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西南农业大学二零零三届硕士学位论文 一中文摘要一 中文摘要 外生菌根真菌是土壤中非常重要的一类真菌,能与7 0 7 5 的造林树种形成外生 菌根。优良的外生菌根真菌与木本植物的根系形成外生菌根后,能促进寄主植物的生 长,改善它们的营养状况,提高其抗逆( 干旱、病虫害,盐害等) 能力。因此,外生 菌根真菌被在林业生产和植树造林中广泛应用。 、 某些外生菌根真菌能不同程度的通过多种方式增强寄主植物抵御不良环境的能 力 估计对减轻重金属的危害也具积极作用,在污染土壤和矿墟的植树造林中可能有 着广阔的应用前景。但是,目前所研究的供试菌种( 株) 和重金属的代表性和数量不 足,尚不能完全弄清外生菌根真菌抗( 耐) 重金属的能力、机理及应用价值,i 因此, 选择更多的有一定研究基础和应用前景的外生菌根真菌作为供试菌种( 株) ,研究它们 对重金属的抗( 耐) 性及其机理很有必要。 。 , ,。 c d 、h g 是人类活动向环境释放较多的重金属。i 试验选用彩色豆马勃p i s o l i t h u s t i n c t o r i u s7 1 5 ( 1 9 9 6 年从四川西昌桉树红壤中分离获得) 和土生空团菌c e n o c o c c u m g e o p h i l u ms i v ( 上世纪8 0 年代从西班牙欧洲火炬松土壤中分离获得) 两种外生菌根 真菌作为供试菌种,在培养基中加入不同浓度的r i g 或c d 进行培养,研究了它们的 生长状况、氮磷钾吸收、h + 及草酸分泌作用等。目的是了解它们对h g 、c d 的抗( 耐) 能力和有关机理,为在h g 、c d 污染的土壤和矿墟进行植树造林,防止h g 、c d 进一 步迁移释放,污染其它陆生或水生生态环境提供科学依据研究结果如下: 1 在培养液中加入较低浓度的h g ,外生菌根真菌的生长受到轻微抑制;继续增加h 譬 的浓度,外生菌根真菌表现出一定的耐受性,生长量不因h g 浓度的提高而显著降低: 当h g 的浓度超过定的阈值后,外生菌根真菌的生长速率迅速降低或停止。h g 对 两种外生菌根真菌生长的影响有所差异,p t7 1 5 的生长对h g 比c gs 1 v 相对敏感。 2 c gs i v 的生长对c d 十分敏感,随着培养液中c d 的浓度逐渐增加,c gs i v 的生长 量也随之降低,二者呈直线负相关( y = 8 1 6 1 3 8 8 x ,r :- - 0 9 8 7 ) 。但是,p t7 1 5 对c d 表现出极高的抗( 耐) 性。在c d 浓度为1 5 m g l 时,c g s i v 的生长量比对照 降低7 4 4 0 ,而在c d 浓度为1 4 0m g l 时,p t7 1 5 的生长量仍为对照的7 3 6 4 。 3 h g 、c d 对外生菌根真菌生长的抑制作用因重金属元素不同而异。对p t7 1 5 而言,h g 张琴:求、镉对外生菌根真茁生长、分泌作用和养分吸收的影响 一中文摘要一 对其生长的抑制作用大于c d ,二者的毒性指数分别为:1 6 1 4 ( h g ) 和0 5 7 6 ( c d ) : 埘c gs i v 而言,c d 对其生长的抑制作用大于h g ,二者的毒性指数分别为:0 9 3 1 ( h g ) 茅【】4 5 9 ( c d ) 。 4 外生菌根真菌吸收阳离子和分泌有机酸会释放h + 。重金属对外生菌根真菌h + 分泌的 影响因菌种不同而异。较低浓度的h g 对c g s i v 的h + 分泌无显著影响,但降低p t 7 1 5 的h + 分泌数量,高浓度的h g 同时显著抑制p t 7 1 5 和c gs w 的h + 分泌。在培养液 中加入h g 后,外生菌根真菌的生长量和h + 分泌量的关系可用回归方程y = o 5 6 7 + 0 0 2 7 x ,r = o 9 8 7 ( c gs i v ) 和y = o 6 5 3 + o ,0 8 7 x ,r = 0 9 9 8 ( p t7 1 5 ) 表示,说明h g 对h + 分泌的影响与生长同步,即生长量降低减少了h + 的分泌量。 低浓度的c d 促进c g s w 但抑制p t 7 1 5 的h + 分泌,但较高浓度c d 却显著抑制c g s i v 而促进p t 7 1 5 的h 十分泌。培养基加c d 处理下,菌根真菌分泌的h + 数量与生长量间 无显著相关性,说明h 窟、c d 两种重金属对h + 分泌的影响机理不同。 5 在不添加重金属的处理中,两种外生菌根真菌分泌草酸的能力差异显著,p t7 1 5 明 显大于c gs i v 。h g 、c d 可促进c gs i v 但抑制p t7 1 5 的草酸分泌作用。向培养液中 添加h g 或c d ,c g s w 的草酸分泌率显著增加,培养液中草酸的数量无显著改变( h g ) 或显著升高( c d ) ,但p t7 1 5 的草酸分泌率和培养液中草酸的数量均显著降低。草酸 对重金属有很强的络合能力,在重金属胁迫的条件下,许多抗( 耐) 能力强的微生物 通过增加草酸分泌以络合重金属,降低它们的危害作用。但本项研究未能支持这种理 论,看来供试外生菌根真菌可能通过某些其它机制抵抗h g 、c d 对生长的危害作用。 6 c d 、h g 两种重金属对外生菌根真菌菌丝体内的氮、磷、钾含量或吸收量的影响因 菌种和金属元素不同而异,但从总体上看,重金属不会显著降低氮、磷、钾含量和 吸收量。 在培养液中加入h g 之后,c g s w 菌丝的氮、磷含量和吸收量显著增加,含钾量和 吸收量无显著变化:h g 对p t7 1 5 菌丝体内的氮、磷、钾含量,以及磷、钾吸收量 无显著影响,但对吸氮量有一定影响。 在培养液中加入c d 之后,c gs w 菌丝的磷、钾含量无显著变化,含氮量随培养液 中c a 浓度上升而增加( y = 1 6 3 2 0 - i - 1 2 1 6 x ,r = o 9 5 6 ) ;与此同时,c gs i v 的吸氮 量显著升高,吸磷量显著降低,吸钾量无显著变化,其中磷素的吸收量与培养液中 c d 的浓度呈显著负相关( v = 2 3 0 2 3 - - 7 4 9 x ,r = - - 0 9 0 6 ) 。对p t7 1 5 而言,菌丝体 内的氮、钾含量显著升高,磷含量随培养液中c d 浓度上升而缓慢降低( y = 8 7 3 4 2 两南农业大学二零零三届硕士学位论文 一中文摘要 一 - - 0 3 3x ,r :一0 9 9 9 ) ;氮、磷、钾吸收中,吸氮量无显著变化,吸钾量显著增加, 吸磷量显著降低且其与培养液中c d 浓度的关系可用y = 2 8 6 7 3 1 4 8 x ( r = 一0 9 7 1 、 描述。 7 综上所述,c d 、h g 总体上抑制供试两种外生菌根真菌的生长,但外生菌根真菌也 表现出不同程度的拮抗作用。在c d 浓度高达1 4 0m g l 的培养基中,p t7 1 5 的生 长量仍可保持对照的2 ,3 左右。两种重金属对外生菌根真菌体内的养分含量和吸收 量均无显著抑制作用( 磷除外,随着培养基中c d 浓度的增加,p t7 1 5 含磷量和吸 收量缓慢降低) 。由此推测,在c d 、h g 污染的土壤中,外生菌根真菌同样能比较 正常的生长和吸收养分。当它们与树木根系形成外生菌根后,菌丝在根系表面形成 菌套,包蔽根系,既可以防止根系接触有害物质,又可吸收养分供应植物生长发育。 所以,利用优良外生菌根真菌在c d 、h g 污染的土壤上进行植树造林可能有着广阔 的应用前景。但考虑到在菌根共生体内,外生菌根真菌的生理活动受到寄主植物的 影响,其实际表现可能与纯培养条件下不同,因此利用外生菌根真菌感染木本植物 的根系,以外生菌根为材料进行有关研究所获得的研究结果可能会更具实际应用价 值。i 。,、 装建羚犟雾,铂纠 1 引蠲 ;蛙, - 嚏 釜一 妻 ltf o 谁 岛髟一 、t i , 唆r 至 出h e 一 i j 一。;善乙一 ,、,一 t 嚼一 张琴:泵、镉对外生菌根真菌生长、分泌作用和葬分吸收的影响 一a b s t r a c t e f f e c t so f m e r c u r y ,c a d m i u m o i lt h eg r o w t h ,s e c r e t i o na n d n u t r i t i v e a b s o r p t i o n o fe c m f u n g u s c a n d i d a t e :z h a n g q i n a d v i s e r :h u a n g j i a n g u o ( c o l l e g eo f e n v i r o n m e n t a n d r e s o u r c e s , s o u t h w e s t a g r i c u l t u r a lu n i v e r s i t y , c h o n g q i n g4 0 0 7 1 6 , c h i n a ) a b s t r a c t e c t o m y c o r r h i z a lf u n g i ,ag r o u po fi m p o r t a n tf u n g ii ns o i l ,c a nf o r ms y m b i o i n tw i t h 7 0 7 5 o ft h et r e e sf o ra r t i f i c i a lr e f o r e s t a t i o n s e l e c t e dm y c o r r h i z a lf u n g ic o u l db e n e f i t p o t e n t i a l l yt h eg r o w t h n n t r i e n ts t a t u s o ft h eh o s tp l a n t sa sw e l la st h e i rr e s i s t a n c el o d r o u g h t ,s a l ta n dd i s e a s e sc a u s e db yi n s e c t sa n dm i c r o o r g a n i s m sa f t e rt h ei n f e c t i o no ft h e h o s tr o o t s t h e r e f o r e t h e ya r e w i d e l yu s e di nf o r e s t r ya n d a r t i f i c i a lf o r e s t a t i o n s o m e e c t o m y c o r r h i z a lf u n g u sc o u l d ,t os o m ee x t e n t ,i m p r o v e t h ea b i l i t i e so ft h e i rh o s t s t or e s i s ta d v e r s ec o n d i t i o n sb yv a r i a b l ew a y s i ts e e m st h u sr e a s o n a b l et os u g g e s tt h a tt h e y c o u l de f f e c t i v e l ya l l e v i a t et h et o x i c i t i e so fh e a v ym e t a l sa n db ea p p l i e di na r t i f i c i a l f o r e s t a t i o nf o rt h es o i l sa n do r ed e b r i sc o n t a m i n a t e db yh e a v ym e t a l s t h em y c o r r h i z a l f u n g u sa n dh e a v ym e t a l ss t u d i e dp r e v i o u s l yi nr e g a r d t o t o x i c o l o g ya r e ,h o w e v e r , t o o l i m i t e dt os u m m a r i z et h ef u n g a lr e s i s t a n c et oh e a v ym e t a l s i ti sn o tt h o r o u g h l yc l e a rt o u n d e r s t a n dt h ea b i l i t i e so fm y c o r r h i z a lf u n g it or e s i s th e a v ym e t a lp o l l u t i o n ,m e c h a n i s m s r e l a t e da n dp o t e n t i a l i t yi na p p l i c a t i o ni nt h a tc a s e i ti st h u sn e c e s s a r yf o ru st ou s em o r e m y c o r r h i z a lf u n g a ls p e d c s a n ds t r a i n s i n t e n s i v e l y s t u d i e d ,w h i c hc o u l db e a p p l i e d p o t e n t i a l l y i na r t i f i c i a lf o r e s t a t i o ni nt h ef u t u r e ,t oi n v e s t i g a t et h e i rr e s i s t a n c et oh e a v ym e t a l t o x i c i t i e sa n dm e c h a n i s m s c da n d h g a r e h e a v y m e t a l s l a r g e l yr e l e a s e d ,c o m p a r e d t oo t h e ro n e s , i n t o e n v i r o n m e n tb yh u m a na c t i v i t i e s i nt h ep r e s e n te x p e r i m e n t ,p i s o l i t h u st i n c t o r i u s7 1 5 , i s o l a t e df r o ma ne u c a l y p t u sg r o w i n gr e ds o i li nx i c h a n g ,c h i n a ,i n1 9 9 6 ,a n dc e n o c o c c u m g e o p h i l u ms l y , i s o l a t e df r o mp i l eg r o w i n gs o i li ns p a i ni n1 9 7 0 s , w e r ea d o p t e d c da n d h gw e r ea d d e di n t oc u l t u r es o l u t i o n sw i t hd i f i e r e n tc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t s t h ef u n g a l g r o w t h ,e f f l u xo fp r o t o n sa n do x a l a t ea n di n f l u xo fn i t r o g e n ,p h o s p h o r u sa n dp o t a s s i u m w e r eo b s e r v e d t h eo b j e e t i v e sw e r e ( i ) t or e a l i z et h e i rr e s i s t a n c e st oc da n dh ga n dt h e p o s s i b l em e c h a n i s m s ,( i i ) t op r o v i d es o m ei n f u r m a t i o nf o rt h ea r t i f i c i a lf o r e s t a t i o nf o rs o i l s a n do r ed e b r i sc o n t a m i n a t e da n d ( i i i ) t op r e v e n tt h ec o n t i n u a lr e l e a s eo ft h eh e a v ym e t a l s f r o mp o l l u t i n go t h e rt e r r i t o r i a la n da q u a t i c e c o l o g ys y s t e m s f o l l o w i n g a r et h er e s u l t s o b t a i ni no u r e x p e r i m e n t m y c o r r h i z a lf u n g a lg r o w t h w a s s l i g l l t l y i n h i b i t e di nl o w h gc o n c e n t r a t i o n s a n d d e p r e s s e dl c s sw i t ht h ec o n c e n t r a t i o n si n c r e a s e d i n d i c a t i n gt h er e s i s t a n c ea n da d a p t a t i o nt o h gt o x i c i t y b u tt h eg r o w t hr e d u c e ds u d d e n l yo rs t o p p e da st h ec o n c e n t r a t i o n sg ob e y o n d c r i t i c a lo r l e s f u n g a ls p e c i e sv a r i e di ng r o w t hr a t eu n d e rh gs t r e s s p t7 1 5w a ss e n s i t i v ea n d c gs i v w a sl e s ss e n s i t i v et oh g s t r e s s c gs i v w a sq u i t es u s c e p t i b l et oc di ng r o w t h n e 4 西南农业大学二零零三届硕士学位论文 一a b s t r a c t b i o m a s sl o w e r e dw i t hc dc o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e d n e g a t i v ec o r r e l a t i o nw a sf o u n db e t w e e n b i o m a s sa n dc dc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t sf y28 1 6 1 3 8 8 x ,r ;- o 9 8 7 ) h o w e v e r ,p t7 1 5 w a sm u c hl e s ss u s c e p t i b l et oc dc o m p a r e dt oc gs t h e b i o m a s so fc gs i vc u l t i v a t e di n 1 5 m ec d l c u l t u r es o l u t i o nr e d u c e d7 4 4 0 o nt h eb a s eo fb l a n kc o n t r o l ,w h i l ei tr e a c h e d 7 3 6 4 o fb l a n kw h e np t7 1 5i n1 4 0 m gc d ls o l u t i o n m y c o r r h i z a lf u n g a lg r o w t hw a sd e p r e s s e dv a r i o u s l yi nc u l t u r es o l u t i o n sw i t hc d o rh g a d d e d 硼mg r o w t hi n h i h i t i o r to fp t7 1 5b vh gw a sm o r eo b v i o u st h a nc d t h et o x i ci n d e x e s w e r e1 6 1 4f o rh ga n d0 5 7 6f o rc d 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s e di no u re x p e r i m e n tc o u l dt h u sh a v e s o m eo t h e rw a y st or e d u c et h et o x i c i t i e sc a u s e d b yh g a n dc d t h ec o n t e n t sa n d q p a n t t i e s o f n i t r o g e n ,p h o s p h o r o u s a n d p o t a s s i u m i n e c t o m y c o r r h i z a lf u n g u sv a r i e ds l i 班y i n f u n g a ls p e c i e s a n dh e a v ym e t a lt r e a t m e n t s g e n e r a l l y , n oo b v i o u sd e c r e a s e sw e r eo b s e r v e di nc o n t e n t sa n da b s o r p t i o n so fn i t r o g e n , p h o s p h o m s a n d p o t a s s i u mc a u s e db yc aa n dh 2 t h ec o n t e n t sa n dq u a n t i t i e so fn i t r o g e na n dp h o s p h o r u si n c gs w e r ei n c r e a s e d r e m a r k a b l yi nc u l t u r es o l u t i o n sw i t hh ga d d e di nc o n t r a s tt ot h o s eo fp o t a s s i u mw h i c h c h a n g e dv e r y l i t t l ei fa n y s i m i l a r l y , n oo b v i o u sv a r i a t i o n sw e r ed e t e c t e di nt h ec o n t e n t so f n i t r o g e n ,p h o s p h o r o u sa n dp o t a s s i u mi np t7 1 5c u l t i v a t e di nh gc u l t u r es o l u t i o n s b u tt h e a m o u n t so f n i t r o g e na b s o r b e db yp t7 1 5w e r ed i f f c r e n ti nh gt r e a t m e n t sw h i l ep h o s p h o r u s a n d p o t a s s i u mk e p ta l m o s ts a n l ei nh g t r e a t m e n t s n or e m a r k a b l ec h a n g ew e r eo b t a i n e di nt h ec o n t e n t so f p h o s p h o r o u sa n dp o t a s s i u mi n c g s i vc u l t i v a t e di ns o l u t i o n sw i t hc da d d e da n dt h ec o n t e n t so fn i t r o g e ni n c r e a s e dw i t h 5 张肇求、镉对外生苗根真蔼生长、分泌作用和养分吸收的影响 a b s t r a c t c dc o n c e n t r a t i o n si n c r e a s e di na c c o r d a n c ew i t hy = 1 6 3 2 0 十1 2 1 6 x ( r = 0 9 5 6 ) i nr e g a r d s t ot h ea m o u n to fn u t r i e n t a b s o r p t i o n s ,n i t r o g e ni n c r e m e n t ,p h o s p h o r o u s r e d u c t i o na n d p o t a s s i u mc o n s t a n tw e r ef o u n di nc g s i vt r e a t e dw i t hv a r i a b l ec di n t e n s i t i e s t h er e l a t i o n b e t w e e nc dc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t sa n dp h o s p h o r o u sa b s o r p t i o no fc gs i vc a l lb e i l l u s t r a t e db yy = 2 3 0 2 3 7 4 9x ( r = 一0 9 0 6 ) t h en u t r i e n tc o n t e n t sa n da b s o r p t i o n sb yp t 7 15s h o w e ds l i 曲t l yd i f e r e n c ef r o mc gs i va f t e rt r e a t e dw i t hc d i nd e t a i l s ,t h ec o n t e n t so f n i t r o g e n a n dp o t a s s i u mw e r ei n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya n da ts a m et i m et h ec o n t e n t so f p h o s p h o r o u sw e r eg r a d u a l l yd e p r e s s e dw i t ht h ei n c r e m e n t so fc dc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t s 西er e l a t i o nb e t w e e n 曲ec o n t e n t so fp h o s p h o r o u si np t7 1 5a n dc dc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t s c o u l db ee x p r e s s e db yv = 8 7 3 4 0 3 3x “= 一0 9 9 9 ) a 1 s o ,t h ea m o u n to f n i t r o g e na b s o r b e d s h o w e dc o n s t a n t ,p o t a s s i u mi n c r e a s a b l ea n dp h o s p h o r o u sd e g r a d a b l e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h ea m o u n to fp h o s p h o r o u sa b s o r b e db yp t7 1 5a n dc dc o n c e n t r a t i o ni n t e n s i t i e s c o u l db ed e s c r i b e da sy = 2 8 6 7 3 1 4 8 x f r = 一0 9 7 1 ) i ns u m m a r y , c aa n dh gi n h i b i t e dg e n e r m l yt h eg r o w t ho fe c t o m y c o r r h i z a lf u n 【西a n d o nt h ec o n t r a r yt h ef u n g is h o w e dt h er e s i s t a n c et ot h e m i ti sw o r t ht op o i n to u t ,t h a tt h e b i o m a s so fp t7 1 5i nt h ec u l t u r es o l u t i o nw i t h1 4 0 m gc d la d d e dw a sa p p r o x i m a t e l yt w o t h i r do fb l a n kc o n t r o la n dn oo b v i o u si n h i b i t i o nw a sf o u n di nt h en u t r i e n tc o n t e n t sa n d q u a n t i t i e s c a u s e db yt h et w om e t a l se x c e p tt h o s eo fp h o s p h o r o u sw h i c hp r o g r e s s i v e l y d e c r e a s e dw i t hc dc o n c e n t r a t i o n si n c r e a s e d t h u s i ti n f e r r e d 也a tt h em y c o r r h i z a lf u n g i c o u l ds i m i l a r l yg r o wa n dt a k eu pt h en u t r i e n t si ns o i l sa n do r ed e b r i sc o n t a m i n a t e db yc d a n d h g l i k ei np u r ec u l t u r ec o n d i t i o n s t h em y c o r r h i z a lf u n 西w i t ht h ea b i l i t i e st or e s i s tt h e h e a v y m e t a l sc o u l db eu s e di na n i f i d a lf o r e s t a t i o ni nt h o s es o i l sa n dd e b r i s s i n c et h eh y p a e m a t s ,b e i n gf o r m i n gs y m b i o n t s ,c o v e r o nt h es u r f a c eo fr o o t sw h i c hc o u l ds h i e l dt h ec o n t a c t o fh e a v ym e t a l sw i t hr o o t sa n da b s o r bn u t r i e n t sf r o ms o i l s t a k i n gi n t oa c c o u n to ft h e p h y s i o l o g i c a lc h a n g e so fm y c o r r h i z a lf u n g ic a u s e db yh o s t s i n s y m b i o n t s ,t h ef u n g a l r e s i s t a n c et ot h em e t a l sa n dn u t r i e n tu p t a k ec o u l db ed i f i e r e n tf r o mt h o s ei np u r ec u l t u r e i t i sn e c e s s a r yt oa d o p tt h es y m b i o n t sf o r m e d b yr e s i s t a n tf u n 西a n dh o s tt r e e st od e m o n s t r a t e t h er e s u l t so b t a i n e di np u r ec u l t u r ea n dt h i sd e m o n s t r a t i o ni sq u i t eu s e f u li np r a c t i c e 6 西南农业大学二零零三届硕士学位论文 文献综述 文献综述 菌根( m y c o r r h i z a l ,是土壤菌根真菌感染植物营养根形成的一种共生联合体 ( f r a n k ,1 8 8 5 ) ,被认为是植物与菌根真菌在长期生存过程中共同进化的结果。在菌根 共生体中,菌根真菌从植物体内获取必要的碳水化合物及其它营养物质,同时吸收养 分和水分等供给植物所需,二者相互依存并高度统一。 外生菌根在自然界中广泛存在,并具有重要的生态意义。据统计,地球上3 的 有花植物( 其中绝大部分为乔灌木树种) 具有外生菌根,它们可增强寄主植物对营养元 素的吸收和利用、扩大植物根系的吸收面积和范围、增强其寄主植物的抗病性和抗逆 性,进而影响到植物的分布、群落结构组成、森林生态系统的稳定和平衡( 郭秀珍, 1 9 8 9 ) 。 随着人类社会的不断进步和发展,人口、资源与环境问题日益凸现,由自然过程 和人类活动造成的土壤污染问题已成为最为严重的农业

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