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文档简介

小吞噬细胞吞噬功能测定细菌计数法,2014级麻醉学1班张先刚学号：1410550160,实验目的,熟悉中性粒细胞的生物学特性及其意义、观察机体的非特异性免疫现象掌握血液中的中性粒细胞体外吞噬异物能力的测定方法及用途,小吞噬细胞,即是中性粒细胞；来源于骨髓造血干细胞；占白细胞总数的60%70%；生命周期短，不能分裂；细胞核呈多叶状，胞质内含多种颗粒：,颗粒内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。,中性粒细胞所特有，巨噬细胞没有这种酶，为中性粒细胞在细胞化学法上的标志。,中性粒细胞生物学特性：A、在抗化脓性细菌感染中起主要防御作用B、引起感染部位急性炎症反应C、参与超敏反应（如型超敏反应），引起机体免疫病理损伤。,实验原理,吞噬细胞可以通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、损伤及病原微生物等异物，是机体固有免疫的重要组成部分。在一定条件下，将白细胞悬液与细菌混合，保持一段时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。该实验可助诊断吞噬细胞功能障碍的疾病。,实验材料,1、菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml）2、抗凝剂：3.8%枸缘酸钠或肝素（25U/ml）3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染料、pH=6.4PB、酒精棉球、采血针、显微镜、香柏油、洗镜油等。,实验流程,取凹玻片一张，在凹孔中加1滴（0.4ml）3.8%枸缘酸钠或者肝素（25U/ml）,酒精棉球消毒左手无名指后，用采血针在消毒部位取血23滴（约0.2ml），加入凹孔中混匀。,加表皮葡萄糖液1滴（0.020.04ml），后用牙签轻轻搅拌混匀。,将凹玻片放在湿盒内，置于37孵箱3045min。,取一滴于载玻片上，制成薄涂片，自然干燥。,置于瑞氏液中，1min后取出。,置于pH=6.4PB中，3min后取出。,置于吉姆萨染液中，510min后取出,蒸馏水洗（平持玻片，在一端加水，使染液“漂走”），待干，镜检。,实验结果,在油镜下可细胞核及被吞噬的细菌被染成紫色，而中性粒细胞的胞浆被染成淡红色。,被吞入细菌,指标检测,1、吞噬百分率=100个中性粒细胞中吞噬了细菌的细胞数100,2、吞噬指数=100个中性粒细胞吞噬的细菌总数100,100%,人吞噬百分率正常参考值：62%76%,100%,人吞噬指数正常参考值：1.321.72,注意事项,1、中性粒细胞吞噬活性在37时最好，温度过高或者过低均会使其吞噬能力减低；2、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力不同；3、掌握好中性粒细胞与细菌的作用时间（中性粒细胞对细菌吞噬非常迅速，5min左右吞噬率达45%，10min左右接近80
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