（动物学专业论文）棘腹蛙和双团棘胸蛙（蛙科：棘蛙属）染色体研究.pdf

四川大学硕士学位论文 棘腹蛙和双团棘胸蛙( 蛙科：棘蛙属) 染色体研究 专业：动物学 硕士生：王栋指导教师：赵尔宓教授研究员 摘要 已有报道的棘蛙属( 无尾目：蛙科) 物种染色体组型按二倍体染色体数耳 ( 2 n ) 可分为三类：2 n = 2 6 ，2 n = 4 0 和2 n = 6 4 。目前该属物种的染色体研究 大多采用常规方法、c 带和a g - n o r s 方法，显带较少。本文采用b r d u 复制 带技术对棘腹蛙( 2 n = 2 6 ) 和双团棘胸蛙( 2 n = 6 4 ) 的染色体进行了研究。常 规染色的结果表明，峨眉山棘腹蛙有4 对亚中着丝粒染色体：n 0 2 、3 、7 、9 。 异形小染色体对排在施8 ，并且次溢痕在染色体长臂。青城山棘腹蛙雌雄两性 的染色体组型有显著差异，雄性与峨嵋山棘腹蛙组型相似，但雌性有4 条染色 体显著异形，应用b r d u 复制带技术将其配成两对，都可能为性染色体。青城 山棘腹蛙的性别决定机制可能为雌性异配z z z w ( 雄雌) 型，性染色体有两 对：z i z i z i w i 和z 2 2 2 z 2 w 2 ( 雄雌) 。青城山棘腹蛙与峨眉山、云南屏边以 及贵州的棘腹蛙形态上很难区分，但其染色体组型却高度分化，所以青城山棘 腹蛙可能是一个新种。由于棘腹蛙在四川西部横断山区分布较广泛，所以在青 城山棘腹蛙种形成过程中，渐进的种形成方式和遗传漂变的可能性较小，量子 种形成方式可能起主要作用。染色体垂组可能在种形成过程中起主要作用。 减数分裂中期i 青城山棘腹蛙雄性同源染色体在两个端粒处相互连接，而 双团棘胸蛙雄性同源染色体通过着丝粒处互相连接，这种结构可能导致中着丝 粒染色体的形成，并伴随染色体数目的减少。2 n ；6 4 很可能是原始的染色体组 型，通过着丝粒融合进化到含中着丝粒染色体及较少数目染色体的组型。 网川i 大学硕t 学位论文 关键词：棘蛙属：棘腹蛙；双团棘胸蛙；组型；b r d u 复制带；染色体重 组；性染色体；减数分裂；种形成 四川大学硕十学位论文 c h r o m o s o m er e s e a r c ho np a a b o u l e n g e r ia n d p a a y u n n a n e n s i s ( r a n i d a e ：p a a ) m a j o r ：z o o l o g y m d c a n d i d a t e ：d o n gw a n gs u p e r v i s o r ：p r o f e r - m iz h a o a b s t r a c t t h ek a r y o t y p e sr e p o r t e di ng e n u sp a a ( a n u r a ：r a n i d a e ) f a l li n t ot h r e et y p g s ：2 n 22 6 ，2 n2 4 0 ，a n d2 n = 6 4 m u l t i p l yb a n d i n gp a t t e r n sc o u l dn o tb ei n d u c e db y c o n v e n t i o n a lm e t h o d ，c - b a n d i n ga n da g n o r st e c h n i q u e si na m p h i b i a n b r d u r e p l i c a t i o nb a n d i n gh a sp r o v e dt ob et h eo n l ye f f e c t i v em e t h o dd e m o n s t r a t i n g m u l t i p l eb a n d i n gp a t t e r n si na m p h i b i a n p a ab o u l e n g o r ia n dp a ay u n n a n e n s i sw g r e t r e a t e dw i t hc o n v e n t i o n a lm e t h o da n db r d ur e p l i c a t i o nb a n d i n gt e c h n i q u e t h e k a r y o t y p eo f p a ab o u l e n g e r io f e m e im o u n ts h o w e dd i f f e r e n tc h a r a c t e r sw i t ht h o s e i no t h e rp a p e r sr e p o r t e d , w h e r et h eo n l ys e c o n dc o n s t r i c t i o no fas m a l lc h r o m o s o m e w a sr e p o r t e di nt h es h o r ta r m , w i l i c l lh o w e v e r , l o c a t e di nt h el o n ga n ni nt h i sp a p e r t h es o r to r d e ro fc l l r o m o s o m e sa n da r n lr a t i o sa l s os h o w e ds o m ed i 疵r e n c c sw i t l l t h o s ep a p e r sr e p o r t e d p a ab o u t e n g e r io fq i n g c h e n gm o u n to fd u j i a n g y a n , s i c h u a n w a ss u p p o s e dt oh a v eu n u s u a ls e xc h r o m o s o m e ss y s t e m ，w h e mh i g h l yd i f f e r e n t i a t e d k a r y o t y p e sw e r ed e m o n s t r a t e db e t w e e nm a l ea n df e m a l e ，a n dm a l es h o w e ds i m i l a r k a r y o t y p ew i t hp a ab o u l e n g e r io fe m e im o u n to fs i c h u a np r o v i n c e ，y u n n a n p r o v i n c e ，a n dg u i z h o up r o v i n c e ，b u tf e m a l eh a dt w op a i r so fh i g h l yd i f f e r e n t i a t e d h e t e r o i n o r p l l i cc l l r o m o s o m e s ，w h i c hw e r ec o n s i d e r e d 雒s e xc l l r o m o s o m e s z 1 2 1 z 2 2 2 z iw i z 2 w 2 ( m a l e f e m a l e ) a l t h o u g hh a r d l yd i f f e r e n t i a t e db yi n o r p h o l o 百c a l c h a r a c t e r s ，p a ab o u l e n g e r io fq i n g c h e n gm o u n ts h o w e dh i 曲l yd i f f e r e n t i a t e d c 栅o m o s o m c sc o m p a r e dw i t hp o p u l a t i o n so fe m e im o u n to fs i c h u a np r o v i n c e ， 四川大学硕士学位论丈 g u i z h o up r o v i n c e ，a n dy u n n a np r o v i n c e , w h i c hw a sh y p o t h e s i z e dt om e a nt h e e x i s t e n c eo fr e p r o d u c t i o ni s o l a t i o nb e t w e e nt h et w ot y p e so fp o p u l a t i o n s t h u s ，p a a b o u l e n g e r io f q i n g c h e n gm o u n tm i g h tb ean e ws p e c i e s ，i nt h es p e c i a t i o no f w h i c h , q u a n t u ms p e c i a , t i o n , m t h e rt h a r lg r a d u a ls p e c i a t i o na n dg e n e t i cd r i f ls h o u l dp o s s i b l y p l a yt h em a j o rr o l e ，w h i c hc o u l di n v o l v ec h r o m o s o m a lr e c o m b i n a t i o n , b e c a u s et h e p o p u l a t i o n s o fp a ab o u l e n g e r is p r e a dw i d e l ya c r o s st h eh e n g d u a nm o u n t a i n s r e g i o n h o m o l o 西ec h r o m o s o m e sw e r es t i l ll i n k e db yt w ot e l o m e r e s ，w h i c hw e r em o r e c l e a ri nb i gc h r o m o s o m e s ，i nt h em e m p h a s eio fm e i o s i si np a ab o u l e n g e r i h o w e v e r , t h eh o m o l o 舀cc h r o m o s o m e sw e r ej o i n t e da tc e n t r o m e r e s ，# v i n gt h e a p p e a r a n c eo f m e t a e e n t r i cc h r o m o s o m e s m e t a c e n 翻ec h r o m o s o m e sm a yh a v eb e e n p r o d u c e dt h r o u g ht h e s e j o i n t e dt e l o m i d ec h r o m o s o m e s t h u s ，2 n = 6 4m a yb eo n e o f t h e p r i m i t i v ek a r y o t y p e s w h i c hm a yp r o d u c ek a r y o t y p e s 谢t l lm e t a e e n t r i e c h r o m o s o m e sa n ds m a l ld i p l o i dn u m b e r , k e yw o r d s ：p a a ；p a ab o u l e n g e r i ；p a ay u n n a n e n s i s ；k a r y o 哆p e ；b r d u r e p l i c a t i o nb a n d i n gp a r e r n s ；c h r o m o s o m er e c o m b i n a t i o n ；s e x c h r o m o s o m e ；m e i o s i s ；s p e c i a t i o n 4 四川大学硕十学位论文 1引言 棘蛙类原是隶属于蛙属r a n a 的一个自然类群( 刘承钊等，1 9 6 1 ) ，a d u b o i s ( 1 9 7 5 ) 将其分离出来，并建立一个新属棘蛙属p a a 。但是存在不同意见。 1 9 8 3 年以来，我国学者对棘蛙属物种的染色体研究( 陈文元等，1 9 8 3 ；李 炳华等，1 9 8 3 ；王子淑等，1 9 8 3 ；刘万国等，1 9 8 4 ；吴贯夫等，1 9 8 4 ；郑秀梅 等，1 9 8 4 ；谭安鸣等，1 9 8 7 ；高建民等，1 9 9 1 ；刘万兆等，1 9 9 3 ；李树深等， 1 9 9 4 、1 9 9 5 、1 9 9 6 和1 9 9 9 ；张加一等，1 9 9 7 ) 表明：我国棘蛙属染色体组型按 二倍体染色体数目( 2 n ) 可分为以下三类：1 ) 2 n = 2 6 ，在棘蛙属以及蛙属中 占大多数；2 ) 2 n = 4 0 ，目前报道仅棘肛蛙p a au n c u l u a n a f l i u , h ua n d y a n g , 1 9 6 0 ) 为这种类型，赵尔宓等( 2 0 0 0 ) 中国两栖动物名录暂时仍将棘肛蛙保留于蛙属； 3 ) 2 n = 6 4 ，目前报道双团棘胸蛙py u n n a n e n s i sa n d e r s o n ，1 8 7 9 和无声囊棘蛙 ( 刘氏棘蛙) pl i u i ( d u b o i s ，1 9 8 7 ) 具有这种染色体组型。这些文章采用了常 规染色体技术、c 带和a g n o r s 的研究方法。由于在哺乳类中适用的显示多 条带型的g 带和r - 带技术不适用f 两栖动物( m s c h m i d ，1 9 7 8 ) ，从而限制了 更深入地对这三种染色体组型进行研究。目前在两栖动物中显示稳定的多条带 型的方法只有b r d u 复制带技术( w s c h e m p p 等，1 9 8 1 ) 。 本文选取棘蛙属中的棘腹蛙pb o u l e n g e r i ( c d m t h e r , 1 8 8 9 ) ( 2 n = 2 6 ) 和双团 棘胸蛙( 2 n = 6 4 ) ，研究其骨髓细胞有丝分裂中期染色体组型及b r d u 复制带型， 以及雄性睾丸细胞减数分裂中期i 染色体行为，以期对揭示该属染色体的进化 关系有所帮助。 四川大学硕士学位论文 2 材料与方法 2 ，材料 2 1 1 标本 实验所用动物标本如表l 所示( 标本鉴定人：吴贯夫) 。 表1 本论文实验所用标本 物种数量编号采集地采集时间 s c u m 0 5 1 6 7 6( q ) 四川省蛾眉 s c u m 0 5 1 6 7 8( q ) 3q q 山 棘腹蛙 s c u m 0 5 1 6 6 7( d ) 2 0 0 5 9 4 d 8 s c u m 0 5 1 6 8 4( q ) 四川省青城 s c u m 0 5 1 6 8 1 1 6 8 3 ( 3g g )山 s c u m 0 5 1 6 7 9 四j i l 省曲昌 双团棘胸蛙2 d d 2 0 0 5 8 s c u m 0 5 1 6 8 0市 2 1 2 主要试剂 生理盐水：0 6 4 n a c l 溶液( 蒸馏水配制) 。 低渗液：o 3 4 k c l 溶液( 蒸馏水配制) 。 固定液：甲醇：冰醋酸= 3 ：i 。 缓冲液i ：o 0 6 7 m ，p h 6 8 ，1 1 8 1g n a 2 h p 0 4 1 2h 2 0 和5 9 2g k h 2 p 0 4 溶于1 0 0 0 m l 蒸馏水。 2 x s s c ：1 7 6gn a c l 和8 8g 柠檬酸钠溶于1 0 0 0m l 蒸馏水( 新鲜配制) 。 缓冲液l i ：o 0 3mk c l ，o 1 5m n a c l ，o 8 3m mk h 2 p 0 4 ，用蒸馏水配制。 e o s i n y 溶液：o 0 3l a g m l ，p h5 5 ，用缓冲液i i 配制。 g i e m s a 原液：称g i e m s a 粉1g 置于玻璃乳钵，加数滴甘油，仔细反复研 磨，直到呈浓糊状为止。加甘油3 3m l ，边加边搅，置于6 0 温箱2h ，然后 6 四川大学硕十学位论文 倾入小烧杯，用4 5 叫甲醇分次加入乳钵，使乳钵附着的染料洗下，然后用一 根细玻棒在小烧杯中慢慢搅拌均匀，最后倒入棕色瓶。g i e m s a 原液保存越久越 好。 g i e m s a 染液：使用时临时配制。g i e m s a 原液：缓冲液i = l ：1 0 。 活性炭：称取一定量活性炭( 武汉市凌云化工厂) ，在研钵内磨成细粉末。 然后将其悬浮在2 0 0 “蒸馏水中，静置5m i n ，取上层悬浮液，1 5 0 0r m i n 离 心5m i n ，以获得较细的活性炭粉末。将获得粉末用2 5 n a 0 h 溶液，蒸馏水， 2 5 h c i 溶液顺序洗涤一次，再用蒸馏水洗涤3 次。最后，离心收集活性炭， 沉淀物在1 8 0 干燥灭菌3 0r a i n 。 b r d u ( 5 - b r o m o d e o x y - u r i d i n e ，5 溴脱氧尿嘧啶核苷) 活性炭溶液： b r d u ( s i g m a ) 用上述生理盐水进行配制成1 0m 咖l 溶液。活性炭按约3 0m 咖l 加入溶液中。使用前在室温下稍搅拌。 秋水仙素( c o l e h i c i n e ) ：1 5m g m l ，用上述生理盐水配制。 清洁液：在瓷罐中，先将5 0g 重铬酸钾溶于8 5 0m l 水中，然后慢慢加入 1 0 0 m l 硫酸，随加随搅。 2 1 3 主要仪器设备 电子称，注射器，解剖器具，吸管，酒精灯，载玻片( 清洁液中浸泡数天， 自来水冲洗，蒸馏水洗过后，浸泡于9 5 酒精中数天，再取出检查，选择表面 划痕较少的使用) ，离心机，水浴锅，培养皿，紫外光灯( 3 0 w ) ，显微镜 ( o l y m p u s ，b h 一2 ) ，数码显微拍摄系统( l e i c a ，d f c 2 8 0 ；所用软件为 i e i c ai m 5 0 ) 。 2 2 实验方法 b r d u 复制带技术参照w s e h e m p p 等( 1 9 8 1 ) ，王子淑( 1 9 8 7 ) 和m s c h m i d 等( 1 9 9 1 ) ，按如下步骤进行。染色体标本制作采用骨髓细胞蒸汽固定法( 吴政 安，1 9 8 2 ) 。 7 四i t l 大学硕 学位论文 2 2 1 活体注射b r d u 活性炭溶液 腹腔注射b r d u ，用量为1 2 0 g 鹰蛙体重。 b r d u 是胸腺嘧啶脱氧核苷的结构类似物，在细胞复制( s ) 期能掺入到进 行复制的d n a 中，在染色体标本后期处理中，用紫外线照射，再经过g i e m s a 染色，b r d u 掺入的染色体片段浅染，其它b r d u 未掺入的片段深染，从而形成 明暗相间的带纹，称为b r d u 复制带。若b r d u 掺入染色体的时间为细胞复制早 期，则所得带型为早复制带：若在复制晚期掺入则为晚复制带。 2 2 2 活体注射秋水仙素 b r d u 作用1 6 5h 后，腹腔注射秋水仙素，用量为1 0i _ t g g 蛙体重。 秋水仙素与微管蛋白结合，阻止细胞中期纺锤体的形成，从而阻止细胞分 裂，使其停留在分裂中期，此时染色体浓缩成棒状，适于分析。 2 2 3 收获细胞 秋水仙索作用2h 后，处死实验用蛙，解剖，取下四肢骨，并取出雄蛙的 睾丸，置于生理盐水( o 6 4 n a c l 溶液) 中，备用。 有丝分裂中期染色体标本制备 在生理盐水中将四肢骨表面清洗，除去血渍以及肌肉，在低渗液( o 6 4 k c ! 溶液) 中稍漂洗。用灌满低渗液的注射器冲出骨髓，滴到预先用低渗液润洗的 1 0m l 小烧杯中，待四肢骨都冲完后，用吸管混匀骨髓细胞悬液，除去脂肪、 肌肉等杂质，视细胞浓度加入适量低渗液。 减数分裂中期i 染色体标本制各 剔除睾丸附带的脂肪组织，捏碎，或用解剖器具切碎睾丸，生理盐水冲洗 收集细胞，1 0 0 0r m i n 离心7m i n 收集下层沉淀。 2 2 4 低渗 在一干净培养皿中，置一对玻璃捧，将载玻片平放于其上。用吸管将上一 步骤中获得的骨髓细胞恳液滴到载玻片上( 整个过程尽最在较短时日j 内完成) ， 密封培养皿，低渗3 5 4 0m i n 。 8 四川大学硕士学位论文 向2 2 3 步骤获得的睾丸组织细胞中，加入低渗液，低渗3 5 4 0m i n 。 低渗液的盐浓度较细胞内的低，由于细胞内的渗透压高于细胞外的渗透压， 从而水进入细胞，使其膨胀以至破裂。这样，中期染色体就可以较好地分散开 来，而不至于相互交叉缠结在一起。 2 2 5 固定 低渗完毕，向培养皿中加入新鲜配制的固定液，不要超过玻璃棒的直径高 度，密封培养皿，固定2 3h 。 睾丸组织细胞低渗完毕后，1 0 0 0r m i n 离心7m i n ，收集下层细胞沉淀，第 一次固定，加入新鲜配制的固定液5 l l ，作用1 5 m i n 后再以1 0 0 0r m i n 离心7 m i n ，收集下层细胞沉淀，加入新鲜配制的固定液，开始第二次固定，作用时 间为数小时，或过夜。 固定液( 甲醇：冰醋酸= 3 ：1 ) 的作用是除去非组蛋白等杂蛋白成分，阻 止染色体进一步聚缩，以使得到清晰的中期染色体。 2 2 6 制片 骨髓细胞：固定完毕后，缓慢倾去载玻片表面的液体，并使其细胞面向上， 约3 0 0 角斜立，吸管吸取约1d 新鲜配制的固定液，轻轻润洗载玻片表面，空 气干燥。 睾丸细胞：固定完毕后，1 0 0 0r m i n 离一t l , 7r a i n ，收集下层细胞沉淀，再加 入少量新鲜配制的固定液，用吸管轻轻混匀细胞悬液。吸取少量悬液，滴片， 空气干燥。 2 2 7 常规染色 g i e m s a 染液染色1 0m i n ，自来水冲洗玻片，空气干燥。 2 2 8b r d u 复制带显带 骨髓细胞的染色体制片空气干燥数小时后，即可用于显带处理。 e o s i n y 溶液作用 9 四川大学硕十学位论文 平放染色体制片，细胞面朝上，滴加e o s i n y 溶液，作用3 0 m i n 。 紫外线处理 将缓冲液( i i ) 倒入一干净培养皿中，液面高度约1c m ，将培养皿置于水 浴锅中，4 0 预热。蒸馏水润洗载玻片后，将其细胞面朝上置于上述培养皿中。 将带罩紫外灯管放在恒温水浴上，灯与标本垂直，距离约1 0e r a ，照射3 5 4 0 r a i n 。 紫外线的作用是使b r d u 掺入的部分在后期的处理中不被g i e m s a 所染色。 2 x s s c 溶液处理 用新鲜缓冲液( n ) 润洗载玻片，置于2 s s c 溶液中，4 0 恒温保育9 0 m i l l 。2 s s c 的作用可能是恢复d n a 双链间的作用力，使得染色体维持较规 整的状态。 g i e m s a 染色 蒸馏水润洗载玻片，空气干燥。平放在玻片架上，细胞面朝上，滴加新鲜 配制的g i e m s a 染液，g i e m s a 可特异地与核酸结合。作用1 0w i n 后在自来水管 下细水流轻轻冲去染液，蒸馏水润洗，空气干燥。 2 2 9 显微摄影 显微镜下观察，选取好的分裂相并显微摄影。选5 个以上带型较好的显微 照片，分析。 3 结果 3 1 染色体组型 3 1 1 峨眉山棘腹蛙染色体组型 如图l 所示，根据对l82 早早中期分裂相的观察结果，蛾眉山棘腹蛙雌雄 两性显示相似的染色体模式：二倍体数均为2 n = 2 6 ( 如衷2 所示) ，由5 对大 型和8 对小型染色体组成；小型染色体组中，对染色体有异形现象，其中一 条长臂有次溢痕，而另一条没有。 按长度从大到小排列所有染色体，编号，选l o 个细胞进行测量，染色体类 型划分按照按a l e v a n 等( 1 9 6 4 ) 。结果如表3 和表4 所示。 1 0 四川大学硕十学位论文 图l ：示蛾眉山棘腹蛙有丝分裂中期染色体。a ：示自然分裂相，箭头示施g 染色体长 臂次溢痕；b ：示染色体组型，按长度从大到小排列，编号，分为大型染色体组( 推卜5 ) 和小型染色体组( 6 1 3 ) ，施8 染色体显示异形，其中一条k 臂有次溢痕，而另一条没 有。c ：示3 个不同细胞的k _ o8 染色体异形现象。虚线指示着丝粒位置，右上方实线段代 表1 0 u m 。 网j i l 大学硕士学位论文 表3 蛾眉山棘腹蛙1 0 个细胞染色体测量数据( u m ) 1 2 朋川大学硕士学位论文 四川大学硕十学位论文 表3 ：1 1 3 ：代表染色体编号；p ：代表短臂长；q ：代表长臂长；p + q ：代表全长； r l ( r e l a t i v el e n g t h ) ：代表相对长度：a r ( a r mr a t i o ) ：代表长臂与短臂的长度比值。 表4 峨眉山棘腹蛙1 0 个细胞染色体测量数据统计结果 表4 ：t y p e ：染色体类犁划分按a l e v a a 等( 1 9 6 4 ) 标准，m 代表中着丝粒染色体， 臂比值为1 o 1 7 ；s i l l 代表亚中着錾粒染色体，臂比值为1 7 3 0 。 1 4 四川大学硕t 学位论文 大型染色体组包括施1 5 染色体。施l 最长，为中着丝粒染色体；2 和 施3 为亚中着丝粒染色体；3 f _ 0 4 和5 为中着丝粒染色体。 小型染色体组包括n 0 6 1 3 染色体。施6 - 8 长度相近，施6 为中着丝粒染 色体，n o7 为亚中着丝粒染色体，施8 为中着丝粒类型，同源染色体间显示显 著的异形现象，其中一条的长臂有次溢痕，另一条则没有，雌雄两性中都是如 此( 图lc ) ；施9 对和施1 0 长度相近，n o9 对为亚中着丝粒染色体，n ol o 为 中着丝粒染色体；施1 1 1 3 臂比值相近，都为中着丝粒染色体，可依据长度区 分开来。 3 1 。2 青城山赖腹蛙染色体组型 如图2 和图3 所示，根据对3d d1 早中期分裂相的观察结果，青城山棘腹 蛙雌雄两性的染色体二倍体数目相同：2 n = 2 6 ( 如表5 所示) ，但是其组型却 显示出极其显著的差异。根据雌雄两性染色体的特点，将2 6 条染色体分为3 组：大型染色体组、小型染色体组和性染色体组，并编号。雌雄各选1 0 个细胞 进行测量，结果如表6 、表7 和表8 所示。 大型染色体组包括施卜4 。n o l 和施2 为亚中着丝粒染色体，3 和n 0 4 为中着丝粒染色体。 小型染色体组包括施5 一l l 。施5 和施7 为亚中着丝粒染色体，6 有异 形现象，一条长臂有次溢痕，而另一条没有，雌雄两性中都是如此( 图2c 和图 3d ) 。3 f _ 0 8 1 l 为中着丝粒染色体。 性染色体组包括两对染色体( 图2 和图3b ，c ) ：z 1 2 1 2 2 2 2 z 1 w l z 2 w 2 ( 雄 t i t ) 。这两对染色体在雌雄两性问差异显著，因此认为它们很可能与该种蛙的 性别决定相关，鉴于其在雌性中的高度分化的异形特征，该种蛙的性别决定机 制应属于雌性异配z z 亿w ( 雄雌) 型。z l 为中着丝粒染色体，w l 为端着丝粒 染色体，二者长臂长度相近。z 2 为中着丝粒染色体，w 2 为亚端着丝粒染色体， 二者短臂长度相近，但后者长臂长度为前者的两倍多( 表7 ) 。 四川大学硕t 学位论文 图2 ；示青城山棘腹蛙雄 性有丝分裂中期染色体。a ： 示自然分裂相，箭头示e _ 0 6 染色体长臂次溢痕；b ：示染 色体组型，按长度从丈到小 捧列，编号，分为大犁染色 体组( 施卜4 ) ，小型染色体 组( n o5 1 1 ) 和性染色体组 ( z i ，z 2 ) ；c ：示3 个不同 细胞的施6 染色体异形现象， 其中一条长臂有次溢痕，而 另一条没有。虚线指示着丝 粒位置，右上方实线段代表 l o u m 1 6 四川大学硕士学位论文 图3 ：示青城山棘腹蛙 雌性有丝分裂中期染色体。 a ：示自然分裂相，箭头示第 6 对染色体长臂次溢痕；b ： 示染色体组型，按长度从大 到小排列，编号，分为大型 染色体组( j r ol - 4 ) 、小型 染色体组( 施5 1 1 ) 和性 染色体组 ( z i 、w i ) ，( z 2 、 w 2 ) 。c ；示三色不同细胞 的性染色体，方框内为来自 同一细胞的染色体：d 示3 个不同细胞的n o6 染色体异 形现象，其中一条长臂有次 溢痕，而另一条没有。虚线 指示着丝粒位置，右上方实 线段代表1 0 9 m 。 1 7 四j i i 大学硕士学位论文 表6 青城山棘腹蛙雄性l o 个细胞染色体测量数据( p r o ) 1 8 四川大学硕士学位论文 1 9 四川大学顾十学位论文 表6 ( 续二) pqp 十q r la r p qp + q r la r z l4 0 24 9 99 0 l1 7 0 01 2 4z l4 6 86 4 4 11 1 21 8 2 81 3 7 12 2 65 5 47 8 01 4 7 22 4 512 2 15 7 4 7 9 51 3 0 72 6 0 21 7 43 8 95 6 3l o 6 l2 2 321 8 9 4 8 96 7 81 1 1 5 2 5 8 32 1 23 3 45 4 6i 0 2 91 5 832 4 54 1 8 6 6 31 0 9 11 7 1 42 5 02 9 65 4 6i 0 3 l1 1 842 6 3 3 3 55 9 9 9 8 4i 2 7 z 2 1 3 7 1 7 4 3 11 5 8 61 2 7心1 4 22 1 2 3 5 45 8 21 5 0 50 7 82 1 22 8 95 4 62 7 350 8 22 3 0 3 1 35 1 4 2 8 0 61 0 9 1 6 42 7 3 5 1 5 1 5 261 2 81 9 73 2 6 5 3 61 5 4 70 8 01 7 22 5 24 7 62 1 570 9 42 1 2 3 0 65 0 42 2 4 81 1 4i 3 4 2 4 84 6 71 1 881 1 9l 6 5 2 8 34 6 61 3 8 90 9 0 1 1 42 0 43 8 51 2 69 1 2 81 3 62 6 44 3 4 i 0 7 1 01 0 11 0 32 0 43 8 5 1 0 2l o1 0 21 0 8 2 1 03 4 5i 0 6 1 l 0 8 4 0 9 91 8 33 4 61 1 81 10 8 00 9 9 1 7 92 9 51 2 3 表7 青城山棘腹蛙雌性1 0 个细胞染色体测量数据( p m ) n o pqp + q r la r施 pqp + q r la r z l4 0 34 7 7。8 7 9 1 2 8 91 1 8z l3 o l3 7 66 7 8 1 2 6 61 2 5 w l0 6 74 8 65 5 3 8 1 07 2 8w l0 5 33 7 7 4 3 08 0 37 1 5 l2 2 45 8 88 1 21 1 9 02 6 2l1 9 3 3 9 05 8 4l o 9 l 2 0 2 21 9 l4 3 76 2 8 9 2 02 2 92l 5 43 7 75 3 l9 9 3 2 4 5 32 2 83 9 16 1 99 0 71 7 23 1 6 52 9 64 6 18 6 1 1 8 0 42 4 93 3 8 5 8 88 6 l1 3 641 7 92 4 5 4 2 47 9 21 3 7 艺1 3 42 0 33 3 7 4 9 31 5 2艺1 1 21 7 22 8 35 2 9 1 5 4 w 2 1 5 7 4 6 1 6 1 8 9 0 52 9 4 w 21 0 93 4 84 5 68 5 33 2 1 51 0 32 2 63 2 9 4 8 32 2 05o 7 l1 9 42 6 54 9 52 7 2 6 1 2 71 6 02 8 74 2 01 2 661 0 4 1 4 22 4 54 5 81 3 7 7o 8 51 9 7 2 8 34 1 42 3 270 6 81 4 62 1 44 0 0 2 1 3 8 0 9 91 4 82 4 73 6 2 1 5 080 9 81 0 92 0 73 8 61 i l 90 9 81 1 92 1 7 3 1 81 2 190 8 51 3 72 2 14 1 3 1 6 2 1 00 8 1 1 3 82 1 83 2 01 7 01 00 8 61 o o 1 8 63 4 81 1 7 l l1 o l1 0 82 1 03 0 7 1 0 7l l0 引0 8 61 6 73 1 2 1 0 6 婴型盔兰堡兰竺堡皇 表7 ( 续一) 施pqp 十q r l a r pq p + q r la r z 13 3 54 3 87 7 31 2 4 81 3 l z i3 5 74 2 37 8 0 1 2 4 81 1 8 w l0 6 64 2 84 9 47 9 8 6 4 8w l0 5 94 1 l 4 7 07 5 26 9 6 l1 8 94 6 16 5 11 0 5 12 4 3l2 4 7 5 2 37 6 91 2 3 02 1 2 21 8 64 3 76 2 4 1 0 0 72 3 521 5 84 4 56 0 2 9 6 32 8 2 31 9 53 8 55 8 09 3 71 9 832 1 23 6 7 5 7 99 2 61 7 3 42 3 03 4 15 7 19 2 21 4 8 42 1 32 5 94 7 2 7 5 51 2 2 z 21 4 51 6 93 1 4 5 0 71 1 7岔1 1 61 7 62 9 2 4 6 81 5 l w 21 2 04 0 95 2 98 5 53 4 0 w 21 3 53 9 45 2 98 4 62 9 3 51 0 8 2 0 43 1 25 0 41 8 95o 8 92 1 53 0 4 4 8 62 4 0 61 0 31 6 l2 6 4 4 2 71 5 561 2 01 6 02 8 04 4 8 1 3 3 70 8 71 7 8 2 6 54 2 82 0 570 6 1 2 j d o2 6 24 1 93 2 7 80 9 61 2 72 2 43 6 11 3 28 1 1 41 4 82 6 1 4 1 81 3 0 90 8 41 2 0 2 0 43 2 91 4 391 0 31 2 72 3 0 3 6 81 2 3 l oo 9 01 1 62 0 63 3 31 3 0 1 01 i o1 1 82 2 73 6 41 0 7 1 l o 8 0 1 o l1 8 12 9 31 2 7 l l o 8 81 0 5 1 9 33 0 91 1 9 n o pqp + q r l a r 施p qp + q i ua r z i4 0 44 9 79 0 1 1 2 8 21 2 3z l3 5 94 1 97 7 81 2 6 3 1 1 7 w l0 7 75 4 26 1 98 8 07 0 8w l0 6 1 4 1 94 8 07 7 96 9 l l2 8 65 5 08 3 7 1 1 9 01 9 2l2 3 24 o o6 3 2l o 2 6 1 7 2 21 8 95 2 67 1 5l o 1 82 7 92 1 5 64 7 06 2 61 0 1 73 0 l 32 1 24 o o6 1 28 7 11 8 9 32 4 03 5 35 9 39 6 3 1 4 7 4 2 2 13 1 85 4 07 6 81 “42 2 3 2 6 34 8 67 8 9l 1 8 z 21 5 71 7 93 3 6 4 7 81 1 4 2 ：2 1 2 71 8 33 1 05 0 4 1 4 4 w 21 2 95 0 86 3 79 0 63 9 3w 2 1 3 14 1 45 4 58 8 53 1 6 5o 8 0 2 4 03 2 04 5 52 9 850 8 72 0 8 2 9 44 7 82 4 0 61 3 61 6 53 0 l4 2 8 1 2 161 2 41 6 02 8 44 6 21 2 8 70 8 72 0 9 2 9 54 2 02 4 l70 8 5 1 7 02 5 64 1 52 0 0 81 2 21 5 62 7 83 9 61 2 7 81 0 91 4 62 5 44 1 31 3 4 91 1 3 1 1 32 2 63 2 21 o o90 9 41 3 l2 2 5 3 6 61 3 9 1 01 1 31 - 3 22 4 53 4 8 1 1 7l oo 7 91 1 31 9 23 1 21 4 3 1 1 o 7 3 0 9 41 6 72 3 81 2 9 1 l o 9 71 0 42 o l 3 2 71 0 8 2 l 婴型盔兰堡主兰垡丝塞 壅! ! 堡三! n o pqp + q r la r pq p + q r la r z l2 6 63 1 55 8 l 1 2 5 31 1 9z l4 1 44 7 9 8 9 21 3 3 71 1 6 w 10 4 73 3 2 3 7 98 1 77 0 9w l0 6 94 7 0 5 3 98 0 86 8 4 11 6 53 4 45 0 91 0 9 82 0 9l 2 5 04 8 07 3 01 0 9 4 1 9 2 21 3 22 9 0 4 2 29 0 92 2 021 8 64 8 06 6 59 9 7 2 5 9 3 1 7 92 4 14 2 19 0 61 3 53 t 8 83 5 95 4 78 2 01 9 1 41 4 62 1 63 6 27 8 01 4 8 42 2 23 0 35 2 5 7 8 71 3 6 z 20 9 91 2 3 2 2 24 7 81 2 5z 21 5 22 0 33 5 5 5 3 2 1 3 4 w 21 0 63 2 44 3 09 2 83 0 6w 2 1 4 35 2 26 6 59 9 7 3 6 4 50 6 2 i 4 52 0 74 4 52 3 45 1 1 8i 9 83 1 64 7 41 6 9 60 9 5i 1 72 ，1 2 4 5 81 2 36l 2 7i 6 22 8 9 4 3 31 2 8 70 5 4 1 4 01 9 44 1 82 6 27 0 8 22 1 52 9 74 4 52 6 2 80 9 41 0 41 9 8 4 2 6l 1 08l 1 31 1 82 3 13 4 6 1 0 4 90 9 1 0 9 91 9 04 0 91 0 991 1 21 1 3 2 2 53 3 71 0 1 i 00 7 50 8 51 6 03 4 6 1 1 31 01 0 41 1 32 1 63 2 4 1 0 9 1 10 6 60 8 61 5 33 3 01 3 0 1 1 0 8 0 1 0 l1 8 12 7 l1 2 6 施pqp4 - q r la rn o p qp + q r la r z l3 9 55 1 29 0 8 1 3 8 01 3 0z l3 7 64 6 58 4 1