（临床医学专业论文）巢式rtpcr方法检测ck20mrna在膀胱癌细胞中的表达及意义.pdf

t h en e s t e dr 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用 过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示了谢意。 研究生签名： 日期： 2 。f ，占 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的 复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内 容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可 以公布( 包括刊登) 论文的全部或部分内容。论文的公布( 包括刊登) 授权东南大学研究生 院办理。 研究生签名：址导师签名歹至丝日期：銎生王二擎 中文摘要 巢式i m p c r 方法检测c k 2 0 m r n a 在膀胱癌细胞中的表达及意义 东南大学医学院 研究生：蔡丰丰导师：杨建军 摘要 目的：膀胱癌是泌尿外科系统最常见的恶性肿瘤，膀胱移行细胞癌占其9 0 以上。目前 临床上广泛应用膀胱镜检查、活组织检查及尿脱落细胞学检查，前2 项为诊断膀胱癌的 金标准，但属于有创性检查，不宜在人群中作普查项目；后者虽属无创但其敏感性低， 且易造成假阳性，故在早期诊断膀胱癌中价值不大。为此寻找一种高敏感性、高特异性、 简便、快速、费用低、无创性的检测方法以早期诊断膀胱癌及其术后复发具有重要意义。 本研究利用巢式r t - p c r 方法检测人膀胱移行细胞癌t 2 4 细胞、膀胱移行细胞癌患者尿脱 落细胞c k 2 0 m r n a 的表达及意义。为膀胱癌早期诊断和术后监测提供一种新的有效手 段。 方法：1 体外培养人膀胱移行细胞癌t 2 4 细胞，提取r n a ，利用普通i m p c r 及巢式 i m p c r 方法，检测其c l q o m r n a 的表达。2 收集临床6 0 例膀胱移行细胞癌患者、1 0 例 泌尿系其他肿瘤患者及5 例泌尿系感染患者的尿脱落细胞，利用普通r p c r 及巢式 i m p c r 方法分别检测其c k 2 0 m r n a 的表达。利用h e 染色法进行尿脱落细胞学检测。3 通过统计学方法分析普通i n p c r 及巢式i m p c r 分别检测膀胱移行细胞癌患者尿脱落细 胞中c k 2 0 m r n a 表达与肿瘤分期及分级的关系；分析对比巢式r t p c r 检测c k 2 0 m r n a 和尿脱落细胞学检查及分析对比巢式r t p c r 检测c k 2 0 m r n a 和普通r t p c r 检测 c k 2 0 m r n a ；分析普通i m p c r 及巢式r t p c r 分别检测膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞 c k 2 0 m r n a 初发与复发的关系。 结果：1 利用普通r t - p c r 及巢式i 弭p c r 方法均能检测出人膀胱移行细胞癌t 2 4 细胞 c k 2 0 m r n a 表达；2 6 0 例膀胱移行细胞癌患者中普通r t p c r 检测c k 2 0 m r n a 结果表达 阳性数为4 3 例，灵敏度为7 1 7 ，对照组1 5 例检测结果表达阳性数为2 例，特异度为8 6 7 ； 巢式i 弭p c r 检测c k 2 0 m r n a 结果表达阳性数为5 4 例，灵敏度为9 0 o ，对照组1 5 例检测 东南大学硕上学位论文 结果表达阳性数为2 例，特异度为8 6 7 ；尿脱落细胞学检测结果表达阳性数为1 8 例，灵 敏度为3 0 0 ，对照组1 5 例检测结果表达阳性数为3 例，特异度为8 0 o 。对比巢式r t p c r 检测c l q o m r n a 和尿脱落细胞学检查，可以认为这两种方法对于膀胱移行细胞癌的检测 有显著性差异( p o 0 5 ) ，前者要优于后者；对比巢式r t p c r 检测c k 2 0 m r n a 和普通 r t p c r 检测c l q o m r n a ，可以认为这两种方法对于膀胱移行细胞癌的检测有显著性差 异( p o 0 5 ) ；在利用巢式r t p c r 检测不同分级膀胱移行细胞癌患者尿脱 落细胞c k 2 0 m r n a 比较中得出：g l 患者2 0 例中有1 7 例c k 2 0 表达阳性，阳性率8 5 o ； g 2 患者2 2 例中有2 0 例表达阳性，阳性率9 0 9 ；g 3 患者1 8 例中有1 7 例表达阳性，阳性率 9 4 4 。c k 2 0 表达随着病理分级的增高而增高，但g 1 和g 2 之间，g 2 和g 3 之间的差异亦 无统计学意义( 胗o 0 5 ) 。4 在利用普通r t p c r 检测不同分期膀胱移行细胞癌患者尿脱 落细胞c k 2 0 m r n a 比较中得出：在2 8 例非肌层浸润性膀胱癌( t a t i ) 患者的尿液中，1 6 例有c l q o 表达，阳性率5 7 1 ；而在3 2 例肌层浸润性膀胱癌( t 2 一t 4 ) 中，2 7 例有c k 2 0 表达， 阳性率8 4 4 ，明显高于非肌层浸润性膀胱癌，差异具有统计学意义( 尸 0 0 5 ) ；在利用巢 式r t p c r 检测不同分期膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞c k 2 0m r n a 比较中得出：在2 8 例非肌层浸润性膀胱癌( t a t 1 ) 患者的尿液中，2 2 例有c l q 0 表达，阳性率7 8 6 ；而在3 2 例肌层浸润性膀胱癌( t 2 t 4 ) 中，3 2 例有c l q o 表达，阳性率1 0 0 ，明显高于非肌层浸润 性膀胱癌，差异具有统计学意义( 尸 o 0 5 ) 。5 在利用普通r t p c r 检测3 6 例初发膀胱移 行细胞癌患者的尿液中，有2 l 例c l q o 表达，阳性率5 8 3 ；而在2 4 例复发膀胱移行细胞 癌患者的尿液中，有2 2 例c k 2 0 表达，阳性率9 1 7 ，明显高于初发膀胱移行细胞癌患者， 差异具有统计学意义( 尸 o 0 5 ) 4 i nt h eu s eo fr t p c rd e t e c t i o no fb l a d d e rt m s i t i o n a lc e nc a r c i n o m ao fu f i n a r ye x f 0 1 i a t e d c e l l si np a t i e n t sw i t hc l q om r n a ，t h ed i f 衔e 1 1 ts t a g e so fb l a d d e rt r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m a o fu r i n a r ye x f o l i a t e dc e l l si np a t i e n t sw i t hc k 2 0a c t i v i t yc o m p a r i s o no ft e s tr e s u l t so b t a i n e d ： i n2 8c a s e so fn o n m u s c l ei n v a s i v eb l a d d e rc a n c e r ( t a - t 1 ) i nt h eu r i n eo fp “e n t s ，16p a t i e n t s h a dc k 2 0e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v er a t ew a s5 7 1 ，w h i l ei n 3 2c a s e so fm u s c l ei n v a s i v e b l a d d e rc a n c e r ( t 2 t 4 ) ，2 7p a t i e n t sh a dc k 2 0e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v er a t ew a s8 4 4 i tw a s s i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a n t h a to fn o n m u s c l ei n v a s i v eb l a d d e rc a n c e r ，t h ed i f f e r e n c ew a s s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p o 0 5 ) i nt h eu s eo fn e s t e dr t - p c rd e t e c t i o n ：i n2 8 c a s e so f n o n m u s c l ei n v a s i v eb l a d d e rc a n c e r ( t a t 1 ) i nt h eu r i n eo fp a t i e n t s ，2 2p a t i e n t sh a dc k 2 0 e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v er a t ew a s7 8 6 ，w h i l ei n3 2c a s e s o fm u s c l ei n v a s i v eb l a d d e rc a n c e r v 东南人学硕i ：学位论文 ( t 2 一t 4 ) ，3 2p “e n t sh a dc k 2 0e x p r e s s i o n ，m ep o s i t i v er a t ew a s lo o i tw a ss i 印i f i c a i l t l y h i 曲e rt h a nn o n - m u s c l ei n v a s i v eb l a d d e rc a l l c t h ed i f 恸饥c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i 印i 6 c a i l t ( j 口 0 0 5 ) 5 i nt h eu s eo fr t p c rd e t e c t e d3 6c a s e so fp r i m a r yb l a d d e r 缸彻s i t i o n a lc e l l c a r c i n o m ao ft h ep a t i e n t s u r i n e ，t h e r ew e r e2lc a s e so fc k 2 0e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v er a t e w a s5 8 3 w h i l ei n2 4c a s e so fr e c u r r e l l c eo fb l a d d e rt 啪s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao ft 1 1 e p a t i e n t s 谢n e ，t h e r ew e r e2 2c a s e so fc k 2 0e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v er a t ew a s 9 1 7 i tw a s s i 印i f i c a n t l yh i 曲e rt h a ni n 研m a 巧b l a d d e rt r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m a ，t h ed i 虢r 朗c ew 弱 s t a t i s t i c a l l ys i 鲥f i c 锄t ( 尸 o 0 5 ) i nt h eu s eo f n e s t e dr t - p c r ，t h e r ew e r e3 0c a s e so fc k 2 0 e x p r e s s i o n ，t h ep o s i t i v e r a t ew a s8 3 3 ，w h i l ei n2 4c a s e so fr e c l l 盯i m c eo fb l a d d e r t r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao ft h ep a t i e n t s 谢n e ，t h e yw e r et o t a l l yp o s i t i v e ，t h ep o s i t i v er a t e w a sl0 0 i tw a si g n i f i c a n t l yh i 曲e rt h a ni np m a r yb l a d d e rt r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m a ，t h e d i f 向饥c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i 印i f i c 叩t ( p o 0 5 ) c o n c l u s i o n ：t h en e s t e dr t p c rm e t h o do fd e t e c t i o no fb l a d d e rt r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m a o ft h eu r i n a r ye x f o l i a t e dc e l l sc k 2 0 m r n ah a sah i 曲s e n s i t i v i t y 1 ti sar e l i a b l et e s t i n g m e t h o d k e yw o r d s ： n e s t e dr e v e r s et r a n s c r i p t i o n p 0 1 y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ； t r a n s i t i o n a lc e l l c a r c i n o m ao fb l a d d e r ；c 机o k e r a t i n2 0 v l 目录 内容 目录 中文摘要 英文摘要 目匀之 缩略词表 前言 第一章文献综述 第二章材料和方法 第三章结果 第四章讨论 小结 参考文献 致谢 作者简介 v l l 缩略词表 a k t b c b l c a - 4 b t a c k d e p c d m s o e b f b s h c f h 巾 h 印e s 缩略词( 中英对照) s e n e t h r e o n i n e p r o t e i nk i n a s e b l a d d e rc a n c e r 丝氨酸苏氨酸激酶 膀胱癌 b l a d d e rc a n c e rs p 确f i cn u c l e a rm a t r i xp r o t e i n4 膀胱癌特异性核基质蛋白_ 4 b 1 a d d e rt i l m o ra l l t i g 饥 c y t o k e r a t i n d i e t h y l p y t o c a 而o n a t e d i m e t h y ls u i p h o x i d e e t h i d i u mb r o m i d e f e t a lb o v i n es e n j m h u m a nc o m p l 锄e n tf a c t o rhr e l a t e dp r o t e i n h y d r o x y e t h y lp i p e m z i n ee t h a n e s u l f o n i ca c i d m a p k m i t o g e na c t i v a t e dp i i o t e i nk i n a s e m r n a m e s s e n g e rr i b o n u c l e i ca c i d n e s t e di 弭p c rn e s t e dr e v e r s et r a n s c p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n n m p sn u c i e a rm a t r i xp r o t e i n o d o p i i c a ld 朗s j t ) ， p b s p h o s p h a t e - b u 艉r e ds a l i n e p c r p o l 舯e r a s ec h a i nr e a c t i o n p t e n p h o s p h a t a s e 鲫dt e n s i nh o m o l o g l h k r e c 印t o rt y r o s i n ek i n a s e r t p c rr e v e r s et r a n s 嘶p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n 1 a et s a c e t a t e b u 行打 t b s t s b u 缳玳ds a l i n e t c c b t r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao fb l a d d e r t 订s t r i s ( h y d r o x ) 仰e t h y l ) a m i n o m e t h a n e vj jj 膀胱肿瘤抗原 细胞角蛋白 焦炭酸乙二酯 二甲基距砜 溴化乙啶 胎牛血清 人补体冈子h 相关蛋白 羟乙基哌嗪乙磺酸 丝裂原活化蛋白激酶 信使核糖核酸 巢式逆转录聚合酶链反戍 核基质蛋白 光密度 磷酸盐缓冲液 聚合酶链式反应 酪氨酸磷酸酶基因 受体酪氨酸激酶 逆转录聚合酶链反应 砀s 乙酸电泳缓冲液 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 膀胱移行细胞癌 二羟甲基氨基甲烷 前言 1 上- j 一 刖舌 膀胱癌是泌尿外科系统最常见的恶性肿瘤。膀胱癌包括尿路上皮移行细胞 癌、鳞状细胞癌和腺细胞癌，其次还有较少见的转移性癌、小细胞癌和癌肉瘤等。 其中，膀胱尿路上皮移行细胞癌最为常见，占膀胱癌的9 0 以上。约7 5 为浅 表性肿瘤，2 0 为浸润性肿瘤。虽然这些浅表性肿瘤可以通过手术切除，但是仍 有高达5 0 一7 0 的5 年复发率。当前临床上广泛应用的标准诊断方法为膀胱镜 检查、活组织检查及尿脱落细胞学检查，前2 项为诊断膀胱癌的金标准，但属于 有创性检查，病人难以接受且不宜在人群中作普查项目；后者虽属无创但其敏感 性低，特别对于早期低级别患者敏感性仅为3 0 ，且感染、结石等亦可影响细 胞的形态而造成假阳性，故在膀胱癌早期诊断中价值不大。尿脱落细胞学检查方 法简便、无创、特异性高，是膀胱癌诊断和术后随访的主要方法。尿标本的采集 一般通过自然排尿，也可以通过膀胱冲洗，这样能得到更多的肿瘤细胞，有利于 提高检出率。尿脱落细胞学检测膀胱癌的敏感性为1 3 7 5 ，特异性为8 5 一1 0 0 。敏感性与肿瘤细胞分级密切相关，对于分级低的膀胱癌敏感性较低，一方面 是由于肿瘤细胞分化较好，其特征与正常细胞相似，不易鉴别，另一方面由于肿 瘤细胞之问黏结相对紧密，没有足够的细胞脱落到尿中用于检测；相反，对于分 级高的膀胱癌，特别是原位癌，敏感性和特异性均较高。但尿标本中细胞数量少、 不典型或退行性变、泌尿系感染、结石以及膀胱灌注治疗等可以导致尿脱落细胞 学诊断困难。 为此寻找一种高敏感性、高特异性、简便、快速、费用低、无创性的检测方 法以早期诊断膀胱癌及其术后复发具有重要意义。由于尿路上皮肿瘤的凋亡、坏 死和脱落可使其部分细胞成分直接释放入尿液中，故寻找尿液中潜在的瘤标已成 为尿路上皮肿瘤无创性诊断的一种趋势。 细胞角蛋白( c o k e r a t i n ，c k ) 是上皮细胞中间丝的组成成分，是构成细胞骨 架的重要物质。它为上皮细胞所独有，是上皮细胞在发生、分化、成熟过程中逐 渐形成的，不同的上皮组织，编码c k 的基因以不同的方式成对表达，所以c k 的 成对表达具有组织特异性。当上皮细胞恶变时，某些种类的c k 的合成就会剧增， 东南大学硕 学位论文 尿中这些物质的含量就会相应增加。 细胞角蛋白2 0 ( c ”o k e r a t i n 2 0 ，c k 2 0 ) 是m 0 1 l 等人在1 9 9 0 年分离鉴定出来的i 型角质蛋白中间丝的一种，其在维持细胞的完整性、调节胞浆蛋白的利用、细胞 信号传导、细胞分化、诱导肿瘤化疗耐药，参与肿瘤的发生、进展，以及细胞表 面受体中起重要作用。c l q o 分子量4 6k d ，在膀胱上皮细胞癌中表达，而在正常 膀胱上皮细胞中不表达。c l q o 具有较高的敏感性和一定的特异性，可作为膀胱 癌诊断的有用标记物。有报告称利用p c r 技术检测尿脱落细胞中c k 2 0 的表达对 膀胱上皮细胞癌是有用的、非侵袭性的、诊断性试验。b h a t i aa 等人的研究表明 c k 2 0 是鉴别膀胱移行细胞癌的重要的生物标记。 目前检测膀胱移行细胞癌中c k 2 0 的表达的检测方法可以利用免疫组化方 法、单克隆抗体对尿脱落细胞进行免疫细胞学染色等，但敏感性均不高，为 5 0 一8 0 ，特异性为4 0 8 0 。而应用的最多的是r t p c r 方法检测尿脱落细胞 c k 2 0 m r n a 表达，用r t p c r 方法具有细胞形态学、免疫细胞化学技术不可比的 优越性，国内外应用r t p c r 方法检测尿脱落细胞c k 2 0 m r n a 表达的敏感性高低 不一，为6 0 9 5 。e i s s a 等研究发现，单独检测尿中c k 2 0 诊断膀胱癌，无论敏 感性还是特异性均优于尿脱落细胞学检查，但与患者临床病理参数均无关。 1 9 8 7 年m u l l i s 在常规p c r 基础上建立了巢式p c r ( n e s t e dp c r ) 。巢式p c r 采用 两对p c r 引物，进行两轮p c r 扩增。使用外侧引物进行第l 轮p c r ，得到的扩增 产物作为第2 轮p c r 的模板，再使用内侧引物进行第2 轮p c r 扩增目的片段。由于 巢式p c r 反应有两次p c r 扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性，增加了检 测的敏感性；又有两对p c r 引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。巢式 逆转录聚合酶链反应( n e s t e dr e v e r s et r a n s c n p t i o n - p 0 1 y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，n e s t e d l m p c r ) 是较普通逆转录聚合酶链反应( r e v e r s et r 肌s c n p t i o n p o l 舯e m s ec h a i n r e a c t i o n ，r t p c r ) 更加敏感、可靠的分析细胞基因表达产物的分子生物学技术。 由于巢式r t - p c r 检测方法的高敏感性，这种检测方法被应用于肿瘤患者微转移 方面的研究。在膀胱癌的研究方面主要应用于检测外周血及笳腔淋巴结的肿瘤细 胞基因的表达。 本研究利用巢式r t p c r 方法研究人膀胱移行细胞癌t 2 4 细胞、膀胱移行细胞 癌肿瘤患者尿脱落细胞中c k 2 0 m r n a 的表达及意义。并作统计学分析，探索出 简便、敏感的无创性检测方法 监测提供一种新的有效手段， 东南人学硕i j 学位论文 第一章文献综述 膀胱癌生物标志的研究进展 摘要：膀胱癌的诊断和术后复发的监测，长期以来一直是泌尿外科领域研究的重 点。随着分子生物学技术的发展，许多膀胱肿瘤标志物被发现，为肿瘤的早期诊 断、早期治疗和术后复发监测提供了新的思路与方法。熟悉和了解膀胱癌生物标 志的研究进展，更好地选择高敏感性及特异性的膀胱肿瘤标志物运用于临床具有 重要意义。 关键词：膀胱癌肿瘤标志物 膀胱癌( b l a d d e rc a r c i n o m a ，b c ) 是泌尿外科学最常见的癌症之一。是泌尿系 统最常见的恶性肿瘤，膀胱癌具有早期治疗效果好的特点，首次症状至治疗时间 少于3 个月，3 年治愈率为5 5 ，而3 8 个月内，3 年治愈率为3 7 ；浸润性病史1 个月内，3 年治愈率为6 0 ，1 6 个月内，3 年治愈率为2 5 。超过9 0 的病例被 诊断是膀胱移行细胞癌( t r a n s i t i o n a lc e l lc a r c i n o m ao fb l a d d e r ，t c c b ) ，7 5 是 浅表性肿瘤。虽然这些浅表性肿瘤可以通过手术切除，但是膀胱肿瘤复发率高， 5 年复发率高达5 0 一7 0 ，而其中1 5 2 5 的复发肿瘤会发展到更高级甚至浸 润肌层。因此，膀胱肿瘤的早期诊断、预后估计、监测复发足提高治疗效果的关 键。尿脱落细胞学检查和膀胱镜检查是目前膀胱癌术前诊断和术后随访的主要手 段，但前者对低级低期肿瘤的诊断敏感性低( 易发生漏诊) ，敏感性仅2 5 4 0 ， 后者为创伤性检查，不适宜用于肿瘤的筛选和普查，且不易发现微小及隐匿性病 变，故它们在膀胱癌早期诊断和筛查中的应用受到限制。膀胱癌的生物学行为复 杂多变，具有多中心性和多空问性发展的特点。早期发现具有浸润倾向的表浅肿 瘤和可能发生转移的浸涧肿瘤对于指导治疗和判断预后具有重要意义。然而膀胱 癌的异质性使形态学上的分级、分期难以全面概括或具体解释某一肿瘤的生物学 行为。因此，寻找新的对膀胱癌具有早期诊断、判定预后价值的肿瘤标志物一直 是膀胱癌研究中的热点。多年来，国内外学者对膀胱痛的发生、发展机制进行了 多方面地、深入地研究和探讨，特别是近年来随着细胞生物学、分子生物学、免 4 第一章文献综述 疫学和遗传学等学科基础理论和实验技术的发展，研究工作取得了很大进展，对 膀胱癌的认识不断深入，目前已到达分子水平，这为寻找具有早期诊断及判定预 后价值的肿瘤标记物奠定了坚实的理论基础。对膀胱癌的理想检测应该是1 0 0 的敏感，非侵袭性和结果快捷。而当前对于膀胱癌检测的非侵袭方法都不能满足 以上标准。因此寻找和发现理想的分子标记物成为医学工作者梦寐以求的目标。 近年来随着分子生物学技术的发展，许多膀胱肿瘤标志物被发现，为膀胱癌的诊 断提供了新的方法。本文就近年来膀胱癌肿瘤标志物的研究进展作一综述。 一，膀胱肿瘤抗原( b l a d d e r t u m o ra n t i g e n ，b t a ) 膀胱癌细胞会分泌一种水解酶降解基底膜，产生一种高分子复合物，即膀胱 肿瘤抗原( b l a d d e rt l l m o ra l l t i g e i l ，b t a ) ，它是一种分子量为1 6 k d 1 6 5 k d 特异多肽 组成的高分子复合物，又称人补体因子h 相关蛋白( h 啪a nc o m p l e m e n tf a c t o rh r e l a t e dp r o t e i n ，h c f h 印) 。此蛋白主要参与帮助肿瘤细胞逃避补体介导的细胞溶 解作用。膀胱癌在发展过程中可分泌蛋白分解酶而降解基底膜的蛋白成分并破坏 基底膜，基底膜的蛋白及分解产物可释放于尿液中，其在尿中可被检及。而正常 的膀胱上皮细胞和其他上皮细胞不分泌水解酶，无膀胱肿瘤抗原产生，在体外细 胞培养中，多个膀胱癌细胞株分泌膀胱肿瘤抗原，而正常膀胱上皮细胞和其他上 皮细胞不分泌膀胱肿瘤抗原。b a s s ipf 【1 】等人的研究表明b t a 实验对于浅表性膀 胱癌的诊断和随访是有益的。b t a 有3 种检测方法，包括b t a 、b t as t a t 和b t a t r a k 。其中早期的b t a 方法是检测基膜降解复合体。b t as t a t 和b t at r a k 为 b t a 的改进方法，是通过单克隆抗体检测尿液中膀胱肿瘤抗原。b t as t a t 试验是 一种快速简易的定性方法，只需数分钟即可完成，是一种新的酶免检测方法。因 此，b t a 可作为膀胱癌尿液肿瘤标志物。它对膀胱癌的特异性7 5 ，敏感性7 0 。 虽然b t as t a t 试验在膀胱癌病人随访中不能替代膀胱镜检查，但它能替代常规的 细胞学检查，尤其是在低度恶性肿瘤患者f 2 1 。b t at r a k 方法是两步定量法，对膀 胱癌的特异性是6 5 ，敏感性是6 9 。b t a 试剂盒快速、方便，可作为膀胱癌的 初步筛查手段。 二，核基质蛋白2 2 ( n u c l e a rm a t r i xp r o t e i n 2 2 ，n m p 一2 2 ) 核基