药物的杂质检查

,第三章药物的杂质检查,1、杂质与药物纯度的评价2、杂质的检测方法3、一般性杂质检测,1-1、什么是杂质,应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。药物的纯度检查也称为杂质检查。药物的杂质：药物中存在的无治疗作用，影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的物质，称为杂质。,1-2、杂质的来源与分类,如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。,1.一般杂质：,指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。有关物质：指药物中可能存在的原料、中间体、副产物、异构体、聚合体和降解产物等与药物结构相似或相关的一类物质的总称。,2.特殊杂质：,按理化性质有机杂质无机杂质残留溶剂,按其来源工艺杂质（中间体、副产物，未完全反应的原料及试剂）降解产物从反应物及试剂混入的杂质,药物的纯度与化学试剂的纯度,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。,1-3、杂质限量,通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示药典中规定的杂质检查均为限量（或限度）检查（Limittest）,杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量,二、药物的杂质检查法,1.对照法限量检查法（LimitTest）系指取限度量的待检杂质的对照物质配成对照液，另取一定量供试品配成供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果（比色或比浊）。特点：不需知道杂质的准确含量,药典对色氨酸杂质检查的规定,自身对照法高低浓度对照法,醋酸甲地孕酮,杂质限度为，单个杂质：1/50X1/2=1/100所有杂质：1/50X3/4=3/200,2.比较法,含量测定法：测定杂质的绝对含量特点：准确测定杂质的量，需要对照品,3.灵敏度法,在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品,三、杂质限量的计算,例色氨酸；教材P101，例3-13-4,供试品溶液体积50ml标准NaCl浓度1ml相当于10mg的氯,计算色氨酸中氯的限量,1-4、杂质研究规范（教材P102，自学）,（一）有机杂质的化学名称作为项目名称（二）杂质检查项目的确定（三）杂质限度的确定（不是越低越好）（四）杂质检查方法的选择与验证,2、杂质的检测方法,1、化学方法2、色谱法薄层色谱：P106P107，示例3-8、10、12、13HPLC：P108P110，示例3-16、18等杂志对照品法、加（不加）校正因子的主成份自身对照法、面积归一化法。GC：类似于HPLC3、光谱法可见-紫外分析：（教材P111，示例3-21）红外分析：区别不同的晶型。4、热分析法,220260300nm,肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线,max310nm,可见-紫外分析肾上腺素中的肾上腺酮,热分析法,定义：在程序控温条件下，测定物质的理化性质与温度之间关系的一类技术。原理：物质在温度改变过程中会发生融化、升华、相转变、晶型改变、脱水、脱氢或分解等反应，从而造成理化性质（温度、能量或质量）的改变。分类：,该法研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，可对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定，可用于鉴别和纯度检查。,1.热重法（TGA）,热重法是在程序控制温度下，测量物质重量与温度关系的一种技术。,记录重量变化对温度的关系曲线称为热重曲线（TG曲线）。,热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。,本法适用于药物结晶水的测定和贵重药物或在空气中极易氧化药物的干燥失重分析。（例：硫酸铜脱去结晶水，教材P113114。）,特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快,2.差热分析法（DTA）,差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（T）与温度(或时间)之间的关系的一种技术。,差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，横坐标为温度。（教材P114，图3-6）,第三节一般杂质检查,一、一般杂质检查规则,药品检验操作标准规定：1.遵循平行操作原则,（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作,平行操作原则,2.正确的取样及供试品的称量范围,3.正确的比色、比浊方法,4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份,二、氯化物检查法,（一）原理对照法,于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得,（三）测定条件,1.标准NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。,2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。（如为碱性？）,（1）加速AgCl浑浊的形成；,（2）产生较好的乳浊；,（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。,3.试剂：硝酸银,5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。,4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀,6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,7.平行操作原则,（四）干扰及排除,1.若供试品有色，需处理后方可检查。,内消色法：如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。于其中一份中先加入硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试溶液，将两液在暗处放置5min后比较，即可消除颜色的干扰。此法又称为内消色法。,2.当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去（1）碘中氯化物的检查（2）碘化物中氯化物的检查（3）溴化物中氯化物的检查,（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。,3.不溶于水的有机药物,（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。,（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。,（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。,三、硫酸盐检查法,（一）原理对照法,（二）测定条件,标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的SO42所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。,2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。目的是防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀得生成,3.氯化钡1025,5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀,6.检测时的温度2030，温度太低产生的白色混浊既慢又少。,若供试品有色，也可用内消色法处理。,（三）干扰及排除,四、铁盐检查法,1.原理对照法,（一）硫氰酸盐法,红色,2.检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取该药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。,（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行,（4）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+,（5）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,4.干扰及排除,（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。,（2）有机药物，特别是具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。,（3）干扰离子的影响氯化物、硫酸盐、磷酸盐、亚硝酸盐、枸橼酸盐有干扰增加酸度、萃取、增加显色剂的量,甘油磷酸钠,铁盐取本品0.5g，加水10ml溶解，依法检查（附录VIIIG），与标准铁溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.004）。,（二）巯基醋酸法BP（2000）对照法,本法灵敏度较高，但试剂较贵,LimitTestforIron(Ph.Eur.method2.4.9)Dissolvethespecifiedquantityofthesubstancebeingexaminedinsufficientwatertoproduce10mloruse10mlofthesolutionprescribedinthemonographandtransfertoaNesslercylinder.Add2mlofa20%w/vsolutionofcitricacidand0.1mlofmercaptoaceticacid,mix,makealkalinewith10Mammonia,diluteto20mlwithwaterandallowtostandfor5minutes.Anypinkcolourproducedisnotmoreintensethanthatobtainedbytreating10mlofironstandardsolution(1ppmFe)inthesamemanner.,五、重金属检查法,中国药典（2005年版）共收载四法。,重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。如银、铅、汞、镉、锡、锑、铋等，生产中遇到铅的机会较多，且铅又易在体内积蓄中毒，所以检查时以铅为代表。重金属影响药物的稳定性及安全性。,芦荟养颜胶囊,（一）第一法硫代乙酰胺法,1.原理对照法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。,（二）第二法炽灼残渣法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。,500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。,1.原理对照法,2.操作方法,依一法检查,氯化物,残渣,样品：S置坩埚中,0ml,pH3.5缓冲液2.,右,O调节至pH7.0左,H,NH,O,H,HCl、,残渣,500600炽灼,2,3,2,（三）第三法硫化钠法,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。,1.原理对照法,（四）第四法微孔滤膜法,适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。,2.测定条件,（1）标准品：用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。,（2）酸度：本法用2mlpH3.5的醋酸盐缓冲液严格控制溶液pH值为33.5。不溶于酸的药物加氢氧化钠5ml溶解（第三法）,（3）显色剂：从Ch.P（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂。碱性条件下用硫化钠,65,四、重金属检查法,重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是A.1.5B.3.5C7.5D.9.5E.11.5,微孔滤膜法是用来检查A.氯化物B.砷盐C.重金属D.硫化物E.氰化物,中国药典(2005年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是A.硫化氢试液B.硫代乙酰胺试液C.硫化钠试液D.氰化钾试液E.硫氰酸铵试液,葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸/50ml酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下观察,现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法A.一法B.二法C.三法D.四法E.以上都不对,下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（）A.500600炽灼残渣后,按一法操作B.pH33.5条件下，加入硫化氢试液C.碱性下，加入硫化钠试液D.按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑E.以上都对,六、砷盐检查法,（一）古蔡法Ch.P（2005）、BP（2000）,遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较,1.原理对照法,检查时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约6080mm)，再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸，盖上旋塞E并旋紧。标准砷斑的制备方法为：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10min后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540水浴中，反应45min取出溴化汞试纸，即得。另取规定量的供试品，加水23ml溶解后，照标准砷斑制备方法操作，将供试品砷斑与标准砷斑比较，不得更深。教材P123图3-11,2.操作方法,（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备,（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作,3.测定条件,（1）标准砷溶液临用新配，1gAs/ml。,（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。,（3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：,A.还原As5+为As3+，加快反应速度；,B.碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；,C.氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；,D.可抑制微量Sb（锑）的干扰（抑制锑化氢的生成），在实验条件下，100gSb存在不干扰。,（4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。,（5）锌粒应无砷,（6）砷斑不稳定，应立即观察,4.干扰及排除,（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。,（2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。,（7）灵敏度210mg显色较好，药典为10mg(8)反应温度和时间：25401小时,（3）具环状结构的有机药物，要先进行有机破坏后再进行检查。常用的有机破坏方法：,碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查溴水,（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。,（二）Ag-DDC法检查、含量测定Ch.P(2005)、USP（24）,Ag-DDC二硫代二乙基氨基甲酸银对照法,测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度约80mm），并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。（教材P125，图3-12）,砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。,用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，Ch.P（2005）用三乙胺。,本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,反应温度2540,（三）白田道夫法Ch.P（2000）含Sb药物中砷盐的检查。如葡萄糖酸锑钠,原理对照法,（四）次磷酸法BP（2000）,原理对照法,在盐酸酸性条件下，次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷,硫化物、亚硫酸盐及含锑药物中砷的检查灵敏度低：5mg的砷,在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是A.氯化物B.硫酸盐C.醋酸盐D.砷盐E.淀粉,在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是A.除去I2B.除去AsH3C.除去H2SD.除去HBrE.除去SbH3,砷盐检查法中，在检砷装置导气管中塞入醋酸铅棉花的作用是A.吸收砷化氢B.吸收溴化氢C.吸收硫化氢D.吸收氯化氢E.吸收锑化氢,古蔡氏法中，SnC12的作用有A.使As5+As3+B.除去H2SC.除去I2D.组成锌锡齐E.除去其它杂质,AgDDC法检查砷盐的原理为：砷化氢与AgDDC吡啶作用，生成的物质是A.砷斑B.锑斑C.胶态砷D.三氧化二砷E.胶态银,中国药典（2005年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是A.与锌、酸作用生成H2S气体B.与锌、酸作用生成AsH3气体C.产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑D.比较供试品砷斑与对照品砷斑的面积大小与颜色强度,106110适用于A.古蔡氏（Gutzeit）法B.二乙基二硫代氨基甲酸银法C.A和B均可D.A和B均不可106在连接砷化氢发生瓶的导管中装入醋酸铅棉花（C）107使用的标准砷溶液为2m1（C）108测定结果要与标准砷斑相比较（A）109要测定吸收度（B）110要用酸碱滴定法（D）,用古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：A.先用硝酸或溴水氧化B.先加酸性氯化亚锑还原C.改用白田道夫法D.先加氰化钾掩蔽E.先加草酸生成沉淀1.硫化物（A）2.亚硫酸盐（A）3.硫代硫酸盐（A）4.高铁盐（B）5.锑盐（C）,AgDDC法检查砷盐时，所产生的红色溶液为（C）A.HDDC吡啶溶液B.Ag吡啶溶液C.Ag的胶态溶液D.Ag(DDC)溶液E.AsAg3溶液,例8.葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有（BCDE）APb2+标准液BSnCl2试液CKI试液DZnE醋酸铅棉花,例9.Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用为（ABCDE）A将As5+还原为As3+B有利于AsH3生成反应C抑制SbH3的生成D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气E催化加速生成AsH3,例11.古蔡氏法检查所用的溶液是(B)A.