海南砂仁中黄酮的提取及抗氧化研究.doc

砂仁中黄酮提取及其抗氧化性研究主要仪器：TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；KQ-500E型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DJZ型粉碎机。？型电子天平，电热鼓风干燥机，烘箱 。超声？机 ，漏斗主要试剂：芦丁化学对照品（中国药品生物制品检定所，分析纯）；无水乙醇（天津市德恩化学试剂有限公司，分析纯）；硝酸铝（分析纯）；亚硝酸钠（分析纯）；氢氧化钠（分析纯）；蒸馏水；甲醇。黄酮提取：处理：将砂仁去壳后仁、皮、整个分别用粉碎机粉碎，分别研磨称取2g左右，分别加25ml甲醇用超声？机搅拌1h。过滤，保存滤液，及得到三种提取液。1)标准溶液配制在电子天平准确称取16.51mg芦丁用甲醇定容25mL的容量瓶中，得到浓度为0.6604mg/mL的芦丁溶液。2）5%NaNO2溶液配制：用电子天平称取5.00g NaNO2于小烧杯中移至100mL容量瓶中，定容。3）10%Al(NO3)3的溶液配制：用电子天平称取10.00g Al(NO3)3于小烧杯中移至100mL容量瓶中，定容。4) NaOH溶液配制：用电子天平称取21.51gNaOH于烧杯中移至500mL容量瓶中，定容。6,测定波长的选择:取芦丁标准溶液0.5mL，置于25 m L容量瓶中，加甲醇6ml,再加5%亚硝酸钠1ml,震荡放置6min,加10%硝酸铝1mi.摇匀，再放置6min,加氢氧化钠10ml,用甲醇定容至刻度，10min后，加5%亚硝酸钠，10%硝酸铝和氢氧化钠的甲醇溶液为空白组，用1cm比色皿在190600波长内扫描，确定最大吸收波长。7,标准曲线的绘制准确移取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL的0.6604mg/mL芦丁标准溶液。分别置于25mL的容量瓶中，各加入甲醇溶液6mL。然后依次加入1mL 5%的NaNO2溶液，6min后加入1mL10%的Al(NO3)3溶液，6min后加入10ml NaOH溶液，10min后用甲醇溶液定容于25ml。10min后，以相应空白溶剂为空白组已确定波长下，测定每个标准样的吸光度值（A）。浓度/(mg/mL)吸光度/A以芦丁标准系列溶液的浓度为横坐标，以对应的吸光度值为纵坐标，绘制出标准曲线图，如下图。称取1ml仁=皮的滤液用蒸馏水定容于200ml容量瓶中，按“黄2“处理测吸光度，按标准曲线算浓度。黄酮提取率公式为：黄酮提取率=总黄酮浓度mg/ml 乘以 稀释倍数 乘以0.001 乘以芦丁分子质量（664.56） 除以 砂仁皮+仁样品质量。抗氧化性研究3）配置试剂DPPH溶液（210-4mol/L）:准确称取0.0079g（0.0020） DPPH用无水乙醇溶解并用无水乙醇定容于100mL（25ml）容量瓶中，再移入棕色试剂瓶中避光保存。4）实验步骤提取液配制 测出Ai：样品溶液2mL和DPPH溶液（210-4mol/L）2mL，室温反应30min后，在已测最大波长处的吸光度；测出Ae:无水乙醇2mL和DPPH溶液（210-4mol/L）2mL，室温反应30min后，在测？波长处的吸光度；测出Aj :样品溶液2mL和无水乙醇2mL，反应30min后，在？nm波长处的吸光度。多测几组。5）数据处理及结果计算测出Ai、Ae、Aj以及DPPH清除率的计算结果如下表6表6中吸光度Ai、Ae、Aj以及清除率的计算结果浓度吸光度Ae吸光度Ai吸光度AjDPPH清除率以黄酮浓度/（ug/m