（麻醉学专业论文）nr2b在糖尿病神经痛大鼠脊髓背角表达的变化.pdf

一 11 目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文脊髓背角n r 2 b 在糖尿病神经痛形成过程中的作用 前言”一”一一”一“一”一一”0 8000 0000 一6 一 日l j 舌”“”“一一”一”“一“”一” “”一”一一一“。 材料和方法o 00bo0000 7 结果1 1 附i 图一一一1 2 附表1 5 讨论17 结论2 1 参考文献2 2 综述n m d a 受体n r 2 b 亚基在疼痛调节中的研究进展2 4 致谢32 个人简历3 3 中文摘要 n r 2 b 在糖尿病神经痛大鼠脊髓背角表达的变化 摘要 目的：糖尿病神经病变是糖尿病最常见的慢性并发症之一，其发病率 逐年增高，感觉神经病变即糖尿病神经痛性病变是其中最为常见的，约占 3 0 ，其发病机制及病理生理机制十分复杂。脊髓背角的各种神经递质和 受体在糖尿病神经病理性痛等慢性疼痛时可发生一系列改变。n m d a 受 体是一种配体门控离子型谷氨酸受体，是兴奋性氨基酸受体系统的重要组 成部分。n m d a 受体不仅参与学习记忆、突触可塑性及神经发育等生理 功能的调节，而且，在疼痛、神经退行性变、癫痫等病理过程中发挥重要 作用。n m d a 受体是由n r l 和n r 2 亚单位组成的异五聚体。n r 2 b 亚单 位对n m d a 受体的结构和功能起着十分重要的作用，通过多种方式调节 n m d a 受体的功能活性，其改变将影响机体n m d a 受体系统的功能，进 而影响痛觉信息在脊髓背角的整合、传递和调控。本实验通过左下腹腔注 射链尿佐菌素( s t z ) ，制备糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型。观察比较糖 尿病大鼠( d m ) 与正常大鼠( c o n t r 0 1 ) 在体重、空腹血糖和5 0 缩足反应阈 值( p w t ) 等方面的变化。采用免疫组织化学染色方法，比较糖尿病神经 痛大鼠与正常大鼠脊髓背角n r 2 b 的表达变化，从而探讨n r 2 b 在糖尿 病神经病理性痛形成中的变化及作用，以期发现新一代治疗慢性疼痛药物 的治疗靶点。 方法：健康雄性s d 大鼠6 0 只，体重1 3 0 克1 5 0 克，实验前测定所 有大鼠的体重、空腹血糖和5 0 缩足反应阈值( v w r ) 。随机取4 8 只大鼠 左下腹腔注射s t z ( 6 0 m g k g ) 制备糖尿病模型。s t z 注射7 天后，3 0 只 大鼠所测空腹血糖 1 6 7 m o l l ，为成功的糖尿病大鼠模型，其余1 8 只大 鼠空腹血糖 1 6 7 m o l l 被剔除实验，模型制备成功率为：6 3 。s t z 注射 1 4 天后，用v o nf r e y 针测定大鼠的5 0 缩足反应阈值( p w t ) ，p w t 小于 4 9 者为糖尿病神经痛大鼠模型。另外1 2 只正常大鼠腹腔注射相同量的生 理盐水( c 组) ，用作与注射s t z 相对比的正常对照组。 随机取糖尿病神经痛大鼠2 0 只( d 组) 和正常大鼠1 2 只( c 组) 进行 行为学及分子生物学实验。确定4 个取材点，分别定为注射s t z 后2 周、3 中文摘要 周、5 周、7 周。根据取材时间点不同，将2 0 只d 组大鼠分成4 组( n = 5 ) ： d 2 组、d 3 组、d 5 组、d 7 组；1 2 只正常大鼠也分为4 组( n _ 3 ) ：c 2 组、c 3 组、c 5 组、c 7 组。两组分别于腹腔注射后2 周、3 周、5 周、7 周测量各大 鼠的体重、空腹血糖及5 0 缩足反应阈值变化，然后取材。大鼠取材时， 均用4 多聚甲醛灌流固定，取脊髓胸腰段膨大处置于4 多聚甲醛固定， 蜡块包埋，进行免疫组织化学染色，测定大鼠脊髓背角n r 2 b 的免疫阳性 神经细胞数。所得数据以平均数士标准差( 娃s ) 表示，采用s p s s l 7 0 统计软 件包进行秩和检验、单因素方差分析、组内t 检验和相关性分析，p o 0 5 ) 。两组大鼠各对应时间点相比，d 组大 鼠体重明显较c 组大鼠降低( p o 0 5 ) ，d 组大鼠空腹血糖明显较c 组大鼠 增高( p o 0 5 ) ，d 组大鼠p w t 明显较c 组大鼠降低( p o 0 5 ) 。 2n r 2 b 在大鼠脊髓背角的表达变化( 见附表) ：与c 组正常对照组 相比，d 组注射s t z 后2 周、3 周、5 周、7 周的糖尿病神经痛大鼠脊髓背角 n r 2 b 免疫阳性神经元细胞数明显增加( p o 0 5 ) ，在3 周时n r 2 b 免疫阳性 神经元细胞数量达到最多，5 周时开始出现下降，在7 周时明显下降。 结论：脊髓背角n r 2 b 在脊髓水平参与调节了大鼠糖尿病神经病理性 痛的调节。 学。 关键词：糖尿病；神经病理性疼痛；脊髓背角；n r 2 b ；免疫组织化 英文摘要 r o l e so fn r 2 bi nt h es p i n a ld o r s a lh o r no fr a t s w i t hd i a b e t i cn e u r o p a t h i cp a i n a b s t r a c t o b j e c f i v e ：a sw ek o n w , t h en e u r o p a t h i e sa r eo n eo ft h em o s tc o m m o n l o n g t i m ec o m p l i c a t i o n so fd i a b e t e s ，a n dt h em o r b i l i t yi n c r e s e se v e r yy e a r m lh e p a t h o l o g i c a lc h a n g e s o fs e n s o r yn e r v ei sm o s tc o m m o ni nt h e n e u r o p a t h i e sw h i c ht a k ep a r ti na b o u t3 0 t h em e c h a n i s m so fd i a b e t i c n e u r o p a t h i cp a i na r ev e r yc o m p l e xa n dt h em a n a g e m e n ti ss t i l lq u i t ed i f f i c u l t s t u d i e so nt h et r a n s m i t t e rp h m a r a e o l o g yh a v ei n d i c a t e dt h a tt h e r ee x i s t e d c h a n g e so fn e u r o t r a n s m i t t e r sa n dr e c e p t o r s i n s p i n a l c o r di n d u c e db y n e u r o p a t h i cp a i n c h a n g e so f 凇bc o u l da f f e c tt h et r a n s m i s s i o na n d m o d u l a t i o no fn o c i c e p t i v em e s s a g e s t h ep e r s e n ts t u d yi st oe x p l o r ec h a n g e so fn i 也bi ns p i n a lc o r dd o r s a l h o r no fr a t sw i t hd i a b e t i cn e u r o p a t h i cp a i ni n d u c e db ys t z c h a r a c t e r i s t i c b e h a v i o r a l c h a n g e s w e r eo b s e r v e dt oa f f e c t h y p e r a l g e s i a a n d f a s t i n g b l o o d - g l u c o s eb e t w e e nt h eg r o u p so fd m a n dc o n t r o l ，a n dw ea l s oo b s e r v et h e c h a n g eo f5 0 p a ww i t h d r a wt h r e s h o l d ( p w t ) o fr a t sw i t hd i a b e t i c n e u r o p a t h i cp a i n m e t h o d so fi m m u n o h i s t o c h e m i s t r yw a sa p p l i e dt oe x a m i n e t h ee x p r e s s i o no fn i 迎bi ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r n s t u d i e sa b o u tt h ec h a n g e s o fn i 也bi ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r nc o u l dh e l pf i n d i n go u tm o r es p e c i f i c t a r g e t so ft r e a t m e n tf o rd i a b e t i cn e u r o p a t h i cp a i n m e t h o d s ：6 0m a l es p r a g u e d a w l e yr a t sw e r er a n d o m l ys e l e c t e df o rt h i s e x p e r i m e n t ，w e i g h i n g13 0 9 一15 0 9 b o d yw e i g h t s ，f a s t i n gb l o o dg l u c o s el e v e l a n d5 0 p a ww i 也d r a wt h r e s h o l do fa l lt h er a t sw e r em e a s u r e db e f o r es t z i n j e c t i o n 4 8 r a t sw e r ei n d u c e dw i t has i n g l e i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no f s t r e p t o z o c i n ( 6 0 m g k g ) 硒d i a b e t e s a to n ew e e ka f t e rs t zi n j e c t i o n ，3 0r a t s w h o s e f a s t i n gb l o o dg l u c o s el e v e li n c r e a s e du pt o16 7 m m o l lw e r ec o n s i d e d a sd i a b e t i cr a t s ，a n dt h er a t i oi s6 3 a tt w ow e e ka f t e rs t zi n j e c t i o n r e s p o n s e st ot h em e c h a n i c a ls t i m u l u so fd i a b e t i cr a t sw e r em e a s u r e dw i t hv o n 3 英文摘要 f r e yf i l a m e n t ，a n d w h o s e5 0 p a ww i t h d r a wt h r e s h o l d ( p w t ) w e r ed o w nt o 4 9w e r ec o n s i d e da sd i a b e t i cn e u r o p a t h i cp a i nm o d e l s a n o t h e r12r a t sw e r e w e r ei n t r a p e r i t o n e a li n j e c t e do fs a l i n ea sc o n t r o l s 2 0d i a b e t i cr a t sa n d12n o r m a lr a t sw e r er a n d o m l ys e l e c t e df o rb e h a v i o r a l a n db i o l o g ye x p e r i m e n t 2 0d i a b e t i cr a t sw e r es e p a r a t e di n t o4g r o u p sb y d i f f e r e n tt i m ep o i n t sa t2 ，3 ，5 ，7w e e ka f t e rs t zi n j e c t i o n b o d yw e i g h t s ， f a s t i n gb l o o dg l u c o s el e v e la n dp w tw e r em e a s u r e di nd i a b e t i ca n dc o n t r o l r a t si ne v e r yt i m ep o i n t a t2 ，3 ，5 ，7w e e ka f t e rs t zi n j e c t i o n ，d i a b e t i cr a t s w h i c hp w tw e r ed o w nt o4 9w e r es a c r i f i c e da n di n t u m e s c e n c es e g m e n t so f s p i n a lc o r dw e r ec o l l e c t e df o ra n a l y s i so f n r 2 bi nt h es p i n a lc o r dd o r s a lh o r n f o ri m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 12c o n t r o lr a t sw e r es a c r i f i c e df o ra n a l y s i so f n r 2 ba t2 , 3 ，5 ，7w e e ka f t e rn o r m a ls a l i n ei n j e c t i o n d a t aa n a l y s i sa n ds t a t i s t i c s d a t aw e r ee x p r e s s e da sm e a n + s e m t h e r e s u l t sw e r ea n a l y z e db yr a n k - s u mt e s to fv a r i a n c e ( a n o v a ) v a l u e so f p 0 0 5w e r ec o n s i d e r e da ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t r e s u l t s ： 1b e f o r es t zi n j e c t i o n ，t h el e v e lo fb o d yw e i g h t s ，f a s t i n gb l o o dg l u c o s e a n d5 0 p a ww i t h d r a wt h r e s h o l dh a dn os t a t i s t i c a ld i f f e r e n c eb e t w e e n d i a b e t i ca n dc o n t r o lg r o u p s t oc o m p a r ew i t hc o n t r o lg r o u p ，t h el e v e lo f f a s t i n gb l o o dg l u c o s ei nd i a b e t i cg r o u pi n c r e a s e dd r a m a t i c a l l ya t2 ，3 ，5 ，7 w e e ka f t e rs t zi n j e c t i o n ( p o 0 5 ) ，w h i l ei ta s l oh a ds i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a l d i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t hi tw a sb e f o r es t z i n j e c t i o n ( p o 0 5 ) b o d yw e i g h t s a n d5 0 p a ww i t h d r a wt h r e s h o l dd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya f t e rs t zi n je c t i o n i nd i a b e t i cg r o u p ( p o 0 5 ) ，a n da s l ot h e yh a ds i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e c o m p a r e dw i t ht h e yw e r e b e f o r es t z i n j e c t i o n ( p 1 6 7 m o l l ( 成功率为6 3 ) ，为成功的糖尿病模型，其余1 8 只大鼠空腹 血糖 1 6 7 m o l l 被剔除实验。3 0 只糖尿病大鼠继续观察7 天后( 即s t z 注射 后1 4 天) ，应用v o nf r e y 针测定大鼠的5 0 缩足反应阈值( p w t ) ，小于4 9 者 为糖尿病神经病理性痛大鼠。另外1 2 只正常大鼠同时腹腔注射相同量的生 理盐水作为正常对照组( c 组) ，用于与注射s t z 的实验组做对照即对照验。 实验分为两部分： 第一部分( 行为学实验) ：所有大鼠在腹腔注射前测体重、空腹血糖、 5 0 缩足反应阈值( p w t ) ，在腹腔注射后分别测2 周、3 周、5 周、7 n 的体 重、空腹血糖、5 0 缩足反应阈值( p w t ) ，并比较各项数据指标的变化。 第二部分：取出2 0 只糖尿病大鼠( d 组) 及1 2 只正常大鼠( c 组) 进 行形态学及分子生物学实验。分别将腹腔注射后2 周、3 周、5 周、7 n 确定 为4 个测量点和取材点。根据时间点不同，将2 0 只糖尿病神经痛大鼠分为4 组：d 2 、d 3 、d 5 、d 7 ，每组5 只，将1 2 只正常对照组大鼠分为4 组：c 2 、 c 3 、c 5 、c 7 ，每组3 只；分别于腹腔注射后2 周、3 周、5 周、7 n 取材。d 组所取材的糖尿病大鼠均需p w t 4 9 为标准。c 组大鼠于2 周、3 周、5 周、 7 n 时取材。两组大鼠取材时，均用4 多聚甲醛灌流固定，然后取脊髓的 胸腰段膨大处进行免疫组织化学染色，测定大鼠n r 2 b 在脊髓背角表达的 免疫阳性神经元细胞数量。 5行为学测定 研究论文 将大鼠置于金属网上，盖以透明的有机玻璃罩，根据c h a p l a n 等【3 1 1 9 9 4 年报道的“u p a n d d o w n 方法测量大鼠的p w t 。保持实验室环境安静，大 鼠适应环境至少15 m i n 以上，待大鼠的探究和梳理活动基本消失保持安静 后，开始测量大鼠的p w t ，采用标准化的v o nf r e yh a i r s 垂直刺激大鼠后 肢足底中部，使其弯曲成s 形，并持续6 8 s ，观察大鼠的缩足反应，大鼠 在受刺激时间内出现快速缩足反应或者舔足，记为阳性反应，如果因为身 体活动引起的缩足反应则不记做阳性，测量直到出现第一次阳性反应和 阴性( 或阴性和阳性) 反应的交接处，再向下一级连续测量4 次。如果测试 完最大或最小力度的v o nf r e yh a i r s 均不出现阳性反应，则大鼠的5 0 缩足 反应阈值算作1 5 9 或0 2 5 9 。5 0 缩足反应阈值采用d i x o n ( 1 9 8 0 ) 【4 】报道的方 法计算。采用下列公式计算5 0 缩足反应阈值：5 0 缩足阈值( g ) - - 1 0 t x f + k s ， 其中x 伪最后一次应用v o nf r e yh a i r s 的力度的l o g 值，6 为相邻v o nf r e y 探 针力度l o g 值之间差值的平均值即o 2 2 4 ，k 为阳性反应和阴性反应类型的查 表值。0 2 5 9 是本种方法可测量到的最d , 5 0 缩足反映阈值，1 5 9 是本种方 法可测量到的最大5 0 缩足阈值。本实验中5 0 缩足阈值小于4 9 标准的大 鼠被认为是成功的糖尿病神经痛大鼠模型。 6 观察指标 两组大鼠于腹腔注射后2 周、3 周、5 周、7 周测量糖尿病神经痛大鼠大 鼠体重及空腹血糖值，并于各时间点利用v o nf r e y 针测定大鼠5 0 缩足反 应阈值( p w t ) 。d 组大鼠分别于注射s t z 后2 周、3 周、5 周、7 周取材，取 材的糖尿病大鼠需p w t 4 9 ，c 组对照组大鼠于上述时间点同时取材，每 次取3 只，取材后制备蜡块，采用免疫组织化学染色方法，检测大鼠脊髓 背角n r 2 b 的免疫阳性神经元细胞数。 7 实验方法：免疫组织化学染色 7 1 标本取材 采用1 戊巴比妥钠5 0 m g k g 腹腔注射的方法麻醉大鼠，麻醉后将大鼠 迅速开胸并经左心室至升主动脉置管，再在右心房处剪一小口，可使血液 和冲洗液流出。先用2 0 0 m l 生理盐水快速冲去血液，随后即刻用含4 多聚 甲醛的磷酸缓冲液( o 1 m o l l ，p h 7 2 ) 先快后慢灌注固定1 h ，然后解剖取脊 髓胸腰段膨大处，置于4 多聚甲醛固定液中固定，梯度酒精脱水，二甲 苯透明，常规石蜡包埋、切片，切片厚1 0 p m 。 研究论文 7 2 实验步骤 1 ) 切片脱蜡( 二甲苯5 m i n x 2 次，无水酒精2 m i n ，9 5 酒精3 0 s ) 2 ) 磷酸盐缓冲液( p b s ) 5 m i n x 2 次 3 ) 切片入抗原修复盒中，修复液为e d t a ，高压修复8 m i n 。缓慢凉至室 汨 皿 4 ) p b s 液洗5 m i n x 2 次 5 ) 擦干切片，滴j j h 3 的h 2 0 2 封闭内源性过氧化物酶，3 7 。c 孵育2 0 m i n 6 ) p b s 液洗5 m i n x 2 次 7 ) 滴加胰酶3 7 孵育1 0 m i n 8 ) p b s 液洗5 m i n x 2 次 9 ) 滴加山羊血清封闭液1 ：1 53 7 孵育2 0 m i n 1 0 ) 滴力i n r 2 b - - 抗，l ：2 0 0 稀释，4 。c 孵育过夜 1 1 ) 次日，p b s 液洗5 m i n x 3 次 1 2 ) 滴加二抗羊抗兔血清3 7 孵育4 0 m i n 1 3 ) 蒸馏水洗5 m i n x 3 次 1 4 ) 滴加新鲜配置的d a b 液，镜下控制显色 1 0 ) 自来水冲洗终止显色 11 ) 苏木素复染细胞核2 m i n 分化3 0 s 反蓝3 0 s 1 2 ) 梯度酒精脱水，二甲苯透明2 m i n x 2 次 1 3 ) 中性树脂封片 8 图像采集与分析 采用m o t i cd i g i t a li m a g e 病理图像采集与分析软件进行免疫组织化学 染色的图像处理，在显微镜1 0 x 2 0 高倍视野下计数在脊髓背角n r 2 b 的阳 性表达数量，每实验组大鼠随机抽取5 个视野计数后计算其平均数值进行 分析。 9 统计学处理 计量数据以平均数4 - 标准差( 娃s ) 表示，采用s p s s17 0 统计软件包进行 秩和检验、单因素方差分析、组内t 检验和相关性分析，p 0 0 5 表示差异 有统计学意义。 研究论文 结果 1 糖尿病大鼠的行为学变化 1 1 一般观察：c 组大鼠毛色柔软光滑，每日饮食、饮水、尿量正常，性 格温顺，个体较大，尾静脉采血时血量正常，且愈合较快；而d 组大鼠逐 渐出现毛发稀少，毛色暗淡，饮水、进食及尿量粪便量明显增加，体重增 长缓慢、个体瘦小、活动减少，出现畸形、易感染等表现，尾静脉采血血 量少，愈合缓慢，甚至有烂尾现象出现。 1 2 体重变化：两组大鼠在腹腔注射前均测量体重，所得结果相比较没有 统计学意义。d 组大鼠的体重在注射s t z 后出现增加，此后各时间点体重 虽逐渐增加，但上升较c 组大鼠缓慢；c 组大鼠体重随周龄逐渐增加，且 体重增长快，d 组大鼠与同时间点c 组大鼠相比体重明显较低( p o 0 5 ) 。( 见 附表1 ) 1 3 血糖变化：两组大鼠在腹腔注射前，均测量空腹血糖，所得结果相比 较没有统计学意义。d 组大鼠在注射s t z 后，各时间点空腹血糖较c 组大 鼠显著升高( p o 0 5 ) ，并且与d 组大鼠s t z 注射前空腹血糖相比亦显著升高 ( p o 0 5 ) ；c 组大鼠空腹血糖基本正常，随周龄增加无明显变化。( 见附表 2 ) 1 45 0 缩足反应阈值变化：d 组大鼠在注射s t z2 周后，5 0 缩足反应 阈值相较c 组有明显下降( p o 0 5 ) ，并且其下降维持至注射s t z 后的第7 周；d 组大鼠注射后各时间点p w t 值与注射前相比，均有统计学意义 ( p o 0 5 ) 。c 组大鼠5 0 缩足反应阈值随周龄增长无明显变化。( 见附表3 ) 2n r 2 b 在脊髓背角的表达变化 免疫组织化学染色：n m d a 受体的阳性信号主要位于细胞浆内，包膜 着色较深，主要集中表达在脊髓背角，脊髓前角神经元也有少量阳性颗粒。 光镜下，n r 2 b 阳性神经元主要分布在脊髓背角浅层，尤其是i i 板层，阳 性细胞形态各异，大小不一，呈深棕色，细胞膜及细胞浆均着色。与正常 c 组比较，d 组注射s t z 后2 周、3 周、5 周、7 n 的糖尿病神经痛大鼠脊髓 背角n r 2 b 免疫阳性神经元细胞数明显增加( p o 0 5 ) ，3 周时数量达到高 峰，在5 周时有下降趋势，7 n 时明显下降。( 见附表4 ) 研究论文 一 附图 f i g 1i m m u n o r e a c t i v i t yo fn r 2 bi ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r ni nd i a b e t i cg r o u p a t2 w e e ka f t e rs t z i n j e c t i o n ( x 2 0 0 ) f i g 2i m m u n o r e a c t i v i t yo fn r 2 bi ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r ni nd i a b e t i cg r o u p a t3 w e e ka f t e rs t z i n j e c t i o n ( x 2 0 0 ) 1 2 研究论文 f i g 3i m m u n o r e a c t i v i t y o fn r 2 bi ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r ni nd i a b e t i cg r o u p f i g 4i m m u n o r e a c t i v i t yo fn r 2 b i ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r ni nd i a b e t i cg r o u p a t7 w e e ka t t e rs t z i n j e c t i o n ( x 2 0 0 ) 1 3 研究论文 f i g 5i m m u n o r e a c t i v i t yo fn r 2 b i ns p i n a lc o r dd o r s a lh o r ni nc o n t r o lg r o u pa t 3w e e k ( 2 0 0 ) f i g 6i m m u n o r e a c t i v i t yo fn r 2 b i ns p i n a lc o r dd o r s a lh o mi nc o n t r o lg r o u pa t 7w e e k ( x 2 0 0 ) 1 4 研究论文 附表 t a b l e1t h ec o m p a r i s i o no nw e i g h tb e t w e e nd i a b e t i ca n dc o n t r o lg r o u p ( g ，n = 5 ，娃s ) g r o u p 2 w e e k3w e e k5w e e k7 w e e k c2 4 8 4 0 j ：11 0 73 0 5 5 0 - a ：1 0 8 03 7 0 1 0 士1 0 2 34 2 0 4 0 - a ：1 5 9 1 d1 7 5 9 0 - a ：1 2 7 6 1 9 0 4 0 士1 4 5 5 2 0 8 8 0 - a ：1 5 0 3 2 3 2 8 0 - a ：l5 8 6 c o m p a r e d w i t hc o n t r o lg r o u p ，p 0 0 5 t a b l e2t h ec o m p a r i s i o no nf a s t i n gb l o o dg l u c o s eb e t w e e nd i c b e t i ca n d g r o u p 2 w e e k3w e e k5w e e k7 w e e k c5 8 钍o 5 35 1 6 士0 9 14 8 5 i - 0 8 25 8 9 士o 6 0 d2 4 0 5 士3 8 2 2 5 0 8 士4 3 9 2 6 3 7 士3 2 5 2 5 6 7 士3 8 9 c o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，p 0 0 5 c o m p a r e dw i t hd i a b e t i cg r o u pb e f o r es t zi n j e c t i o n ，p 0 0 5 t a b l e3t h ec o m p a r i s i o no n5 0 p a ww i t h d r a wt h r e s h o l db e t w e e n d i c b e t i c a n dc o n t r o lg r o u p ( g ，n = 5 ，文士s ) g r o u p 2 w e e k3 w e e k5w e e k7 w e e k c1 2 11 ：1 ：3 7 l1 1 9 1 ：1 ：3 8 6l o 5 6 士2 9 71o 2 3 士2 5 5 d3 3 2 士1 6 73 1 3 士1 6 5 a3 2 8 士1 5 1 3 1 4 士1 6 1 c o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，p 0 0 5 c o m p a r e dw i t hd i a b e t i cg r o u pb e f o r es t zi n j e c t i o n ，p 0 0 5 1 5 研究论文 t a b l e4t h e c o m p a r i s i o no ni m m u n o r e a c t i v i t yo f n r 2 br e c e p t o r si ns p i a n l c o r dd o r s a lh o r ni nd i a b e t i ca n dc o n t r o lg r o u p s ( n = 5 ，x 士s ) g r o u p 2 w e e k3 w e e k5 w e e k7 w e e k c4 4 1 4 士4 5 14 0 1 4 ：1 ：3 5 64 3 1 牡4 1 84 1 7 5 士5 8 9 d 6 1 2 3 士6 3 4 * l31 6 5 士9 6 8 拌 10 8 8 9 士17 0 4 撑6 8 5 6 士5 5 2 * c o m p a r e d w i t hc o n t r o lg r o u p ，p 0 0 5 ，p 0 0 1 ； c o m p a r e d w i t h2 w e e k ，挣p 1 6 7 m o l l ，p w t 值 海马 纹状体 上丘 脑干 视网膜 小脑 下丘 脑，而嗅球、海马、皮质以及纹状体都在前脑。这些研究表明n r 2 b 有前 脑的优势分布。在本实验中，在光镜下观察，n r 2 b 在大鼠脊髓的背角 均有免疫阳性神经元细胞的表达；在脊髓背角，n r 2 b 阳性神经元细胞主 研究论文 要分布在脊髓背角浅层( i i i 层) ，尤其是i i 板层；阳性细胞大小不一， 形态各异，呈深棕色，细胞浆及细胞膜均着色。 n r 2 b 在痛觉信息传递中的作用。外周的伤害性刺激引起初级传人神 经纤维末梢释放兴奋性氨基酸( b 蚣) 和一些其他神经递质，从而激活 n m d a 受体，使c a + 内流过多，进而激活蛋白激酶c ( p k c ) ，导致生成 传递伤害性信息的介质( 如n o ) 增多等一系列反应，诱发脊髓及其它中 枢神经系统产生兴奋性，引起脊髓水平的中枢敏感化，导致产生神经病理 性疼痛。在痛觉过敏的产生和维持中n m d a 受体发挥着重要作用，它在 激活启动细胞内级联放大效应，引起正反馈性神经元兴奋性增高方面起着 关键作用。应用电生理学方法可观察到，在脊髓内离子渗透n m d a 时可诱 导脊髓后角神经元对有害刺激的反应出现增强，使用n m d a 受体拮抗剂 时则可以减轻大鼠神经损伤引起的机械性触诱发痛和热痛觉过敏，还可减 少外周神经损伤引起的动物白残行为【1 6 】。m a 等【1 7 】用免疫组化技术发现， n r 2 b 表达在7 0 的c 纤维和a6 纤维传入末梢，表明n r 2 b 是突触前膜 的主要表达，因此推测在脊髓水平痛觉信息传递中n r 2 b 可能起到重要作 用。陈建平等【1 8 】研究发现s n i 诱导的慢性神经病理性痛大鼠腹腔注射n r 2 b 抗体，可通过下调脊髓组织中n r 2 b 的高表达产生镇痛效应。这些研