干粉培养基配制注意事项.ppt

三干粉培养基配制注意事项,1.称量,溶解2.灭菌3.分装4,保存,1.称量,溶解,按称量数准确称取干粉于洁净容器中.加蒸馏水或去离子水摇匀,避免干粉粘在容器底部.加热使其充分溶解,在此过程中注意摇匀,避免局部过热.!注意避免吸入粉末,特别是含有毒成份的培养基.,2.灭菌,灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施常用灭菌方法1,加热灭菌2,过滤除菌3,辐射4,化学试剂灭菌,加热灭菌和过滤除菌,加热灭菌分两种:干热灭菌,湿热灭菌A干热灭菌B湿热灭菌中我们常见的方法为加热煮沸和高压灭菌,这主要根据不同培养基的成份决定（是否含有对热敏感的成份).备注:1.严格按标签说明的灭菌条件，时间过长或温度过高，会破坏某些成份.2.含琼脂的培养基高压灭菌后不能长时间处于高温状态，应适当水浴或迅速冷却保存.过滤除菌A适用于培养基中不耐高温高压的成份，如大多数抗生素，尿素水，亚碲酸钾溶液等。B设备和耗材：过滤器，滤膜（孔径0.22m），过滤垫备注:使用前，过滤器要经过121/15min灭菌C我公司提供商业化的附加试剂产品：使用前无须进行过滤除菌，方便使用,3.分装,分装量不宜超过容积的2/3，以免灭菌时外溢。制备平板（90mm）：每块15ml左右，厚度约2mm。,4.保存,干粉培养基及原材料适宜保存在温度为15-30的阴凉干燥的环境中配制好的培养基密封包装后可保存在2-8的冰箱中其他产品要严格按照产品外包装上的保存条件保存,四干粉培养基使用注意事项1容器洁净度的影响,洗涤剂中含有表面活性剂，会影响微生物生长，建议清洗完之后用去离子水润洗。自来水中的某些离子成份可能会导致培养基出现沉淀。其他影响：例如影响观察荧光,2配制培养基用水的要求,去离子水或蒸馏水PH值：5.5-7.5水质不合格的影响异常沉淀：如EC肉汤（水质偏酸会产生胆酸盐沉淀）颜色异常：如SS琼脂，TCBS琼脂含琼脂培养基凝胶强度下降,3常用加热煮沸方式的比较,直接用电炉加热：耗时，含琼脂培养基容易烧糊隔水煮沸的弊端A温度不够，达不到灭菌效果B经隔水煮沸的含琼脂培养基，在水浴的过程中易出现分层现象，这是由目前国产培养基的现状所决定的为您提供一种快速便捷的方式第一步：采用微波炉适当加热第二步：在电炉上继续加热至沸腾,4灭菌效果监测的重要性和常用方法,可能引发的问题灭菌不彻底同一灭菌锅内不同位置灭菌条件不均，导致同一批高压的培养基颜色不一致，如BGLB，EE肉汤等常用监测方法化学指示卡：使用方便，高压后可立即得知监测结果生物指示剂：准确性高,5含琼脂培养基水浴及复溶的要求,建议水浴温度在50左右，时间不宜超过4h如果不能在4h内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用前再进行复溶。不可反复复溶，否则会影响培养基的PH值和凝胶强度。,6导致颜色异常的原因,干粉颜色异常由指示剂的批间差异造成的培养基干粉在允许范围内的颜色差异。产品变质：如SC增菌液干粉变红，说明亚硒酸盐已被氧化，不能使用。溶液及平板颜色异常正常差异：指示剂的批间差异造成的某些含有酸碱指示剂的培养基，其PH值是一个范围，在这个范围内，颜色略有差异也是正常现象。非正常差异：PH值异常导致的，可能是培养基或配制用水的PH值异常,7导致不正常沉淀的原因,培养基变质：过期失效，吸潮容器不洁净配制用水的问题（见常见问题2）没有完全溶解过度加热,8导致PH值异常的原因,培养基变质：过期，吸潮容器不洁净配制用水的问题（见常见问题2）没有完全溶解过度加热反复复溶（见常见问题5）,9导致凝胶强度下降的原因,没有充分混匀过度加热反复复溶（见常见问题5）配置用水的PH值偏低,10培养基保存的注意事项,培养基的保存条件：避光保存于阴凉干燥处；使