药物分析维生素类药物的分析.ppt

药物分析维生素类药物的分析,维生素类药物,维生素又称为维他命（Vitamin），从结构上看，维生素类药物没有很强的共性特征，不同的维生素有不同的结构和性质。按溶解度来说，维生素可以分为脂溶性维生素和水溶性维生素。前者常在油状物中存在，如鱼肝油中富含丰富的维生素A和E。本章主要讲述维生素A、维生素E、维生素B1、维生素C。,维生素类药物,脂溶性维生素,维生素A维生素D维生素E维生素K,水溶性维生素,维生素B维生素C,维生素B1维生素B2维生素B4维生素B6维生素B12,1.结构与特点,环己烷,共轭多烯醇（四）支链,全反式维生素A（天然）,根据双键的顺反VA的立体异构体应有16种，但由于空间位阻实际上只有6种存在。,维生素A的分析,醋酸酯棕榈酸酯,醇,6种立体异构体,6种立体异构体,2.官能团与分析方法,SbCl3（SbCl5）,（RCOOSbCl5）,CHCL3中,618620有强吸收，可用于鉴别、含测（无水，1，10秒内测定）定性，定量。.245,共轭双键的紫外吸收,无水乙醇中有一个单峰，当在酸催化下脱水生成脱水VA,增加一个双键，吸收红移，同时在350390出现三个峰。,亮蓝色,紫红色,第一次测定,第二次测定,3含量测定,各国药典均采用UV法，相对简单、可靠。但VA原料、制剂中含有相当量的VA2、VA3、VA醛、VA酸、中间体、稀释用油等，对其构成干扰。研究中发现干扰成分的吸收在316、328、340成一直线，所以建立了三点校正法。,A328(校正)=3.52（2A328A316A340）,（1）测定Ai和计算Ai/A2（328）将Ai/A2与药典规(5波长)定值进行比较(P.249)，如果差值：均不超过0.02,不用校正,直接用A2计算含量或标示量有一个波长处Ai/A2超过0.02者,则计算误差然后用下一原则.,分析原则为：,误差-15-303,用第二法测定,用A328(校正)计算用A328计算,用第二法测定,A328(校正)=3.52（2A328A316A340）,（2）样品含量及标示量的计算,样品的含量是以效价（IU/g）表示,效价-每g样品中所含维生素A的国际单位数,换算因子=已知:1IU=0.300ug全反VA醇;1IU=0.344ug全反VA醋酸酯全反VA醇E1%(异丙醇)325nm=1820;全反VA醋酸酯E1%(环己烷)328nm=15301000,000ug所以：VA醋酸酯的换算因子=0.344ug=1900,效价（IU/g),E1CM,1,1530,效价（IU/g）,单位E1%相当的效价,则样品的含量（以IU/g表示）P（IU/g）VA醋酸酯=E1%（328）1900,E1%（328）=,A328（校正）,100WL,D,100是将样品浓度由g/ml换成g/100ml见P.248,样品的标示量%=含量/标示量100%,对样品进行皂化，提纯后再测定。（提取物为VA醇，溶剂为异丙醇，）其A315（校正）=6.815A3252.555A3104.260A334IU/g=E1%1830,（3）第二法,稀释体积,其A315（校正）=6.815A3252.555A3104.260A334IU/g=E1%1830,维生素B1的分析,.结构,嘧啶亚甲基噻唑连成的季铵盐化合物,白色结晶或结晶性粉末，吸水性强，易溶于水。,.官能团与分析方法,HCl,二个碱性基团,可与多数生物碱沉淀剂,三硝基酚K2HgI4I2,生成组成恒定的沉淀可用于鉴别和含量测定。,可用非水碱量法进行含量测定。,硫化铅反应硫色素反应,样品,NaOH,开环,-H2O,KFe(CN)6,合环,O,硫色素蓝色荧光，加H荧光消失加OH荧光又出现。用于鉴别和含量测定。P.258,Na2S,Pb(Ac)2,PbS,黑鉴别,-2H,NaOH,共热,KFe(CN)6,非水滴定法（ChP所用方法）,3.含量测定,硅钨酸重量法硫色素荧光法紫外分光光度法,246nm,维生素C的分析,1.化学结构,特点：六碳五员环内酯(四羟基烯醇)，分子中具有2个手性C原子，具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸,D(-)-异抗坏血酸,L(+)-异抗坏血酸,L(+)-抗坏血酸,D(-)-抗坏血酸,.官能团与分析方法,内酯结构,碱性水解。,烯二醇结构酸性。C3-OH，pKa=4.17(共轭效应)C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基)一元酸.能与Na2CO3作用生成钠盐。,还原性,去氢抗坏血酸,L-二酮古罗糖酸,VC的结构很象糖结构，具有糖的反应,蓝色荧光,邻苯二胺,去氢抗坏血酸,鉴别CP,反应的摩尔比是11,3.含量测定,a.碘量法,操作,终点颜色：无色蓝色1ml0.05mol/L碘液1ml8.806mgC6H8O6,酸性，使VC在空气中氧化速度减慢。溶剂新沸放冷的水，减少水中溶解氧的影响。还原性物质的影响及排除，注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂.排除：加入丙酮或甲醛。,反应条件,在酸性下2,6-二氯吲哚酚氧化型是红色的;还原型是无色的酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。,b.2,6-二氯吲哚酚滴定法,氧化型（红色）,还原型（无色）,终点的颜色是溶液由无色变为红色。,维生素E的分析,一.结构,苯并二氢吡喃醇醋酸酯十三烷,旋光性：天然VE为右旋体，合成VE为消旋体。性状：黄色透明的黏稠液，溶于有机溶剂，不溶于水。紫外吸收：苯环的共轭结构。易水解及氧化变色（酚羟基）。,生育酚,二.官能团与分析方法,Ar-OH,H,HNO3,生育红,KOH,75,Fe3,Fe2,Fe,3,2,UV,血红色,VE的0.01%无水乙醇液：max=284nmmin=254nmCP性状,对生育醌,生育酚,cp鉴别,Ce(SO4)2,Fe3,紫红色,维生素E的鉴别,检查游离生育酚:ChP2000P.798取0.1g样品，按铈量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，消耗Ce(SO4)2液不得超过1.0ml。亮黄灰紫反应式，计算P.275,3.杂质检查,a.铈量法原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。终点：亮黄灰紫空白试验反应的摩尔比是12,4.含量测定,反应条件：VE在H2SO4酸性条件下水解为宜，碱性溶液中游离生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行,如在碱性中会生成碱式盐而影响测定。Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,生育酚溶于醇而不溶于水,滴定过程中应有一定浓度的乙醇。本法适用于纯度高的VE供试品。,b.气相色谱法：Chp2000色谱条件及系统适应性试验色谱柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱，内装硅藻土（80100目）固定相：硅酮（OV-17）涂布浓度2%载气：N2，流速:含2%固定相：以1820分钟为宜；含5%固定相：以3032分钟为宜,柱温：265内标：正三十二烷检测器：FID（氢火焰离子化检测器）性能要求：理论塔板数按VE峰计算应不低于500，VE峰与内标物质峰的分离度应大于2。溶液配制：内标溶液：正三十二烷的环己烷溶液（1.0mg/ml）,对照溶液：对照品溶解于内标溶液中(1mg/ml)供试品溶液：供试品约50mg，用内标溶液，溶解并稀释至50ml4、供试品测定。mg=FAxMs/AsAx：供试品峰面积F：校正因子As：内标物的峰面积特点：简便快速、专属性强，适用于VE、VE制剂及多种维生素制剂中VE的测定。,电位滴定法原理和方法：电位滴定的仪器装置如图在化学反应计量点（附近）,离子浓度发生根本的变化,引起指示电极电位发生相应的突变如用AgNO3滴定Cl,化学反应计量点前,过剩的是Cl或者Cl为主体离子,计量点时CCl-CAg+（KspAgCl）,计量点后Ag+为主体离子,溶液的性质发生了改变,电极电位也发生质的变化.,电位滴定法是在滴定过程中,借助指示电极的电位突变从而确定终点的分析方法间接电位法,每加入0.1mL0.2ml，测量一次电动势,电位滴定法的基本原理及装置,加入AgNO3溶液的体积V/mL,2.终点的确定方法:（1）图解法EV作图法.（2）一阶微商法E/VV作图法.（3）二阶微商法2E/V2V作图法.（4）二阶微商内插法比例法.,2滴定终点的确定,E-V曲线法,终点,一阶导数曲线法E-V滴定曲线的突跃范围，实际上是曲线斜率变化最大的范围，曲线的拐点就是滴定终点。,终点,E/V,V,2,2,0,终点,在线图上，此点所对应的滴定剂体积是V1和V2的平均值：,计算时，与相应的滴定剂体积V，是相邻两次加入体积的平均值。,V=(v1+v2)/2=24.15ml,E,V,3.各种类型的滴定及电极的选择:（1）酸碱滴定:玻璃电极（锑电极）;甘汞电极（2）沉淀滴定:银电极,相应的X选择