（内科学专业论文）非小细胞肺癌中mmp10的表达与mvd的关系及意义.pdf

原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均 己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 7 - 学位论文作者：名互1 易 日期：砷。年，月7 ，日 l 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留 使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门 或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学 可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文 或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。 保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：幺圣勺历 。 同期：阳口年厂月衫日 摘要 非小细胞肺癌中m m p - 10 的表达与m v d 的关系及意义 研究生：岳新召 导n - 张庆宪 郑州大学第一附属医院呼吸内科 河南郑州4 5 0 0 5 2 摘要 背景与目的 肺癌作为恶性肿瘤中的一种，具有侵袭和转移等生物学特征。在这些过程 中，肿瘤细胞首先要与细胞外基质组成的基底膜相互作用。故细胞外基质在肿 瘤侵袭转移过程中酋当其冲。基质金属蛋白酶家族因为具有能够降解细胞外基 质的作用而受到越来越多的重视。作为基质金属蛋白酶中的一员，基质金属蛋 白酶一1 0 ( 删p 一1 0 ) 因其独特的作用也备受重视。它不但可以降解多种细胞外基 质，同时可降解基质金属蛋白酶的前体并使其活化。 肿瘤微血管密度( m v d ) 作为判断肿瘤内微血管生成的指标，已经广泛的被 认为是判断肿瘤预后的重要因素。跨膜糖蛋白( c d l 0 5 ) 主要在表达于处于增殖 状态的血管内皮细胞表达，作为新生血管的标志特异性强，而成为m v d 重要的标 志物。同时，c d l 0 5 还可以通过对t g fb 活性的调节，促进内皮细胞的增殖、分 化和迁移，参与血管的生成。 目前国内外对m m p 一1 0 与非小细胞肺癌发生、发展、侵袭、转移和血管生成 关系的研究很少，且尚无m m p 1 0 和c d l 0 5 标志的m v d 在非小细胞肺癌中相互作用 的报道。本研究课题应用免疫组织化学方法，检测非小细胞肺癌中m m p - i o 和 c d l 0 5 标志的m v d 的表达情况，并分析两者的表达水平与非小细胞肺癌临床及病 理学特征之间的关系，以及两者在非小细胞肺癌中的相互作用，旨在为临床提 供有效的诊断预测指标及新的治疗靶点。 摘要 方法 选用郑州大学第一附属医院2 0 0 6 年- 2 0 0 8 年胸外科手术切除并经病理诊断 为原发性非小细胞癌组织存档蜡块6 0 例及癌旁正常肺组织2 0 例。所有病例术前 未经任何化疗和放疗。其中男4 2 例、女1 8 例，年龄2 8 7 5 岁、平均5 5 6 岁、小 于6 0 岁者2 6 例，大于和等于6 0 岁者3 4 例；低分化癌2 2 例，中分化癌1 8 例，高分 化癌2 0 例；鳞癌2 8 例，腺癌3 2 例；i 期+ i i 期2 8 例，i 期+ 期3 2 例；有淋巴结 转移者1 7 例，无淋巴结转移者4 3 例。全部标本经1 0 甲醛溶液固定，常规石蜡包 埋， 4pm 连续切片。分别应用兔抗人m m p 一1 0 和c d l 0 5 多克隆抗体进行免疫组 化染色和苏木素染色。结果采用s p s s i o o k 件分析，m m p 1 0 表达阳性率的分析 比较采用贮检验、c d l 0 5 标志的肿瘤m v d 表达强度及其与m m p 一1 0 之间关系的分析采 用t 检验、检验水准q = o 0 5 。 结果 ( 1 ) m m p l0 在组织中的表达：m m p - i o 在n s c l c 组阳性达率为7 3 3 ， 明显高于对照组正常肺细胞( 3 0 ) ( p 0 0 5 ) ；在高中分化的n s c l c 中阳性表 达率为6 3 2 ，低于低分化肺癌组织中阳性表达率( 9 0 9 ) ( p 0 0 5 ) ；有淋巴 结转移的阳性表达率为8 3 8 ，高于无淋巴结转移组( 5 6 5 ) ( p o 0 5 ) ；i + i i 期阳性表达率( 5 3 6 ) 低于i i i + i v 期阳性表达率( 8 4 4 ) ( p o 0 5 ) 。 ( 2 ) c d l 0 5 标志的m v d 在组织中的表达：非小细胞肺癌组织中m v d 值为4 3 7 5 3 9 7 ，正常肺组织中，m v d 值为3 3 2 5 3 3 l ，两组差异有统计学意义( 尸 0 0 5 ) ；高中分化组的m v d 值( 3 9 6 5 1 ) 低于低分化组的m v d 值( 4 4 7 7 3 ) ( j p 0 0 5 ) ；i + i i 期患者组的m v d 值( 3 7 6 5 4 ) 低于i i i + i v 期患者的m v d 值 ( 4 4 9 7 5 ) ( p 0 0 5 ) ，有淋巴结转移组的m v d 值( 4 3 8 6 1 ) 高于无淋巴 结转移组的m v d 值( 3 7 8 5 5 ) ( p 0 0 5 ) 。( 3 ) n s c l 组织中c d l 0 5 标志的m v d 和 垤v i p 1 0 表达的关系：m m p - i o 阳性组的m v d 值( 3 9 2 3 2 6 ) 大于m m p 1 0 阴 性组的( 3 2 3 8 3 8 ) ，二者的差异有统计学意义( 乒6 9 8 8p = o 0 1 3 ) 。 摘要 结论 ( 1 ) 删p 一1 0 在非小细胞肺癌组织中呈高表达，且表达水平的高低与非小细 胞肺癌有无淋巴结转移、肿瘤细胞分化程度、临床分期相关。提示删p 1 0 可能 参与了非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭、转移和血管的生成等过程。( 2 ) c d l 0 5 标志的m v d 在非小细胞肺癌组织中的表达也高于正常肺组织，m v d 值的高低与非 小细胞肺癌有无淋巴结转移、肿瘤细胞分化程度、临床分期有关。表明c d l 0 5 可 能对非小细胞肺癌的血管形成、侵袭、转移起促进作用。( 3 ) 删p 1 0 与c d l 0 5 标 志的m v d 在非小细胞肺癌组织中的表达中呈现正相关关系，表明两者在肺癌的发 生、发展、侵袭、转移、尤其是血管生成中可能存在相互作用。 关键词：非小细胞肺癌；免疫组化；基质金属蛋白酶1 0 ；c d l 0 5 ； 肿瘤微血管密度 a b s t r a c t e x p r e s a n ds i g n i f i c a n c e s“m m p 10andlaressiona ns i r n i t i c a n c e so la nm v di nm l v l r l um v h u m a nn o n - s m a l lc e l lc a r c i n o m aa n dt h e i rr e l a t i o n p o s t g r a d u a t e y u ex i n z h a o t u t o r z h a n gq i n g x i a n d e p a r t m e n to fr e s p i r a t o r y ， t h ef i r s ta f f i l i a t e dh o s p i t a l ，z h e n g z h o u u n i v e r s i t y , z h e n g z h o u 4 5 0 0 5 2 a b s t r a c t a sam a l i g n a n tt u m o r , l u n gc a n c e rh a st h eb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so fi n v a s i o n a n dm e t a s t a s i s i nt h e s ep r o c e s s e s ，t u m o rc e l l si n t e r a c t i v ew i t hb a s e m e n tm e m b r a n e f i r s t l y ，w h i c hc o m p o s e do fe x t r a c e l l u l a rm a t r i x t h e r e f o r e ，e x t r a c e l l u l a rm a t r i xi s c r i t i c a lt ob e a rt h ei n v a s i o na n dm e t a s t a s i so ft u m o r m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e f a m i l yh a st h ea b i l i t yt od e g r a d ee x t r a c e u u l a rm a t r i x ，e a m i n gm o r ea n dm o r e a t t e n t i o n a so n eo ft h em a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s ，m m p 一10i s b e i n gs i g n i f i c a n t b e c a u s eo fi t su n i q u er o l e i tc a nn o to n l yd e g r a d ea v a r i e t yo fe x t r a c e l l u l a rm a t r i x ，a t t h es a m et i m ed e g r a d ep r o - m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e sa n da c t i v a t et h e m m v d w i t h i nt h et u m o ra n g i o g e n e s i sa saj u d g eo fi n d i c a t o r s ，h a sb e e nw i d e l yc o n s i d e r e dt o b ea ni m p o r t a n tf a c t o ri np r e d i c t i n gp r o g n o s i so ft u m o r c d10 5i se x p r e s s e dm a i n l y i np r o l i f e r a t i n ge n d o t h e l i a lc e l l s ，a n ds i g n sa n g i o g e n e s i so ns p e c i f i c ，s ob e c o m ea n i m p o r t a n tm a r k e ro fm v d m e a n w h i l e ，c d 10 5c a na l s ob er e g u l a t i n gt h ea c t i v i t yo f t h et g f l 3t op r o m o t ee n d o t h e l i a lc e l lp r o l i f e r a t i o n ，d i f f e r e n t i a t i o na n dm i g r a t i o n ，a n d p a r t i c i p a t e si na i l 西o g e n e s i s i n p r e s e n t ，t h e r e i sl i t t l er e s e a r c ha b o u tt h er e l a t i o n o fm m p - 10a n d n o n - s m a l lc e l l l u n gc a n c e r , w h i c hr e v e a l t h er o l eo fm m p 一10o fd e v e l o p m e n t ， i n v a s i o n ，m e t a s t a s i sa n da n g i o g e n e s i s a n dt h e r ei sn or e p o r t e da b o u tt h e i n t e r a c t i o no fm m p 一10a n d m v d ( m a r k e db yc d 10 5 ) i nn o n - s m a l lc e l ll u n g c a n c e r t h i sr e s e a r c h ，w ed e t e c t e dm m p - 10a n dm v d ( m a r k e db yc d10 5 ) e x p r e s s i o ni nn o n s m a l lc e l ll u n gc a n c e rb yi m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d s ，a n d i v a b s t r a c t a n a l y z e dr e l a t i o n s h i p sa m o n gm m p 一10 ，m v da n dl u n gc a r c i n o m a ，d i s c u s s e dt h e i n t e r a c t i o nb e t w e e nm m p 一10a n dm v d ( m a r k e db yc d10 5 ) i nl u n gc a r c i n o m a ， a i m i n ga ts u p p l y i n gd i a g n o s i sa n dp r o g n o s i si n d i c a t o ra n dn e wt h e r a p yt a r g e ts i t ef o r l u n gc a r c i n o m a m e t h o d s s a m p l e so fl u n gc a n c e ra n da d j a c e n tn o r m a ll u n gt i s s u ew e r ec o l l e c t e df r o m6 0 p a t i e n t sw i t hn s c l c ，d i a g n o s e db yp a t h o l o g yo fs u r g i c a lr e m o v e d t i s s u e sf r o m2 0 0 6 t o2 0 0 8i nt h ef i r s ta f f i l i a t e dh o s p i t a lo fz h e n g z h o uu n i v e r s i t y 2 0n o r m a ll u n g t i s s u e sw e r ec o l l e c t e da sc o n t r 0 1 a l lt h ep a t i e n t sw e r en o tr e c e i v e dt r e a t m e n t s i n c l u d i n gc h e m o t h e r a p y , r a d i o t h e r a p ya n do t h e r s a m o n gt h e mt h e r ew e r e4 2m a l e s a n d18f e m a l e ，a g e df r o m2 8t o7 5y e a r so l da n dt h ea v e r a g ea g ei s5 5 6 t h e r ew e r e 2 2 p o o r l y - d i f f e r e n t i a t e dc a s e s ， 18 m o d e r a t e l y - d i f f e r e n t i a t e dc a s e s ， 2 0 w e l l - d i f f e r e n t i a t e dc a s e s ；2 8s q u a m o u sc a n c e rc a s e s ，3 2a d e n o c a r c i n o m ac a s e sb y p a t h o l o g i c a lc l a s s i f i c a t i o n l y m p hn o d em e t a s t a s i sw a so b s e r v e di n17 c a s e s ，a n dn o l y m p h n o d em e t a s t a s i si n4 3c a s e s t w e n t y - e i g h tc a s e sa r ei nia n di ic l i n i c a ls t a g e ， 3 2c a s e sa r ei ni i ia n di vc l i n i c a ls t a g e ；s a m p l e sw e r ef i x e di n10 n e u t r a l f o r m a l i na n de m b e d d e di np a r a f f i n t h ee x p r e s s i o n so fm m p 一10a n dc d10 5i nl u n gc a n c e r o u st i s s u ew e r ed e t e c t e d b ys pi m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d t h ed a t aw e r ea n a l y z e db ys o f t w a r es p s s 10 0 c h i - s q u a r em e t h o di su s e dt oc o m p a r et h ed i f f e r e n c eo fm m p 10e x p r e s s i o nb e t w e e n g r o u p s t t e s ti su s e dt oc o m p a r et h ee x p r e s s i o no fm v d ( m a r k e db yc d 10 5 ) b e t w e e ng r o u p s ，a n da s s e s st h er e l a t i o no fm m p 一10a n dm v d r e s u l t s ( 1 ) e x p r e s s i o no f m m p - 1 0i nn s c l c ：t h ep o s i t i v er a t eo fm m p 一1 0w a s 7 3 3 i ns a m p l e so fn s c l ct i s s u e sa n d3 0 i nn o r m a ll u n gt i s s u e s ( p 0 0 5 ) t h e p o s i t i v e r a t eo fm m p 一10i n s a m p l e s o fw e l l - d i f f e r e n t i a t e da n dm o d e r a t e l y - d i f f e r e n t i a t e dc a s e sw a s6 3 2 ，l o w e rt h a nt h ee x p r e s s i o ni np o o r l y d i f f e r e n t i a t e d l u n gc a n c e r ( 9 0 9 ) ( 尸 0 0 5 ) t h ep o s i t i v er a t eo fm m p 一10i nt h eg r o u pw i t hl y m p h v a b s t r a c t n o d em e t a s t a s i sw a s8 3 8 h i g h e rt h a nt h ee x p r e s s i o ni nt h eg r o u pw i t h o u tl y m p h n o d em e t a s t a s i s ( 5 6 5 ) 俨 o 0 5 ) t h ep o s i t i v er a t eo fm m p 一10i ns a m p l e so f ia n di ic l i n i c a ls t a g ec a s e sw a s 5 3 6 ，l o w e rt h a nt h ee x p r e s s i o ni np o o ri i ia n di v c l i n i c a ls t a g el u n gc a n c e r ( 8 4 4 ) 妒 o 0 5 ) t h e r ew e r en os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e b e t w e e ns q u a m o u sc a n c e ra n da d e n o c a r c i n o m a , m a l ea n df e m a l e ，s m o k e ra n d n o n s m o k e r , y o u n g e ra n do l d e r ( 2 ) e x p r e s s i o no fm v d ( m a r k e db yc d 10 5 ) i n n s c l c ：m v dv a l u eo fn o n s m a l lc e l ll u n gc a n c e rw a s4 3 7 54 - 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2 6 ) w a sh i g h e rt h a nm m p 一1 0n e g a t i v eg r o u p ( 3 2 3 84 - 3 8 ) t h e r ew a ss i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb e t w e e nt h et w og r o u p s ( 产6 9 8 8p = - 0 013 ) c o n c l u s i o n ( 1 ) t h el e v e l so ft h ee x p r e s s i o n so fm m p 一10w e r ec l o s e l yr e l a t e dt ol y m p h n o d em e t a s t a s i s ，d i f f e r e n t i a t i o ng r a d e ，c l i n i c a ls t a g e s 瞅0 0 5 ) m m p 一10m a yb e i n v o l v e di nt h ed e v e l o p m e n t ， i n v a s i o n ， m e t a s t a s i sa n da n g i o g e n e s i sa n do t h e r p r o c e s s e so fn o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e r ( 2 ) m v d ( m a r k e db yc d 10 5 ) v a l u ei n n o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e rc o r r e l a t e dw i t ht h el y m p hn o d em e t a s t a s i s ，t u m o rc e l l d i f f e r e n t i a t i o na n dc l i n i c a ls t a g e t h i si n d i c a t e dt h a tc d10 5m a yb ep r o m o t et h e p r o g r e s so fa n g i o g e n e s i s ，i n v a s i o na n dm e t a s t a s i z i n go fn o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e r ( 3 ) t h ee x p r e s s i o no fm m p - 1 0a n dm v d ( m a r k e db yc d10 5 ) i nn o n s m a l lc e l ll u n g c a n c e rs h o w e dap o s i t i v ec o r r e l a t i o nw i me a c ho t h e r t h i si n d i c a t e dt h a tt h e ym a y v i a b s t r a c t i n t e r a c t i v ei nt h ep r o g r e s so ft h eo c c u r r e n c e ，d e v e l o p m e n t ，i n v a s i o n ，m e t a s t a s i sa n d a n g i o g e n e s i so fl u n gc a n c e r k e yw o r d s ：n o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e r ( n s c l c ) ；i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e l 0 ( m m p 一1 0 ) c d l 0 5m i c r o v e s s e ld e n s i t y ( m v d ) v i i 目录 目录 正文部分 引言l 材料和方法3 结果7 讨论1 2 结论19 附图2 0 参考文献2 3 综述部分 m m p s 与恶性肿瘤2 6 参考文献3 6 个人简历4 3 攻读硕士学位期间发表的学术论文及获奖情4 4 致谢4 5 英文缩略词索引 缩写 a i b m e g f e c m e r k f g f h h t t l i c a m j n k l n m a p k m c c m m p s 仆，d n f n s c l c p k c i u 、- p c r s a p k t g f t i m p t n f v e g f 英文缩略词索引 英文名称中文 a p o p t o s i si n d e x凋亡指数 b a s e m e n tm e m b r a n e基底膜 e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r表皮生长因子 e x t r a c e l l u l a rm a t r i x细胞外基质 e x t r a c e u u l a rs i g n a l - r e g u l a t e dk i n a s e细胞外信号调节激酶 f i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r成纤维细胞生长因子 h e r e d i t a r yh e m o r r h a g i c 遗传性出血性毛细血管扩 t e l a n g i e c t a s i at y p e1 张症 i n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e c u l e胞问粘附分子 j u nn t e r m i n a lk i n a s ej u n 氨基末端激酶 l a m i n i n层粘连蛋白 m i t o g e n - a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e 促分裂原活化蛋白激酶 m a r k e lc e l lc a r c e n o m am a r k e l 细胞瘤 m a t r i xm a t a l l o p r o t e i n a s e基质金属蛋白酶 m i c r o v e s s e ld e n s i t y肿瘤微血管密度 n u c l e a rf a c t o r细胞核因子 n o n s m a l ll u n gc a n c e rc e l l非小细胞肺癌 p r o t e i nk i n a s e 蛋白激酶c p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n聚合酶链式反应 s t r e s s a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e应激活化蛋白激酶 t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r转化生长因子 t i s s u ei n h i b i t o ro f m e t a l l o p r o t e i n a s e金属蛋白酶组织抑制剂 t u m o rn e c r o s i sf a c t o r 肿瘤坏死因子 v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r血管内皮生长因子 引言 非小细胞肺癌中m m p 1 0 的表达与m v d 的关系及意义 研究生：岳新召 导师：张庆宪 郑州大学第一附属医院呼吸内科 河南郑州4 5 0 0 5 2 引言 肺癌是原发于支气管肺部的肿瘤。随着环境的恶化、社会人口的老龄化等， 肺癌的发病率和死亡率明显呈现增高的趋势，并因其恶性度高、转移早、发现 晚、治疗效果差等因素，现已成为当今国内及世界上最常见的恶性肿瘤之一， 严重威胁着人类的健康【l j 。目前对肺癌的治疗还局限于传统的手术为主、联合放 化疗的综合治疗为主。通过不断地努力，肺癌患者的预后有了很大程度的改善， 但其死亡率仍很高，居恶性肿瘤之首【2 】。大多数患者就诊时已发生转移，即使早 期发现的病人，手术切除后复发的概率仍较高，因此肺癌早期诊断、早期治疗 及防治复发对改善肺癌患者的预后非常重要。随着对肿瘤侵袭、转移机制的进 一步研究，人们认识到了遏制肿瘤的侵袭和转移的重要性，并已成为肿瘤治疗 的新靶点。 肿瘤的发生、侵袭、转移是一个多基因、多阶段、多步骤的过程。根据肿 瘤发生、发展、侵袭转移等的过程，肿瘤细胞需要与包括由各型胶原蛋白、蛋 白聚糖、纤维连接蛋白( f n ) 、层粘连蛋白( l n ) 等细胞外基质组成的基底膜发生 关系。细胞外基质对抵抗肿瘤侵袭转移首当其冲，并可能是其限速步骤。随着 研究的深入，人们逐渐认识到细胞外基质不仅在抑制肿瘤转移过程中发挥物理 屏障的作用，但在基质金属蛋白酶( m m p ) 的蛋白水解作用下，同时可产生的 底物片段促进肿瘤细胞的侵袭和转移。因此，如何抑制基质金属蛋白酶对细胞 外基质的降解作用，越来越多的受到重视。目前人们研究基质金属蛋白酶的焦 点是m m p 2 ，m m p 7 和m m p 一9 等。作为基质金属蛋白酶中的一员，m m p 一1 0 因 其独特的作用也备受重视。它可以降解多种细胞外基质如胶原蛋白、层粘连蛋 引言 白、纤维连接蛋白、蛋白聚糖、明胶蛋白等，同时可降解基质金属蛋白酶的前 体并使其活化。已有大量的研究表明，它在人类的胸部、颈部、头部、食管癌【3 】、 胃癌【4 】等肿瘤细胞中呈高表达，同时它也可表达于慢性损伤修复的基础角化中， 而在肺癌中的表达情况尚无较多的研究资料。 肿瘤生长到一定阶段必需有新生血管的生成，而新生的血管在为肿瘤原发 灶提供营养支持的同时，为肿瘤的转移也提供了前提条件。肿瘤微血管密度 ( m v d ) 作为判断肿瘤内微血管生成的指标，已经广泛的认为是判断肿瘤预后的 重要因素。但应用何种物质进行标志也经历了一个很长的过程。经过众多的研 究分析发现，跨膜糖蛋白( c d l 0 5 ) 主要表达于处于增殖状态的血管内皮细胞， 对新生血管的标志特异性强，而成为m v d 重要的标志物。同时，c d l 0 5 还可以 通过对t g f1 3 活性的调节，促进内皮细胞的增殖、分化和迁移，参与血管的生成。 它的这种作用在人类的实体肿瘤中已有广泛研究，如食管癌、胃癌、肝癌、直 肠癌、乳腺癌、头颈部肿瘤等，而在肺癌中的研究很少。 基于上述，目前国内外对m m p 1 0 与非小细胞肺癌发生、发展、侵袭、转移 和血管生成关系的研究很少，且尚无m m p 1 0 和c d l 0 5 标志的m v d 在t h , 细胞肺 癌中相互作用的报道。本研究课题应用免疫组织化学方法，检测非小细胞肺癌 中m m p 1 0 和c d l 0 5 标志的m v d 的表达情况，并分析m m p 1 0 和c d l 0 5 标志的 m v d 表达水平与非小细胞肺癌临床及病理学参数之间的关系，以及在m m p 1 0 和c d l 0 5 标志的m v d 非小细胞肺癌中的相互作用，为进一步研究非小细胞肺癌 的发生、发展、侵袭、转移和血管生成等的机制提供理论依据，并在为临床提 供有效的诊断预测指标及新的治疗靶点。 2 材料和方法 材料和方法 1 材料 1 1 实验材料 选用郑州大学第一附属医院2 0 0 6 - 2 0 0 8 年胸外科手术切除并经病理诊断为原 发性非小细胞肺癌存档蜡块6 0 例及癌旁正常肺组织2 0 例，男4 2 例、女1 8 例，年 龄2 8 7 5 岁、平均5 5 6 岁、小于6 0 岁者2 6 例，大于和等于6 0 岁者3 4 例。所有病例 术前未经任何化疗和放疗。分化程度：高分化癌2 0 例，中分化癌1 8 例，低分化 癌2 2 例；组织学分类：鳞癌2 8 例，腺癌3 2 例；临床t n m 分期：i 期1 0 例、i i 期 1 8 例、i i i 期2 6 例、期6 例；有淋巴结转移者1 7 例，无淋巴结转移者4 3 例。正常 组织取自肿瘤远端5c m 以外或手术切缘经病理检查证实未发现癌细胞者。全部标 本经1 0 甲醛溶液固定，常规石蜡包埋， 4i lm 连续切片。分别应用兔抗人 m m p 。1 0 和c d l 0 5 多克隆抗体进行免疫组化染色和苏木素染色。 1 2 试剂 1 2 1 兔抗人m m p 1 0 多克隆抗体( 浓缩型) ( 编号：b s 1 3 4 4 r ，北京博奥 森生物技术有限公司) 。 1 2 2 兔抗人c d l 0 5 多克隆抗体( 浓缩型) ( 编号：b s 。0 5 7 9 r ，北京博奥森 生物技术有限公司) 。 1 2 3s p ( 兔i g g ) 0 0 2 3 试剂盒( 包括3 h 2 0 2 去离子水、封闭用正常山 羊血清工作液、生物素化二抗工作液、辣根酶标记链霉卵白素工作液) ( 北京博 奥森生物技术有限公司) 。 1 2 4 显色剂d a b ( f l 匕京博奥森生物技术有限公司) 。 1 3 试剂配方 ( 1 ) p b s ( 0 0 2 m ，p h7 2 7 6 ) n a c i 8 5 9 n a 2 h p 0 42 8 9 n a h e p 0 40 4 9 蒸馏水溶解至1 0 0 0 m l ，混匀。 3 材料和方法 ( 2 ) 枸橼酸盐缓冲液 储备液： a o 1 m 枸橼酸溶液：称取2 1 0 1 9 枸橼酸( c 6 h 2 0 7 h 2 0 ) 溶于1 0 0 0 m l 蒸馏水 中。 b o 1 m 枸橼酸钠溶液：称取2 9 4 1 9 枸橼酸钠( c 6 h s n a 3 0 7 2 h 2 0 ) 溶于1 0 0 0 m l 蒸馏水中。 工作液： 取9 m l 的a 液和4 1 m l 的b 液加入4 5 0 m l 蒸馏水中，溶液p h 值应为6 0 。 1 4 主要仪器设备 实验操作台 d r p 。9 0 8 2 电热恒温箱 格兰仕微波烧烤炉 不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器 4 c 电冰箱 电动匀浆器 高速低温离心机 广口瓶：9 个 染色架：6 个 组织切片机 恒温水浴箱 j j 2 0 0 型精密电子天平 b x 5 0 光学显微镜 显微成像系统 2 0 微升定量加液器 5 0 微升定量加液器 1 0 0 微升定量加液器 e p p e n d r o 借：12 0 0 个 加液器枪头：1 2 0 0 个 免疫组织化学专用抗原修复架： 博士德生物制品有限公司 郑州市家具厂 上海森信实验仪器有限公司 佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司 镇河金鑫医疗有限公司 河南省新飞电冰箱厂 宁波新芝医用电器厂 湘仪贝克仪器仪表公司 博士德生物制品有限公司 博士德生物制品有限公司 武汉俊杰电子有限公司 天津市恒奥科技发展有限公司 常熟双杰测试仪器厂 日本奥林巴斯公司 上海山富有限公司 博士德生物制品有限公司 博士德生物制品有限公司 博士德生物制品有限公司 北京博奥森生物技术有限公司 北京博奥森生物技术有限公司 6 个 4 材料和方法 树胶吸管：4 个博士德生物制品有限公司 高温修复盒：6 个博士德生物制品有限公司 免疫组织化学专用湿盒：6 个博士德生物制品有限公司 2 实验方法 2 1 载玻片防脱片处理 ( 1 ) 载玻片在重铬酸浓硫酸液体中浸泡2 4 d , 时； ( 2 ) 清水冲洗过夜； ( 3 ) 用蒸馏水荡洗两遍后烘干，无水