肿瘤开题报告

1 / 12 肿瘤开题报告 毕业论文开题报告 论 文 题 目： 肿瘤护理人员职业态度及其影响因素探究 院 系： 专 业 名 称： 年级： 姓名： 学 号： 指导教师姓名： 指导教师职称： 填表时间： 2016 年 1月 24日 天然药化实验开题报告 黄芩苷的提取与结构鉴定 学院：生命科学与工程学院 班级：制药 姓名： 学号： 指导老师： 一文献综述 是唇形科植物黄芩的有效成分之一 ,属葡萄糖醛酸苷类 ,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸 ,具有清热解毒、抗2 / 12 炎、利胆、降压、利尿、螯合金属离子、抗变态反应等多方面的作用 3。近年来随着国际上对黄芩苷研究的持续升温以及认识的逐步深入 ,认为黄芩苷在清除氧自由基、减轻组织的缺血再灌注损伤、调节免疫、促进细胞凋亡以及抗肿瘤和 HIV等多方面均有作用。 1. 解热作用 发热是一个多环节 多因素参与的复杂 过程，若其中某些因素、环节被抑制或阻断，则可防止体温升高，从而产生解热效应 。目前。对于黄芩苷解热机制方面的研究报道甚少 。综合近几年研究发现，黄芩总提物及单一活性成分在整体动物实验、方面表现出显著的解热作用，且在一定剂量下其作用强度可高于以临床剂量折算的阿司匹林 4 。 2. 抗炎作用 张罗修等 5报道了黄芩苷对刺激剂 Ca2+载体A23187 诱导大鼠腹腔巨噬细胞 PGE2 的合成有抑制作用，这可能提示了黄芩苷抗炎作用的部分机理。陈先福等 6应用兔感染性脑水肿模型，测定了黄芩苷 、川芎嗪、甘露醇对血清和脑脊液中磷脂酶 A2 活性的抑制作用及改善脑水肿关系，结果显示黄芩苷与川芎嗪均可抑制磷脂酶 A2 活性和脂质过氧化，从而减轻脑水肿、降低颅内压。 3.对肝损伤的保护作用 采用 D-氨基半乳糖及 D-氨基半乳糖与内毒素合用建3 / 12 立的小鼠急性肝损伤模型 ,测定小鼠血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶的含量。结果，腹腔注射 200mg?kg-1 或 500mg?kg-1黄芩苷可以明显降低因 D-氨基半乳糖及 D-氨基半乳糖与内毒素合用所致肝损伤小鼠血清中已升高的 GOT及 GPT 含量。提示黄芩苷对 于受 7损的小鼠肝脏有一定的保护作用。静脉注射黄芩苷能显著增加 肝组织、血清中超氧化物歧化酶活性及谷胱苷肽水平 ,进一步提高组 织的抗氧化能力 ,通过抑制自由基的产生 ,降低四氯化碳、 D-氨基半乳糖对小鼠肝组织的损伤作用 ,降低生物膜脂质过氧化的产生 ,增强生物膜的稳定性 ,从而降低小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶 AST)活性及丙二醛水平 ,并使血清、组织中 SOD活性及 GSH水平升高 ,提示黄芩苷对 CCL、 D-氨基半乳糖所致小鼠实验性急性肝损伤具有一定的防治作用 ,其作用机 制与其降酶、抗脂质过氧化反应有关 8。 4. 对缺血再灌注损伤的保护作用 缺血再灌注损伤发病机制中 ,自由基的作用和细胞内钙超载是其发病学的两个重要环节。再灌注损伤后机体通过多种途径产生的自由基对细胞的各种成分造成损伤。经股静脉注射黄芩苷能显著降低缺血再灌注模型大鼠心肌的脂4 / 12 质过氧化物丙二醛的含量 ,升高组织内的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性 ,提示黄芩苷对再灌注损伤的心肌有保护作用 ,其机制可能与抗氧自由基引起的脂质过氧化反应有关 9。对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的保护研究结果 还证实 ,黄芩苷能缩小糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积 ,减轻白细胞浸润程度 ,缺血区的髓过氧化物酶活性和细胞间粘附分子 -1mRNA 的表达均显著降低 ,并推测其保护作用可能与抑制 ICAM-1 的表达降低微血管通透性等有关 10。另一方面缺血再灌注损伤时细胞内的钙离子超载既是损害的结果 ,又是造成细胞进一步损害的重要原因。在神经胶质瘤大鼠模型的研究中发现 ,黄芩苷能明显降低由去甲肾上腺素诱导的神经胶质瘤细胞内高钙离子浓度水平 , 且作用的强弱存在效应剂量关系 ,进一步研究还发现黄芩苷的降钙机制可能与降低细胞膜磷脂酶 C 的 活性有关。 5. 降压和镇静作用 黄芩苷的降压原理一般认为是直接扩张血管，研究表明黄芩苷对离体兔耳、离体兔肾、蟾蜍与兔后肢血管皆有扩张作用。在肠鼠离体主动脉、肺动脉、气管及右心房实验中，黄芩苷可竞争性拮抗肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺收缩主动脉条和肺动脉条的作用，拮抗异丙肾上腺素舒张血管、增加右心房自发频率的作用，这与其降压、减慢心率、镇静等作用有关。另外，黄芩苷可抑制小鼠的自发活动，有5 / 12 明显的镇静作用 ; 可通过抑制前列腺素 E2 的释放，降低花生四烯酸的浓 度，对防治高血压和 糖尿病等有重要的临床意义。黄芩苷静脉注射具有降压作用， 2+多数学者认为其机制可能与阻滞 Ca通道有关。黄芩苷可剂量依赖性地降低静息 状态下平滑肌细胞内 Ca2+的浓度，显著抑制去甲肾上腺素和高 K+所致细胞内 Ca2+浓度的升高，因而推断黄芩苷可通过阻断平滑肌细胞膜上的电压依赖型钙通道和受体操纵型钙通道抑制细胞内 Ca2+浓度的增高，舒血管机制类似维拉帕米阻滞 Ca2+通道的作用，从而扩张血管，降低血压。另有研究显示，黄芩苷具有明显的排钠利尿作用，可减少外周血容量及心输出量，导致血管阻力降低， 血压下降 11。 6. 抗变态反应 T 淋巴细胞激活后产生的细胞因子是各种炎症细胞间信息传递的重要信使之一，其中辅助性 T淋巴细胞所产生的白细胞介素 4 具有促进淋巴细胞成熟和分化的功能，同时又是诱导淋巴细胞合成分泌型 IgE的关键因子。姜斌等 12探讨了黄芩苷对哮喘的保护机制，发现黄芩苷保护组气道周围炎性细胞，尤其是嗜酸性粒细胞的浸润明显减轻， IL 4水平明显低于哮喘组，提示黄芩苷对过敏性哮喘具有保护作用。顾红缨等 13研究了黄芩苷对型变态反应豚鼠超微结6 / 12 构的影响，电镜结果显示，黄芩 苷给药组与未给药致敏组豚鼠超微结构在发生变态反 应后有较大的差异，而给药组与正常对照组的差异则很小，表明黄芩苷可显著抑制型变态反应豚鼠超微结构的改变。郑红等 14应用微分干涉差显微镜观察未经染色的活的肥大细胞，记录肥大细胞释放脱颗粒的全过程，发现加入黄芩苷后可明显阻止和延缓这一过程。黄芩苷对肥大细胞的细胞膜有保护作用，增加膜的稳定性，从而阻止其脱颗粒，这可能是黄芩苷治疗过敏性疾病的机理之一。致炎细胞因子的过度释放介导超抗原葡萄球菌素的毒性作用，黄芩苷能够抑制葡萄球菌素激发 T细胞增殖和外周血单核 细胞产生白细胞介素 1、白细胞介素 6、 TNF、 IFN、单核细胞趋化蛋白 1、巨噬细胞炎症蛋白 1、巨噬细胞炎症蛋白1，对减轻葡萄球菌素的致病性具有治疗作用。 7. 其他作用 抗癌作用 , 黄芩苷不仅能调节细胞周期，而且能通过上调促凋亡基因 p53和 bax，下调凋亡抑制基因 bcl 2 和bcl 6 的表达，同时抑制肿瘤细胞的增殖而表现为抑制肿瘤的生长。清除氧自由基及抗氧化作用，目前研究表明 ,黄酮类的自由基清除活性与其所含有的酚羟基数量和结构密切相关 ,黄芩苷的酚羟基数量较黄芩中其它的有效成分为多 ,且 A环中含有邻二酚结构 ,因而具有较强的自由基清除活性。 7 / 12 提取方法研究概况 1. 采用水提酸沉法 15。称取适量黄芩粉末 ,用一定量的水先浸泡一段时间 ,然后加热煎沸 ,维持微沸一定时间 ,纱布滤过 ,药渣重提 2 次 ,合并滤液 ,浓缩一半 , 用2mol/LHCl 调 pH1 2,70保温一段时间 ,黄芩苷沉淀析出 ,离心 ,沉淀物加 8倍量水 ,用 /LNaOH调 pH值至 7,并加等量乙醇 ,搅拌溶解 ,滤过 ,滤液用 2mol/LHCI 溶液调 pHl 2,于70保温 30min,静置 6h,滤过 ,沉淀用乙醇洗涤、干燥得粗品 ,其收率为 %。 2. 乙醇回流法 16。称取一定量的黄芩 ,将其粉碎 ,以不同浓度、不同体积的乙醇溶液为提取剂 ,置于微波炉中进行常压提取 ,接受微波辐射一定时间 ,待挥发出的溶剂被冷凝回流后 ,取出用冷却至室温 ,重新置于微波炉中 ,重复以上步骤直至总辐射时间累计达设计值。然后减压抽滤 ,提取滤液 ,将滤液于一定温度进行水浴加热 ,蒸干后放入烘干箱中干燥 ,即得到黄芩苷粗品。黄芩苷粗品用少量丙酮分次洗涤 ,至洗液无色 ,合并丙酮洗液 ,沉淀干燥至恒重 , 得精制黄芩苷。 3. 超声提取法。称取黄芩样品约 10g置于 500mL 烧杯中 ,加入 60%乙醇溶液 250mL,超声波提取 30min后过滤 ,得提取液。 4.微波辅助提取。称取黄芩样品约 10g 置于三口烧8 / 12 瓶中 ,加入溶剂 150mL,放入微波萃取器中进行常压提取 ,在空气鼓泡搅拌状态下 ,接受微波辐射 2min,待挥发出的溶剂被冷凝回流后 ,取出用冷却水冷至室温 ,重新置于微波萃取器中 ,重复以上步骤直至总辐射时间累计达设计值。 5. 超滤法。该法是一种分离精制的新方法 ,其原理是根据体系中分子的大小和性状 ,通过膜的筛分 作用在分子水平上进行分离。该技术可起到分离、纯化、浓缩或脱盐作用 ,而在中药制剂中的应用主要是滤除细菌、微粒、大分子杂质。超滤法制备中药注射液工艺简单 ,具有提高中药注射剂澄明度 ,去除杂质和热原 ,保留更多有效成分及部分脱色的特点。 含量测定方法研究概况 1. 高效液相色谱法 高效液相色谱法是一种十分成熟的检测手段 ,对于黄芩苷来说 ,人们通常用 C18 柱或 ODS 柱作为固定相 ,普遍采用甲醇 -水 -磷酸作为流动相 ,用紫外检测器 检测血清或药物当中的黄芩苷含量。李宁等 17在前人文献基础上 ,进行优化 ,采用 RP-HPLC 法 ,以苯甲酸为内标物测定家兔血浆中黄芩苷的含量。实验结果显示 ,苯甲酸与供试品的分离度在 ,符合要求 ,且在室温柱效及分离度不受干扰 ,空白血浆中的内源性物质不干扰待测物黄芩苷及内标物的测定。 9 / 12 2.紫外分光光度法 渠莉等 18用 HP-8453 紫外分光光度计于 220400nm 测定复方黄芩凝胶剂中黄芩苷的含量。采用零阶导数光谱及一阶导数光谱测定供试品溶液。由一阶导数光谱看出 ,样品和黄芩苷在 262nm及 291nm处有最大及最小吸收。空白液在 240 400nm 范围内与基线重合 ,对测定无干扰 ,所以选择 262nm 处的振幅作为定量信息。三波长 -紫外分光光度法是计算机辅助含量测定方法。其在干扰组分的吸收光谱上具有线性吸收的三个波长处对被测组分的吸光度进行测量 ,然后通过计算而求得被测组分的含量。此法能消除某些干扰组分的影响、溶液混浊、吸收池不洁净或不完全配对所引起的误差 , 并且解决随浓度不同使本底值漂移、吸收峰不对称等给定量分析带来的困难。 3.薄层扫描法 李梦等 19使用硅胶 GF254 薄层板测定清喉咽合剂中黄芩苷的含量。分别吸取 供试品溶液及黄芩苷对照品溶液各 3 L,交叉点于同一 GF254 薄层板上 ,以正戊醇 -甲醇 -甲酸 -水展开 ,取出 ,晾干 ,置 254nm荧光灯下观察色点。在薄层板上覆盖一同样大小的玻璃板 ,周围用胶布固定。双波长反射法锯齿扫描 ,测定波长 290nm, 参比波长 350nm,狭缝 1 25mm 1 25mm,线性化系数 Sx=3。根据峰面积积分值计算黄芩苷的含量。实验结果为 :平均回收率为 98 .36%,RSD= 1. 10 / 12 24% 。采用薄层扫描法测定黄芩苷的含量具有直接点样 ,简便、灵敏、快速等优点 ,且重现性好 ,结果准确。 4.高效毛细管电泳法 潘细贵等 20采用高效毛细管电泳法 ,以苯甲酸钠为内标 ,建立了消炎抗菌胶囊中黄芩苷的含量测定法。毛细管规格为 60cm 75 m,检测波长为 215nm, 电压为 21kV, 电解缓冲液为 10mmol L 硼砂且 PH值为 9. 0,柱温为20 。黄芩苷在 96768 g mL-1 范围内线性关系良好 ,加样回收率为 %,RSD 为 %。该法快捷、灵敏、准确 , 适用于该制剂的快速含量分析。 二、实验的目的和意义 实验研究目的 1、能够运用煎煮法、碱 溶酸沉法对黄芩中的黄芩苷进行提取和精制 . 2、会用显色反应、色谱法进行黄芩苷的检识 . (二）意义 对黄芩苷提取分离实验的工艺路线进行改进，提高实验成功率，缩短实验时间，改善实验教学效果 . 黄芩苷为祖国医学中的一种传统药用植物，其主要作用成分黄芩苷已得到了国内外医疗界的广泛认同和应用，由此黄芩苷的提取工艺和测定方法也也就随之变得尤为重要，就目前较为主要的一些工艺方法的原理和应用价值进行归纳和总结，以期从中得到某些有价值的信息，对今后发展趋势有所启发。 11 / 12 广 州 大 学 硕士研究生学位论文开题报告 题目： 基于胸部 CT的肺结节自动检测法研究 专业：电子与通信工程 研究方向： 硕士