常见临床标本的细菌学检验.ppt

常见临床标本的细菌学检验,一、常见临床标本1、血液2、尿液3、粪便、肛拭子4、脓汁及脓拭子5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、脑脊液、鞘膜液）6、痰7、胆汁8、咽拭子9、空气,二、标本采集的一般原则,1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗法之前采集标本。2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避免其它微生物特别是正常微生物的污染。3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌不能使用消毒剂）加入适当保存液。4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌氧运送。防止污染及扩散。5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。,三、常见标本的采集（一般由临床医师执行）,（一）血液：1、一般在发热高峰期采集（发热初期1-2天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。2、采血部位：一般为静脉（动脉阳性率更高些）。3、采血量：5-1ml，直接加入酚红葡萄糖肉汤中（血/肉汤=1：10）（防止血凝、稀释Ab等因子）如不能直接接种应置入已灭菌适量20%枸橼酸盐瓶中。尽快送检。,4、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤中加入相应对抗剂。磺胺类药物对氨基苯甲酸5mg/100ml.青霉素2u青霉素酶/ml其他抗生素MgSO45mg/100ml（二）粪便：1、应尽量在用药前自然排便；取有胧血、粘液部分2-3g（新鲜）液壮便应取絮壮物1-2ml于无菌广口瓶中。,2、如无法获取粪便，应用直肠拭子，小儿入肛门2-3cm。成人入肛门4-5cm.取直肠粘液入无菌试管/保存液。3、如需保送运送测量PH7.0甘油PSB中（0.033mol/LPSB与等体积甘油混匀。PH7.0),(三）、脓汁1、创伤：先以无菌NS清洗创口周围，再以棉签来取脓汁/分泌物脓拭子置无菌试管。2、脓肿：先消毒患部表面皮肤，再以注射器抽吸/切开脓时接留脓汁1-2ml置无菌试管。3、厌氧菌：一定要由伤口深处取样，半小时内接种完毕。,（四）咽拭子：1、由咽部扁桃体处采集分泌物（注意部位、方式）2、如凝为白喉患者，则应先除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物，再取样。3、凝为百日咳患者，可采用咳碟法。,（五）痰：1、先让病人用清水嗉口数次，以除去口腔内大量杂菌。2、取清晨第一口咳出的痰，（晨痰）3、作结核杆菌培养可收集24h痰。（冰箱保存）,（六）胆汁：1、行十二指肠引流水收集“胆汁乙”10-15ml。胆汁甲胆总管（）胆汁乙胆素（柠黄色）胆汁丙肝胆管（金黄色）胆汁丁十二指肠（）,（七）穿刺液：1：原则上由临床医生先穿刺获得。2：采样量：胸水，腹水：5-10ml3：如需抗凝：3.8%枸橼酸钠。1：10,（八）尿液：1、一般用导尿.5-10ml，也可用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾，2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。2、作结核杆菌培养，留取24h尿，将沉淀部分送检。,3、肾盂尿，应标明右、左，每侧分3份留联（导尿管插入输尿管。）4、通常宜取清晨第一次尿。5、采集后应立即送检，接种，一般不得超过1h，冰箱保存，不过6h。,四、常见临床标本鉴定程序,染色镜检变浊、色、质BA菌落染色镜检1血液酚红葡萄糖肉汤有菌落无改变BA报告：无菌生长无菌落无菌落BA有菌落染色镜检变浊、色、质BA菌落染色镜检2穿刺液血肉汤有菌落无改变BA报告：无菌生长无菌落染色,3，拭子（咽、脓）,BA,菌落分类、编号、染色镜检,染色镜检,注：接种血平板时，拭子作原划线、接种环划开,4、痰,BA,菌落分类、编号、染色,TB培养,罗氏斜面（先消化处理）,4%NaOH6%H2SO4,5、尿液,BA（直径=9.0cm，接种量0.01ml）注：将标本充分划开,集菌（3000n/min15）,沉渣,革兰氏染色,BA,无菌落,报告：无菌生长,有菌落,染色镜检,菌落计数,报告：检出*菌*个/ml10万/ml感染,6、粪便,（含肛拭子）,SS、MaC（强弱各1个）,无可疑菌落报告：无致病菌生长,可疑菌落（透明/半、无酸色）,增菌（一般不进行）,T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤）M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤)S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）,沙门氏菌,煌绿增菌液亚硒酸盐增液,沙志,G.N,志贺氏菌,碱性蛋白胨水,霍乱弧菌,革兰氏染色,球菌G+杆菌:根据菌落特征,细菌染色性,形态排列选择恰当生化反应,免疫学反应及动物试验,报告,G-杆菌,KIA,菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度,根据KIA结果选择适当生化反应项目,+/+,IMViC七叶,+,-/+,IMANSUCCUPA,_I项“+”非沙门氏菌,+,I项“+”非志贺氏菌,+变+普,-/-I葡C不动杆菌绿脓杆菌+/-一般不会出现，可考虑接种不当，空气污染根据生化反应结果，结合相应血清学实验报告结果,五、空气细菌计数,将直径9.0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板按五点法/三点法打开盖暴露20，盖好3724h计数菌落数，称出平均每个板菌落数N,奥梅梁斯基法则：100cm2510LAt*10L,At100*50,XX个/M3=*1000=39.32N,N*10,At100*5,50000NAt,（49.0；20）,结果报告应注明“普通琼脂平板培养”/“血琼脂平板培养”,肠杆菌科各属KIA结果,斜面底层产气H2S动力埃希氏菌属A/KA+/-（+）/-志贺氏菌属KA-沙门氏菌属KA+/-d/+枸橼酸盐菌属dA+d+克雷伯氏菌属AA+-肠杆菌属AA+-+欧文氏菌属K/AA-/+/-+/-沙雷氏菌属K/AA+/-/d哈夫尼亚菌属K/AA+-+/-爱得华氏菌属KA+/d+/-+,斜面低层产气H2S动力变形杆菌属KA+/-+普罗菲登斯菌属KA+/-+摩根氏菌属KA（+）-+耶尔森氏菌属K/dAd/-肥杆菌属KA-致病性杆菌属KA-+克沃尔氏菌属AA+-+/（+）拉思氏菌属AA（+）-西地西菌属K/dA（+）/+-塔特母氏菌属-A-,注：A产酸；K产碱；+90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌株阳性；d26-75%菌株阳性；-0-10%菌株菌阳性,七、肠杆菌微量快速鉴定,一、机理：不同种细菌有不同酶系。首先获得待测菌的纯培养物，制成悬液，将其示为酶予成酶,酶+低物+显色剂（或其他添加剂）观察现象,二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空，低温干燥，密封保存备用。2345678910111213141516,H2SNPDILDODMUVPEONPGSKAARAD1NSO,序号实验名称英文缩写阴性阳性1H2SH2S无色棕色、黑色2硝酸盐还原N淡黄/白色粉红3苯丙胺酸P白色绿色4吲哚I白色粉红,序号实验名称英文缩写阴性阳性5赖胺酸LD黄色紫兰色6乌胺酸OD黄色桔色7丙二酸盐M黄缘色湖兰色8尿素U黄色粉红9VPVP白色粉红10七叶苷E白色棕黑色11ONPGONPG白色黄色12蔗糖S紫色黄色13阿拉伯糖A紫色黄色14侧金盏花醇AD紫色黄色15肌醇1N紫色黄色16山梨醇SO紫色黄色,12345678,H2SNPDILD