诊断酶学精品课件.ppt

,第五章诊断酶学,DiagnosticEnzymology,1,主要内容,一、酶的概念与特征(自学),二、血清酶,三、酶促反应动力学,四、酶活性浓度测定技术,五、酶的免疫化学测定,六、同工酶和亚型的测定,2,1.掌握血清酶的来源、去路及生理变化因素。2.掌握血清酶变化的病理机制。3.掌握酶反应进程曲线的含义及用途。4.掌握酶活性测定方法及酶偶联的基本概念。5.掌握酶活性浓度的单位、K值的计算及应用。6.掌握同工酶的概念及主要分析方法。7.熟悉酶学测定的影响因素及酶学测定标准化。8.熟悉酶的免疫化学测定的原理及优缺点。,教学目的,3,一、酶的组成、结构和功能酶的本质与特性酶的结构与功能二、酶的催化作用机制三、酶的命名、分类与编号,Section1酶的概念与特征,4,一、血清酶的来源,Section2血清酶,三、血清酶的生理变异,四、血清酶变化的病理机制,二、血清酶的去路,5,一、血清酶的来源,6,血清酶的去路,与血清酶的半寿期有关半寿期代表酶从血中清除的快慢。半寿期长的酶，在血清中持续时间长。血清酶的失活和排泄血管：内失活或分解。血清酶经蛋白酶水解产物（多肽或氨基酸）可经小肠粘膜排至肠腔，再彻底分解成氨基酸后被重吸收肾脏：肝脏单核巨噬系统,7,酶合成异常合成减少合成增多细胞内外酶浓度差异酶释放增加细胞内外酶浓度差异酶蛋白分子量的大小酶的组织分布酶在细胞内定位和存在形式器官损害的性质及原因缺氧程度及持续时间酶的清除异常,二、血清酶变化的病理机制,8,三、血清酶的生理变异,1.性别少数酶如CK、ALP及GGT等有性别差异，与血清酶的来源组织有关。2.年龄血清酶的活性随年龄而变化，ALP和GGT到老年时可有轻度升高。年龄差异也见于同工酶。3.进食过量饮酒可使血清GGT明显升高。4.运动多种血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT等，其升高的幅度与运动量、持续时间、运动频率及骨骼肌所含的酶量有关。5.妊娠胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、LD、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶活性升高。6.其他一些酶活性与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变化及家庭因素有关。,9,诊断酶学的任务,1.发现组织损伤。2.证明损伤器官的起因。3.损伤的程度。4.损伤的严重性。5.诊断潜在的疾病。6.鉴别诊断,10,（1）酶活力测定：以酶为分析对象，检测生物样品中酶的活性或含量。（2）酶法分析：以酶为工具（分析试剂）测定酶的底物、辅酶、活化剂、抑制剂等。不同点：目的、对象不同相同点：利用酶的专一和高效催化化学反应为基础,四、酶分析,11,一、米曼氏方程,Section3酶促反应动力学,三、酶促反应进程曲线,四、影响酶促反应的因素,二、Km与Vmax,12,Michaelis和Menten提出的酶作用的中间产物学说:,一、米曼氏方程,E+S,K1,K2,K3,1913年提出了著名的酶促反应速度与底物浓度关系的方程式，即米-曼氏方程(Michaelis-Mentenequation):,E+P,ES,13,二、Km与Vmax,Km值：等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax一半时的底物浓度，即VVmax时，则KmS。Km在临床上的应用：反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。用来计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最大反应速度的百分率。根据Km值选择酶的最适底物。确定工具酶用量。确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依据。Vmax：酶完全被底物饱和时的反应速度，代表了在一定酶量下的最大反应速率。,14,三、酶促反应进程曲线,如将酶反应过程中测得的产物P或底物S变化量对时间作图，可得酶促反应时间进程曲线。图中产物P或底物S变化曲线的斜率就代表酶促反应的速率。,延滞期,线性反应期,底物耗尽期,必须根据线性反应期的反应速率才能准确计算出酶活性浓度。,15,反应级数,时间,酶促反应进程,延滞期,线性期,非线性期,P147,Lagphase,Zeroorder,Linearphase,Firstorder,酶促反应时间进程曲线,16,酶促反应过程酶促反应时间进程曲线：以产物或底物变化量对时间作图，斜率为酶促反应的速率。典型的酶促反应过程一般包括：延滞期（lagphase）线性期（linearphase）非线性期（nonlinearphase）,延滞期,线性期,非线性期,17,四、影响酶促反应的因素,酶浓度底物种类及浓度（1）当SKm时，反应速率与底物浓度S无关，VVmaxKE称为零级反应，反应速率与酶浓度E成正比。酶学测定时一般底物浓度可选择为Km的1020倍。缓冲液的种类、离子强度及pH温度激活剂及抑制剂,18,常见酶温度转化系数,19,量微、一般不能测定其浓度酶（催化）活性浓度指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。酶活性测定优点：灵敏、容易、测定范围广,Section4酶活性浓度测定技术,20,1.按检测方法分类根据产物或底物的理化性质不同（颜色、浊度、pH、气体、荧光、放射性）量气法、分光光度法、荧光法其他方法（放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、HPLC或生物发光法等）2.按反应时间分类（1）定时法（Fixedtimeassay，取样法、终点法、两点法）（2）连续监测法（速率法或动力学法）,一、酶活性浓度测定方法,21,按检测方法分类底物或产物浓度的检测,22,定时法（固定时间法）测定酶与底物作用反应一定时间后底物或产物变化的总量，计算酶促反应平均速度。优点：比较简单，无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。利用该法测定酶活性浓度，必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。,23,连续监测法指在酶促反应过程中用仪器监测某一反应产物或底物的浓度随时间的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。优点无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，观察到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活性，结果准确可靠。要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能。,24,连续监测法的种类,直接法是指待测酶酶促反应的底物或产物有特征性的理化性质，然后通过特殊的仪器直接检测。基于NADH或NADPH的反应原理：LD、-HBD等基于人工合成色素原底物：ALP、GGT、AMS等基于氧的消耗：各种氧化酶,25,（1）目前以分光光度法最为广泛，利用340nm处吸光度的变化测定各种脱氢酶。,340nm处A的变化可以反映反应体系中NAD(P)H量的增减，进而反映酶活性浓度。,L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+,LD,（2）利用一类人工合成的所谓色原性底物，其本身为无色或微黄色，酶作用后生成有色化合物。,26,连续监测法的种类,间接法酶促反应底物和产物之间没有特征性的理化性质，需通过另一个化学反应或生化反应，将底物或产物转化为有明显特征理化性质的另一个化合物。用直接法来测定的酶类非常有限，很多情况下不得不使用间接法。化学法：如ChE的丁酰硫代胆碱测定法。酶偶联法,+试剂,可被检出的物质,27,Ex为待测酶，A为底物，B为中间产物。A、B二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二个酶Ei(为指示酶)，其底物为B，反应产物为P可直接测定。,二、酶偶联法,酶偶联反应最简单的模式为：,28,辅助反应如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时还可在始发反应和指示反应之间加入另一种酶，将二者连在一起，此反应称为辅助反应。模式为：,其中，B、C均为中间产物，Ea、Ei都为工具酶。最后一个酶称指示酶Ei，其他外加的酶都为辅助酶（Ea）。,29,酶偶联反应原理(1)当用酶偶联法测定时，在偶联反应中存在几个时期：预孵育期、延滞期、恒态期、非恒态期。(2)延滞期是酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别。从酶反应开始至稳态期间，指示酶反应较慢且不稳定，称为延滞期。在这期间指示酶反应速度不能代表测定酶量多少。(3)设计和选择酶偶联测定方法时，延滞期越短越好，测定时间要避开此期。,30,酶偶联法测定ALT的吸光度变化图,31,第一试剂与样本混合,第二试剂与样本混合,预孵育期,延滞期,线性期,非线性期,反应进程曲线（速率法）,时间（s）317334351368385402419吸光度（A）1.2531.2041.1781.1461.1261.0971.048据此计算此酶的A/min,速率法,终点法,32,丙氨酸氨基转移酶,（1）速率法,a-丙酮酸+2，4-二硝基苯肼2，4-二硝基苯腙（红棕色）,（2）终点法,碱性,33,操作步骤（1）终点法加入物测定（ml)对照（ml)血清0.1基质缓冲液0.5混匀，37保温30min2，4-二硝基苯肼0.50.5基质缓冲液0.5混匀，37保温20min0.4mmol/LNaOH溶液5.05.0室温放置5min，波长505nm以蒸馏水调零。（2）速率法血清100ul，R11000ul,，混匀，37保温5min，加R250ul，混匀（启动反应），波长340nm处，延滞期30s，监测时间90s，计算A/min。,34,（1）方法条件的选择尽可能采用连续监测法；减少步骤,化学试剂有一定纯度,双蒸水,使用双试剂。（2）仪器和设备（3）试剂（4）测定参数的设置方法类型、波长、样品量与试剂量（1：10）、反应时间、试剂吸光度上下限、空白速率、反应孵育时间、延迟及监测时间（90120s，3个A）、底物耗尽限额、线性范围及计算因子F值。（5）标本的采集、运输与保存影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。（6）干扰因素的控制反应干扰、污染、底物自行发生反应、非酶反应、沉淀形成等。,三、血清酶活性浓度测定条件的选择,35,不同贮存温度时体液酶的稳定性,*酶不耐融化；与同工酶类型有关；标本未酸化；#标本加枸橼酸或醋酸至pH5,36,酶活性单位惯用单位惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，难以进行比较。国际单位（IU）在特定的条件下，每分钟转化1mol底物的酶量为一个国际单位。以IU表示，1IU=1mol.min-1。Katal单位在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量为1kat，1kat=1mol.s-1。常用单位为katal或nkatal。Kat与IU的换算关系为：1IU=1molmin-1=16.67nmols-1=16.67nkatal,四、酶活性浓度的单位,37,酶活性浓度单位临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶活性单位数表示。连续监测法根据摩尔消光系数进行酶活性浓度的计算。公式如下：,38,参考范围与正常上限升高倍数（ULN）由于临床实验室进行酶学测定时所选仪器、试剂和方法不同，加之生物学变异等对酶活性影响，常常导致实验室之间所得参考范围差别甚远，应根据各自情况对各种酶建立自己的参考值。所谓正常上限升高倍数（ULN）是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限。便于比较来自不同方法的结果；如将ULN进一步适当分级，更制定出轻度、中度及极度增加的范围，一目了然。有些酶测定要考虑到不同性别、年龄时间时，用ULN换算更能正确表达，就不致发生误判。,39,临床常用血清酶的测定方法与参考范围（37）,*国际临床化学联合会（IFCC）参考方法；#实际为拟胆碱酯酶（PChE）,40,用自动生化分析仪测定同一酶，条件固定时，从理论上来讲V、v和L均为固定值，为常数，则将公式简化为如LD活性浓度，已知NADH的为6.22103cm-1.mol-1，血清量为50l，底物液为1ml，比色杯光径为1cm，则F=1.05106/6.221030.051=3376,五、系数K值的计算与应用,41,常用指示物的摩尔消光系数,42,使用推荐方法和参考方法使用公认的酶校准物或酶参考物,标准化途径,建立原级参考方法制备原级参考物建立参考实验室网络,酶活性浓度测定的参考系统,六、临床酶学测定的标准化,酶活性单位的校准用实测的校准用酶校准品校准,43,酶的免疫化学测定方法放射免疫测定（RIA）、免疫抑制法、化学发光免疫测定（CLIA）、酶免疫测定（EIA）、荧光酶免疫测定（FEIA）。免疫化学法的结果报告方式（1）用酶活性浓度单位，结果以U/L表示。（2）用质量浓度单位，结果直接用ng/ml或g/L表示。血清酶活性与酶质量的变化的关系注意两者之间的差异，如CK-MB活性与质量不平行。,第五节酶的免疫化学测定,44,优点：灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶。特异性高，不受体液中其他物质的影响。能测定一些不表现酶活性的酶蛋白；特别适用于测定同工酶。局限性：制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且工作量大。测定步骤多，操作繁琐。测定成本高。,酶的免疫化学测定的优缺点,45,第六节同工酶及亚型的测定,一、同工酶的概念及分类,二、同工酶的分析方法,46,概念：同工酶是催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质不同的一组酶。亚型指基因在编码过程中由于翻译后修饰的差异形成的多种形式的一类酶。往往在基因编码产物从细胞内释入血浆时因肽酶作用降解而形成。分类：简单分类原级同工酶和次级同工酶。基因分类单基因决定的同工酶、复等位基因同工酶、多基因决定的同工酶和修饰的同工酶等四类。,一、同工酶的概念及分类,47,48,人体中几种重要的同工酶,49,人体中几种重要的同工酶,50,二、同工酶的分析方法,51,主要内容,七、工具酶及其临床应用,八、临床常用血清酶及其同工酶,52,1.掌握临床诊断中常见血清酶主要特征、测定原理及临床意义。2.掌握工具酶的基本概念、共同性呈色反应的基本原理、应用。3.掌握临床常见的酶谱的组成及意义。4.熟悉代谢物酶法测定的动力学法与终点法的区别。,教学目的,53,第七节工具酶及其临床应用,一、工具酶,二、代谢物的酶法测定,54,概念作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶。,一、工具酶,常用工具酶多为氧化还原酶类工具酶纯度不必要求过高工具酶中杂质的含量有一定的限制限速因子为待测化合物或待测酶辅助酶及其底物过量,55,葡萄糖尿酸胆固醇甘油丙酮酸,工具酶参与的指示反应,临床生化检验中，很多项目的测定往往使用有工具酶参与的类似的反应原理共通（通用）反应途径。,1.偶联H2O2的工具酶及其指示反应,H2O2,(最常用）,56,葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖,GluO2H2OGAH2O2H2O24-AAP酚H2OO2红色醌类化合物,（1）POD在色原性氧受体存在时将H2O2分解为H2O和O2，并将色原性氧受体4-AAP和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的量与Glu含量成正比。,（2）POD催化下，H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色色素，此类色素原供氢体包括：邻联甲苯胺（OT）、联苯胺（DAB）、邻联茴香胺（ODA）、3，3，5，5，-四甲基联苯胺（TMB）。,GOD,POD,57,工具酶参与的指示反应,被测物,工具酶（氧化酶）,H2O2,过氧化氢酶或POD,有色物质,葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶、丙酮酸氧化酶等,显色剂（氧化发色剂）,邻联甲苯胺（OT）、四甲基联苯胺（TMB）、联苯胺（DAB）、4-AAP等,偶联H2O2的工具酶及其指示反应,Glu、UA、胆固醇、甘油、丙酮酸,Glu+O2+H2O,GOD,葡萄糖酸内酯+H2O2,+4氨基安替比林+酚,POD,红色醌类化合物,Trinder反应,58,许多氧化还原反应，尤其是作为工具酶如LD、GLD、G6PD等参与时，常将底物的H去除后传递给NAD(P)+形成NAD(P)H。借助NAD(P)H340nm处特征性的光吸收，借此用分光光度法检测。,2.NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应,如：葡萄糖、尿素、-羟丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD、ICD等。,尿素H2O2NH3CO2NH3-酮戊二酸NADHH+谷氨酸NAD+H2O,尿素酶,GLD,59,工具酶（脱氢酶）,被测物（或被测物被催化的产物、或被测酶催化底物的产物）,NAD（P）+/NAD（P）H,NAD（P）H/NAD（P）+,葡萄糖、尿素、-羟丁酸、TG、甲醇、血氨、ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD和ICD,NAD（P）+或NAD（P）H偶联的脱氢酶及其指示反应,Glu+ATP,HK,G6P+ADP,+NADP+,G6PD,6-磷酸葡萄糖酸内酯+NADPH,L-丙氨酸+-酮戊二酸,ALT,L-谷氨酸+L-丙酮酸,H+NADH+,LD,L-乳酸+NAD+,被测酶,60,LDL,61,临床化学中常用的共通性呈色反应,62,工具酶的其他应用酶循环法固相酶酶电极,酶循环法测定胆汁酸,63,二、测定技术,终点法概念：在代谢物酶促反应中，随着时间的延续，待测物浓度逐渐减少而产物逐渐增多，一定时间后待测物全部转化为产物，反应趋于平衡，测定反应完全后待测物或产物变化的总量，即终点法（又称平衡法）。测定的基本条件：待测物浓度S应远小于其米氏常数Km，此时任何时刻的反应速度v=VS/Km，呈一级反应。反应配方中所用酶量（V）应足够大，而Km应小，以保证有较快的反应速度完成测定。,64,直接法待测物与产物在理化性质上有可直接进行检测的差异，这种是最简单的代谢物浓度测定方法。如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在293nm有特异的吸收峰，胆红素在胆红素氧化酶作用下生成胆绿素造成450nm处的吸光度下降等。体内还有很多代谢物可以直接测定，关键是需要相对应的酶。,终点法,65,酶偶联法直接法测定的项目是有限如甘油三酯、肌酐都有多种酶试剂法。指示反应主要分两大类：NAD（P）H和过氧化物酶（POD）系统。动力学法,终点法,66,与终点法相比，动态法测定中待测物无需完全转化，故工具酶的用量较少，为了保证有足够的测定线性，所用酶的Km应足够大。两者对于测定仪器的要求不同。终点法测定对于仪器的电噪声和温控要求不严，而动态法要求仪器的电噪声小，吸光度应读准到0.0001，温度变化20ULN)的疾病：病毒性肝炎、中毒性肝炎。,74,二、-谷氨酰转移酶及其同工酶,生化特性-GT或GGT是一种含巯基的线粒体酶。组织分布分布于肾、胰、肺、肝、肠和前列腺等多种组织中，其中以肾脏含量最多。,IFCC参考方法L-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺(GCNA)作为底物，以甘氨酰甘氨酸（双甘肽）作为-谷氨酰基的受体。在pH7.7的条件下，-GT催化底物生成-谷氨酰双甘肽和黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波长处直接连续监。,75,(1)胆道疾病肝外梗阻等升高明显。(2)肝实质疾病肝炎、脂肪肝、肝硬化时中度升高。慢性肝炎活动期GGT多增高，非活动期则多正常。原发性或转移性肝癌时不同程度的增高。(3)诱导作用对乙醇性中毒的判断有一定的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者升高。(4)同工酶GGT1、GGT2、GGT3和GGT4四种。,76,三、肌酸激酶及其同工酶,生化特性肌酸激酶由两种不同亚基（M和B亚基）组成的二聚体。按电泳速率的快慢分为：CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）、CK-MM（CK3）和CKMt(CK4)四种同工酶。组织分布广泛分布于全身，心肌含量最高，其次是骨骼肌和脑组织。CK-BB在脑和脊髓内含量最高称为脑型同工酶。CK-MB主要存在于心肌细胞内称为心型同工酶。分为CK-MB1CK-MB2亚型。骨骼肌中几乎全部为CK-MM，称为肌型同工酶。分为CK-MM1CK-MM2CK-MM3亚型。,77,CK的测定方法比色法紫外分光光度法和荧光法IFCC测定CK的参考方法为酶偶联法。,78,CK同工酶和亚型的测定方法临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制法，但二法均会受溶血和巨CK的干扰，免疫抑制法还会受到CK-BB的干扰。现推荐用免疫化学方法直接测定CK-MBmass，可不受溶血和巨CK的干扰。CK同工酶亚型（CK-MM亚型和CK-MB亚型）多用琼脂糖凝胶高压电泳和等电聚焦电泳等。,79,CK及其同工酶测定的临床意义主要用于早期诊断AMI（1）血清CK总活力AMI后24h开始升高，1024h达峰值，34天恢复正常。（2）CK同工酶及亚型AMI胸痛发作后，血清CK-MB的上升先于其CK总活性，CK-MB/CK0.03可诊断为AMI。CK-MM亚型的测定：以CK-MM3/CK-MM11.0作为诊断AMI的标准。CK-MB2亚型：在AMI早期诊断和判断有无再灌注上同样有很高的灵敏度和特异性。一般以CK-MB21.9U/L或CK-MB2/CK-MB11.5作为AMI的诊断标准。,80,LD的测定方法（目前多用连续监测法）LD-P法：以丙酮酸为底物（反应方向PL）的逆向反应（称LD-P法）。LD-L法：以乳酸为底物（反应方向LP）的顺向反应（称LD-L法）。为IFCC参考方法（pH为9.4）。通过在340nm波长处监测NAD+还原成NADH吸光度的增加速率而计算LD活性。,组织分布LD位于细胞质中，以肾、心和骨骼肌含量最丰富。LD是由H（心型）和M型（肌型）两种不同亚基组成的四聚体。5种同工酶。,四、乳酸脱氢酶及其同工酶,81,LD同工酶的测定方法常用电泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以琼脂糖凝胶电泳法更多用。一般成年人存在如下规律：LD2LD1LD3LD4LD5，部分正常儿童血中可见LD1LD2。,82,LD及其同工酶测定的临床意义心肌梗死LD心肌酶中升高最晚，持续时间长。急性肝炎、慢性活动性肝炎和肝癌(尤其转移性肝癌)时，LD明显升高。LD同工酶主要用于AMI和肝病的诊断AMILD1升高最为显著，LD1/LD21，视为诊断AMI的一个特异指标。肝胆疾病LD5升高常表示有肝细胞坏死。肝细胞性黄疸时LD5LD4，阻塞性黄疽时LD4LD5。肿瘤肝癌(尤其转移癌)时可伴有LD4和LD5明显增高；白血病、胶原病时以LD3、LD4增高为主。恶性贫血LD活性极度升高(原始巨幼红细胞可产生并释放LD)，伴有LD1明显升高，LD1LD2。,83,AMI时心肌酶时相变化,返回节,84,五、碱性磷酸酶及其同工酶,组织分布ALP广泛分布定位于细胞膜表面，其含量依次为肝、肾、胎盘、小肠、骨骼等。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼，是胆汁淤滞的酶学指标。根据ALP的来源不同可以3大类，即胎盘ALP、肠ALP和肝/骨/肾ALP同工酶。,ALP的测定方法(1)磷酸苯二钠比色法：测定ALP水解底物产生的酚。(2)连续监测法：我国及IFCC的推荐方法。,85,ALP测定的临床意义肝胆疾病各种肝内、外胆管阻塞引起的胆汁淤积性疾病，ALP明显升高，且ALP升高与胆红素平行甲亢、恶性骨损伤、佝偻病、Pagets病、骨折、指端肥大症所致骨损伤等，均可引起ALP活性升高，尤其是骨ALP同工酶的增高妊娠后期及儿童生长期ALP增高血清ALP活性降低：主要见于呆小病、维生素C缺乏症、甲状腺功能低下、恶性贫血等。,86,六、酸性磷酸酶及其同工酶,组织分布ACP主要来源于前列腺、红细胞、血小板、肾脏、肝脏等。正常男性血清中的ACP约有1/31/2来自前列腺，其余则与女性血中的ACP一样可能来自血小板或破骨细胞。同工酶前列腺ACP（PAP），可被酒石酸抑制非前列腺ACP（红细胞、溶酶体、破骨细胞等），,87,ACP的测定方法ACP的测定底物、原理和方法与ALP相似，只是反应pH为酸性。如利用磷酸苯二钠法和磷酸对硝基酚法等在酸性条件下测定ACP。国外多推荐使用磷酸麝香草酚为底物的比色法。可通过用L-酒石酸这类抑制剂鉴别和估量PAP活性。由于ACP不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定ACP（特别是PAP）。血标本采取后必须尽快分离血清并立即测定。不同方法参考范围也不同。,88,ACP测定的临床意义前列腺疾病血清PAP测定是诊断前列腺癌最重要的指标之一。在前列腺肥大、前列腺炎、急性尿潴留时亦可升高。酒石酸抑制试验可区别PAP与非PAP。骨病恶性骨肿瘤、变形性骨炎、多发性骨髓瘤、骨质疏松、代谢性骨病等轻度增高。肝病肝癌、肝硬化肝炎时ACP增高。血液病溶血性疾病、白血肉、血小板疾病等，ACP均有不同程度的升高。,89,七、淀粉酶及其同工酶,生化特性-amylase（AMY或AMS）是一种不均一性的钙依赖金属蛋白酶。AMY作用的最适pH在6.57.5，卤素和其他阴离子有激活作用（ClBrNO3I）。分子量4000050000，易从肾脏排出。半寿期很短，约为2h。,90,组织分布-AMY分为两种同工酶：S-AMY和P-AMY。利用电泳可将S-AMY分为S1、S2、S3和S4四个亚型；P-AMY分为P1、P2、P3三个亚型。P-AMY和S-AMY可单独或联合与抗淀粉酶自身抗体以非共价形式结合，形成巨淀粉酶（M-AMY）。M-AMY的分子量较