（微生物学专业论文）高效浓缩型酸奶冻干发酵剂制备关键技术研究.pdf

摘要 随着我国发酵乳制品工业的遇猛发展，积极研究并大力开发离效浓缩型酸奶发酵 裁，对予摇动我鬻翼酸菠发酵裁产鲎位避程，挺进我嚣发簿巍巅麓工鼗豹发展，其鸯 黧要的意义。本文对高效浓缩型冻干酸奶发酵剂制备的关键技术进行了深入研究，包 爨：选育发酵性能优良、抗冷冻干燥性强、后酸化力弱的乳酸麓菌黏( 株) ，继续寻 求并筛选了廉价蹭殖培养基稷高效冻干绦护裁，优纯了羲酸菌蜷殖培养、细胞浓缩分 离、真空冷冻干燥、发酵剂贮藏簿工艺条件；在此基础上，进行了5 l 全自动模拟发 酵罐隶平扩大试验，割备国冻予发酵劐楼晶，著在穗关金选进行了批量发酵试验，为 实现高效浓缩型酸奶发酵剂的商晶化生产和在我国的攘广应用掇供科学依据。 从国内外优质发酵乳制品或商业发酵剂中初步分离筛选出7 株保加利亚乳杆菌 艟a c t o b a c i l l u sb u l g a r i c u s ) ，通过磷究萤撩在毳串的发酵特性、嚣羧讫特豫、撬冷冻干 燥特性及混合菌种的优化搭配，筛选出发酵性能优良、后酸化弱、抗冻干特性强的保 擞剥亚乳凝菌2 株l + b d r 、l b s 1 ，确定二错与嗜热链球菌s t - s y 的最佳比例为 l ：l 。 选择原料易樽、易于分离细胞的胡萝 汁培游基、番茄汁培养基、轰芽汁培养基 终为基确培莠基，逶过缨蘧生长试验，蝼定麦劳泞基璇培莽蒸不仅怒嗜热镰球菌 s t s y ，而且也是保加利溉乳杆菌l b d r 、l b s t 的最邋基础培养基；研究了在麦芽 汁基础培器中添加9 种黪养因予对嗜热链球菌s t s y 细胞生长蹙的影响，结果表明， 大豆蛋白胨、牛爨膏、酵母膏可嚣著键逶s t s y 的- n 藤生长，磷酸氢二锤不仅可敦 促进菌体增殖，而且还可缓冲基质p h 值的变化，避免了低p h 值对乳酸菌生长的抑 铡 乍角；潮翅l 母( 3 3 ) 正交试验优诧筇选出s o s y 最馒增殖培器基，劳对l 。b - d r 、 l b s i 遂行了验证性增蘸试验。其配眈为：在1 0 。麦芽汁基础培养基中，添加o ，5 大豆蛋白胨、1 o 牛肉错、o 5 酵母膏、0 2 k 2 h p 0 4 、0 1 吐温8 0 。 在麦芽复台泞溪蓥壤莠基申，嗜热链建蘩s t - s y 、傈热列强爨抒蘧l 。b d r 、 l b s 1 ，3 74 c 恒濑培养1 6 h ，活菌数分别达2 4 2 1 0 9 、2 8 5 x 1 矿、4 8 1 1 0 9 c f u m l ，较 麦芽汁基础培养基活菌数分别提高1 6 。1 3 、9 8 9 、2 2 ，5 8 倍，与液体m r s 培养基活菌 数彼此桶当，毽成本较之降低1 0 0 0 元( ￥) ，睫( t ) 。 通过研究培养温度、培养方式、起始p h 、接种量、补料培养对乳酸菌增礅培养 赦影响，佐纯了魏酸营攮蘧培养豹工艺条 牛。缝祭表明，乳酸藏在麦芽汁复合壤券基 中增殖培养的最适工艺条件为：起始p n 值6 5 7 0 、按种量2 、培养温度3 7 、 静置培养1 6 h ；谯最适条件下，保加利溅乳杆菌l b s 1 、l b d r ，嗜热链球菌s t - s y 避嚣培莽，教获麓活蓥数分嗣这鬟4 。3 l 1 0 9 、2 9 3 x 1 0 9 、2 。7 4 x 1 0 9 c f i g m l 。 在此基础上，进行了5 l 金自动模拟发酵罐水平增蔼试验。结果表明，l b s i 、 l b - d r 、s t - s y 蘧株在起始p h 馕6 5 7 + 0 的麦芽复合汁增殖培养基中，援种巅均为 2 ，搅拌速度1 0 0 r p m ，3 7 。c 德温培养1 6 h ，活菌数分掰达4 2 1 x 1 0 9 、2 7 6 x 1 0 9 、 2 6 5 x 1 0 9 c f u m l 。 逶过研究褒，0 力、囊心嚣阀黠孚l 酸麓襄心损失率、裹心存溪攀及离心收缛窭夔影 响，确定了菌体细胞浓缩分离的最适离心条件：保加利脏乳杆黼l b s 1 、l b d r 为 1 6 3 2 9 ( 4 0 0 0 r ) 1 0 m i n 或5 7 3 8 9 ( 7 5 0 0 r ) 5 r a i n ，活菌收得率高达9 8 1 2 或9 7 8 】 9 8 ，3 5 或9 7 8 9 ；嗜热链球萤s t s y 为3 6 7 2 9 ( 6 0 0 0 r ) 1 0 m i n 或5 7 3 8 9 ( 7 5 0 0 r ) 5 m i n ， 活菌收得率高达9 5 1 9 成9 7 2 9 。 磅究了冷冻瀑度、冷冻对间以及干燥过程中发酵剂含水量对乳酸菌缁胞存活媳关 系，结果表明：一2 0 一】8 和_ 4 0 3 5 冷冻，对细胞存活率无届著影响( p 0 0 5 ) ； 冷冻起始至完全冻结，细胞存活率差异极显著( p o 0 5 ) ；干燥过程中，发酵剂含水量对细胞干燥 存活率影响极显著( p o 0 1 ) ，但存活率降低程度因含水量下降水平不同而出现差异， 其中以含水量由4 0 左右至5 左右的过程影响最大，细胞存活率由8 8 6 8 降至 4 0 1 1 ，下降约5 0 左右，差异极显著( p 0 0 5 ) ，t h e r e w a s as i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h e f r e e z e l i v a b i l i t y o fl b s 1b e t w e e nt h es t a r t - p o i n ta n dt h e e n d p o i n t o ff r e e z i n g ( p o 0 5 ) d u r i n gf r e e z e d r y i n g t h e1 i v a b i l i t yw a se f f e c t e dm a r k e d l yb yt h em o i s t u r ec o n t e n to fs t a r t e rb u tt h e r ew a sa d i f f e r e n c ei nt h el i v a b i l i t yo fc e l lb e c a u s eo ft h el e v e lo fd e s c e n d i n go fs t a r t e r sm o i s t u r e c o n t e n t i tw a st h em o s ts i g n i f i c a n t l yd i f i e r e n c e ( p o 0 1 ) d u r i n gt h ec o u r s eo f d e s c e n d i n g o fs t a r t e r sm o i s t u r ec o n t e n tf r o m4 0 t o5 a n dt h el i v a b i l i t vo fc e l ld e s c e n d e df i o m 8 8 6 8 t o4 0 1 1 a b o u t5 0 ( p n u - 酥矗轰酵潮 4 高散浓缩型酸奶冻干发酵剂制箭关键技术研究 量然“a b ”袭簿裁生产出静酸娆营葬髹懿作鼹穰磐，毽这辩l 鼹鬟酸蕊发酵时只生戏毳酸、 醋酸、和少量甲酸、乙醇、琥珀酸、不产生其他芳香物质，所阻产品风味蔗。丹麦专家在研究时 臻单萤静蹬热链蘧薅与单蕊摹孛保翅裂簸乳抒藩分别培棼城工作发簿裁，在接秘这鼹辨 作发簿裁 的同时，接种冻干荫接使用型a b 发酵割。由于接种了普通酸奶发酵剂，酸奶菌种控制了发酵过 稳，缩短了发酵时阉，产晶具有纯正的酸奶风味。此类发酵剂现有四种，南四种单菌神嗜热链球 蔼与a b 袋酵壳口菌种混合而成，也可称为a b t 发酵剂。用扰娄发酵齐可生产出嚣种发酵黥、泳 淇淋、冷冻酸奶等健身型发酵乳制品。 1 2高效浓缩型酸奶冻干发酵剂制备的关键技术 真空冷冻干燥简称冻干【m ，其基本原理魁：菌体与保护介质混溶，在冰冻状态下通过低压 秀华秘擦暇辩鲍方法，使铡t g ；承分减少到使其谨长时潮如无法缨捺生物学藏纯学及废的承乎。离 散浓缩型酸奶冻干艘酵剂制备的关键技术主要包括：优良菌种的选育、廉价增殖培养基的筛选及 乳酸萤培券条件的优化、细胞浓缩分离条件的筛选、冻千保护剂的优化筛选、真空冷冻于燥工艺 的优化及冻千发酵黼的傈藏技术等。 】2 1 臻庭藩秘( 拣) 弱逮弯 噻热链球蓥( s t h e r m o p h i l l u s ) 鞠镙热裁豫霉l 抒釜( l b u l g a r i c u s ) 是数奶及发酵骢辕料生产 中制备发酵荆的常崩乳酸菌种，筛选并培育具宵优良性状的乳酸菌菌种( 株) 是制备高效浓缩型 酸奶发酵粼的基础，鞭子剖备高效浓缩型酸奶凉干发酵划的乳酸麓神应该具有优良的发酵产酸性 能、较强的抗冷冻干燥特性、较弱的后酸纯特性等基本特性。 ( 1 ) 发酵产酸特性 酸奶筵鞋牛孚戒其毽巍为主要原辩，经杀莲焉接释巍酸萤等有益黉垒耪，经曝溢发酵露籍藏 的具有特殊风味的乳制品。柱发酵过程中，原料乳中的乳糖在微生物产生的乳糖酶的作用下，首 受将襞藉分舞戒二分子豹擎藏，进一步在毳酸落( 嗜热链球莹鞠绦热翻噩g k 耪蕴) 黪雩 翊下生藏 乳酸。当乳酸达到一定浓度时，乳中酪蛋白胶粒中的胶体磷酸镪转变为可溶性磷酸钙，促进酸奶 凝块约形戏，弗赋予酸奶爽翻的酸味，鼹时在发酵过程中因生成黎些风昧物质，翅忍醛、联乙醮、 丁二二酮等，使酸乳艇有特殊的风味。 获得发酵性能优良的乳酸菌是生产优质酸奶及发酵乳饮料的基础，一般而言，以2 的接种 鬟将季l 酸诸接种刘灭菌脱聪乳中，在4 2 c 下培养3 h ，漓定酸度戳9 5 l 叮f 用o i m o l l n a o h 标准溶液滴定1 0 m l 样品溶液，每消耗掉l m l n a o h 溶液称为l 滴定酸度( 。t ) 1 为宜。如果菌株 的产酸力太强，裁会影璃酸娆匏风棘，蔫置，瓣酸度会捧镯巍酸蘩豹皇长，经酸弱中活萤数不足。 “1 1 。研究袭明：保加利亚乳杆菌在乳中发酵产生1 7 1 8 的d ( ) 一乳酸，嗜热链球菌在乳中发 辩产生0 , 6 0 8 的l ( + ) 毳酸。骏奶逶翥禽骞4 0 - - 5 5 豹d ( ) 一乳酸郄4 5 6 0 的l 一定容( 1 k g 胡萝 生产5 l 泞定义为l 胡萝 汁) 一调p h 值至7 2 一t 2 1 l5 r a i n 灭菌备用。刚于乳酸菌增菌培养撼的优化筛选。 2 3 主要试剂 ( 1 ) 酵母膏：生化试剂，：i 匕京双旋微生物培养基制晶厂 ( 2 ) 牛肉膏：生化试刺，北京双旋微生物培养基制品厂 ( 3 ) 饕甍耱：生他试裁，藏豪双旋徽生耪培养綦翻鹣厂 ( 4 ) 乳耱：生化试剂，天津市化学试剂一厂 ( 5 ) 斌白胨：生化试剂，北京烈旋微生物培养基制品厂 ( 6 ) 犬豆蛋白胨：生他试剂，北柬般旋微生物培葵基制赫厂 ( 7 ) 簇蛋氖蒎：生健试蘩，l 象敲麓微生物壤莠蒸翩瑟厂 ( 8 ) 蔗糖：生化试荆，北京化工厂 ( 9 ) 氯化钠：分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂 ( 1 0 ) 碳酸钙：天津市福晨 二学试刹厂 ( 11 ) 羌求碳酸铺：天津市天遮净纯辛季耨精鲴纯工厂 ( 1 2 ) 乙酸钠：分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂 ( 1 3 ) 磷酸氢二钾：生化试剂，天津市化学试剂六厂 ( 1 4 ) 墨米浆：生纯试裁，河北壤欢制药有限公落 ( 1 5 ) 吐温硒：化学纯，天津市藏腹骅跃纯学试剂厂 ( 1 6 ) 丙三醇：化举纯，北京化工，一 ( 1 7 ) 胎牛血清：生化试剂，三利生物制品厂 1 8 ) 麓疆瑰耪：食整级，j 哀i b 方震巍食品添热剡有隈公司绦定势公司 ( 1 9 ) 麦芽糊精：食赭级，i e 索i e 方霞光食晶添栩有限公司裸定分公面 ( 2 0 ) 维生素e ：吉林通化东宝康定龄药业有限公司 ( 2 1 ) 菊芋、番茄、胡萝h 、蔗糖、鲜牛奶均为市售优质品 1 3 河北农业大学硕士学位( 毕业) 论文 2 4 主要仪器设备 ( 1 ) f l c 3 超净台：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 ( 2 ) y x q s g 4 6 2 8 0 s 型不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业有限公司医疗设备厂 ( 3 ) h g 7 2 1 型恒温干燥箱：北京市朝阳区来广营医疗器械厂 ( 4 ) l d z x 1 0 i l 型立式自动电热压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂 ( 5 ) s p x 1 5 0 b - z 型生化培养箱：上海博迅实业有限公司 ( 6 ) g r - 2 0 6 s v q 型l g 冰箱：山东省泰州乐金电子冷机有限公司 ( 7 ) s h d i i i 型循环水多用真空泵：河北保定高新区阳光科教仪器厂 ( 8 ) f a l 0 0 4 a 型电子天平：上海精天电子仪器有限公司 ( 9 ) j a 5 0 0 2 型电子天平：上海精天电子仪器有限公司 ( 1 0 ) p h s 3 c 型酸度计：上海康仪仪器有限公司 ( 1 1 ) 电子恒温水浴锅：北京市光明医疗仪器厂 ( 1 2 ) k q 2 0 0 d b 型数控超声波清洗器：江苏省昆山市超生仪器有限公司 ( 1 3 ) x s z - g 型光学显微镜：四川重庆光学仪器厂 ( 1 4 ) w h 8 6 1 型漩祸混合器：江苏省太仓市科教器材厂 ( 1 5 ) t g l l 6 m 型冷冻离心机：湖南省氏沙市易达科贸公司 ( 1 6 ) h z q q 恒温振荡培养箱：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 ( 1 7 ) 7 5 2 n 型紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司 ( 1 8 ) f d 1 冷冻干燥机：北京博医康技术公司 ( 1 9 ) m d f u 3 2 v 型超低温冰箱：日本s a n y o 公司 ( 2 0 ) a g 型5 l 全自动模拟发酵罐：瑞士i n f o r s 公司 2 5 检测项目 ( 1 ) 活菌计数：采用固体m r s 培养基稀释平板活菌计数法1 5 ”，3 7 c 培养3 6 4 8 h 。 ( 2 ) p h 值测定：采用p h s 一3 c 型酸度计直接测定。 ( 3 ) 发酵酸度测定：采用滴定法，用吉尔涅尔度( 叮) 表示。 ( 4 ) o d 值测定：采用7 5 2 n 型紫外可见分光光度计( x = 6 0 0 n m ) 直接测定。 ( 5 ) 水分含量测定：采用常压干燥法【“测。 2 6 研究方法与技术路线 2 6 1 保加利亚乳杆菌优良菌株的分离筛选及优化搭配 ( 1 ) 保加利亚乳杆菌不同菌株在乳中发酵性能的研究 菌种经复原脱脂乳活化，以2 ( 约2 x 1 0 6 c f u m l ) 接入复原脱脂乳中，4 2 ( 2 发酵至凝乳。观 4 高效浓缩型醴奶冻干发酵剂制备关键投术研究 察并记录撼嚣酵阚，捡溅凝嚣嚣豹灞莲数、潞定酸凌及砖l 蓬，蕊中选戡发酵性熊优良豹蘩撩。 ( 2 ) 保加利亚乳杆菌不同荫株抗冷冻千燥特性的研究 莛静缝复原脱脂巍活化，班2 ( 约2 t 0 f u m l ) 接入滚体m r s 壤葵基中，3 7 。c 恒濑培养 至对数生艮末期，离心收获蔺体，添加近等量的1 2 脱脂乳作为保护剂，混匀，进行真空冷冻干 燥。检测冻干前后的活菌数，计算冻于存活率，筛选出抗冻干特性强的翦株。 ( 3 ) 保掘秘亚氧拇菌不同稿株后酸纯蒋往鲍研究 菌种经复原脱脂乳活化，以2 ( 约2 1 0 。c f u m l ) 攘入复原脱脂乳中，4 2 ( 2 发酵凝乳厉，4 。c 冷藏2 1 d ，定麓梭测基囊法定酸凄、p 辩值及涯鹫含量瓣交纯，簿选窭嚣酸纯弱黪蘩拣。 ( 4 ) 苗种的优化措配 罄选出熬保加剃受嚣杆蕊撬良藏椿与实验窒魏有的优良的噫热链璋蕴，以t ：l 缨台搭配， 缀成发酵剂，进行酸奶发酵，观察并记录产晶的凝乳时间，检测凝乳时p h 值、滴定酸度、活菌 数；评价产品的感官风味；确定用予制备高效浓缩型酸奶发酵刹盼优良菌种( 株) 。 ( 5 ) 最适配冼菌株发酵酸奶贮藏稳定性研究 将优选出保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌以l ：1 组台搭配，婀成发酵剂，进行酸奶发酵。4 c 冷藏2 1 d ，定期数样，检测酸奶豹矮落数、基藏p 硅氆及滴定酸菠，蒡蕊察巷宫囊羹变纯。 2 6 2 嚣簸蓥增疆墙莽技术 ( i ) 乳酸蕊廉价增殖培养基的筛选 乳酸菌基础培养基的选择：选掰胡萝 汁、番茄汁、麦芽汁作为基础培养基，s t s y 、l b d r 、 l b s i 经复原脱脂乳培养基、液体m r s 培养撼活化，以2 ( 约2 1 0 6 c f u m l ) 接入基础培养基 申，3 t c 落溢墙蓁1 6 1 8 h ，观察我黢藩在墙莽基中的生长棱躐，确定最适基穑培养基。 在波芽汁基础培养基中嗜热链球菌s t - s y 增殖吲子的筛选：在麦芽汁基础培养基中分别添 麴8 静莺葵露孑配摹l 藏多秘生汝培莽蒸，对麦茅汁壤蓁熬进行营雾强纯；s + t - s y 蘩拣经复驻瓣鬻 乳培养基、液体m r s 培养基活化，姓2 ( 约2 1 0 f u m l ) 分别接种于上述生k 培养基中，3 7 恒温培舞1 6 h ，检铡培莽翦后静滔藏数和p h 售。 s ，t s y 菌株麦芽复合汁增菌培养基的优化筛选：程麦芽汁基础培养基中添加大豆蛋囱胨、 牛肉膏、酵母膏为三因素，利用b ( 3 3 ) 正交试验设计配制9 种培养基；s t - s y 菌株经复原脱脂 巍培养基、液俸m 骁s 培葬纂活倔。戳2 ( 约2 x l d 呛f l g m l ) 分辨凌种予上述生长培养基串，3 7 恒温培养1 6 h ，检测培养前后的活荫数。 在麦芽复合泞增萤壤箨基中，对揉热嗣鼗巍辑蘧避行验谖幢增蓥试骚：裁塌爱芽复会泞增 荫培养基配方配制培养基；保加利乳杆菌优良菌株经复原脱脂乳培养基、液体m r s 培养基活 豫基，驳2 ( 约2 x 1 0 f i ：m l ) 接静予述培葵基孛，3 7 9 c 恒瀑培姜至辩数生长束翅，检测其滔 菌数。 ( 2 ) 乳酸落增殖培葬条件的优化 痞莽温度对乳酸菌菌体生& 瓣影响：嗜热链球菌s t s y 和傈加利豫霉l 杆菌l b 。d r 、l b - s 1 分别复原脱脂乳液体培养基和m r s 液体培养慕活化后，分别以2 ( 约2 1 0 f u m l ) 接入灭菌 瓣3 0 0 m l 三角簸装液量2 0 0 m l ) p 辩僖为6 。5 7 0 静麦芽复合汁增菌珞券基串，每菌橡分澍置 河北农业大学硕士学位( 毕业) 论文 3 2 z ；、3 7 。c 、4 2 * ( 2 垣瀑静电培嚣2 4 h ，定孵褒样，捡溺o d 篷( x = 6 m ) 耪翊谴，绘澍生长 曲线和p r l 值曲线，检测乳酸菌培养至对数末期或稳定初期的括菌数。 培养方式对乳酸麓菌体生长的影响：嗜热链球菌s t - s y 和傈加剩亚拿i 姆蓥l b - d r 、l b - s 1 分剐经复原脱脂乳液体培养基和m r s 液体培养基活化后，每株菌以2 ( 约2 x1 0 f u m l ) 分别 接入灭蓖的3 0 0 m l 三角瓶( 装激量分别为1 0 0 m l 、2 0 0m l ) 和灭菌的2 5 0 m l 厌氧糕( 即输液 瓶，装液量2 0 0 m l ，装液过程串通过h u n g a t e 获氧系统充氮豫氧) p h 值为6 5 7 0 的麦芽复合 汁增黼培养基中，于3 7 分别进行摇床培养( 转速为8 0 r m i n ) 、静霞培养、厌氧培养1 6 h ，梭 测活蘩鼗，毙较不嚣蟪器方式煞增蓥效鬃，确定毳酸蓥培莽约最适塔葬方式。 ( 多培养基起始p h 对乳酸菌菌体生& 的影响：用2 m o l l n a 2 c 0 3 溶液或l m o l l 的乳酸溶液缀 磁力搅嫠器和o h 诗将培姜基分期调配成泌l 值秀4 + 5 、5 0 、5 5 、6 , 0 、6 5 、7 0 、7 5 檬度系列， 分装3 0 0 m l 三角瓶( 装液量均为2 0 0 m l ) ，1 2 1 1 5m i n 灭菌冷却备用。嗜热链球菌s t s y 和 保加铡亚乳杼麓l b - d r 、l b - s 1 分别经复原脱脂乳液体培养基和m r s 液体壤葵基活他后，每株 菌阻2 ( 约2 x 1 0 f u m l ) 分鄹接入不同p 秘值梯废系列的三角瓶麦芽复合汁增菌培养基中，3 7 恒温静置培养1 6 h ，捡测活菌数。确定乳酸菌培养的最适起始p h 傻。 簇拜量辩巍酸薤壤落生长靛影蘸：嗜熬链球蓊s ，t - s y 耪徐弱稠耍乳符穗l b - d r 、l b - s 1 分别复原脱脂乳液体培养基和m r s 液体培养基活化后，每荫株分别咀1 ( 约i 1 0 6 c f u m l ) 、 2 f 缝2 x 1 0 6 c f l v m l ) 、3 ( 终3 1 0 f u m l ) 、5 约5 l 嵌f h m l ) 接入灭藿熬3 0 0 m l 三熊 瓶( 装液量2 0 0 m l ) p h 值为6 5 7 0 的淹芽复含汁增菌培养基中，3 7 c 恒潞静置培养2 4 h ，定 时取样，检测o d 值( l = 6 0 0 n m ) 和p h 馕，绘铡生长曲线和p h 毽曲线，捡测乳酸懿壤募至对 数束期或稳定初期的活蔚数。确定最适接种量。 调控方式对保加利弧乳杆蔼l b - s l 菌体生妖的影响：嗜热链球菌s ，t s y 和保加剥亚乳杼 菌l 。b - d r 、l ，b s 1 努剐复原袋嚣嚣液俸培养基和m r s 液体培养基活纯后，每株菌以2 ( 约 2 x 1 0 f u m l ) 分别接入灭菌的3 0 0 m l 三角瓶( 装液量分别为2 0 0 m l 、1 0 0 m l 、1 0 0 m l ) ，p h 值 羹6 ，5 7 0 戆麦芽复合 增莹蝰棼基孛，3 7 恒游簿萋壤养1 6 h ，检测o d 毽( 7 l = 6 0 0 n m ) 。袋 用无荫操作，分别对每菌株进行中间补料处理：调节培养液p h 值：用灭菌的2 m o l l n a 2 c 0 3 溶液将培养渡p h 僮润变最适起始p 珏值6 5 7 。0 ；癸充掰鳝培莠鏊：在培券滚中 兖镰量翡灭 菌麦芽复合汁培养基；补充新鲜培养基和调节培养液p h 饿相结台：即在培养液中加入等量的 灭菌澎芽复合汁培养基，荐用灭藏的2 m o f l n a 2 c 0 3 溶液将壤棼液p h 镶调至最逶起始p 撂俊& 5 7 0 。然后，3 7 * ( 2 继续静霞培养至4 0 h ，定时取样，检测o d 值( x = 6 0 0 ) 和p h 值，绘制培养 1 6 h 4 0 h 生长曲线和p h 值曲线， 澍臻舞确定豹最鹱培养条体进行乳羧蘸增蔼试验 利用麦芽复合汁培养基配方配制培养藻，起始p h 值调至晟适p h 值，装入3 0 0 m l 三角瓶中， 装滚蘩2 0 0 m l ，t 2 1 t 5 m i n 灭莹器攮。曦稳穗塔蘩s + t - s y ，缳热聪霰g 耪蓥l b s 1 、l b - d r 筑 复原脱脂乳培养基，液体m r s 培养基活化，以2 ( 约2 1 0 6 c f u m l ) 接种于麦芽汁复合培养基 中，翻_ l l 所确是的培养条 牛进行媾蘸培葬，检测收获期的涵藏数。 ( 3 ) 5 l 全自动模拟发酵罐水平增菌试验 利用麦芽复合汁培养基配方骶制培养基，起始p h 值调至最适p h 傻，装入5 l 全自动模拟发 酵罐串，装液量3 l ，1 2 l 3 0 r a i n 灭菌备用。傈加利豫乳秆菌l b s 1 、l ，b - d r 与蹬热链球麓s t _ s y 1 6 高效浓缩型酸奶冻干发酵剂制备关键技术研究 分别经复原脱脂乳培养基、液体m r s 培养基活化，分别以2 ( 约2 x 1 0 6 c f u m l ) 接入麦芽复合 汁增菌培养基中，以摇瓶试验确定的培养条件进行增菌培养，检测对数生长末期的活菌数。 2 6 3 乳酸菌细胞浓缩分离技术研究 保加利亚乳杆菌l b s 1 和嗜热链球菌s t s y 分别经复原脱脂乳培养基、液体m r s 培养基活 化，分别以2 ( 约2 1 0 6 c m h l ) 接种于麦芽复合汁增菌培养基中，3 7 c 恒温培养1 6 h ，分别采 用不同离心力、离心时问浓缩分离菌体细胞，检测不同离心条件离心前初始活菌数、离心后上清 液活菌数，沉淀的活菌数，计算离心损失率、离心存活率、离心收得率，以寻求获得最高菌体收 得率的离心条件。 2 6 4 冷冻干燥工艺的研究及高效冻千保护剂的优化筛选