实验四动物血液基因组DNA的提取.ppt

动物基因组DNA的提取,常祖明,背景知识,动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？与植物细胞的差别？,背景知识,DNA的存在形式,背景知识,DNA的存在形式,背景知识,DNA的存在形式,背景知识,DNA的存在形式,核苷酸,双螺旋结构,一级结构-核小体,二级机构-螺线管,三级结构-超螺旋管,四级机构-染色体,+组蛋白,DNA为白色类似石棉样的纤维状物，大都呈酸味。DNA是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。,DNA的理化性质,实验目的,掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意：此方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。,实验原理,哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。,实验原理,固定,血样采集,抗凝血,裂解细胞,蛋白质降解,蛋白质变性,沉淀DNA,洗涤去杂质,普通家鸡无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、1MTris-HCl(PH8.0)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿(三氯甲烷)、异戊醇,实验材料,实验仪器,取血针及管离心机：3台/12管离心管：水浴锅：65移液枪（包括枪头）,实验试剂,1.75%的乙醇2.ACD抗凝剂100ml（共需48ml，每管0.8ml）3.禽血裂解液100ml（共需51ml，每管1.7ml）4.氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml5.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml6.TE缓冲液PH8.050ml,实验步骤,75%乙醇20ml,翅下取血5ml,5ml离心管,800ulACD抗凝剂,800ulACD抗凝剂,8000转离心1分钟,弃上清液,8000转离心1分钟,弃上清液,取680ul,8000转离心1分钟,55水浴过夜,1700ul裂解液,10ul蛋白酶K,实验步骤,2ml饱和酚,摇匀至无块状,12000转离心10分钟,DNA酚蛋白层,5ml离心管,取上层透明的DNA溶液,2ml酚-氯仿-异戊醇,12000转离心10分钟,5ml离心管,取上层DNA液,1.8ml氯仿-异戊醇,12000转离心10分钟,5ml离心管,取上层DNA液,无水乙醇,75%无水乙醇,1000ulTE缓冲液,晾干,-20保存,在整个实验过程中应严格执行无菌操作；部分药品有毒，操作中应注意安全防护；刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！再每一次加入药剂后，都要轻轻晃动离心管，使之混匀。,注意事项,思考题,本实验中用到的各种试剂的作用是什么？本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？,实验安排,按照学号分组进行实验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。,6人一组,2013级生物技术专业分子生物学实验