（免疫学专业论文）hlac克隆、表达及在母胎耐受作用的初探.pdf

上海第二医科土学博士学位论文 中文捕要 h l a c 克隆、表达及在母胎耐受作用的初探 博士研究生：李卫党 导师：范丽安 上海第二医科大学免疫学研究所 中文摘要 h l a ( h u m a nl e u k o c y t ea n t i g e n ) 复合体，它是一个由一系列紧密连锁的基因座 组成的具有高度多态性的遗传复合体，位于人类6 号染色体的短臂上。分为 h l a i 类、i i 类、i i i 类3 个基因区。h l a i 类基因又分为经典i 类基因( h l a i a ) 和非经典i 类基因( h l at o ) 。h l a c 基因属于h l ai a ，是最早发现的3 个功能 基因之一。h l ai b 发现较晚，包括h l a e 、f 、g3 个基因，目前在胚胎种植发 育和肿瘤免疫中研究较多。h l a - c 抗原虽已发现多年。但因其有限的多态性及 在细胞表面的表达低于h l a a 、b 分子，血清学分型困难。多年以来对其在免 疫系统中的作用研究甚少。直到1 9 9 0 年m o r e t t a 及其同事在研究n k 细胞杀伤作 用时，直接证实h l a c 分子具有抑制n k 细胞细胞毒作用。迸一步研究表明它 是n k 细胞表面的杀伤抑制性受体( k i l l e ri n t f i b i t o r yr e c e p t o r ，k m ) 的配体。因而 出人意料地使h l a c 成为免疫系统中一个值得关注分子，并使n k 细胞受体研 究取得重要突破性进展。与此同时，在研究母胎界面滋养层细胞分子表达时发现， 它虽不表达经典的h l a - a 、b 及全部的h l ai i 类分子，却表达经典的h l a - c 和非经典的h l a g 、e 分子。h l a c 分子这特殊表达，提示它可能通过与子 宫n k 细胞之间的相互作用在维持母胎耐受中起重要作用。以往的大部分研究都 是将h l a c 分子表达在b 淋巴母细胞系l c l 7 2 2 7 2 1 上进行的。为了更能反映 它在母胎界面的真实情况万本课题试图以滋养层细胞表达h l a - c 为模型，对其 功能进行研究。为此克隆了h l a c 基因，并将它表达在h l ai 类分子阴性的j a r 细胞上，从以下几方面初步探讨了h l a c 分子的生物作用 第一部分 h l a _ cl 目l 棱细胞毫琏麓俸的相慧、薹定反表达 为研究滋养层细胞表达h l a - c 分予的生物学作用及它与n k 细胞受体之间 的相互作扇：龟们 h l a c w + 0 6 0 2 轴， 从一健康汉族个体的外周血单个细胞中直接克隆了 构建p c d n a 3 - h l a - c 真核表达载体，在h l ai 类分子阴性 - l - 上海第二医科文学博士学位论文 中文摘要 _ 、_ ，_ _ - - - _ - _ 一 的滋养层细胞来源的绒癌细胞系j a r 细胞表达。并获得了高表达h l a - c 分子的 j a r 细胞( 7 8 1 。由于h l a - a 、b 基因和h l a c 在它们的c d n a 两端高度同源， 我们在扩增h l a c 基因时，发现h l a a 、b 基因也可同时被扩增。为进一步研 究n k 细胞受体与h l ai 类分子之间的相互作用，我们也克隆了 a - a 3 0 0 1 和h l a - b * 2 7 0 5 2 基因。) 第二部分h l a - c 细胞表面表达对r s a 庸人外月血n l 【细胞功艇的影响 利用直接分离的外周血n k 细胞对j a r 细胞和表达h l a - c 的j a r 细胞进行 细胞毒试验，结果直接分离的n k 细胞对两者都无细胞毒作用x 为获取纯度相对 较高的n k 细胞，我们在体外用p h a 、r l l - 2 扩增初步分离纯化的n k 细胞，结 果c d 5 6 + 的n k 细胞获得了不同程度的扩增( 4 8 ，2 0 7 0 9 0 ) ，并表达不同程度 的k i r 2 d 受体f 3 5 0 6 6 3 3 8 ) 。正常人和r s a 病人体外扩增的n k 细胞对j a r 细胞、j a r - h l a c w * 0 6 0 2 细胞均有细胞毒活性。用e b 6 单抗阻断n k 细胞抑制 性受体，r l l - 2 活化的n k 细胞仍对靶细胞有杀伤作用。与正常对照相比r s a 病 人n k 细胞对靶细胞的细胞毒作用未见著性差异( p o 0 5 ) 。对正常人和r s a 病 人体外扩增的n k 细胞与靶细胞作用4 小时和2 0 小时时，收集细胞上清进 行i f n - y 的检测，结果显示表达h l a - c 分子的j a r 细胞与r s a 病人n k 细胞 作用后，其n k 细胞分泌的i f n - 丫与同j a r 细胞作用后分泌的i f n - - 无明显差异。 但两者在2 0 小时时分泌的i f n - y 水平都明显高于4 小时时分泌的量口 o 0 5 ) s u g g e s t i n gt h a tj a rc e l l s r e s i s t a n c et on k l y s i sc o u l d i n v o l v ea nh l a - c i n d e p e n d e n t m e c h a n i s m w ea l s o i n v e s t i g a t e d w h e t h e rh l a c - e x p r e s s i n gl r a n s f e c t a n t so fj a rc e l l s i n t e r a c t i n g 、i t l ln k c e l l si n h i b i t o rr e c e p t o ra f f e c t f n - 7 p r o d u c t i o no f n k c e l l i f n v s e c r e t i o no fn kc e l l sa t4a n d2 4h o u rw a sm e a s u r e da f t e rc o c u l t u r ew i t hj a rc e l l s a n dh l a c - e x p r e s s i n gl r a n s f e c t a n t so fj a rc e l l s t h er e s u l t sr e v e a l e dt h a ti f n - 7 p r o d u c t i o no f n kc e i l sf r o mr s aa n dc o n t r o lh a v en od i f f a r e n c e s b u ta t2 4h o u r i f n - 7s e c r e t i o no f n kc e l l sw a sg r e a t e rt h a n4h o u r 伊 o 0 5 ) 。用c d l 6 分子结合n k 细胞后，n k 细胞对h l a - c 的转 染体仍有细胞毒作用。表明h l a c 分子在细胞表面表达对r s a 病人外周血扩 增的n k 细胞的细胞毒作用无明显影响。r s a 病人的n k 细胞的细胞毒作用与 正常个体也无显著差异。 体外扩增n k 的细胞毒作用 图6 r s a 病人体外扩增n k 细胞对j a r _ h l a c 细胞的细胞毒作用 f i g u r e 6t h ec y t o t o x i c i t yo fa m p l i f i e dn k c e i l sf r o mr s aa g a i n s t j a r h l a c 上海第二医科史学博士学位论文 第二部分 3 7 - i l a c 表达对体外扩增正常人n k 细胞分泌i f n 一丫的影响 正常人体外扩增n k 细胞与j a r - h l a c 细胞和j a r 细胞作用4 小时和2 0 小时收集细胞上清进行检测，产生i f n - 7 的结果见图7 。结果显示n k 细胞与表 达h i a c 分子的j a r 细胞作用后，其分泌的i f n - y 与不表达h l a - c 分子的j a r 细胞作用后产生的i f n 吖无显著性差异；但在共同培养2 0 小时后n k 细胞产生的 i f n y 明显高于4 小时产生的i f n 吖( p o 0 1 ) 。说明n k 细胞杀伤作用和i f n - 7 产生 并非在同一时段。 h l a c 表达对n k 分泌i f n - r 的影响 图7h l a c 表达对正常人n k 细胞产生1 f n - ? 的影响 f i g u r e7 t h ee f f e c to f h l a - co ni f n - t p r o d u c t i o no f n k c e l lf r o mc o n t r o l 3 8 h l a c 分子对体外扩增r s a 病人n k 细胞产生i f n l 的影响 r s a 病人体外扩增的n k 细胞与靶细胞作用4 小时和2 0 小时收集细胞上清 进行i f n 吖的检测，结果见表8 。测定结果显示表达h l a c 分子的j a r 细胞与 r s a 病人n k 细胞作用后，其n k 细胞分泌的i f n i y 与同j a r 细胞作用后分泌的 i f n - 7 无明显差异。但两者在2 0 小时时分泌的i f n - 7 水平都明显高于4 小时时分 泌量( p o 0 5 ) 。 5 正常人和r s a 病人体外扩增的n k 细胞与靶细胞作用4 小时和2 0 小时收集 细胞上清进行i f n 吖的检测，结果显示表达h l a - c 分子的j a r 细胞与r s a 病人n k 细胞作用后，其n k 细胞分泌的i f n 吖与同j a r 细胞作用后分泌的 i f n - y 无明显差异。但两者在2 0 小时时分泌的i f n 吖水平都明显高于4 小时 时分泌的量( p 0 0 1 ) 。同正常人n k 细胞相比r s a 病人n k 细胞产生的i f n - y 无明显变化。 6 j a r 细胞表面表达少量的h l a e 分子( 1 1 1 8 1 6 3 2 ) 。h l a - c 转染的j a r 细 胞表面表达的h l a e 分子明显增高( 3 5 7 2 4 3 4 4 ) ，比未转染的j a r 细胞表 达的h l a e 高出近2 倍。提示h l a - c 分子的表达可上调h l a - e 在j a r 细 胞表面的表达。 7 n k 细胞与h l a c 转染的j a r 细胞共培养2 4 小时后，n k 细胞表面的k i r 2 d 受体表达下调，并且n k 细胞上的c d l 6 受体表达也下调。表明在j a r 细胞 表面表达的h l a c 分子可调节n k 细胞表面相关受体的表达。 上海第二医科太学博士学位论文 参考文献 参考文献 1 n em h c s e q u e n c i n gc o n s o r t i u m ：c o m p l e t es e q u e n c e a n dg e n em a po fah u m a n m a j o r h i s c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x n a t u r e1 9 9 9 ，4 0 1 ：9 2 1 9 2 4 2 m o r e t t aa ，t a m b u s s ig ，b o t t i n oce ta 1 an o v e ls u r f a c ea n t i g e ne x p r e s s e db ya s u b s e to fh u m a nc d 3 c d l 6 + n a t u r a lk i l l e rc e i l s r o l ei nc e l la c t i v a t i o na n d r e g u l a t i o no f c y t o l y r i cf u n c t i o n je x p m e d1 9 9 0 ，1 7 1 ：6 9 5 - 7 1 4 3 m o r e t t aa ，b o t t i n oc ，p e n d ede ta 1 i d e n t i f i c a t i o no ff o u rs u b s e t so fh u m a n c d 3 一c d l 6 + n a t u r a lk i l l e r ( n k ) c e l l sb yt h ee x p r e s s i o no fc l o n a l l yd i s t r i b u t e d f u n c t i o n a ls u r f a c em o l e c u l e s ：c o r r e l a t i o nb e t w e e ns u b s e t a s s i g n m e n to fn k c l o n e sa n d a b i l i t yt o m e d i a t e s p e c i f i ca l l o a n t i g e nr e c o g n i t i o n je x pm e d 1 9 9 0 1 7 2 ：1 5 8 9 1 5 9 8 4 e l l i ss a ，s a r g e n ti l ，r e & n a nc we ta 1 e v i d e n c ef o ran o v e lh l a a n t i g e nf o u n d o nh u m a ne x t r a v i l l o u st r o p h o b l a s ta n dac h o r i c a r c i n o m ac e l ll i n e i m m u n o l o g y 1 9 8 6 ，5 9 ：5 9 5 - 6 0 1 5 s c h u s td j ，t o r t o r e l l ad ，p l o e ：曲h le ta 1 h l a - ga n dh l a - ca tt h ef e t o m a t e r n a l i n t e r f a c e ：l e s s o n sl e a r n e df r o m p a t h o g e n i cv i r u s e s c a n c e rb i o l o g y 19 9 9 ，9 ：3 7 - 4 6 6 m c c u t c h e o nj a ，g u m p e r zj ，s m i t hk de ta 1 l o wh l a ce x p r e s s i o na tc e l l s u r f a c e sc o r r e l a t e sw i t hi n c r e a s e dt u r n o v e ro fh e a v yc h a i nm r n a je x pm e d 1 9 9 5 ，1 8 1 ：2 0 8 5 2 0 9 6 7 t i b e n s k yd ，d e c a r yf d e l o v i t c ht l h l a - cg e n e sa r et r a n s c r i b e di nh l a - c b l a n k i n d i v i d u a l s i m m u n o g e n e f i c s19 8 8 ，2 7 ：2 2 0 - 2 2 4 8 c e r e bn y a n gs y n 坞r e g u l a t o r yc o m p l e xo fh l ac l a s sip r o m o t e r se x h i b i t s l o c u s - s p e c i f i c c o n s e r v a t i o nw i t hl i m i t e da l l e l i cv a r i a t i o n ji m m u n o l 1 9 9 4 ，1 5 2 ：3 8 7 3 - 3 8 8 3 9 b r a n dv m ，j o n e se y , m c m i c h e a la t h eh u m a nm a j o rh i s t o c o m p i t i b i l i t y c o m p l e xc l a s si bm o l e c u l eh l a eb i n d ss i g n a ls e q u e n c e - d e r i v e dp e p t i d e sw i t h p r i m a r ya n c h o rr e s i d u e s a tp o s i t i o n2a n d9 e u rji m m u n o l ，2 7 ，1 1 6 4 - 1 1 6 9 1 0 l i t t a u ar a ，0 l d s t o n em b a ，t i l 【e d aae ta 1 a nh l a c - r e s t r i c t e dc d 8 + c y t o t o x i ct - l y m p h o c y t ec l o n er e c o g n i z e sah i 曲l yc o n s e r v e de p i t o p eo nh u m a n i m m u n o d e f i c i e n c y v i r u st y p e1 g a g jv i r o l19 9 1 6 5 ：4 0 5 1 - 4 0 5 6 1i c h e n 3 p , l a mvk r a u se ee ta 1 r e s t r i c t i o no f e p s t e i n - b a r rv i r u s s p e c i f i c c y t o t o x i e tc e l l s b y h l a - a ，- ba n d - 4 2m o l e c u l e s h u mi m m u n o l 1 9 8 9 2 6 ：1 3 7 1 4 7 - s 8 上海第二医科大学博士学位论文 参考文献 12 v a nd e ne y n d eb ，p e e t e r so ，d e b a c k e roe ta 1 an e wf a m i l yo fg e n e sc o d i n g f o ra na n t i g e nr e c o g n i z e db ya u t o l o g o u sc y t o l y t i ctl y m p h o c y t e so nah u m a n m e l a n o m a je x pm e d1 9 9 5 1 8 2 ：6 8 9 6 9 8 13 d i l lo ，k i e v i t sf ，k o c hse ta 1 i m m u n o l o g i c a lf u n c t i o no fh l a ca n t i g e n si n h l a c w 3t r a n s g e n i cm i c e p r o cn a t la c a ds c iu s a1 9 8 8 8 5 ：5 6 6 4 5 6 6 8 1 4 l j u n g g r e nh g ，k a r r ek i ns e a r c ho ft h e m i s s i n gs e l f ：m h cm o l e c u l e sa n d n kc e l lr e c o g n i t i o n i m m u n o lt o d a y1 9 9 0 ，1 1 ：2 3 7 2 4 4 1 5 k a r r e k e x p r e s sy o u r s e l f o r d i e ：p e p t i d e s ，m h cm o l e c u l e s ，a n d n k c e l l s s c i e n c e19 9 5 ，2 6 7 ：9 7 8 9 7 9 16 m o r e t t al ，b i a s s o n irb o t t i n oce ta 1 h u m a nn k - c e l lr e c e p t o r s i m m u n o l t o d a y 2 0 0 0 s e p ；9 ：4 2 0 - 4 2 2 l7 m a r c oc o l o n n a ，a l e s s a n d r om o r e t t a ，v e l yfe ta 1 ah i g h r e s o l u t i o nv i e wo f n k - c e l l r e c e p t o r s ：s t r u c t u r ea n d f u n c t i o n i m m u n o lt o d a y2 0 0 0s e p ；9 ：4 2 8 4 3 0 18 b i a s s o n ir ，c a n t o n ic ，f a l c ome ta 1 t h eh u m a nl e u k o c y t ea n t i g e n ( h l a ) c s p e c i f i ca c t i v a t o r y o r i n h i b i t o r y n a t u r a lk i l l e rc e l l r e c e p t o rd i s p l a yh i g h l y h o m o l o g o u s e x t r a c e l l u l a rd o m a i n sb u td i f f e ri nt h e i rt r a n s m e m b r a n ea n d i n t r a c y t o p l a s m i cp o r t i o n s je x p m e d l 9 9 6 ，1 8 3 ：6 4 5 - 6 5 0 1 9 b i a s s o n ir ，c a n t o n ic ，p e n d ede ta 1 h u m a nn a r l r a lk i l l e rc e l lr e c 印t o r sa n d c o r e c e p t o r s i n n n u n o lr e v 2 0 0 1 1 8 i ：2 0 3 - 2 1 4 2 0 b i a s s o n ir ，f a l c om ，c a m b i a g g iae ta 1 a m i n oa c i ds u b s t i t u t i o n sc a ni n f l u e n c e t h en a t u r a lk i l l e r - m e d i a t e dr e c o g n i t i o no fh l a cm o l e c u l e s r o l eo fs e r i n e 7 7 a n dl y s i n e 一8 0i nt h et a r g e tc e l lp r o t e c t i o nf r o m l y s i sm e d i a t e db yg r o u p 2 o rg r o u p 1 n kc l o n e s je x pm e d 1 9 9 5 ，1 8 2 ：6 0 5 6 0 9 2 1 t a n a k aj 。m o r ia ，o h mse ta 1 e x p r e s s i o no f h l a cs p e c i f i cn a t u r a lk i l l e re e l l r e c e p t o r so np e r i p h e r a lb l o o dm o n o n u c l e a rc e l l sa f t e r d l o g e n e i cb o n em a l t o w t r a n s p l a n t a t i o n b r jh e a m a t o l2 0 0 0m a r ；10 8 ：7 7 8 7 8 3 2 2 w e n d eh ，c o l o m am ，z i e g l e rae ta 1 o r g a n i z a t i o no ft h el e u k o c y t er e c e p t o r c l u s t e r ( l r c ) o nh u m a n c h r o m o s o m e 1 9 q 1 3 4m a m m g e n o m e1 9 9 9 ，1 0 ：1 5 4 1 6 0 2 3 c h a p m a nt l ，h e i k e m a n 觚b j o r k m a n p j t h ei n h i b i t o r yr e c e p t o rl i 艮lu s e sa c o m m o n b i n d i n gi n t e r a c t i o nt or e c o g n i z ec l a s sim h c m o l e c u l e sa n dt h ev i r a l h o m o l o gu l l 8 i m m u n i t y1 9 9 9 ，1 1 ：6 0 3 - 6 1 3 2 4 c h a p m a nt l h e i k e m aa p , w e s ta p e ta 1 c r y s t a ls t r u c t u r ea n dl i g a n db i n d i n g p r o p e r t i e so ft h ed 1 d 2r e g i o no ft h ei n h i b i t o r yr e c e p t o rl i r - 1 ( l i t 2 ) i m m u n i t y 2 0 0 0 、1 3 ：7 2 7 7 3 6 5 9 上海第二医科大学博士学位论文 参考文献 2 5 l o n ge o r e g u l a t i o no fi m l n u n er e s p o n s e st h r o u g hi n h i b i t o r y r e c e p t o r s a n n ur e vi m m u n o l1 9 9 9 1 7 ：8 7 5 9 0 4 2 6 v a l e s g o m e z m ，r e y b u r nht e r s k i n e r ae ta 1 k i n e t i c sa n d p e p t i d e d e p e n d e n c y o f t h eb i n d i n go f t h ei n h i b i t o r yn k r e c e p t o rc d 9 4 n k g 2 aa n d t h e a c t i v a t i n gr e c e p t o r c d 9 4 n k g 2 ct oh l a e e m b oj1 9 9 9 1 8 ：4 2 5 0 - 4 2 6 0 2 7 k i n ga ，a l l a nd s ，b o w e nm e ta 1 h l a ei se x p r e s s e do nt r o p h o b l a s ta n d i n t e r a c t sw i t l lc d 9 4 n k g 2 r e c e p t o r s o nd e c i d u a ln kc e l l s e u rji m m u n o l2 0 0 0 j u n ；3 0 ( 6 ) ：1 6 2 3 1 6 3 1 2 8 b r a n dv m ，a l l a nd s j ，o c a l l a g h a nc ae ta 1 h l a eb i n d st on a t u r a lk i l l e r c e l lr e c e p t o r sc d 9 4 n k g 2 a ，ba n dc n a t u r e1 9 9 8 ，3 9 1 ：7 9 5 7 9 9 2 9 l a n i e rl l ，c o r l i s sb c ，w uje t a 1 i m m u n o r e c e p t o r d a p l 2b e a r i n ga t y r o s i n e b a s e d a c t i v a t i o nm o t i f i si n v o l v e di na c t i v a t i n gn k - c e l l s n a t u r e1 9 9 8 ， 3 9 1 ：7 0 3 7 0 7 3 0 b o r r e g o f ，k a b a tj ，k i md k e ta 1 s t r u c t u r ea n df u n c t i o no f m a j o r h i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x ( m h c ) c l a s s is p e c i f i cr e c e p t o r se x p r e s s e do nh u m a n n a t u r a lk i l l e r ( n k ) c e l l s 3 1 h i b ys e ，k i n ga a n ds h a r k e yae ta 1 h u m a nu t e r i n en kc e l l sh a v eas i m i l a r r e p e r t o i r eo fk i l l e r n h i b i t o r ya n da c t i v a t o r yr e c e p t o r s t ot h o s ef o u n di nb l o o d ，a s d e m o n s t r a t e db yr t - p c ra n ds e q u e n c i n g m o li m m u n o l1 9 9 7 ，3 4 ：4 1 9 - 4 3 0 3 2 a k i n g s eh i b y , l g a r d n e re ta 1 r e c o g n i t i o no ft r o p h o b l a s th l a c l a s si m o l e c u l e sb yn kc e l lr e c e p t o r s - ar e v i e w p l a c e n t a2 0 0 0 ，2 1 ，s u p p l e m e n t a ，t r o p h o b l a s tr e s e a r c h ，1 4 ，$ 8 1 - $ 8 5 3 3 p l eb o u t e i l l e r , i l s a r g e n t h l ac l a s sim o l e c u l e si nt h ep l a c e n t a ：w h i c h o n e s ，w h e r ea n dw h a t f o r ? 一a w o r k s h o pr e p o r t p l a c e n t a2 0 0 0 , 2 1 ，s u p p l e m e n t a ，t r o p h o b l a s tr e s e a r c h , 1 4 ，$ 9 3 - $ 9 6 3 4 h i b ys e ，k i n ga ，s h a r k e ya & l o k e y w ：m o l e c u l a rs t u d i e so f t r o p h o b l a s t h l a g ：p o l y m o r p h i s m ，i s o f o r m ，i m p r i n t i n ga n de x p r e s s i o ni np r e i m p l a n t a t i o n e m b r y o t i s s u ea n t i g e n1 9 9 9 5 3 ：1 - 1 3 3 5 颜卫华，范丽安等：h l a g 基因多态性与r s a 及p i h 的关联研究。中国 免疫学杂志2 0 0 1 ， 3 6 g o m e z c a s a d oe m a r t i n e z - l a s oja n dc a s t r om je ta 1 d e t e c t i o no f h l a ea n d gd n aa l l e l e sf o rp o p u l a t i o na n dd i s e a s es t u d i e s c e l lm o ll i f es c i1 9 9 9 5 6 ： 3 5 6 3 6 2 3 7 p o n t em ，c a n t o n ica n db i a s s o n ire ta 1 i n h i b i t o r yr e c e p t o r ss e n s i n gh l a - g i 6 0 上海第二医科大学博士学位论文 参考文献 m o l e c u l e si np r e g n a n c y ：d e c i d u a la s s o c i a t e dn a t u r a lk i l l e rc e l l se x p r e s sl i r - 1a n d c d 9 4 n k g 2 aa n da c q u i r ep 4 9 a nh l a g 1 一s p e c i f i cr e c e p t o r p r o cn a t la c a d s c i u s a1 9 9 9 ，9 6 ：5 6 7 4 5 6 7 9 3 8 v e r m a s k i n g aa n dl o k ey we t a 1 e x p r e s s i o n o f k i l l e r i n h i b i t o r y r e c e p t o r s ( k r ) o n h u m a nu t e r i n en kc e l l s e u rji m m u n o l1 9 9 7 ，2 7 ：9 7 9 9 8 3 3 9 o b e rc ，a l d r i c hca n dr o s i n s k ybe ta 1 h l a g 1p r o t e i ne x p r e s s i o ni sn o t e s s e n t i a lf o rf e t a ls u r v i v a l p l a c e n t a1 9 9 8m a r - a p r ；1 9 ( 2 3 1 ：1 2 7 - 1 3 2 4 0 l o k ey wa n dk i n ga i m m u n o l o g yo f i m p l a n t a t i o n b a i l l i e r e sb e s tp r a c tr e s c l i no b s t e tg y n a e c o l2 0 0 0o c t ；1 4 ( 5 ) ：8 2 7 4 1 k r a s n o wj s ，t o l l e r r u dd ja n dd e l o i aj ae ta 1 e n d o m e t r i a lt h 2c y t o k i n e e x p r e s s i o nt h r o u g h o u tt h em e n s t r u a lc y c l ea n de a r l yp r e g n a n c y h u m a nr e p r o d 1 9 9 6 ，1 l ：1 7 4 7 - 1 7 5 4 4 2 l i mk j ，o d u k o y ao aa n dc o o k ei de ta 1 p r o f i l eo f c y t o k i n em r n ae x p r e s s i o n i np r e i m p l a n t a t i o nh u m a ne n d o m e t r i u m m o lh u m r e p r o d1 9 9 8 4 ：7 7 8 1 4 3 v i v e sa b a l a s c hj , y a g u eje ta 1 t y p e 一1a n dt y p e 2c y t o k i n e si nh u m a nd e c i d u a l t i s s u ea n dt r o p h o b l a s t sf r o mn o r m a la n da b n o r m a lp r e g n a n c i e sd e t e c t e db y r e v e r s et r a n s c r i p t a s ep o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n a mjr e p r o di m m u n o l1 9 9 9 ， 4 2 ：3 6 1 3 6 8 4 4 h i l lj a ，p o l g a rk ，a n d e r s o nd je ta 1 t - h e l p e r1 - t y p ei m m u n i t yt o t r o p h o b l a s ti n w o m e nw i t hr e c u r r e n ts p o n t a n e o u sa b o r t i o n j a m a1 9 9 5 ，2 8 ：1 9 5 8 - 1 9 5 9 4 5 b i a s s o n ir ，b o t t i n oc ，m i l l ore ta 1 n a t u r a lk i l l e rc e l l - m e d i a t e dr e c o g n i t i o no f h u m a n t r o p h o b l a s t c a n c e r b i o l o g y1 9 9 9 ，9 ：1 3 1 8 4 6 w i n t e r c c ，g u m p w e zj e ，p a r h a m pe ta 1 d i r e c tb i n d i n ga n df u n c t i o n a lt r a n s f e r o fn kc e l l i n h i b i t o r yr e c e p t o r s r e v e a ln o v e l p a t t e r n s o fh l a - ca l l o t y p e r e c o g n i t i o n jh n m u n o l1 9 9 8 ，1 6 1 ：5 7 1 - 5 7 7 4 7 h u a r db 。k a r l s s o nl k i re x p r e s s i o no ns e l f - r e a c t i v ec d 8 + te e l l si sc o n t r o l l e d b yt c e l lr e c e p t o re n g a g e m e n t n a t u r e2 0 0 0 ，4 0 3 ：3 2 5 - 3 2 8 4 8 c e r e bn ，m a y ep l e ese ta 1 l o c u s - s p e c i f i ca m p l i f i c a t i o no fh l ac l a s si g e n e s f r o m g e n o m i cd n a ：l o c u s s p e c i f i cs e q u e n c e s i nt h ef i r s ta n dt h i r di n t r o n s o f h l a - a ，b ，ca l l e l e s t i s s u ea n t i g e n s1 9 9 5 ，4 5 ：1 - 8 4 9 l i t w i nv ，g u m p e r zj ，p a r h a r npe ta 1 an a t u r a lk i u e rc e l lr e c e p t o ri n v