o n ,e n e r g ys y n t h e s i s ， p h o t o s y n t h e s i s O ft h e10p r o t e i n s ，A T P a s e1 3s u b u n i td i s p l a y e dd o w n r e g u l a t i o ni n Z h e n 9 58 a f t e rt r e a t m e n ta n dA T P a s e6s u b u n i t d i s p l a y e dd o w n - r e g u l a t i o n i n C h a n 9 7 - 2a f t e rt r e a t m e n t H o w e v e r , A T P a s ei nZ h e n g D a n 9 58s h o w e dn oo b v i o u s l y c h a n g e T h i sm a yh i n t e dt h a tZ h e n g D a n 9 5 8r e f l e c t e d t h eh y b r i da d v a n t a g ei n e n v i r o n m e n ta d a p t a t i o nu n d e rPs t r e s s 6 P o l y m o r p h i s ms c r e e n i n ga n dh e t e r o s i sa n a l y s i sw e r ec o n d u c t e du s i n g2 0 0 S S Rm a r k e r si nY e 4 7 8 ，Z h e n g D a n 9 58a n di t sp a r e n t s T h er e s u l t ss h o w e dt h a t6 0o f 2 0 0S S Rm a r k e r sd i s p l a y e dP o l y m o r p h i s mb e t w e e nZ h e n g D a n 9 5 8a n di t sp a r e n t s ；4 7 o f2 0 0S S Rm a r k e r sd i s p l a y e dP o l y m o r p h i s mb e t w e e nZ h e n 9 5 8a n dY e 4 7 8 S S R m a r k e r sp r e s e n t e du n e v e nd i s t r i b u t i o na m o n gd i f f e r e n tc h r o m o s o m e s ，a n di nt h e s a m ec h r o m o s o m e T h e s em a r k e r ss h o w e dc o n c e n t r a t i o ni ns o m ea r e a T h e s e v a r i a t i o nm a yp r o c l a i m e dt h a ts p e c i f i cc h r o m o s o m ew e r ep r o n et oo c c u r r e dg e n e t i c V l r e c o m b i n a t i o na I l dm u t a t i o n T h e s ev a r i a t i o nm a yh a v er e l a t i o nt oy i e l dc o o r d i n a t i o n ， w h i c hr e p r e s e n t i n gt h es p e c i f i ch e t e r o s i so fZ h e n g D a n 9 5 8 K e yw o r d s ：M a i z e ( Z e 口m a y sL ) ；p h o s p h o t o ss t r e s s ；p r o t e o m i c s ；S S R ；h e t e r o s i s V I l 目录 目录 摘要3 A b s t r a c t ：【1 5 J 7 目录V I I I 符号说明X 第一章引言1 第二章文献综述2 2 1 磷胁迫蛋白质组学研究2 2 1 1 植物耐低磷胁迫分子机制及研究进展3 2 1 2 蛋白质组学研究进展7 2 2S S R 分子标记在杂交优势育种中的应用18 2 2 1S S R 分子标记的特点1 8 2 2 2S S R 标记在作物杂种优势中的应用1 8 2 2 3 展望一2 0 第三章材料与方法2 1 3 1 试验材料2 l 3 2 实验试剂及溶液配制2 l 3 2 1 主要试验试剂二2 l 3 2 2 试剂配制2 2 3 3 主要试验仪器2 3 3 4 研究方法2 3 3 4 1 郑单9 5 8 及其亲本郑5 8 和昌7 - 2 的蛋白质组学研究2 3 3 4 2 郑单9 5 8 及其亲本郑5 8 和昌7 - 2 的S S R 多态性分析2 8 第四章结果与分析3 1 4 1 郑单9 5 8 及其亲本郑5 8 和昌7 2 的蛋白质组学研究一3 l 4 1 1 玉米幼苗选择3 l 4 1 2 玉米幼苗叶片蛋白质提取3 2 V 目录 4 1 3 蛋白质定量分析3 5 4 1 4 玉米幼苗叶片蛋白质的双向电泳图片分析。3 6 4 1 5 玉米片蛋白质双向电泳软件分析4 5 4 2 蛋白质显著差异点氨基酸序列质谱分析6 6 4 2 1 蛋白质显著差异点选择6 6 4 2 2 蛋白质显著差异点氨基酸序列质谱分析6 6 4 3 掖4 7 8 、郑单9 5 8 及其亲本郑5 8 和昌7 2 的S S R 多态性分析6 7 4 3 1 掖4 7 8 和郑5 8 基因组差异性分析6 7 4 3 2 郑单9 5 8 和亲本的多态性S S R 标记7 0 第五章讨论7 7 5 1 蛋白质组学分析7 7 5 。1 1 样品蛋白的制备7 7 5 1 2 蛋白质定量分析。7 8 5 1 3 郑单9 5 8 差异表达蛋白质分析。7 8 5 1 4 郑5 8 差异表达蛋白质8 0 5 1 5 昌7 - 2 差异表达蛋白质8 l 5 2S S R 多态性标记在杂种优势利用中的作用8 4 第六章结论8 6 尚待解决的问题8 7 参考文献8 8 致谢9 9 个人简历10 0 在学期间发表的学术论文1 0 0 I X 符号说明 符号说明 一缩呈 墓窒全整 主茎全整 _-_-_-_-_-_-_l_-_-_-_l-_-_-_-_一一 A P S a m m o n i u mp e r s u l p h a t e 过硫酸铵 B I S N N - M e t h y l e n e b i s - A e r y l a m i d e C H A P S 3 【( 3 C h o l a n i d o p r o p y l ) d i m e t h y l a m m o n i o - l - p r o p a n e s u l f o n a t e 2 D E D T T I A A I P G S D S T E M E D T R I S P A G E D l G E 2 - d i m e n s i o ne l e c t r o p h o r e s i s d i t h i o t h r e i t o l i o d o a c e t a m i d e I m m o b i l i z e dp Hg r a d i e n t s o d i u md o d e c y ls u l f a t e t e t r a m e t h y le t h y l e n ed i a m i n e T r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h a n e p o l y a c r y l a m i d eg e l e l e c t r o p h o r e s i s t w o d i m e n s i o n a ld i f f e r e n t i a lg e le l e c t r o p h o r e s i s 甲叉双丙烯酰胺 3 - ( 3 - 胆固醇氨丙基) 二 甲基氨基卜卜丙磺酸 双向电泳 二硫苏糖醇 碘乙酰胺 固相p H 梯度 十二烷基磺酸钠 四甲基乙二胺 三羟甲基氨基甲烷 聚丙烯酰胺凝胶电泳 差异凝胶电泳 I E Fi s o e l e c t r i