（有机化学专业论文）紫花地丁多糖的提取及硫酸酯化研究.pdf

摘要 本文从紫花地丁中提取并提纯了水溶性多糖，将该多糖进行了硫酸酯化修 饰。在提取紫花地丁水溶性多糖时设计了提取温度( a ) 、提取溶剂比( b ) 、提取 时间( c ) 、提取次数( d ) 等四因素三水平的正交实验，得出最佳提取条件a ：b 。c ：d 。， 将该条件下提取的多糖用透析法，葡聚糖凝胶法进行了提纯。以硫酸苯酚法测定 了含量，多糖含量为7 8 4 。再以w o l f r o m 法以不同比例的酯化试剂合成了紫花 地丁多糖硫酸酯，以硫酸钡浊度法测定了硫含量及取代度。当氯磺酸与吡啶的比 例1 ：2 时产率和取代度最高，产率为8 9 ，取代度为1 5 5 1 。采用高效凝胶渗透 ( g p c ) 色谱法测定了分子量，紫花地丁多糖的m n = 4 4 7 2 0 4 ，m w t m5 5 9 0 3 4 ，分散 度为1 2 5 ；紫花地丁多糖硫酸酯的m n = 2 1 8 5 4 ，m w = 8 6 8 0 6 ，分散度为3 9 7 。从 g p c 单一对称峰可知该多糖为均一纯多糖，而硫酸酯化后分子量降低且出现了两 个峰说明多糖发生了降解。紫外光谱中1 9 0 4 0 0 h m 之间该多糖无特征吸收，硫酸 酯化多糖在2 6 2 n m 处出现了s = o 键的特征吸收，初步证明已形成了多糖硫酸酯； 红外光谱中紫花地丁多糖及其硫酸酯均显示有多糖特征峰，而且紫花地丁多糖硫 酸酯在1 2 5 5 c m ，8 1 0 c m ，6 1 2 c m 。1 处有硫酸酯的特征吸收，也进一步证明了多糖硫 酸酯的形成。 关键词：紫花地丁；多糖；提取；硫酸酯化 s t u d i e so ne x t r a c t i o na n ds u l f a t e dp o l y s a c c h a r i d e s o fvi o l ay e d o e n s i sm a k i n o a b s t r a c t t h ep a p e rs t u d i e dt h ee x t r a c f i o na n d p u r i f i c a t i o n o fw a t e r s o l u b i l i t y p o l y s a c c h a r i d ef r o mvi o l ay e d o e n s i sm a k i n o ，a n dt h ep r e p a r a t i o no fs u l f a t e d p o l y s a c c h a r i d e s t h eo r t h o g o n a le x p e r i m e n to ff o u re l e m e n tt h r e el e v e lw a sd e s i g n e d f o rt h ee x t r a c t i n gt e m p e r a t u r e ( a ) e x t r a c t i n gs o l i dt ol i q u i dr a t i o ( b ) ，e x t r a c t i n g t i m e ( c ) ，e x t r a c t i n gt i m e s ( d ) i ne x t r a c t i n gp o l y s a c c h a r i d e sf r o mvi o l ay e d o e r u i s m a k i n o ，a n do b t a i n e dt h em o s tc o n d i t i o na 2 8 2 c 2 d 1 t h ep o l y s a c c h a r i d e sw a sf u r t h e r p u r i f i e db yc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yo ns e p h a d e x g 一2 5a n dd i a l y s e sm e t l l o d t h e p o l y s a c c h a r i d e s c o n t e n ti s7 8 4 w i t hs u l f u r i c a c i d - p h e n 0 1m e t h o d t h e p o l y s a c c h 撕d es u l f a t ew a so b t a i n e d 、v i t l lw o l f r o mm e t h o d a n dm e t h o dd e t e r m i n e d t h es u l f u rc o n t e n ta n dt h ed e g r e eo fs u b s t i t u t i o nw i t hb a r i u ms u l f a t et u r b i d i t y t h e p r o d u c t i o nr a t i oa n dd e g r e eo fs u b s t i t u t i o nw e r em a x i m a lw h e nt h ev o l u m ep r o p o r t i o n o fc h l o r o s u l f o n i ca c i da n dp y r i d i n ei sl ：2 i t ss u l f u rc o n t e n tw a s8 9 a n dt h ed e g r e e o fs u b s t i t u t i o nw a s1 5 51 t h em o l e c u l a rw e i g h to fvi o l ay e d o e r a i sm a k i n o p o l y s a c c h a r i d e sw a s i n v e s t i g a t e db yt h em e t h o do fg p c t h es i n g l es y m m e t i c a lp e a k c o r r e s p o n d i n gt oa na v e r a g em o l e c u l a rw e i g h tm n = 4 4 7 2 0 4 ，m w = 5 5 9 0 3 4 ，a n d p o l y d i s p e r s i t yi s1 2 5a n ds h o w e dt h ep o l y s a c c h a r i d ei sa v e r a g e t h em o l e c u l a r w e i g h t m n = 2 18 5 4 m w = 8 6 8 0 6a n dt h e p o l y d i s p e r s i t y i s3 9 7o fs u l f a t e d p o l y s a c c h a r i d e ，t h em o l e c u l a rw e i g h tr e d u c t i o na n dt h et w op e a ke m e r g i n gs h o w e d t h ep o l y s a c c h a f i d e sh a p p e n e dd e g r a d a t i o na f t e r s u l f a t e d t h eu vs p e c t r u ms h o w e d t h e r ei sn oc h a r a c t e r i s t i c a b s o r p t i o n a n dt h e i rs p e c t r u ms h o w e dt h e r ei s c h a r a c t e r i s t i ca b s o r p t i o nt ot h ep o l y s a c c h a r i d eo f 矿f d 肠v e 如e n s i sm a k i n o b u tt h e u va n di rs p e c t r u mo fs u l f a t e dp o l y s a c c h a r i d es h o w e dt h a tt h ec h a r a c t e r i s t i c a b s o r p t i o n so fs u l f a t ee s t e rb o n dw e r ea tw a v el e n g t ho f2 6 2 n ma n d1 2 5 5 c m l 81 0 c m 6 2 0 c m r e s p e c t i v e l y k e yw o r d ： v i o l a y e d o e n s i sm a k i n o ；p o l y s a c c h a r i d e s ：e x t r a c t i o n ；s u l f a t e d 1 图1 2 图2 3 图3 4 图4 5 图5 6 图6 插图和附表清单 多糖标准品的g p c 图2 2 紫花地丁多糖的g p c 图2 2 硫酸化紫花地丁多糖的g p c 图2 3 紫花地丁多糖的紫外光谱图2 4 硫酸酯化紫花地丁多糖的紫外光谱图2 4 紫花地丁多糖及其硫酸酯的红外光谱图2 5 表1 多糖不同提取方法的比2 表2 多糖分子量测定4 表3 常用的多糖结构鉴定方法及解决的问题6 表4 多糖的常见化学修饰方法1 0 表5 部分多糖硫酸酯的活性及应用1 2 表6 l 3 ( 3 4 ) 正交实验因素表1 6 表7 硫含量测定的标准曲线1 8 表8 正交试验结果分析2 0 表9 紫花地丁中多糖含量的测定2 l 表1 0 按不同比例的氯磺酸和吡啶进行酯化的结果2 1 表1 1g p c 校准表2 2 表1 2 紫花地丁多糖及其硫酸酯的g p c 数据2 3 表1 3 紫花地丁多糖及其硫酸酯的红外光谱分析2 5 l 良钆m u心他m垢坞培坞 缩略语表 i r ( i n f r a r e ds p e c t r u m ) u v ( u l t r a v i o l e ts p e c t r u m ) g p c ( g e tp e r m e a t i o nc h r o m a t o g r a p h y ) g c ( g a sc h r o m a t o g r a p h y ) h p l c ( 1 i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ) n m r ( n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e ) m n ( n u m b e r a v e r a g em o l e c u l a rw e i g h t ) m w ( w e i g h t a v e r a g em o l e c u l a rw e i g h t ) m z ( z - a v e r a g em o l e c u l a rw e i g h t ) d m f 红外光谱 紫外光谱 凝胶渗透色谱 气相色谱 高效液相色谱 核磁共振 数均分子量 重均分子量 z 均分子量 n ，n - 二甲基甲酰胺 内蒙古民族大学硕士学位论文 1 前言 多糖( p o l y s a c c h a r i d e s ) 一般是指聚合度超出1 0 以上的多聚糖，其分子量通 常在数万至数百万，多糖纯品是指一定分子量范围的均一组分。多糖是来自高等植 物、动物细胞膜和微生物细胞壁中的天然大分子物质，是所有生命机体的重要组成 部分，并与维持生命所需的多种生理功能有关。多糖及其衍生物具有抗肿瘤、降血 糖、降血脂、解毒、抗病毒、抗辐射、抗艾滋、抗凝血、增强免疫等功能。自2 0 世纪5 0 年代末人们发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以来，多糖的研究受到越来越广 泛的重视。近2 0 年来由于生物学、化学等学科的飞速发展，人们对多糖及其复合 物的活性作用有了越来越深入的认识“1 1 。至今，几百种天然多糖的发现，已给人类 提供了丰富的生物多聚体的宝库。多糖是动植物的主要支持结构物质( 如甲壳动物 中的几丁质，植物中的纤维素) ，而且也是生物体主要能量来源( 如淀粉、糖原) 。 同时多糖也是工业上重要多聚体的原料来源，如食品工业上不可缺少的卡拉胶，石 油工业上应用的田著胶等。不但如此，多糖还具有多方面的生物活性与功能，多糖 的糖链能控制细胞的分裂与分化，调节细胞的生长与衰老，特别是多糖作为广谱免 疫调节剂在免疫性疾病治疗上的应用。多糖是一种非特异性免疫调节剂，不仅能治 疗机体免疫系统受到严重损伤的癌症和艾滋病，还能治疗多种免疫缺损疾病和某些 细菌、病毒引起的疾病。多糖的免疫疗法己给近代肿瘤、艾滋病治疗及其它疾病治 疗开辟了新方向。我们知道，癌症的治疗主要有三种方法，即化学疗法、放射疗 法和外科手术。免疫疗法不同于化疗及放疗，它是通过宿主中介而起作用，所以没 有直接细胞毒性作用，不影响正常细胞，毒副作用小，治疗后白细胞不会下降，并 使因化疗或放疗引起的白细胞下降维持到正常水平。它也不像手术疗法具有不彻底 性，因为免疫疗法是整体的治疗。现在国际上多糖研究以日本、美国、德国和加拿 大处于领先地位，我国多搪的研究虽然起步较晚，但自8 0 年代以后各地的研究如 雨后春笋般掀起，进入新世纪的近几年来，我国在多糖方面的研究已经进入到更加 广泛和深入的阶段。国内外研究的主要目标是：一方面进一步寻找活性更高，特别 是对肿瘤、艾滋病更有效的多糖。另一方面正在着重进行构效关系的研究。因为一 旦构效关系阐述清楚，将对发现新的多糖起指导作用，并对药物学、分子生物学的 理论作出新贡献m “。 1 1 多糖的研究进展 1 1 1 多糖的分类 多糖按来源分为植物多糖睁”，如沙棘多糖、黄芪多糖。1 等；动物多糖，如海星 多糖鹿茸多糖“”等；微生物多糖，如香菇多糖。“、茯苓多糖“”等。按在生物体内的 功能分为两类：一类为非水溶性的，形成生物体内的支持组织，如植物的纤维素、 茎垄丝工量塑塑堡塾垦堕堕堕些堡壅 甲壳类动物的外壳甲壳素“”等；另一类为水溶性多糖。按分子量分布可分为均聚多 糖和杂多糖。 1 1 2 多糖的提取和分离 多糖是极性较强的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色、然后用水、 盐或稀碱水在不同温度下提取，提取物浓缩后加沉淀剂( 如丙酮、乙醇等) 离心沉淀， 沉淀部分通常经膜分离后冷冻干燥得粗多糖。多糖大多数采用不同温度的水或稀碱 溶液进行提取。“，如果用稀酸提取，应注意提取的时间要短、提取温度不宜太高， 以避免糖苷键的断裂引起多糖的降解。各种提取方法及其优缺点的比较见表1 。 表1 多糖不同提取方法的比较 近年来，一些新型的分离技术引用在多糖的提取过程中，如超声波提取技术、 微波辅助提取技术等。这些技术“”1 与传统方法比较具有能耗小，速度快、产率高 等特点。 1 1 3 多糖的纯化 1 1 3 1 除蛋白 粗多糖常杂有较多蛋白质，可选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂。常 用的除蛋白方法有s e v a g e 法1 、三氯乙酸法、水解酶法等。s e v a g e 法是将氯仿与 正丁醇( 或正戊醇) 按5 ：1 混合后，加到样品水溶液中振摇，离心法除去形成凝 胶状的蛋白质，反复多次至蛋白质除尽为止。此法效率不高，但很温和，一般不会 破坏糖苷键。三氯乙酸法是利用三氯乙酸能使蛋白沉淀的原理，将3 的三氯乙酸溶 液滴加到多糖溶液中，离心分离即可。此法效率高、操作简便，但是反应激烈使含 呋喃环多糖苷键断裂、也容易使硫酸多糖的硫酸根脱落。水解酶法，如胃蛋白酶、 胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等使样品中的蛋白质部分降解后，再用s e v a g e 法进一步处 理。 内蒙古民族大学硕士学位论文 1 1 3 2 分级纯化方法 ( 1 ) 分步沉淀法“”1 ：有机溶剂分级、冻融分级等。 ( 2 ) 盐析法“1 ：根据不同多糖在不同盐溶液中具有不同溶解度的性质，加入 ( n h 。) 。s o 。、n a c i 等使多糖逐步析出。 ( 3 ) 金属络合法：根据有的多糖能与铜、钡、钙等离子形成配合物而沉淀，沉淀 经水充分洗涤后用无机酸乙醇处理即得游离的多糖。 ( 4 ) 季铵盐沉淀法：根据长链季铵盐能与酸性多糖成盐而成水不溶性多糖化合物 的特点，以分离酸性及中性多糖。常用的季铵盐有c t a b 、c p c 等。 ( 5 ) 纤维素阴离子交换剂柱层析法：根据p h = 6 时，酸型多糖易吸附在阴离子基团 的凝胶上而中性多糖不能吸附或很少吸附的原理使用不同的洗脱液将多糖洗脱离。 常用的有d e a e 纤维素或树脂。 ( 6 ) 凝胶柱层析法：根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的。常用的凝 胶有葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶等，展层剂为各种浓度的盐溶液及缓冲液。 ( 7 ) 超滤法：根据多糖分子的大小，选择合适的膜孔来分级分离。同时还可以用 此法进行脱盐、浓缩、分子量测定等。 ( 8 ) 其它方法：如高压液相层析法、制备性区域电泳法、透析法等。 1 1 3 3 脱色 粗多糖中常含有一些色素( 游离色素和结合色素) ，常用的脱色方法有：离子交 换法、吸附法( 纤维素、硅藻土、高龄土、活性碳等) 、氧化法。 1 1 3 4 多糖的纯度检验 多糖纯度标准不能用通常化合物的纯度标准来衡量，因为即便是多糖纯品，其 微观也是不均一的，它的纯度只代表相似链长的平均分布。我们通常所蜕的多糖纯 品实质上是一定分子量范围的均一组分，检验纯度的常用方法有。”以下5 种。 ( 1 ) h p l c 法鉴定为单一对称峰。 ( 2 ) 凝胶柱层析洗脱图呈现单一对称峰。 ( 3 ) 纸层析法呈单一集中斑点。 ( 4 ) 比旋度法中不同浓度乙醇醇析的产物比旋度相同。 ( 5 ) 超离心法中间隔照相形成单一峰。 1 1 4 多糖分子量的测定 多糖分子量大小是影响它生物活性的重要因素，同时也与多糖本身的性质密切 相关，因此多糖分子量的测定，在多糖类化合物的研究中有着重要的意义。 紫花地丁多糖的提取及硫酸酯化研究 表2 多糖分子量测定方法。” 常用方法 所需仪器分子量范围特点 渗透压法 蒸气压法 光散射法 高效液相 粘度法 凝胶过滤法 膜渗透压计卜5 0 万不需标准品，需要台适的半透膜，费时 蒸气压渗透计 5 0 0 1 0 0 0 0 需标准品，简单、快速、 光散射分子量测定仪不需标准品 高效液相色谱仪 需标准品，用特定的凝胶作填科 粘度计测出g ，依 g = v & q 计算大约分子量 s e p h a d e x g 柱层析仪 提取次数 提取时间 溶剂用量。溶剂用量的影响较小，但 是溶剂用量少时由于浓度大而过滤困难，因此耗费时间。溶剂用量过大时浓缩时间 长，为了减轻后续浓缩处理工作，以2 0 倍的溶剂用量提取比较合适；当提取温度 为7 0 对应的产率最高，8 0 时提取物颜色加深采取，因此7 0 为最佳温度。提 取次数中，3 次时的产率最高：故确定紫花地丁多糖的较佳提取工艺条件为为： a ：b 。c ：d 。即以2 0 倍的溶剂，在7 0 水浴中提取3 次，每次2 h 。以此条件进行紫花地 丁水溶性多糖的提取，此法提取率好、操作简便。 3 2 紫花地丁中多糖含量的测定 表9 紫花地丁中多糖含量的测定 糖含量计算中标准曲线回归方程为：y = 0 0 0 9 3 + 1 1 5 2 4 2 x ( r = o 9 9 9 4 ) 3 3 紫花地丁多糖硫酸酯 3 3 1 比浊法测定硫含量 得标准曲线回归方程为 y = 1 4 9 2 5 x + 0 2 3 8 6 r = o 9 9 7 4 ，硫酸根在0 0 8 m g 一0 4 0 m g 之间线性关系良好。 3 3 2 以不同比例硫酸化试剂酯化的结果 表1 0按不同比例的氯磺酸和吡啶进行酯化的结果 取代度：d s = 1 6 2 s 3 2 1 0 2 x s 茎垄丝工玺塑塑堡娶丝堕墼堕些塑窒 吡啶与氯磺酸的体积比为1 ：2 的时产率及取代度最大，可能是形成的酯化试 剂中氯磺酸吡啶盐的比例相对较多，并且反应体积较大，因此多糖在其中较为分散， 能够与酯化试剂充分接触而有利于反应的进行。而比例为1 ：1 时，产率及取代度 都最低，可能是由于氯磺酸比例增大导致制备酯化试剂时难于充分搅拌，使生成的 酯化试剂相对减少，还有过量的氯磺酸使多糖降解成小分子而在透析纯化时被透析 出去也导致产率降低。在合成时反应时间采用了文献中的1 h ，由于时间太长也会加 剧多糖的降解。 3 4 紫花地丁多糖及其硫酸酯的分子量测定 皇 善， 雪 图1标准多糖的g p c 谱图 表1 1g p c 校准表 内蒙古民族大学硕士学位论文 童。舶 兰 o i m 一一k 一一 m _ s 0 ： 加i 一。一、一一一一、j 2 , 0 96 o o8a 01 0 1 2 - 0 01 6 啪1 8 ：q d2 0 0 07 2 0 0 m n u k i 图2 紫花地丁多糖的g p c 图 图3 硫酸化紫花地丁多糖的g p c 图 表12 紫花地丁多糖及其硫酸酯的b p e 数据 挫 样品名称数均分子量重均分子量z 均分子量多糖分散度 s a m p l en a m e m nm wm zm z + l p 0 1 y d i s p e r s n y 紫花地丁多糖4 4 7 2 0 45 5 9 0 3 46 4 1 0 5 76 9 4 9 4 5l _ 2 5 0 0 6 4 硫酸酯化多糖2 1 8 5 48 6 8 0 63 3 2 3 6 75 4 0 0 5 43 9 7 2 0 8 4 紫花地丁多糖的提取及硫酸酯化研究 应用高效液相色谱g p c 法测定多糖的分子量，具有快速、高分辨的特点。其 中多糖的分散度为m w m n 。分散度越大说明分子量分布越宽1 。 从紫花地丁和紫花多糖硫酸酯的分子量分布比较可知，紫花地丁分子量分布较 窄的单峰，说明该多糖样品纯度较高，为均一性多糖。而硫酸酯化后的多糖分子量 分布变得很宽而且分子量变小，可能是因为酯化过程中有多糖的降解变化和混有少 量小分子杂质引起的。 紫花地丁多糖的分子量较大这会对其应用及分析工作带来不便。而硫酸酯化后 其分子量变小，对其应用方面有可能带来更好的新的优点。 3 5 紫花地丁多糖及其硫酸酯的紫外光谱分析 紫花地丁多糖在2 0 0 4 0 0 n m 之间无吸收峰，而酯化后在2 6 2 n m 附近有一新的 硫酸酯基特征吸收峰。说明已形成了多糖硫酸酯。 ， 窨 喜 萤 爹善誉 图4 紫花地丁多糖的紫外光谱图固5 硫酸化紫花地丁多糖的紫外光谱 鲁 p 3 6 紫花地丁多糖及其硫酸酯的红外光谱分析 ( 1 ) 紫花地丁多糖在3 4 2 0 8 6c m - 处强而宽峰是糖特征峰，是分子间氢键缔 合的羟基o h 键的伸缩振动产生的，而经过硫酸酯化修饰后，可看出此处的峰移向 高波数3 4 9 5 6 2 c m - 1 ，并且峰变窄变弱，表明由于硫酸基的取代，改变了局部的空间 2 4 内蒙古民族大学硕士学位论文 位置情况，使得羟基参与分子间氢键的状态发生了变化，即相对减少，这也有利于 提高多糖的水溶性。同时峰高度的削弱也证明了因硫酸基的取代，使羟基的数量减 少。( 2 ) 硫酸酯化后的多糖峰中1 2 5 5 6 7c m - 1 、8 11 ，3 8c m 、1 2 8 1c m - 1 峰是硫酸 基的特征吸收。1 2 5 5 6 7c m l 处的峰是o s o 。一的s = o 双键的伸缩振动，8 1 1 3 8c m - 1 峰是c o _ s 的伸缩振动，6 1 2 8 1c m 。1 是一o s o 。一的s = o 键的变角振动。( 3 ) 1 7 2 5 8 5c m - 1 和1 7 3 7 4 5c m 。峰说明此多糖中含有羰基，是c = o 键的伸缩振动。( 4 ) 1 0 6 9 3 6 c m - 和1 0 4 7 2 6 处的吸收是多糖中一c 一0 _ c 的振动。( 5 ) 1 1 4 6 8 0c m l 和1 1 4 6 6 5c m 。1 处 的吸收峰是吡哺糖环的c o - c 的振动吸收峰和。( 6 ) 8 9 3e m l 处峰是吡喃型糖的b 一糖苷键特征吸收一“。 通过紫花地丁多糖的硫酸化前后的红外光谱的比较可以得出以下几点结论： 首先说明了酯化前后该样品都是多糖。其次，硫酸酯化后显示硫酸酯的特征吸 收，证明了多糖硫酸酯的生成。 图6 紫花地丁多糖及其硫酸酯的红外光谱图 紫花地丁多糖的提取及硫酸酯化研究 表1 3 紫花地丁多糖及其硫酸酯的红外光谱分析 4 讨论 本文研究的内容主要有从紫花地丁中提取纯化多糖、多糖的最佳提取条件、确 定分子量、以及对紫花地丁多糖的硫酸酯化修饰等通过分析得出如下结论： ( 1 ) 提取紫花地丁多糖时反应温度是重要因素，而温度过高会引起多糖的氧化得到 褐色片产物。 ( 2 ) 纯化多糖时使用透析法和凝胶柱层得到了分子量较均一分布的紫花地丁多糖， 说明该方法对紫花地丁多糖是较理想提纯方法。 ( 3 ) 通过不同比例的氯磺酸一毗啶法制备硫酸酯化多糖，均得到了多糖硫酸酯，该 方法中氯磺酸：吡啶为1 ：l 时会使搅拌困难而产率降低，导致硫含量也降低， 当比例1 ：2 时产率和取代度都最高。硫酸酯化使多糖发生降解，因此酯化后 分子量降低。这点有可能改善紫花地丁多糖分子量太高应用不便的缺点。 ( 4 ) 通过高效凝胶渗透法对多糖及其分子量进行测定，该法稳定、可靠。 ( 5 ) 通过红外、紫外光谱分析说明了紫花地丁多糖硫酸酯的生成。 今后将进一步深入研究紫花地丁多糖及其衍生物的组分和生物活性。 内蒙古民族大学硕士学位论文 参考文献 1 魏传晚，曾和平，王晓娟多糖及其研究进展简述广东化工，2 0 0 4 ，13 6 3 9 2 黄芳，蒙义文活性多糖的研究进展【j 】天然产物研究与开发，1 9 9 9 ，1 1 ( 5 ) ：9 0 - 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- 2 4 4 2 4 胡稳奇，张志光，张天晓盐析法提取香菇、草菇多糖的探讨 j 中国食用菌，1 9 9 5 ，1 4 ( 3 ) ： 2 7 紫花地丁多糖的提取及硫酸酯化研究 3 4 3 5 一 2 5 鞠海，陈建民等天然多糖的分离、纯化和结构鉴定【j 】国外医药一植物药学分 册，2 0 0 0 ，i5 ( 3 ) ：1 0 7 1 13 2 6 方积年多糖体的分子结构【j 】国外医学一药学分册，i9 8 1 ，4 ：2 2 2 2 2 8 2 7 周鹏，谢明勇，傅博强多糖的结构研究 j 】南昌大学学报，20 0 1 ，2 5 ( 2 ) ：19 7 2 0 4 2 8 高小荣，刘培勋，多糖结构分析研究进展【】天津药学，2 0 9 3 ，1 5 ( 6 ) ：6 7 7 0 2 9 王展，方积年高场核磁共振谱在多糖结构研究中的应用分析化学，2 0 0 2 ，2 8 3 0 霍光华，李来生，高荫榆波谱在多糖结构分析上的应用 j 生命的化学，2 0 0 2 ，2 2 ( 2 ) ： 1 9 4 - 1 9 6 3 1 王顺春，方积年x 一射线纤维衍射在多糖构型分析中应用的研究进展【j 1 天然产物研究与 开发，1 9 9 9 ，1 2 ( 2 ) ：7 5 8 0 3 2b a r d b u r yjh ，j e n k i n sga c a r b o h y d r r e s ，1 9 8 4 ，1 2 6 ：1 2 5 1 3 6 3 3b a n e r j ia ，b a n d y o p a d h y a yd ，s a r k a rm ，s i d d h a n t aak ，p a lsc ，g h o s h s ，a b r a h a m k ，s h o o l e r yjn p h o t o c h e m ，19 8 5 ，2 4 ：2 7 9 2 8 4 3 4u n i y a lgc ，a g r a w a lpk ，t h a k u rrs ，s a t i0p p h o t o c h e m ，1 9 9 0 ，2 9 ：9 3 7 9 4 0 3 5 张剑波，田庚元糖类的高校毛细管电泳【j 】有机化学，1 9 9 8 18 = 8 8 - 9 6 3 6 赵国华等活性多糖的研究进展【j 】食品与发酵工业，2 7 ( 7 ) ：4 5 4 8 3 7 方一苇具有药理活性多糖的研究现况1 j 】分析化学，1 9 9 4 ，2 2 ( 9 ) ：9 5 5 9 6 0 3 8 周世文，徐传福多糖的免疫药理作用【jj 中国生化药物杂志，19 9 4 ，15 ( 2 ) ：1 43 - 14 7 3 9w a r t e n b e r glw c a n c e rr e s ，19 8 5 ，4 5 ( 1 ) ：1 8 4 0 魏小龙，茹祥斌低分子量地黄多糖对p 53 基因表达的影响f j 】中国药理学 报，1 9 9 7 ，1 8 ( 5 ) ：4 7 1 4 7 4 4 1 韩锐主编抗癌药物研究与实验技术【m 】北京：北京医科大学中国协和医科大学出版 社，1 9 9 7 ，3 4 2 黄芳，蒙叉文活性多糖研究进展 j 】天然产物研究与开发，19 9 9 ，1 1 ( 5 ) ：9 0 9 8 4 3w h i t t a k e rd v ，p a r o l isl a s ，p a r o l ish c a r b o h y d r ，r e s ，i9 9 4 ，2 53 ：2 4 7 2 5 6 4 4 h o l m b s c k s m a ，p e t i l l op a ，l e r n e r ，l e b i o c h e m ，1 9 9 4 ，3 3 ：14 2 4 6 14 2 5 5 4 5 王兆梅，李琳，郭祀远等活性多糖构效关系研究评述【j 】现代化工，20 0 2 ，2 2 ( 8 ) ：i8 - 2 1 4 6 吴立根，毛文君衍生化多糖的生物活陛研究进展【j 】海洋科学，2 0 0 2 ，2 6 ( 5 ) ：23 2 5 4 7d a c er c o m p a r is o i lo ft h ea n t i c o a g u l a n ta c t i o no f $ t 1 1 f a t e da n dp h o s p h o r y l a t e d p o l y s a c c h a r i d e s 【j 】t h r o m b o s t sr es e a r c h ，1 9 9 7 ，8 7 ( 1 ) ：1 13 12 1 4 8 赵晓燕等分子修饰在多糖购销关系研究中的应用【j 】海洋湖沼通报，2 0 0 0 ，( 3 ) ：i o - 1 4 4 9 王雁，杨祥良，邓成华等羧甲基化虎奶多糖的制备及抗氧化性研究【j 生物化学与生物物 理进展，2 0 0 0 ，27 ( 4 ) ：4 1 卜4 1 5 内蒙古民族大学硕士学位论文 5 0u r y ut ，i k u s h i m an ，k a ts u r a y ak e t a l s u l f a t e d a l k y l o l i g os a c c h a r i d e sw i t hp o t e n t i n h i b i t o r ye f f e c tso nh u m a nir m u n o d e f i c i e n c yv ir u si n f e c t i o n 【j b i o c h e mp h a r m a c o l 1 9 9 2 ，4 3 ( 1 1 ) ：23 8 5 23 9 2 5 1c o l q u h o u n i j ，j a yh ，j ，e a g l e sj e t a l s tr u c t u r ea n dc o n f o r m t i o no fa n o v e lg e n e t i c a l l y e n g i n e e r e dp o l y s a c c h a r i d e 【j 】c a r b o h y d r ，r e s ，2 0 0 1 ，3 3 0 ( 4 ) ：3 2 5 3 3 3 5 2y o s h i z a w a y , t s u n e h i r oj , n o m u r ak ，e t a l i n v i t r o m a c r o p h a g e - s t i m u l a t i o na c t i v i t y o ft h e e n z y m e d e g r a d e d w a t e r - s o l u b l e p o l y s a c c h a r i d e f r o ma m a r i n e a l g a 【j 】b i o s c ib i o t e c h n o l b i o c h e m ，1 9 9 6 ，6 0 ( 10 ) ：16 6 7 1 6 7 1 5 3t a b a t ak ，l t ow ，k o j i m at ，u l t r o s o n i cd e g r a d a t i o no f s c h i z o p h y l l a n ，a na n t i t u m o rp o l y s a c c h a r i d e p r o d u c e db ys c h i z o p h y l l a nc o m m u n e f l i e s ， j c a r b o h y d r r e s ，1 9 8 1 ，8 9 0 ) ：1 2 1 - 1 3 5 5 4s t a h m a n nkp ，m o n s c h a un ，s a h mh ，e t a l s t r u c t u r ep r o p e r t i e so fn a t i v ea n ds o n i c a t e d c i n r e e a n ，ad 一( 1 ，3 ) 一( 1 ，6 ) 一d - g l u u a np r o d u c e d b yb o r t y t is c i n e r e a c a r b o h y d r r e s ，1 9 9 5 ，2 2 6 ( 1 ) ：11 5 - 1 2 8 5 5c h e nrh ，c h a n gjr ，s h y u rjs e f f e c tso fu l tr a s o n i cc o u d i t i o n sa n ds t o r a g ei na c i d i c s o l u t i o n so nc h a n g e si nm o l e c u l a rw e i g h ta n dp o l y d is p u r s it yo ft r e a t e d c h lt o s a n 【j 】c a r b o h y d r r e s ，1 9 9 7 ，2 2 9 ：2 8 7 2 9 4 5 6ag a m z a z a d e ，a s k l y a r ， i s u s h k o v e t a l s tr u c t u r a lf e a t u r e so fs u l f a t e d c h i t o s a n s 【j 】c a r b o h y d r a t ep o l y m e rs ，1 9 9 7 ，3 4 ：1 13 - 1 1 6 5 7 向道斌，李晓玉硫酸化多糖：一粪治疗a i d s 的新药 j 】国外医学一药学分册，1 9 9 2 ，1 9 ( 1 ) ： 1 5 5 8 刘晓蕙，张翼伸海带中褐藻糖胶的分离纯化与结构研究【j 】生物化学与生物物理学报， 1 9 9 2 ，2 4 ( 4 ) ：2 9 7 3 0 2 5 9 王作芸赵学武铜藻的褐藻糖胶、褐藻淀粉和褐藻胶的分离及提纯【j 】水产学报，1 9 8 5 ，9 ( 1 ) ：7 l 一7 6 6 0 张全斌徐祖洪几种褐藻中褐藻多糖硫酸酯的分离及分析【j 】海洋科学，1 9 9 7 ，( 3 ) ：5 5 5 8 6 1 方积年硫酸化多糖的研究进展【j 】中国药学杂志，1 9 9 3 ，2 8 ( 7 ) ：3 9 3 - 3 9 5 6 2u e n oy ，o k a m o t oy ，y a m a u c h i re t a l a na n t i t u m o ra c t i v i t yo f t h ea l k a l i - s o i u b l ep o l y s a c c h a r i d ea n di t sd e r i v a t i v e so b t a i n e df r o mt h es c i e r t i ao fg r i f o r a u m b e l l a t a ( f r ) p i l a t c a r b o h y d rr e s 1 9 8 2 ，10 1 ：i6 0 1 6 7 6 3w 0 1 f r o mml ，s h u nh a ntm t h es u l f o n a t i o no fc h i t o s a n ja mc h e ms o c ，1 9 5 9 ，8 l ：1 7 6 4 6 4a d a