堆肥中大肠菌群等粪便污染指标菌的残留状况调查

农业环境科学学报 2 0 1 0 ， 2 9 ( 8 ) ： 1 5 9 5 - 1 6 0 0 J o u r n a l o f Ag r o - E n v i r o n me n t S c i e n c e 堆肥中大肠菌群等粪便污染指标茵的残留状况调查 龚春明 ， 王晓丹 ， 顾卫兵 ， 染谷孝 4 ( 1 厦门市环境保护科研所， 福建 厦门 3 6 1 0 0 6 ； 2 上海市环境科学研究院， 上海 2 0 0 2 3 3 ； 3 南通农业职业技术学院， 江苏 南通 2 2 6 0 0 7 ； 4 日本佐贺大学农学部，日本 佐贺 8 4 0 0 0 2 7 ) 摘要 ： 从 1 3 本九州地 区 2 3处堆肥化设施采集 了以牛粪 、 鸡粪 、 污泥和餐厨垃圾为原料 的堆肥试样 2 9个 ， 调 查了大肠 菌群 等粪便 污染指标菌的残留状况。 结果表明， 使用 D E S O培养基有 1 1 个试样被检出大肠菌群， 检出率达 3 8 ， 菌数在 1 0 2 - 1 0 c f u g 的范围。 使用 A P I 2 0 E鉴定系统对 4个试样 中的 2 1 个分离纯化菌株进行了菌种鉴定，发现有大肠菌群属的 E s c h e r i c h i a c o l i 、 E s c h e r i c h i a v u l n e r i s 、 P a n t o e a s p 和 B u t t i a u x e l l a a g r e s t i s ， 以及非大肠菌群属的S e r r a t i a m a r c e s c e n s等肠内细菌科细菌。采用血清凝集试验对 5株 E c o l i 的病原性检测结果均为阴性。 进一步针对 6处堆肥设施的堆肥发酵过程中大肠菌群的消长追踪发现， 大肠菌群数从原料到成 品出现了逐渐减少直至消失 、 暂时消失、 未完全消失、 完全未检出4种走势 ， 显示即使堆肥发酵温度在 6 O以上， 大肠菌群也有可 能通过交叉污染等途径残 留在堆肥成品中。 关键词 ： 堆肥 ； 大肠菌群 ； 大肠菌 ； 沙门氏菌 ； 残 留 中图分类号 ： S 1 4 1 4 文献标志码 ： A 文章编号 ： 1 6 7 2 2 0 4 3 ( 2 0 1 0 ) 0 8 1 5 9 5 0 6 I nv e s t i ga t i o n o n S ur v i v a l o f Co l i f or m Ba c t e r i a i n Va r i o us Co m p os t s GONG Ch un mi n g ， W ANG Xi a o da n ， GU W e i bi n g ， SOMEYA Ta k a s hi ( 1 Xi a me n E n v i r o n me n t a l P r o t e c t i o n I n s t i t u t e ， Xi a me n 3 6 1 0 0 6 ， C h i n a ； 2 S h a n g h a i Ac a d e my o f E n v i ron me n t a l S c i e n c e ， S h a n g h a i 2 0 0 2 3 3 ， C h i n a ； 3 N a n t o n g Ag ri c u l t u r a l Vo c a t i o n a l T e c h n o l o g y C o l l e g e ， Na n t o n g 2 2 6 0 0 7 ， C h i n a ； 4 F a c u l t y o f Ag r i c u l t u r e ， S a g a Un i v e r i s i t y ， S a g a 8 4 0 0 0 2 7 ， J a p a n ) Ab s t r a c t ： O c c u r r e n c e a n d s u r v i v al o f f e c a l c o n t a m i n a t i o n i n d i c a t o r ( c o l i folq n b a c t e ri a ) i n v a ri o u s c o mp o s t s a mp l e s c o l l e c t e d f r o m 2 3 c o n p o s t i n g f a c i l i t i e s i n K y u s h u w e r e i n v e s t i g a t e d b y u s i n g s e l e c t i v e m e d i a C o l i f o r m b a c t e ri a w e r e d e t e c t e d o n d e s o x y c h o l a t e a g a r ( D E S O) fr o m 1 1 ( 3 8 ) o f 2 9 p r o d u c t s a m p l e s ( 1 5 C O W d u n g ma n u r e s ， 4 p o u l t r y ma n u r e s ， 2 b i o s o l i d c o m p o s t s a n d 8 f o o d w a s t e c o mp o s t s ) a t a r a n g e o f 1 0 - 1 0 c f u g d ry ma t t e r F r o m p o s i t i v e s a mp l e s ， 2 1 i s o l a t e s w e r e p u ri fi e d f r o m w h i c h ， s p e c i e s o f c o l i f o rm b a c t e ri a( E c o l i ， E v u l n e r i a , P a n - t o e a s p a n d B u t t i a u x e l l a a g r e s t ) w e r e i d e n t i fi e d ， o t h e r b a c t e ri a ( S e r r a t i a m a r c e s c e n s ) w e r e al s o o b s e r v e d ， s u g g e s t i n g t h a t c a r e f u l i d e n t i fi c a t i o n wa s n e c e s s a ry t o a v o i d f a l s e p o s i t i v e c o u n t i n g I s o l a t e s o f E c o l i we r e t e s t e d f o r s l i d e a g g r e g a t i o n wi t h a s e t o f a n t i s e r u ms a g a i n s t p a t h o g e n i c E c o l i s e r o t y p e s a n d n e g a t i v e r e a c t i o n w a s o b t a i n e d for all t h e i s o l a t e s t e s t e d F a t e o f f e c a l - c o n t a mi n a t i o n i n d i c a t o r s wa s f o l l o w e d d u ri n g c o m p o s t p r o d u c t i o n a t 6 c o m p o s t f a c i l i t i e s a n d 4 p a t t e r n s w e r e o b s e r v e d ： ( 1 ) d e c r e a s e d a n d fi n al l y d i s a p p e a r e d ， ( 2 ) d e c r e a s e d ， t h e n r e - g r o w t h o c c u e d i n p r o d u c t s ， ( 3 ) d e c r e a s e d t o c e r t a i n e x t e n t a n d r e ma i n e d i n p r o d u c t s ， ( 4 ) n o t d e t e c t e d e v e n f r o m r a w m a t e r i al s T h e s e r e s u i t s s u g g e s t e d t h a t s o me c o l i f o rm b a c t e ri a mi g h t s u r v i v e d u ri n g c o mp o s t p r o d u c t i o n e v e n t e mp e r a t u r e r e a c h e d t o a s h i g h a s 6 0 Ke y wo r d s ： c o mp o s t ； c o l i foI l n b a c t e ri a ； E s c h e r wh i a c o l i ； S a l mo n e l l a ； s u r v i v a l 我国有机废弃物 资源分布广泛 ， 餐厨垃圾 、 农作 物生产和畜禽养殖中产生的大量秸杆和粪便 、 污水处 理厂生产的污泥、 食品和饮料加工 中的边角余料等都 是其中较为常见 的有机废弃物， 在农业上具有 巨大的 收稿 日期 ： 2 0 1 0 - 0 2 1 3 作 者简介 ： 龚 春明( 1 9 6 5 一 ) ， 男 ， 福建 建 阳人 ， 留 日博 士 ， 高 级农 艺师 ， 主要从事生物环境保护研究。E - ma i l ： x mg c m1 6 3 c o n 通 讯作者 ： 染谷孝E - ma i l ： s o me y a t c c s a g a U a e J p 开发潜力。对它们加 以有效的处理和利用 ， 对于节约 自然资源 、 防止环境污染 、 实现生态经济 良性循环具 有重要意义。 随着我国近 3 0年社会经济的飞速发展 ， 特别是随着我 国人 民生活水平 的提高以及人世后我 国农产品应对 国际竞争 的需求 ， 人们对农产品的品质 提出了更高的要求， 从而给使用有机废弃物制造堆肥 创造 了巨大的市场空间。 然而 ， 随着堆肥产量的急剧增加 ， 一些未充分腐 1 5 9 6 龚春明等： 堆肥中大肠菌群等粪便污染指标菌的残留状况调查 2 0 1 0 年8月 熟 的堆肥施用后 ，引起 了作物烧苗和土壤污染等问 题， 尤其是一些病原微生物通过堆肥的使用而导致人 类疾病的事件屡屡发生。据报道 ， 由于生吃被污染 的 水果和蔬菜， 而导致具有强烈病原性的肠管出血性埃 希 氏菌 E s c h e r i c h i a c o l i 0 1 5 7 ： H7 ( E c o l i 01 5 7 ) 食 物 中毒事件在许多国家时有发生 ， 已成为世界关注的公 共卫生问题 ，由E c o l i 0 1 5 7引起的食源性疾病的暴 发 、 流行已呈逐年上升的趋势 1 _ 5 l。 大量研究证实 ， 牛等 家畜、 家禽是大肠菌 E c o l i O1 5 7的重要宿主 ， 对人类 的健康造成很大的威胁 0 】 。因此 ， 加强堆肥生产过程 中发酵热的管理，对堆肥的微生物安全性十分重要， 也是生产安全农产品的一个重要环节。 目前 ， 有关土壤环境 、 水环境和废弃物中大肠菌 的残留研究很多【 i l 3 1 ， 但有关堆肥中的病原菌存在的 调查实例很少。笔者在 日本 留学期间 ， 对这方面研究 有一定的涉及口 5 j ， 本研究是通过从 日本九州地 区各 县堆肥制造设施采集的堆肥试样 ， 进行大肠菌群等粪 便污染指标菌的残留调查 ， 同时对作 为堆肥原料的牛 粪和餐厨垃圾等的大肠菌群数量及其在堆肥化过程 中的消长进行了相应的探讨 ， 以期为我国的堆肥生产 过程中微生物安全性控制提供有益参考。 1 材料与方法 1 1试样的采取和处理 从 日本九州地 区的 2 3个堆肥设施 中采集 了 2 9 个堆肥试样( 表 1 ) 。其中， 牛粪堆肥试样 l 3 个 ( 序号 1 1 3 ) ， 牛粪与鸡粪混合堆肥试样 2个( 序号 1 4 ， 1 5 ) ， 鸡粪堆肥试样 4 个 ( 序号 l 6 1 9 ) ， 污泥堆肥试样 2 个 ( 序号 2 0 ， 2 1 ) ， 餐厨垃圾堆肥试样 8 个( 序号 2 2 2 9 ) ， 这些全部是完全发酵的堆肥产品。 堆肥发酵过程中还 混入了作为畜舍垫料的锯屑 、 树皮 、 稻草和稻壳等辅 料 。 同时也采集了 6 个堆肥( 序号为 1 0 l 3 ， 2 2 ， 2 5 ) 的 原料以及发酵过程中的堆肥 中间品。 试样采取时，从堆肥表 面以下 3 0 5 0 c ：m的 5 个 部位各采集试样大约 5 0 0 g ，充分混合后取混合试样 5 0 0 g密封于试样袋，放入低温箱中运送到研究室冷 藏保存 ， 3日内进行分析。 称取试样 1 0 g ( 湿重 ) 放入不锈钢分散杯中， 加入 灭菌生理盐水至 1 0 0 m L ， 在分散机( 日本精机 A M一 3 ) 中 1 5 0 0 0 r m i n 分散处理 1 5 m i n ， 分散液用灭菌生理 盐水逐次梯度稀释， 得到 l C r 。 1 0 - 8 的个数梯度稀释液。 1 2大肠菌群的检测方法 大肠菌群使用脱氧胆酸盐琼脂( D e s o x y c h o l a t e 表 1各种堆肥制造场所、 原料、 辅料和发酵时间 T a b l e 1 T h e c o mp o s t i n g p l a c e ， l a W ma t e r i a l ， s u p p l e me n t a r y ma t e r i al a n d t h e c o mp o s t i n g t i me 莓 制 造 场 所 原 料 辅 料 发 注： 1 7 ， 粒状品； 1 8 ， 粉末状品。 2 3 - 2 6 ， 2 7 - 2 8 分别是同一设旃， 不同时期采取的试样 。 A g a r ， D E S O ) 培养基( 日 本， 荣研) 平板法培养计数。 从 1 0 - 3- 1 0 的稀释悬浊液中选取适当的3 梯级，取 l 0 0 L滴人平板上( 直径 9 c m培养皿) 涂抹 ， 5 重复 ， 在 3 7 cI= 下培养 2 4 h ， 计数 D E S O培养基上出现赤红色的 大肠菌群菌落。 1 3大肠菌群分离菌株的鉴定 用接种笔从 D E S O培养基中疑似大肠菌群的菌 落上挑菌 ， 放入 0 5 mL灭菌生理盐水 中悬浊( 1 个试 样取数个菌落) 。 把悬浊液在普通肉汤琼脂培养基( 日 本， 生研) 上划线接种， 3 0 下培养 5 d 后 ， 确认其纯 粹性。按照 A P I 2 0 E系统的操作指南， 分离菌株纯化 第 2 9卷第 8 期 农 业 环 境 科 学 学 报 后的新鲜培养菌液接种在 A P I 2 0 E系统的小试管 中， 经 3 7、 2 4 h培养后 ，通过观察试验管内的反应 ， 或 是加入试剂后颜色的变化 ， 对照 A P I 2 0 E系统编码来 判别鉴定细菌的种类 。 1 4大肠菌( E c o l i ) 的血清凝集试验 采用玻片凝集法 ， 免疫血清使用 日本生研的病原 大肠菌免疫血清( 含 4 3种 0抗原免疫血清) 。E c o l i 的菌株经培养后 ，用接菌环接菌放入 1 0 0 Ix L生理盐 水中制成悬浮液 ， 经 3 7 c I 二 、 1 5 ra i n加热处理后 去除菌 体表面 的鞭毛抗原 。接着经过 1 5 0 0 0 r rai n 一 、 5 rai n 的离心分离 ，在去除上清液后在沉淀 中加入 1 0 0 l x L 生理盐水制成抗原液。 在玻片上滴入病原大肠菌混合 血清和作为对照的生理盐水各 1 滴 ， 用接菌环接种抗 原液在血清和生理盐水上各 自接种 ，在玻片上混匀 ， 数分钟后就可判断有无凝集反应。 试验 中作为对照的 阳性病原大肠菌使用 日本产业 医科大学产业保健 院 微生物研究室保存 的 E c o l i 01 5 7 ： H 7菌株 ，阴性大 肠菌使用 E c o l i K1 2菌株 。 2 结果与讨论 2 1堆肥中的大肠菌群数 2 9个堆肥试样 中，大肠菌群被检出的有 1 1个 ( 3 8 ) ，菌数在 1 O 1 0 c f u g 一的范围。从原料来源 看 ， 牛粪堆肥 l 3个试样( 试样 1 1 3 ) 中有 6个检出大 肠菌群 ， 菌数在 3 0 x 1 0 2 - 2 5 x 1 0 c f u g ， 污泥堆肥 2个 试样( 试样 2 0 ， 2 1 ) 的菌数分别为 1 1 x l 0 、 1 8 x 1 0 c f u g ， 餐厨垃圾堆肥 8个试样 ( 试样 2 2 2 9 ) 中有 3个检 出大肠菌群 ，菌数在 3 2 x 1 0 3 - 2 4 x l 0 4 c f u g 之间 ； 而 牛粪、 鸡粪混合堆肥 2个( 试样 1 4 ， 1 5 ) ， 以及鸡粪堆肥 4个( 样品 1 6 1 9 ) 没有检出大肠菌群。 结果表明， 大肠 菌群较易在 以牛粪 、 污泥和餐厨垃圾为原料的堆肥中 残留， 这可能与原料中大肠菌群的多寡有关。 根据 日本对蔬菜抽检结果 ， 有机栽培蔬菜 1 5 3 个 抽检样 品中的 9 8 ，市售蔬 菜 4 4个抽检样 品中的 5 6 ， 被检出了大肠菌群 。因此 ， 堆肥的施用可能是 造成蔬菜、 水果被污染的原因和人类疾病传染 的途径 之一， 尤其是以牛粪 、 污泥和餐厨垃圾为原料的堆肥。 通常认为， 在堆肥制造过程产生的发酵热能够杀死原 料中带来的病原菌、 寄生虫卵和杂草种子等。在本研 究中，腐熟的堆肥成品中大肠菌群被高频率地检出 ， 特别是大肠菌 、沙 门氏菌以及其他的内源性感染菌 ( 数据未列 出) 被检出 ， 说明在堆肥发酵过程 中， 温度 的控制和交叉污染的防止等管理工作十分重要。 2 2大肠菌群分离菌株的鉴定与大肠菌血清凝集试验 选取 4个被检出大肠菌群 的堆肥试样 ， 每一试样 选取赤红色的疑似大肠菌群菌落数个，共计 2 l 株进 行分离纯化 。 使用 A P I 2 0 E鉴定系统进行鉴定的结果 如表 2 ， 3 个试样( 样品 1 1 ， 1 2 ， 2 6 ) 被分离的菌株 中有 1 1株鉴定为 E c o l i ， E v u l n e r i s ， P a n t o e a s p 和 B u t t i a u x e l l a a g r e s t i s ， 这些都是大肠菌群属的肠内细菌科细 菌。此外 ， 1 个试样( 样品 2 3 ) 的 6株分离纯化菌株都 被鉴定 为 S e r r a t i a m a r c e s c e n s ， 以及另一个试样( 样 品 1 1 )也 有 2株分 离菌株被 鉴定为 S ma r c e s c e n s 。S m a r c e s c e n s 是不属于大肠菌群属的肠内细菌科细菌 ， 即在 D E S O培养基上被判断为检 出大肠菌群的 4个 堆肥试样中 ， 有 1 个试样未被分离出大肠菌群 。这可 能与 m a r c e s c e n s 能够在 D E S O培养基上产生红色 色素( p r o d i g i o s i n ) 而被误判 的原 因有关。 从堆肥试样中分离纯化的大肠菌群 中有 5株为 E c o l i ，而 E c o l i 有非病原性 的菌株和病原性菌株 ， 其病原性大多是通过菌体抗原的血 清类型进行判别 的。 本研究采用玻片凝集反应法对 5株鉴定为 E c o l i 的菌株进行判断 ， 结果所有 的菌株都没有发现抗血清 反应 ， 即它们都是非病原性大肠菌( 见表 2 ) 。 大肠菌群属的 E v u l n e r i s 、 P a n t o e a s p B a g r e s t i s 和非大肠菌群属 的 S m a r c e s c e n s ，这些菌种 虽然病 原 性 因菌株 而 有差 异 ， 但 都 是 常见 的 内源性 感染 菌l l 7 删 ， 这些菌种在堆肥中被检出的事实需要我们谨 慎对待。 2 3堆肥发酵过程中大肠菌群的消长 从 6个堆肥设施 中追踪堆肥化过程 中大肠菌群 的消长情况( 图 1 ) 。 堆肥发酵过程中， 6例原料为牛粪 或餐厨垃圾 的堆肥 中有 5例( A到 E) 的发酵温度上 升到 6 O o C 以上 ， 发酵完成时 ， 除 C约 6 0 c g b ， 其他 4 例成品温度下降到 4 0以下。余下的 1 例( F ) ， 是从 原料 ， 发酵 中间品 ， 到成品的整个发酵过程 中温度大 约 4 0 5 0。从图 1 可以看出 ， 堆肥从原料到成品的 发酵过程 中 ， 大肠菌群大约呈 4种走 向， 即： ( 1 ) 大肠 菌群在原料中检 出，在发酵 中减少 ，在成品中消失 ( E ) ； ( 2 ) 在发酵 中暂时消失后 ， 在成品中又出现( B ， C， D) ； ( 3 ) 未完全消失( F ) ； ( 4 ) 原料 中未被检出( A) 。 这一结果， 与已有的报告l2 。 大体一致。 判断造成以上堆肥发酵过程 中大肠 菌群 的走 向 结果的可能原因为 ： ( 1 ) 温度控制恰 当， 大肠菌群在发 酵热的作用下被完全杀灭。( 2 ) 由于发酵温度不足而 导致大肠菌群暂时失活残留， 在湿度较大时再增殖 。 1 5 9 8 龚春明等： 堆肥中大肠菌群等粪便污染指标菌的残留状况调查 2 0 1 0年 8 月 表 2 A P I 2 0 E系统对疑似大肠菌群分离菌株的鉴定及病原大肠茵免疫血清反应 T a b l e 2 Th e i d e n t i f i c a t i o n o f i s o l a t e d s t r a i n b y AP I 2 0 E a n d s l i d e a g g l u t i n a t i o n t e s t 注： 1 ) 未检测。 囊 篓 N 原料 中间 成 品 原料 中间 成品 原料 中间 成品 菌数 0 0温度 A 熊本县 Q设施( 牛粪堆肥) ； B 佐贺县A设施( 牛粪堆肥) ； c 佐贺县 B 设施( 牛粪堆肥) ； D 佐贺县 Q设施( 牛粪堆肥) ； 、 E 佐贺县 D商会( 餐厨垃圾堆肥) ； F 佐贺县 I 设施 e ( 餐厨垃圾堆肥) 。详细的制造场所参照表 1 。N D ， 未检出( 检出界限： 2 O e r a ) 图 1 堆肥化过程中大肠菌群的消长与堆肥 温度 F i g u r e 1 Th e c h a n g e o f c o l i f o 1 1 1 1 b a c t e r i a n u mb e r a n d c o mp o s i n g t e mp e r a t u r e ( 3 ) 发酵温度较低而未能完全杀灭， 造成交叉污染( 发 酵过程中堆肥表面低温部位生存的大肠菌群在发酵 完成后混入成品中) 。笔者曾经在 5 4 6 7 高温的发 酵堆肥中检出了大肠菌群、 粪便性大肠菌群、 大肠菌 赠 霉辫 鲫加O 加0 第 2 9卷第 8期 农业 环境 科 学 学 报 1 5 9 9 和沙门氏菌 ， 它们的残留与堆肥发酵过程 中的温度 、 湿度 、 菌种和是否对数繁殖期具有很大的关联性 4 1 。 然而， 存在于堆肥原料中， 可能残留在堆肥成品中病 原菌之中， 最值得警惕的是 E c o l i O1 5 7 。 有研究证明 牛粪 中的 E c o l i O1 5 7在一定温度下能生存 7 0 d 】 。 本研究中 ，虽然从堆肥 中被分离 的大肠菌是非病原 大肠菌 ， 但所分析 的堆肥数量依然十分有限 ， 希望今 后能集合更多的研究实例和更多的见解。 3 结论 堆肥成品中大肠菌群高频率被检 出， 大肠菌群较 易在以牛粪 、污泥和餐厨垃圾为原料 的堆肥 中残存 ， 而不易在鸡粪为原料的堆肥 中残 留。 从分离纯化的菌 株 中发现有大肠 菌群属的 E c o l i 、 E v u l n e r i s 、 P a n t o e a s p 和 B a g r e s t i s ， 以及非 大肠 菌群属 的 S ， n e S C e ， 等肠 内细菌科细菌 ，其 中E c o l i 菌株未检 出病原性 ， 而 E v u l n e r i s 、 P a n t o e a s p 、 B a g r e s t i s和 S m a r c e s c e n s 是病原性较弱的内源性感染菌 。 追踪堆肥发酵过程 中 大肠菌群 的消长 ， 发现即使堆肥发酵温度超过 6 0， 大肠菌群也可能在成品中残留。 参考文献： 【 1 C i e s l a k P R， B a rre t t T J ， G r i f fi n P M， e t a 1 E s c h e r i c h i a c o l i O1 5 7 ： H7 i n f e c t i o n f r o m a ma n u r e d g a r d e n J T h e L a n c e t ， 1 9 9 3 ， 4 2 ： 3 6 7 2 P e l l A N Ma n u r e a n d mi c r o b e s ： P u b l i c a n d a n i ma l h e alt h p r o b l e m? J J Da i r yS c i ，1 9 9 7 ， 8 0： 2 6 7 3 - 2 6 81 【 3 H i l b o r n E D ， Me r mi n J H， Ms h a r P A， e t a 1 A mu l t i s t a t e o u t b r e a k o f E s c h e r i c hi a c o l i O1 5 7： H7 i n f e c t i o n s a s s o c ia t e d wi t h c o n s u mp t i o n o f me s c l u n l e t t u c e J Ar c h I n t e r n Me d ， 1 9 9 9 ， 1 5 9 ： 1 7 5 8 1 7 6 4 4 】 金子臀一 生食用野菜招 土 果实力 媒介食 品 匕 6感染症 J 】 食 衡 ， 1 9 9 9 ， 4 0 ( 6 ) ： 4 1 7 4 2 5 Ka n e k o K I F o o d b o r n e i nfe c t i o n i n d u c e d b y t h e c o n s u mp t i o n o f s a l a d v e g e t a b l e s a n d f r u i t s J J o u r n o o ft h e F o o d H y g i e n i c S o c i e t y ofJ apan， 1 9 9 9 ， 4 0 ( 6 ) ： 4 1 7 4 2 5 【 5 小沼博 隆 野菜 6 二扫c 于为微生物污染状况 奄 对策 J 1 日本食 品 微生物学会 雅 ， 2 0 0 0 ， 1 7 ： 3 7 4 1 Ko n u ma H M i c r o o r g a n i s m po l l ut i o n s i t u a t i o n i n v e g e t a b l e a n d t h e me a - s u r e s J J 印n ， s e J o u r ofF o o dMi c r o b i o l o g y ， 2 0 0 0 ， 1 7 ： 3 7 4 1 【 6 马国柱， 王安礼， 刘长宏， 等 2 0 0 2 年陕西省食品中食源性致病菌监 测 J 1 中国食品卫生杂志， 2 0 0 3 ， 1 5 ( 6 ) ： 4 8 9 4 9 1 MA Gu o z h u ，W ANG An l i ，LI U Ch a n g- h o n g ，e t a1S u r v e i l l a n c e f o r foo d b o r n e p a t h o g e n i n f o o d s i n S h a a n x i P r o v i n c e 2 0 0 2 C h i n e s e J o u r n a ! ofF o o dH y g ie n e ， 2 0 0 3 ， 1 5 ( 6 ) ： 4 8 9 4 9 1 7 B o h a y c h u k V M， G e n s l e r G E ， K i n g R K， e t a1 O c c u r r e n c e o f p a t h o g e n s i n r a w a n d r e a d y t o - e a t me a t a n d p o u l t r y p r o d u c t s c o l l e c t e d f r o m t h e r e t a i l ma r k e t p l a c e i n E d m o n t o n ， A l b e r t a ， C a n a d a J J F o o d P r o t ， 2 0 0 6 ， 6 9 ( 9 ) ： 2 1 7 6 2 1 8 2 8 】 龚云伟， 王平， 董伟力 长春地区家禽( 家畜) 中心 E c o l i O 1 5 7 ： H 7 调查 J 1 微 生物学杂志， 2 0 0 6 ， 2 6 ( 6) ： 1 0 2 1 0 4 GONG Yu n we i ， W ANG P i n g ，DONG W e i l i I n v e s t i g a t i o n o n E c o l i 01 5 7 ： H7 a m o n g p o u l t r y a n d l i v e s t o c k i n C h a n g c h u n are a J J o M m o f Mi c r o b i o l o g y ， 2 0 0 6 ， 2 6 ( 6) ： 1 0 2 1 0 4 【 9 K u d v a I T ， B l a n c h K， H o v d e C J A n a l y s i s o f E s c h e r ic h i a c o l i O1 5 7 ： H7 s u r v i v al i n o v i n e o r b o v i n e ma n u r e a n d m a n u r e s l u r r y J A p p l i e d a n d En v i r o n me nt a l M i c r o b i o l o g y ，1 9 98 ， 6 4： 31 6 6 3 1 7 4 1 0 韦俊超， 占利 ， 王雅 琴， 等 从农村耕 牛粪便 中检出产 志贺毒 素大 肠 埃希 菌 01 5 7： H7 J 中国卫 生检验 杂 志， 2 0 0 7 ， 1 7 ( 1 1 ) ： 1 9 8 3 一 l 9 8 5 WEI J u n c h a o ， ZHAN Li ， WANG Ya q i n， e t a1 De t e c t i n g s h i g a t o x i n p r o d u c i n g Es c h e r i c hi a c o l i O1 5 7： H7 f r o m c o u n t r y s i d e f a r m c a t t l e e x c r e me n t J C h i nes e J o u r n a l ofHe a l t h L a b o r a t o r y T e c h n o l o g y ， 2 0 0 7 ， 1 7 ( 1 1 ) ： 1 9 8 3 1 9 8 5 1 1 R a v v a S V， S a r r e al C Z ，D u f f y B ， e t a1 S u rvi v a l o f E s c h e r i c h i a c ali O1 5 7： H7 i n w a s t e w a t e r f r o m d a i ry l a g o o n s J J o u r n al ofa p p l i e d m i c r o b i o l o g y ， 2 0 0 6 ， 1 0 1 ( 4 ) ： 8 9 1 9 0 2 1 2 I b e k w e A M，G ri e v e C M， Ya n g C H S u rvi v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i O1 5 7 ： H7 i n s o i l a n d o n l e t t u c e a f t e r s o i l f u m i g a t i o n J C ana d i an M r _ nol ofMicr o b i o l o gy， 2 0 0 7 ， 5 3 ( 5 ) ： 6 2 3 - 6 3 5 1 3 龚春 明 应用 F I S H技术对 土壤 中大 肠杆菌 的快速特异性 检 出【 J J 海峡科学， 2 0 0 9 ， 3 1 ( 7) ： 2 6 2 8 GONG Ch u n - mi n g Ra p i d a n d s p e c i fic d e t e c t i o n o f Es c he r i c h i a c o l i i n s o i l b y fl u o r e s c e n c e i n s i t u h y b ri d i z a t i o n ( F I S H) J S t r ait s S c i e n c e ， 2 0 0 9 ， 3 1 ( 7) ： 2 6 2 8 1 4 】 G o n g C M， I n o u e K ， I n a n a g a S ， e t a1 S u r v i v a l o f p a t h o g e n i c b a c t e ri a i n c o m p o s t w i t h s p e c i al r e f e r e n c e t o E s c h e r i c h i a c o l i J J o u r c t a l ofE n v i r o n me n t o l S c i e n c e s ， 2 0 0 5 ， 1 7 ( 5 ) ： 7 7 0 7 7 4 1 5 Go n g C M Mi c r o b i al s afe t y c o n t r o l o f c o m p o s t m a t e r i al w i t h c o w d u n g b y h e a t t r e a t e n t J J o u r n al ofE n v i r o n me n t al S c i e n c e s ， 2 0 0 7 ，1 9 ( 8 ) ： l 01 4 -1 01 9 1 6 上 田成子， 桑原祥浩 有横栽 培 圃埸 野菜 挡 土 有楼肥 料 衔 生细菌学的研究 J 1 防菌 防徽， 2 0 0 2 ， 3 0 ( 3 ) ： 1 4 5 1 5 2 Ue d a S K，Ku w a b a r a Y S Ba c t e r i o l o g i c a l e v alu a t i o n s o f t h e p r o d u c e a n d o r g a n i c f e r t i l i z e r f r o m o r g a n i c f a r mi n g fi e l d s J B o k i n B o b ai， 2 0 0 2 ， 3 0 ( 3 ) ： 1 4 5 1 5 2 1 7 L e b i n e W N， G o l d b e r g M J E s c h e r i c h i a v u l ner i s o s t e o m y e l i t i s o f t h e t i b i a c a u s e d b y a w o o d e n f o r e i g n b o d y J O r t h o p Re v ， 1 9 9 4 ， 2 3 ： 2 6 2 2 6 5 1 8 D e B a e r e T ， V e r h e l s t R ， L a b i t C ， e t a1 B a c t e r e mi c i n f e c t i o n w i t h P a n t o e a ananati s J JC 1 i n Mi c r o b i al， 2 0 0 4 ， 4 2 ： 4 3 9 3 4 3 9 5 1 9 Di o n i s i o D ， B e l l i A ， D i o n i s i o A， e t a 1 A p p e n d i c i t i s ： Mi c r o b i a l i n t e r a c t i o n s a n d n e wp a t h o g e n s J Re c e n t i P r o gMe d ， 1 9 9 2 ， 8 3 ： 3 3 0 - 3 3 6 2 O 平渴洋一 七 于 n 日本跪爿 木 ， 2 0 0 2 ， 6 0 ： 2 1 5 6 2 1 6 0 H i r a k a t a Y S e r r ati a m a r c e s c e r J 1 J apan C l i n i c al， 2 0 0 2 ， 6 0： 2 1 5 6 2