小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备

环 境 昆 虫 学 报 J o u r n a l o fE n v i r o n m e n t a l E n t o m o l o g y ， J u n e 2 0 1 0 ， 3 2 ( 2 ) ： 1 9 41 9 8 I S S N 1 6 7 4 - 0 8 5 8 d o i ： 1 0 3 9 6 9 i i s s n 1 6 7 40 8 5 8 2 0 1 0 0 2 0 0 8 小菜蛾普通气 味结合 蛋 白 2基 因的原核 表达与多克隆抗体 制备 徐红星， 陈东旭， 张雅林 ， 王 敦 ( 西北农林科技 大学植保资源与利用教育部重点实验 室，陕西杨凌7 1 2 1 0 0 ) 摘要 ： 本 实验提取 羽化 3 d的小菜蛾 P l u t e l l a x y l o s t e l l a 成虫 触角总 R N A， 反转录合成 c D N A， 以此为模 板 P C R扩增 出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因， 大小为4 9 2 b p ， B l a s t 结果显示与多种昆虫的G O B P 2具有较高的同源性。将该 基因克隆到表达载体 p MA Lc 4 E中， 转化宿主菌 T B 1( D E 3 ) ， 获得单克隆重组质粒 p MA Lc 4 EG O B P 2 。I P T G 成功诱导 p MA Lc 4 EG O B P 2表达出约6 0 k D a的融合蛋白。优化诱导条件为3 m m o L L终浓度 I P T G 、 6 h ， 可获得 大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、 免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。E L I S A分析表明制 备 的抗体效价达 1： 1 2 81 0 。 关键词： 小菜蛾；G O B P 2 ； 原核表达； 多克隆抗体 中图分类号 ： Q 9 6 6 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1 6 7 4 - 0 8 5 8 ( 2 0 1 0 ) 0 1 -01 9 4 - 0 5 Cl o n i ng，p r o k a r y o t i c e x p r e s s i o n a nd po l y c l o na l a n t i b o d y pr e p a r a t i o n o f P l u t e l l a x y l o s t e l l a g e n e r a l o d o r a n t b i n d i n g p r o t e i n 2( GOB P 2 )g e n e X U H o n g X i n g ，C H E N D o n g - X u ， Z HA N G Y a L i n ， WA N G D u n ( Mi n i s t r y E d u c a t i o n K e y L a b o r a t o ry o f P l a n t P r o t e c t i o n Re s o u r c e s& Pe s t Ma n a g e me n t ，No r t h we s t A & F Un i v e r s i t y，Ya n g l i n g 7 1 2 1 0 0，S h a a n x i P r o v i n e ， C h i n a ) A b s t r a c t ： A 4 9 2 b p o p e n r e a d i n g fl a m e o f t h e g e n e r a l o d o r a n t b i n d i n g p r o t e i n 2( G O B P 2 )g e n e w a s a m- p l i fie d b y P CR wi t h c DNA o f n e wl y e me r g e d Pl u t e l l a x y l o s t e l l a a n t e n n a e a s t e mp l a t e a n d s e q u e n c e d T he r e s ul t o f Bl a s t s h o we d t h a t t he c l o n e d g e n e h a s h i g h n u c l e o t i d e s e q u e n c e s h o mo l o g y wi t h o t h e r i n s e c t T he g e n e wa s c l o n e d i n t o p MAL c 4E p r o k a ryo t i c e x p r e s s i v e v e c t o r s，a n d t h e c o n s t r u c t e d r e c o mbi na n t p l a s m i d s p MA L - c 4 E - G O B P 2 w e r e t r a n s f o r m e d i n t o t h e h o s t b a c t e r i a E c o l i T B 1( D E 3 ) 1 1 1 e e x p r e s s i v e p r o d u c t i n d u c e d b y I G wa s i d e n t i fie d b y S DS PAGE a n d W e s t e r n bl o t a na l y s i s Th e r e s u l t s s h o we d t h a t t h e r e c o mbi n a n t v e c t o r p MAL c 4E GOBP 2 p r o d u c e d a 6 0 kDa r e c o mb i n a n t p r o t e i nwh i c h wa s p u r i fi e d b y a ff i n i t y c h r o m a t o g r a p h y a n d t h e n i n j e c t e d i n t o N e w Z e a l a n d r a b b i t t o i n d u c e i m m u n e s e r u m ( p o l y - c l o n a l a n t i b o d y )E L I S A a n a l y s i s s h o w e d t h e t i t e r f o r t h e p o l y c l o n a l a n t i b o d y w a s 1： 1 2 8 1 0 Ke y wo r d s：Pl u t e l l a x y l o s t e l l a；GOBP 2；p r o k a ryo t i c e x p r e s s i o n；p o l y c l o na l a n t i b o d y 小菜蛾 P l u t e l l a x y l o s t e l l a是世界性 的十字花科 蔬菜和油料作物的重要害虫之一， 每年因小菜蛾为 害造 成 程 度 不 同 的 损 失 ( T a l e k a r a n d S h e h o n ， 1 9 9 3 ) 。小菜蛾在我国各地均有发 生， 南方危 害尤 为严重。小菜蛾是最早发现的具 有抗 药性 的鳞 翅 目害虫 ， 且其抗药性在近几十年 内显著增强。研究 表明， 小菜蛾的抗药性与过分单一的使用农药进行 防治关系密切 ( S a r a u e r e t a 1 ， 2 0 0 3 ) 。高毒高残 留 农药的使用不仅增强了昆虫的抗药性 ， 也危害了人 们的身体健康 ， 因此有必要发展一种安全 、 高效 的 基金项 目：国家 自然科学基金( 3 0 8 7 2 0 3 3 ) 作者简介 ： 徐红 星， 男 ，1 9 8 3年生 ， 硕 士研究生 ， 主要从 事昆虫气味结合蛋白功能研究 ， E m a i l ： x h n g 1 9 8 3 1 6 3 c o m 通讯作者 A u t h o r f o r c o r r e s p o n d e n c e ， E ma i l ： w a n g h a n d e c n y a h o o c o m c n 收稿时 间 R e c e i v e d ： 2 0 1 0 - 0 3 -0 1 ， 接受时间 A c c e p t e d ： 2 0 1 0 - 0 4 - 1 2 一2期 徐红星等： 小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备 防治新方法 。 利用寄主植物气味影响昆虫行为是取代杀虫 剂 的理想 的防治策 略 (P e l o s i a n d Ma i d a ，1 9 9 5 ) 。 昆虫的嗅觉系统是一个高度专一、 极其灵敏的化学 监测器 ， 能够检测、 识别和传递环境 中的化学气 味 分子 ， 并触发觅食、 寻偶 、 选择产卵场所等一系列特 殊 的行为反应 (娄永根和程家安， 2 0 0 1 ； 王桂荣等 ， 2 0 0 1 ； L i e t a 1 ， 2 0 0 8 ； D a m b e r g e r e t a 1 ，2 0 0 7 ) 。因 此 ， 研究昆虫嗅觉系统 、 开发新 型引诱剂是一种前 景广阔、 安全高效的防治手段。 昆虫能够感应 的气 味物质多为脂 溶性小分子 化合物， 这些外界的亲脂性分子不 能够直 接通过触 角感受器的亲水性 淋巴液到达 嗅觉神经树突末梢 ， 在这个 传递过程 中气 味结合 蛋 白( o d o r a n t b i n d i n g p r o t e i n ， O B P ) 起到 了溶解并 运输脂溶性化合 物穿 过亲水性液体 的作用 (K o a n d P a r k ， 2 0 0 8 ；L a u t e n s c h l a g e r t a 1 ， 2 0 0 7 ) 。昆虫气味结合蛋 白是一类低 分子量水溶性酸性蛋 白(P e l o s i a n d Ma i d a ，1 9 9 5 ) ， 多在昆虫嗅觉感器 中表达， 在 昆虫识别外界物质中 起重要作用。研究发现， 根据气味结合蛋 白的氨基 酸序列同源性和生理功能的不 同， 昆虫气味结合蛋 白可分为信息素结合 蛋 白( p h e r o m o n e v i n d i n g p r o t e i n ， P B P) ， 普 通气 味结 合蛋 白 I( g e n e r a l o d o r a n t b i n d i n g p r o t e i n I， G O B P I) ， 和普通 气味结合蛋 白 ( G O B PI I ) (L i a n d P r e s t w i c h ，1 9 9 7 ) 。P B P主要 存在于雄蛾触角中， 与昆虫感受性信 息素有关 ， 对 性信息素具有很 高的敏感性和专一性 (P e l o s i a n d Ma i d a， 1 9 95； L i e t a1 ， 2 0 08；Da mb e r g e r e t a1 ， 2 0 0 7 ；K o a n d P a r k ， 2 0 0 8 ) ， 部分 昆虫雌虫触角 中也 有不同量的表达 (Mo h a n t y ， 2 0 0 4； A b r a h a m， 2 0 0 5 ) 。 基于一些事实的研究发现， 性信息素的只能引诱雄 性成虫而对雌性成虫不起作用 ， 导致雌性成虫的数 量和繁殖能力在雄性成虫减少的情况下也不会受 到影响 ， 因此防治效果不理想。随后研究转 向了普 通气味结合蛋 白， G O B P在雌、 雄蛾触角 中均存 在， 并且表达量相同， 在昆虫感受普通气味物质过程 中 起着重要作用， 这种反应相对来说更为普遍但敏感 性较弱(S h a n b h a g e t a 1 ， 2 0 0 5 ； V o g t e t a 1 ，1 9 9 9 ； X u e t a 1 ， 2 0 0 5 ) 。对小菜蛾普通气 味结合蛋 白 的研究 ， 有助于深入 了解该害虫 的气味感受机制 ， 并为将来利用 昆虫行 为控制来进行 害虫 防治提 供 基础依据。 1 材料和 方法 1 1 试 验材 料 1 1 1 材料 供试昆虫小菜蛾从西北农林科技 大学无公害 农药研究中心获得 ， 幼虫 以小 白菜饲养 ， 温度 2 6 1 ，相对湿度 6 0 ， 光周期 1 6 h： 8 h( 光 暗) ； 表 达载体 p M A Lc 4 E和 T B 1 ( D E 3 ) 购 自 N E B公司 ， 大肠杆菌 T G 1由西北农林科技大学植保 资源与利 用教育部重点实验室保存 。实验 动物 雄性新西兰 大 白兔( 体质量 2 53 0 k g ) ， 由西安交通大学动 物实验中心提供。 1 1 2 试 剂 克隆载体 p G E MTe a s y V e c t o r 、 T 4 D N A连接 酶及 相应 B u f f e r 购 自 P r o me g a公 司。限制性 内切 酶 、 T a q D N A 聚合酶、 T o t a l R N A提取试剂 、 m R N A纯 化 试 剂 盒 、 1 s t S t r a n d c D N A S y n t h e s i s K i t、 D N A M a r k e r 、 蛋 白质分子量标 准为 T a k a r a产品； I P T G、 X g a l 为沃尔森产品； 弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐 剂购 自 S i g m a公司； 以辣根过氧化物酶 ( H R P) 标记 的羊抗兔 I g G购 自先锋公 司； a n t i MB P， D N A 回收 试剂盒为北京天根生物公司产品。 1 2 实验方法 1 2 1 引物设计与合成 参考 G e n e b a n k公布的小菜蛾 G O B P 2基因序列 ( P X y l o s t e l l a G O B P 2 P x y l ， G e n b a n k E U 3 6 8 1 1 5 ， Z h a n g e t a 1 ， 2 0 0 7 )设计一对引物 ， 序列如下 ： Px GOBP 2 一 F： 5 一 CA GGATCC ATG GCG T C A G T G T G G A G T C T 一 3 ( B a m H I ) ； P x G O B P 2一R： 5 一c垒 垒 T C A G T A C T F C T C C A G C A C G G C 一 3 ( 胁 I I I ) 。 以上引物由上海生工生物工程技术 服务有限 公司合成 ， 在 P x G O B P 2一F和 P x G O B P 2一R中分别 设计 了 B a mH I和 胁柑 I I I的酶 切 位点 ( 划 线 部 分)。 1 2 2 R N A提取与 c D N A合成 用 T o t a l R N A提取试 剂 ( R N A i s o t Hu s ，T a k a r a ) 提取羽化 3 d的小菜蛾触角总 R N A， m R N A纯化 试剂 盒 ( mR N A P u ri fi c a t i o n K i t ，T a k a r a ) 纯化 得 到 m R N A， 方法参考 T a k a r a公 司相关说明。以纯化 的 m R N A为模板 反转 录合成 c D N A， 方法参 照 T a k a r a 公司 P r i me S c r i p t TM 1 s t S t r a n d c D N A S y n t h e s i s K i t 说 明书 。 环境 昆虫学报 J o u r n a l o f E n v i r o n m e n t a l E n t o m o l o g y 1 2 3 基因克隆与表达载体构建 以反转录合成的 c D N A为模板 ， 以 P x G O B P 2一 F、 P x G O B P 2一R为引物进行扩增。P C R反应体系 为 2 5 L ： 1 0B u f f e r 2 5 L ， Mg 2 Ix L ， d N T P ( 各 2 5 m mo l L ) 2 t x L ， 上 下游 引物 各 0 5 tx L ， c D N A 0 3 L ， T a q D N A 聚合酶 0 3 I x L ， 双灭 菌蒸 馏水 1 6 9 L 。P C R扩增按如下条件进行 ： 9 4 C预变性 3 m i n ； 9 4 C变性 4 5 S ， 6 2 复性 4 5 S ， 7 2 C延伸 5 0 S ， 3 5个循环； 最后 7 2 C延伸 1 0 ra i n 。P C R产物经 1 琼脂糖凝胶 电泳 ， 割胶回收 、 纯化按 D N A回收试剂 盒说 明书进行 。经纯化 回收后 的 P C R产物与 T e a s y载体连接 ， 转化 大肠杆菌 T G 1 ， 通过蓝 白斑筛 选 ， 挑取阳性克隆， B a mH I 和 胁 I I I 双酶切鉴定 后测序( 北京奥科生物技术有限公司) 。 经鉴定的阳性克隆过夜摇菌后提取质粒 D N A， 经 B a mH I 和 H i n d I I I 双酶切后回收目的基因片段 ， 分别与用相 同内切酶双酶切 的 p M A Lc 4 E表达载 体连接 ， 转化大肠杆菌 T B 1( D E 3 ) 感受态细胞， 蓝 白斑筛选挑选阳性克隆菌斑 ， B a mH I 和 H i n d I I I 双 酶切鉴定、 测序正确后获得重组表达菌 p MA L c 4 E Px GOBP 2一TB1 。 1 2 4 融合蛋白诱导表达条件的优化 将鉴定正确的表达菌转接到含有氨苄抗性 L B 液体培养基 中 3 7 C过夜培养。过夜 培养 的菌液以 1： 1 0 0 体 积 转 接 至 新 的 培 养 基 中培 养， 3 7 C， 2 2 0 r mi n 培养振摇至 0 D =0 5 。加入 I P T G使其 终浓度分别 为 0 5 ， 1 0 ，1 5 ，2 0 ， 3 ，4 m m o l L ， 3 0 C， 2 2 0 r m i n诱导表达 6 h 。离心收集菌体变性 处理后 ， 经 1 0 S D SP A G E电泳 ， 考马斯亮蓝染色 分析， 确定最佳诱导浓度。 以最佳诱导浓度加入 I P T G， 以同样的方法诱导 表达 0， 1 ， 2 ，3 ， 4， 5 ，6 ， 7， 8 h后分别取样 ， 经 1 0 S D SP A G E电泳 ， 考马斯亮蓝染色分析， 确定 最佳诱导表达时间。 1 2 5 We s t e r n b l o t 鉴定 以优化 的条件诱 导表达菌 p M A Lc 4 E P x G O B P 2一 T B 1 表达， 菌体经 1 0 S D SP A G E后 ， 三明治夹心法半干转印至 P V D F膜 ， 以 a n t i M B P 为一抗 ， 以辣根 过氧化物酶 ( HR P) 标记 的羊抗兔 I g G为二抗进行 We s t e rn b l o t 鉴定 。 1 2 6 表达蛋 白纯化 以优化的诱导条件诱导获得 1 0 0 mL菌液 ， 超 声波破碎后离心 ， 收集含有融合表达蛋 白的上清。 用 A m y l o s e 树脂纯化 MB P融合蛋 白， 方法参考 N e w E n g l a n d B i o l a b s 公 司 p MA Lc 4 E表达纯化 系统说 明书进行。 1 2 7 a n t i P x G O B P 2多克隆抗体的制备 将纯化的融合蛋 白 MB PP x G O B P 2与弗 氏完 全佐剂按 1： 1的体积比充分乳化后， 皮下 多点注 射新西兰大 白兔 。免疫前 ， 从 兔耳抽取血样， 作为 阴性对照。初次免疫后， 每 1 0 d 使用弗 氏不完全佐 剂加强免疫 1 次 ， 共 3次。末次免疫后一周采血 ， 分 离血清 ， 一7 0 保存。 1 2 6 a n t i P x G O B P 2抗血清效价检测 以纯化的 P x G O B P 2融合蛋白( 1 0 0 g 孔) 包被 酶联板 ， 分别 以不 同稀释倍数 的免疫前兔血 清( 阴 性对照) 和免疫后兔血清作为一抗 ， 用 间接 E L I S A 法测定多克隆抗体的效价。 2 结果与分析 2 1 P x GO B P 2基因的克隆和重组质粒 p MA L c 4 E P x GOB P 2的构建 以反转录的 c D N A为模板 ， 经 P C R扩增得到约 5 0 0 b p的条带( 图 1 ) ， 与 目的片段长度相近。P C R 产物与 T e a s y载体连接后序列 ， 结果显示完整 的 开放阅读框含有 4 9 2 p b ， 序列经 B l a s t 比对发现与多 种昆虫的 G O B P 2具有较高的同源性 ， 表明该序列为 小菜蛾 G O B P 2基因。通过 B a mH I 和 I I I 双酶 切 ， 将 目的片段克隆至 p M A Lc 4 E载体上， 重组质 粒经双酶切 ( 图 2 ) 和测序检 验， 序列 与 目的片段 吻合。 图 1 小菜蛾 G O B P 2基因P C R扩增结果电泳分析 Fi g 1 El e c t r o ph o r e s i s o f PCR p r o d uc t s of GOBP2 g e n e M， D N A分子量标准 Ma e r( D I 20 0 0) ；1 ， P C R产物 P C R p r o d u c t i o n of P x G OB P 2 g e n e 如 7 5 2 2期 徐红星等： 小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备 图 2 B a m H I、 H a n d 双酶切鉴定 p M A L c 4 E P x G O B P 2 F i g 2 Di g e s t i o n o f p MALc 4 E P x G OB P 2 M， D N A分子量标准 Ma r k e r( D L 2 0 0 0 ) ； 1 ， 阴性克隆N e g a t i v e c l o n e ； 2 ， 阳性克隆 P o s i t i v e c o n e 2 2 诱导表达条件优化及鉴定 以不 同终 浓度 I P T G诱 导含有 重组质粒 的菌 株 ， 表达 6 h后分别取样 ， 经 1 0 S D SP A G E分析 表明， 含 p MA Lc 4 EP x G O B P 2重组质粒 的菌株 大量表达了分子量约为 6 0 k D a的外源蛋 白， 与理论 值相一致 ， 当 I P T G终浓度为 3 m mo l L时表达量达 到最高值( 图 3 A)。 ， M KL； 9 7 2 6 6 4 I V V 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 A B 图 3 p MA L c 4 EP x G O B P 2诱导表达条件优化 F i g 3 pMAL c 4EPx GOBP 2 o p t i ma l i nd u c t i o n ( A ) 不 同 I P T G浓度 下 融合 蛋 白的 S D SP A G E 分 析 S D SP AG E a n aly s i s o f r e c o mb i n a n t P XG 0B P I I u n d e r d i ff e r e n t I P T G c o n c e n t r a t i o n I， 0 5 mM； I I， 1 0 mM； ， 1 5 mM； 1V， 2 0 mM； V， 3 m M； ( B ) 不同诱导时问下融合蛋白表达产物 的 S D SP A G E分析( 0 8 h ) ， S D S P A G E a n a l y s i s of r e c o m b i n a n t P XG OB P I I u n d e r d i f f e r e n t t i me ( 08 h) 以3 mm o l L终浓度的 I P T G诱导含有 p MA L c 4 EP x G O B P 2重组质粒的菌株， 表达 0 ， 1 ，2 ，3 ， 4， 5 ，6 ， 7 ，8 h后分别取样 ， 经 1 0 S D SP A G E 分析， 表达后 6 h后 目的条带表达量达到最高值( 图 3 B)。 2 3 We s t e r n b l o t 鉴定 以优化的条件 ( 3 m mo l L终浓度 I P T G、 6 h ) 诱 导含有 p MA Lc 4 EP x G O B P 2重组质粒的菌株 ， 以 及空载体 p M A Lc 4 E， 菌体经 We s t e r n b l o t 分析 ， 结 果显示 6 0 k D a 、 5 0 k D a有明显条带 ， 证 明 p MA L c 4 EP x G O B P 2能够正确表达( 图 4 ) 图 4 表达蛋 白的 We s t e r n b l o t 鉴定 F i g 4 We s t e r n b l o t a n aly s i s o f t h e r e c o mb i n a n t P x GOB P 2 p r o d uc e d b y pMAL c 4E Px GOBP 2 1 ， I P T G诱导 p MA Lc 4 EP x G O B P 2在 大肠 杆菌 T B 1 ( D E 3 )中表 达 I P T G i n d u c e d p MA Lc 4 EP x G O B P 2 e x p r e s s e d i n E c o l i T B 1 ( D E 3 ) ； 2 ， I P T G诱导 p M A Lc 4 E在 大 肠杆菌 T B 1 ( D E 3 )中表达 I P T G i n d u c e d p MA Lc 4 E e x p r e s s e d i n E c o l i T B 1 ( D E 3 ) 2 4 抗血清的效价检测 将重组蛋白 MB PP x G O B P 2作为抗原 ， 用间接 E L I S A法测定多抗 效价。多克 隆抗体第一 次稀释 1 0 0 0倍 ， 以后采用倍比稀释法， 当稀释到 1 2 8 0 0 0倍 时， 待检血清的 O D值明显大于阴性对照 O D值 的 2 倍 ， 而 且 阴 性对 照无 明显 的梯 度。表 明 MB P P x G O B P 2蛋 白对 a n t i P x G O B P 2多克隆抗体具 有 很好 的免疫原性 ， 抗体效价为 1 2 81 0 。 3 结论与讨 论 随着分子生物学技术的发展 ， 越来越多 的昆虫 O B P基 因被人们发现 (Mc K e n n a e t a 1 ，1 9 9 4； P i k i e l n y e t a 1 ，1 9 9 4；Wa n g e t a 1 ，2 0 0 3；Ab r a h a m e t a 1 ， 2 0 0 5 ； L u e t a 1 ， 2 0 0 7 ； J i n e t a 1 ， 2 0 0 9； 王桂荣 等 ， 2 0 0 1 ) ， 其 中能够检索 的全序 列 的 G O B P有 3 3 如 7 5 2 1 9 8 环境 昆虫学报 J o u r n a l o f E n v i r o n m e n t a l E n t o m o l o g y 3 2卷 个、 P B P有 4 4个 ， 但是 目前对于 O B P的生理功能 的 研究 目前仍 只能通过标记配体进行结合实验来研 究( D a mb e r g e r e t a 1 ， 2 0 0 7 ，王桂荣等 ， 2 0 0 2 ) ， 因此 制备高效价 的抗体是研究 O B P基 因功 能的基础。 研究表明 ， 亲缘关系较近的昆虫 O B P氨基酸序列 同 源性很高， 其抗体 问具有交叉抗性的特 点( Wa n g e t a 1 ， 2 0 0 3 ；J i n e t a 1 ，2 0 0 9 ) ， 因此 可 以利 用 已知 O B P的抗体来鉴定未知的同源 O B P 。 本研究对小菜蛾 G O B P 2基因进行了高效表达， 以亲和色谱纯化的融合表达蛋 白免疫新西兰大 白 兔制备了 a n t i P x G O B P 2多克隆抗体 ， 抗体效价为 1：1 2 8 x 1 0 。该 多 抗 的 制 备 为 检 测 小 菜 蛾 G O B P 2基因在昆虫体 内表达 的时空分布和表 达量 提供了一个有效的手段 ， 为深入研究小菜蛾 G O B P 2 基因 的 功 能 及 未 知 O B P 的 鉴 定 提 供 了 基 础 。 G O B P 2多抗的制备 ， 为深入研究小菜蛾对气 味的行 为反应 ， 包括与寄主植物 的互作 、 寻偶 、 产卵等特殊 行为提供重要的物质基础 ， 为未来害虫的防治提供 新的思路和途径 。 参 考 文 献 ( R e f e r e n c e s ) Ab r a h a m DL，Fs t e d t C，P i c i mb o n J F，2 0 05 Mo l e c u l a r c h a r a c t e r i z a t i o n a n d e v o l u tio n o f p h e r o mo n e b i n d i n g p r o t e i n g e n e s i n Ag r o t i s mo t h s I n s e c t B i o Mo 1 B i o ， 3 5 ( 1 0 ) ： 1 1 0 01 1 1 1 Da mb e r g e r F F，I s h i d a Y，L e al W S，W fi t h r i e h K，2 0 0 7S t r u c t u r a l b a s i s o f l i g a n d b i n d i n g an d r e l e a s e i n i n s e c t p h e r o mo n e -b i n d i n g p ro- t e i n s： NMR s t r u c t u r e o f a n t h e r a e a p o l y ph e mu s PBP 1 a t p H 45 J Mo 1 B i o ， 3 7 3 ( 4 ) ： 8 1 1 8 1 9 J i n F L，Do n g XL， Xu XX，Re n S X，2 0 08 c DNA c l o n g i n g an d r e c o mb i n an t e x p r e s s i o n o f t h e g e n e r al o d o r a nt b i n d i n g p rot e i n f r o m S p o d o p r a L i t u r a S c i C h i n a S e r CL if e S c i ， 5 2 ( 1 ) ， 8 08 7 K0 HJ ，Pa r k T H。 2 0 0 8En h an c e me n t o f o d o r ant d e t e c t i o n s e n s i t i v i ty b y t h e e x p r e s s i o n o f o d o r a n t b i n d i n g p rot e i n Bio s e ns Bio e l e c t r o n ， 2 3 ( 2 3 ) ：1 0 1 71 0 2 3 L a u t e n s e h l a g e r C，Le a l WS， Cl a r d y J ，2 0 0 7 Bo mb y x mo ri p h e ro- mo n e b i n d i n g p r o t e i n b i n d i n g n o n p h e romo n e l i g a n d s ：I mp l i c a t i o n s f o r p h e r o mo n e r e c o g n i t i o nS t r u c t u r e，1 5：1 1 4 81 1 5 4 L i F，P r e s t wi c h GD，1 9 9 7E x p r e s s i o n an d c h ara c t e riz a t i o n o f a l e p i d o p t e r a n g e n e r a l o d o r a n t b i n d i n g p r o t e i n I nse c t Bi o Mo 1 Bi o ，2 7 ( 5 ) ： 4 0 5 4 1 2 “ S ， P i e i m b o n J F ，J i S ， K a n Y C， Q i a o C L ， Z h o u J J ，P e l o s i P， 2 0 0 8 Mu l t i p l e f u n c t i o n s o f a n o d 0 r a n t b i n d i n g p r o t e i n i n t h e mo s q u i t o A e d e s a e g y p t i B i o c h e mB i o p h R e s C o ， 3 7 2 ( 3 ) ： 4 6 4 4 6 8 L o u YG， Cb e n g J A， 2 0 0 1 C h e mi c al S e n s o r yMe c h a n i s ms o fI n s e c ts C h i - n g s e E c o 1 ， 2 0 ( 2 ) ： 6 66 9 娄永根 ，程家安 ， 2 0 0 1 昆虫的 化学感觉机理生态学杂志， 2 0 ( 2 ) ： 6 66 9 Mo h a n t y S，Z u b k o v S，Gr o n e n bo r n AM ，2 0 0 4T he s o l u tio n NMR s t r u c t a r e o f An t h e r a e a p o l y ph e mu s PB P p rov i d e s n e w i n s i g h t i n t o p h e ro mo n e r e c o g n i t i o n b y p h e romo n eb i n d i n g p rot e i n s Mo 1 Bio ， 3 3 7：4 4 3 4 5 1 Pe l o s i P，Ma i d a R ，1 9 9 5Od o r a n t b i n d i n g p rot e ins i n i n s e c t s C o mp B i o c h e m P h y s i o l ， l l 1 ( 3 ) ， 5 0 3 5 1 4 S a r a u e r BL，Gi l l o t t C，He g e d u s D，2 0 0 3Ch a r a c t e r i zat i o n o f a n i n t e s t i n a l mu c i n f r o m t h e p e r i t rop h i e ma t rix o f t h e d i am o n d b a c k mo t h， P l u t e l l a x y l o s t e l l a I nse c t Mo 1 B i o 1 ， 1 2 ( 4 ) ： 3 3 34 3 S h a n b h a g S R ，S mi t h DP，S t e i n b r e c h t RA ，2 0 0 5T h ree od o r a n tbin d i n g p rot e i n s a r c c o e x p r e s s e d i n s e n s i l l a t r i c h o d e a o f Dr o s o p h i l a m e lan o g nst e r A r t h r