（外科学专业论文）igfir和pcna在乳腺良恶性肿瘤中的表达及其意义.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文i g f i r 和p c n a 在乳腺良恶性肿瘤中的表达及其意义 前言6 6月u 舌 材料方法一7 结果10 附图12 附表17 讨论1 9 结论2 1 参考文献2 3 综述pc n a 和恶性肿瘤的关系26 致谢33 个人简历3 4 中文摘要 胰岛素样生长因子一i 受体( 1g f - ir ) 与增殖细胞核抗原( p c n a ) 在乳腺癌组织中的表达及其意义 摘要 背景和目的：乳腺癌是临床常见女性恶性肿瘤，大部分起源于乳腺导 管上皮细胞，占全身恶性肿瘤的7 1 0 。流行病学调查表明，随地域和 年龄分布不同，乳腺癌的发病率也不尽不同，我国属于乳腺癌的低发病区， 但随着我国对乳腺癌的普查和诊疗力度加大，人民生活环境改变，就诊意 识增强，乳腺癌的年发病率也在逐年增加，在北京、上海等经济发达城市， 乳腺癌已经是女性恶性肿瘤中的首位。乳腺癌的发生和年龄有很大关系， 绝经期即4 5 5 0 岁之间是乳腺癌发病率最高的年龄段，大约年龄每增长 1 0 - - 2 0 岁该病发病率就上升一倍，绝经期后上升则相对较慢。乳腺癌的发 生是一个长期的多阶段多因素参与的复杂过程，但病因及其发病机制目前 还不确定。近年来，随着分子生物学的发展以及人们对肿瘤的研究逐步深 入，发现肿瘤的发生实际上是一个多基因多环节多因素共同作用的疾病。 现有实验研究和临床研究表明，胰岛素样生长因子i 受体 ( i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o rt y p e ir e c e p o ri g f i r ) 和增殖细胞核抗原 ( p r o l i e f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e np c n a ) 都和乳腺癌的发生有很大的关 系。现在大部分研究集中于对它们在乳腺癌形成过程中的影响。胰岛素样 生长因子i 受体( i g f i r ) 是一种由2 个伐，p 亚单位组成的酪氨酸激酶跨膜 蛋白受体，其中e 亚单位存在于细胞膜外，p 亚单位跨膜存在，a 亚单位 可与其配体胰岛素样生长因子i ( i g f i ) 结合，导致d 亚单位的磷酸化，然 后将信号转导细胞内，调节i g f i 的生理生化功能，可以促进肿瘤细胞分 裂增殖、抑制肿瘤细胞凋亡和细胞恶变等。目前已经有实验研究发现了 i g f i r 在结肠癌、前列腺癌等恶性肿瘤组织中都呈现高表达。s u r m a c ze 等经过多年实验研究报道，i g f i r 的表达水平在乳腺癌细胞中明显高于 在正常乳腺组织中。增殖细胞核抗原( p c n a ) 是d n a 聚合酶6 的辅助蛋白， 是真核细胞d n a 合成所必需的一种酸性核蛋白，直接参与细胞增殖过程 中的d n a 复制，其合成、表达与细胞周期有关，p c n a 的含量的变化与 d n a 的合成过程一致，其表达程度能较客观地反映肿瘤细胞的增殖活性， 中文摘要 是反映细胞增殖活性的常用指标。p c n a 作为一种细胞增殖的上调因子， 通过与周期素依赖性蛋白激酶结合而促进细胞的增殖。对肿瘤良恶性的区 分、恶性程度的确定及预兆等方面有很大意义。大多数学者研究目的在于 探讨它在预测肿瘤预后的价值，而其在乳腺良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值 却很少有报道。对于联合检测i g f i r 和p c n a 在乳腺癌组织中的表达并 联合分析其相关性目前还尚未见报道。正是因为如此，本实验应用免疫组 化s p 法检n - 孚t , 腺癌组织和乳腺纤维腺瘤组织中i g f i r 和p c n a 的表达， 综合分析它们在乳腺癌中的表达是否有相关性，另外本实验结合良恶性肿 瘤的病理学指标比如：病理类型、分级、肿块的大小、淋巴结转移情况等 分析肿瘤与i g f i r 和p c n a 的关系，从而研究将i g f i r 和p c n a 作为 乳腺癌分子诊断指标的可能性。 材料和方法：本实验应用免疫组化s p 法检测华北石油总医院病理科 2 0 0 9 年1 1 月至2 0 11 年2 月外科手术切除的4 7 例乳腺癌组织，4 0 例乳腺 纤维腺瘤中i g f i r 和p c n a 的表达情况，并结合组织学分级，病理类型， 肿瘤的大小和腋窝淋巴结的转移情况进行相关性分析。 结果：i g f i r 在乳腺癌中的阳性表达率8 5 1 ，在乳腺纤维腺瘤中的 阳性表达率4 2 5 ，在乳腺癌中的表达与组织学分级，病理类型，肿瘤大 小，腋窝淋巴结的转移情况和无关( p o 0 5 ) ；p c n a 在乳腺癌中的阳性表达 率7 4 5 ，在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率3 2 5 ，乳腺癌中腋窝有淋巴 结转移的表达率明显比无淋巴结转移的表达率要高( p o 0 5 ) ，并随肿瘤分 级的升高而逐渐上升趋势，其中i 级和i i i 级、i i 级s n l i i 级间差异有统计学 意义( p 0 0 5 ) ；i g f i r 和p c n a 在乳腺 癌中的表达有协同相关性( p o 0 5i r r e l e v a n t ) ；i ns m a l lf i b r o a d e n o m ao fp c n ao f p o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t ei nb r e a s tc a n c e r ，t h ep o s i t i v e7 4 5 e x p r e s s i o nr a t eo f b r e a s tc a n c e r ，a x i l l a r yh a v e3 2 5 l y m p hn o d em e t a s t a s i se x p r e s s i o nr a t e o b v i o u s l yl o w e rt h a nw i t h o u tl y m p hn o d em e t a s t a s i se x p r e s s i o nr a t e ( p 0 0 5 ) c o n c l u s i o n ：t h u s ，i g f - i ra n dp c n a i nb r e a s tc a n c e rd e v e l o p m e n tp r o c e s s h a st h ei m p o r t a n te f f e c t ，t h e ya r el i k e l yt ob r e a s tc a n c e rf o rc l i n i c a ld i a g n o s i s ， t a r g e tg e n et h e r a p y a n d p r o g n o s i s o fm o l e c u l a r b i o l o g i c a li n d i c a t o r ； m e a n w h i l ei g f i ra n dp c n ai nb r e a s tc a n c e rm a yh a v em u t u a ls y n e r g i s t i c a c t i o n k e yw o r d s ： b r e a s tt u m o r ；i g f i r ，p c n a ；i m m u n o h i s t o c h e m i c a l 5 研究论文 胰岛素样生长因子一i 受体( i g f i r ) 与增殖细胞核抗原( p c n a ) 在乳腺癌组织中的表达及其意义 - 屿! 叁 翮昌 乳腺癌多见于女性，在乳腺恶性肿瘤中乳腺癌约占9 9 以上，占全身 恶性肿瘤的7 1 0 e l , 2 ，3 】。流行病学调查表明，我国属于乳腺癌的低发地 区，但随着我国对乳腺癌的普查和诊疗力度加大，人民生活环境改变，就 诊意识增强，乳腺癌的年发病率也在逐年增加【3 】，在北京、上海等经济文 化发达城市，乳腺癌业已成为主要的女性恶性肿瘤【4 ，5 ，6 】。乳腺癌的发生是 一个长期的多阶段多因素参与的复杂过程，其病因及其发病机制目前还不 确定。随着分子生物学技术的发展，人们对肿瘤的研究从宏观领域进入到 微观领域，发现肿瘤实的发生是由许多相关基因共同作用的结果【3 】。 目前众多研究表明，胰岛素样生长因子i 受体( i n s u l i n 1 i k eg r o w t h f a c t o r - ir e c e p t o r , i g f i r ) 和增殖细胞核抗原( p r o l i e f e r a t i n gc e l ln u c l e a r a n t i g e np c n a ) 与乳腺癌的发生、发展都有很大的关系。现在对它们在乳 腺癌发生过程中的作用等已经成为研究的重心【7 ，8 】。i g f i r 是一种酪氨酸 激酶跨膜蛋白受体，与胰岛素样生长因子i ( i g f i ) 结合，引起自身磷酸化， 然后将信号转导到细胞内，调节其的生理病理功能，可以促进肿瘤细胞增 殖、抑制细胞凋亡和使细胞发生恶变等【9 ，1 0 ，1 1 ，1 2 ，1 3 ”。增殖细胞核抗原( p c n a ) 是真核细胞d n a 合成所必需的一种酸性核蛋白，直接参与细胞增殖过程 中的d n a 复制。它是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽，其合 成、表达与细胞周期有关。其含量的变化与d n a 的合成过程一致，其表 达程度能较客观地反映肿瘤细胞的增殖活性，是反映细胞增殖活性的常用 指标 1 4 , 1 5 。 大多数学者研究目的在于探讨它们预测肿瘤预后的价值，而其在乳腺 良恶性肿瘤鉴别诊断中的作用却报道很少。本实验旨在检测乳腺良恶性肿 瘤组织中i g f i r 和p c n a 的表达，分析它们的表达是否有差异和是否有 相关性。从而将i g f i r 和p c n a 作为乳腺癌分子生物学诊断指标，为乳 腺癌的诊治提供分子生物学实验依据。 研究论文 材料与方法 1 材料 1 1 实验设计： 临床实验对照研究。 1 2 实验单位： 华北石油总医院病理科。 1 3 病例材料： 取自华北石油总医院病理科2 0 0 9 2 0 11 年手术切除女性乳腺良恶性病 变组织存档蜡块。所有标本均有完整的临床病例资料。按照w h o 乳腺肿 瘤组织学分类进行乳腺癌的病理分型、组织学分级。乳腺纤维腺瘤4 0 例， 4 7 例乳腺癌病理切片中，单纯癌18 例，浸润癌2 2 例，特殊类型癌( 髓 样癌) 7 例；组织学分级：依据国际抗癌联盟( u i c c ) 乳腺癌t n m 分期 标准分为i 期组( t 1 n o m o ) ( 1 0 例) ，i i 期组( t 0 1n 1m o 、t 2 n o i m o 、 t 3 n o m o ) ( 2 3 例) ，i i i 期组( t o 一- , 2 n 2 m o 、t 3 n 1 - - - - 2 m o 、t 4 任何n m 0 、 任何tn 3 m o ) ( 1 4 例) ；淋巴结转移者2 7 例，未转移者2 0 例；肿瘤直径 5 c m9 例。 所有组织蜡块标本，4 p m 连续切片，其中1 张切片常规h e 染色进 行病理形态学观察，4 张用于行免疫组化染色观察，再请病理科医师复诊和 组织学分级。 2 试剂 采用过氧化酶标记的链霉卵白素( s e r t p t v a i d i n p e r o x i d a s e ，s p ) 免疫组 织化学方法。 主要试剂： 1 ) 鼠抗人i g f i r 单克隆抗体即用型，购自北京中杉金桥生物技术有限 公司，编号：z m 0 1 4 7 2 ) 鼠抗人p c n a 单克隆抗体即用型，效价1 ：5 0 2 0 0 ，购自北京中杉金桥 生物技术有限公司，编号：z m 0 2 1 3 3 ) s p 试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。s - p 试剂盒含有3 m l 阻断血清，l m l 生物素标记亲和素纯化的体，各2 m l 的试剂a ( 链霉亲和素 d h 溶液) 和试剂b ( 生物素标记的辣根过氧化物酶) ，这些试剂均可用于冰 研究论文 冻切片和石蜡包埋组织。每一试剂盒内含有的贮存试剂可配制i o m l 的工 作溶液。编号：s p 9 0 0 2 4 ) d a b 显色试剂盒：购自北京中杉金桥生物技术有限公司 3 主要仪器 旋转切片机：德国m icr o m 公司 摊片烤片机：孝感市宏业医用仪器有限公司 保温箱：3 0 3 4 a 数显电热保温箱 冰箱： 长沙伊莱克斯电器有限公司 图文分析系统：北京普利生仪器有限公司 光学显微镜：o l y m p u s 日本 照相显微镜：n i k o n 日本 4 方法( 参考免疫组化试剂盒说明书) 4 1 玻片准备 将磨沙载玻片放入洗衣粉水中浸泡，每一块玻片用毛刷刷洗并流水下 持续冲洗干净，将玻片置通风处凉干，再放入恒温烤箱内( 3 7 0 c ) 过夜烤干； 第二天，将烤干的玻片浸泡于强硫酸内过夜；第三天，取出硫酸浸泡的玻 片，用流水持续冲洗及毛刷刷洗干净，凉干后再次放入烤箱内过夜烤干； 第四天，将充分洗净烤干的玻片浸泡于0 0 1 的多聚赖氨酸溶液( ( 1 份多 聚赖氨酸+ 9 份蒸馏水) 数秒，沥干，最后放入烤箱内烤干备用。 4 2h e 染色 4 2 1 切片常规脱蜡至水。 4 2 2 苏木素染色3 分钟，自来水冲洗。 4 2 31 盐酸酒精中分化后立即取出，自来水冲洗。 4 2 41 的氨水返蓝1 0 秒，自来水冲洗。 4 2 5 伊红染色1 分钟，自来水冲洗。 4 2 6 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 4 2 7 常规病理形态学观察。 4 3 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色，各例切片均取5 张，其中1 张切片常规h e 染色 进行病理形态学观察，其余4 张用于免疫组化染色以及阴性对照。 4 3 1 组织蜡块经4 9 m 厚度连续切片后，置烤箱6 0 干燥，贴附4 0 分钟； 研究论文 4 3 2 切片常规脱蜡至水：二甲苯i 、i i 、i i i 各1o 分钟，无水乙醇i 、i i 、 i i i 各l o 分钟，9 5 、8 5 、7 5 酒精各5 分钟，自来水冲洗。用p b s ( p h 7 4 ) 冲洗3 分钟3 次。 4 3 3 抗原修复：放入柠檬酸盐缓冲液中加热至9 8 以上持续2 0 分钟， 室温下自然冷却。 4 3 4p b s ( p h 7 4 ) 冲洗3 分钟3 次。 4 3 5 3 过氧化氢去离子水室温孵育1 0 分钟，以阻断内源性过氧化物酶 的活性。p b s ( p h 7 4 ) 冲洗3 分钟3 次。 4 3 6 除去p b s ，滴加封闭用正常山羊血清工作液( 试剂a ) 室温孵育 15 分钟，倾去血清，勿洗，以防止抗原与非特异性抗体结合。 4 3 7 滴加一抗，湿盒内4 。c 冰箱内过夜。，h i f 1 0 t 稀释度为l ：1 0 0 。 4 3 8p b s ( p h 7 4 ) 冲洗5 分钟3 次。 4 3 9 除去p b s 液，滴加生物素标记二抗( 试剂b ) ，3 7 。c 温箱1 5 分钟。 p b s ( p h 7 4 ) 冲洗3 分钟3 次。 4 3 1 0 除去p b s 液，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液( 试剂c ) ，3 7 温箱1 5 分钟。p b s ( p h 7 4 ) 冲洗3 分钟3 次。 4 - 3 1 l 除去p b s 液，滴加新鲜配制的d a b 溶液，显微镜下观察3 分钟。 4 3 1 2 自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化。 4 3 1 3 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 染色过程中均设有阳性和阴性对照。用已知i g f i r 和p c n a 阳性片作阳 性对照( 照片由北京中杉金桥生物技术有限公司提供) 。阴性对照以p b s 替 代一抗，余操作步骤同实验片。 5 结果判断： 免疫组化切片分别由俩名病理科医师采用双盲法随机观察至少1 0 个 高倍视野，不少于1 0 0 0 个细胞，对免疫组化结果进行评估。i g f i r 染色 阳性细胞是细胞膜或胞质呈棕黄色颗粒样信号。p n c a 阳性信号为细胞核 内出现棕黄色细颗粒，具体结果判断如下： ( 1 ) 按阳性细胞百分率计分：阳性细胞 5 0 ，3 分。 ( 2 ) 按染色强弱记分：淡黄色，1 分：棕黄色，2 分；棕褐色，3 分。两项相加 得l 。3 分为+ ，4 5 分为+ + ，6 分为+ + 十。 研究论文 6 主要观察指标： 6 1 乳腺良恶性肿瘤组织中i g f i r 和p c n a 的表达情况； 6 2i g f i r 和p c n a 的表达与病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移的关系； 6 3i g f i r 表达与乳腺癌分级的关系；p c n a 的表达与乳腺癌分级的关系； 6 4i g f i r 和p c n a 在乳腺癌组织中的表达是否相关。 7 统计学方法： 数据采用四格表的x2 检验( 校正公式) ，四格表精确检验法，行列变 量的相关检验。检验水准a = 0 0 5 ，p 0 0 5 ) ，i g f i r 的表达 与肿瘤的组织学类型、淋巴结转移情况及肿块的大小情况无关( 所有比较 之间p 0 0 5 ) 。 2 3p c n a 在乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤组织中的表达( 见表格3 ，图 研究论文 8 , 9 ，1 0 ) p c n a 在乳腺癌组织中的阳性率为7 4 5 ，明显高于在乳腺纤维腺瘤 组织中的阳性率为3 2 5 ，_ r - - 者间差异有统计学意义( p o 0 5 ) ，但i 级和i i i 级、i i 级和i i i 级 间差异有统计学意义( ( p 0 0 5 ) ；p c n a 在 腋窝有淋巴结转移的阳性率较无淋巴结转移的明显升高，差异有统计学意 义( p o 0 5 ) 2 5 在乳腺癌中i g f i r 和p c n a 表达的相关性( 见表格5 ) i g f i r 在乳腺癌组织中呈现高表达，p c n a 在乳腺癌组织中表现为高 表达，并有部分异位表达现象，i g f i r 和p c n a 在乳腺癌中的表达经行 列变量相关检验有正相关性( p 0 0 5 ) 。 - 、 q - k 船 研究论文 附图 f i g 2b r e a s tc a r c i n o m ag r a d ei h e2 0 0 x 1 2 、 研究论文 f i g 3b r e a s tc a r c i n o m ag r a d ei i h e2 0 0 x f i g 4b r e a s tc a r c i n o m ag r a d e l i ih e2 0 0 x 1 3 研究论文 f i g 5b r e a s tc a r c i n o m ag r a d eip c n as t a i n i n gs p2 0 0 x 譬! ：一瓢 f 孙 f i g 6b r e a s tc a r c i n o m ag r a d ei ip c n a s t a i n i n g s p2 0 0 x 1 4 研究论文 f i g 7b r e a s tc a r c i n o m ag r a d e l i ip c n as t a i n i n gs p2 0 0 x f i g 8b r e a s tc a r c i n o m ag r a d eii g f i rs t a i n i n g s p2 0 0 x 1 5 研究论文 n r 、j 奄 奄鼻气 簟 叼q ? ，i 擎 f i g 9 b r e a s tc a r c i n o m ag r a d ei ii g f i rs t a i n i n g s p 2 0 0 x f i g 10 b r e a s tc a r c i n o m ag r a d e i i i i g f i rs t a i n i n g s p 2 0 0 x 压- 警奠 ， 一鼾。，。 ?。岁_ 气 一 | ，“恤 k 簟 i 研究论文 附表 t a b l e1t h ee x p r e s s i o no fi g f i ri nt h eb r e a s tc a r c i n o m a sa n df i b r o a d e n o m i g f i r 一+ + + + n 阳性率( 9 6 ) 乳腺纤维腺瘤 2 38454 0 4 2 5 乳腺癌 79 1 21 94 78 5 1 t a b l e2t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e n e x p r e s s i o no f l g f i ri nb r e a s tc a r c i n o m a s a n dc l i n i c o p a t h o l o g i cv a r i a b l e so f p a t i e n t s t a b l e3t h ee x p r e s s i o no fp c n ai nt h eb r e a s tc a r c i n o m a sa n df i b r o a d e n o m p c n a + + + + n 阳性率( ) 乳腺癌 1 28 1 44 7 乳腺纤维腺瘤 2 74 5 4 4 0 7 4 5 3 2 5 1 7 研究论文 t a b l e4t h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e ne x p r e s s i o no f p c n ai nb r e a s t c a r c i n o m a sa n dc l i n i c o p a t h o l o g i cv a r i a b l e so f p a t i e n t s p c n a 临床病理指标 - + + + 抖 n 阳性率( ) 组织学分级 i 22 241 08 0 i i43792 38 2 6 i i i22371 48 5 7 组织学类型 浸润癌 单纯癌 髓样癌 淋巴结转移 + 肿块大小 2 c m 2 c m 5 c m 5 c m 4 4 l 6 4 l 5 1 3 2 2 5 4 3 7 0 2 28 6 - 3 1 88 8 9 78 5 7 2 77 7 8 2 08 0 1 1 9 0 9 2 78 1 5 98 8 9 t a b l e5t h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e ne x p r e s s i o no fi g f - i ra n dp c n ai nt h e b r e a s tc a r c i n o m a s p c n a 阳性 阴性合计 i g f i r 阳性 2 9l l 4 0 阴性 i 67 合计 3 01 7 4 7 p = 0 0 0 2 1 8 研究论文 讨论 近年来乳癌的发病率逐年上升，严重危害广大妇女的健康和生命。乳 腺癌的发生由遗传因素，多基因因素和环境因素等多种因素引起1 6 1 。随着 对乳腺癌研究的深入，尤其是在分子生物学水平，发现i g f i r 和p c n a 在乳腺癌的发病机理以及预后上有着重要的作用。 1i g f i r 在乳腺癌中的表达及其意义 胰岛素样生长因子i 受体( i n s u l i n 1 i k eg r o w t h f a c t o rt y p e l r e c e p o r l g f i 鼬是一种酪氨酸激酶蛋白受体，具有潜在的有丝分裂原作用 【l3 1 ，与其配体胰岛素样生长因子i ( i g f i ) 结合，导致p 亚单位的磷酸化， 激活酪氨酸激酶活性传导细胞信号后，可促进细胞有丝分裂增殖、转化， 与肿瘤的形成和发展有着密切关系【1 0 ，1 1 , 1 2 , 1 3 】。有多项实验研究证 实：i g f i r 是细胞体内生长所必需的。正常生理水平的i g f i r 对体内外细 胞具有促进细胞分裂与增殖作用【l 孓1 6 】，并且对转化的表型维持具有重要 作用【1 7 】。r e s m i c o t tm 等经过实验研究，发现抑制i g f i r 表达后，不但可 以防止肿瘤发生，而且还可以抑制野生型肿瘤细胞的生长，并可诱导肿瘤 细胞凋亡【1 8 】。仔细分析其原因，有可能是一方面是诱导了肿瘤细胞的凋亡， 一方面通过增强机体的免疫水平来遏制残余肿瘤细胞。近年来，随着研究 深入，众多文献报道i g f i r 在人类大部分组织肿瘤细胞中都是高表达， 如大肠癌、肝癌等 1 9 , 2 0 。目前对于i g f i r 与乳腺癌关系的实验研究发现， i g f i r 在乳腺癌组织中的表达明显要比正常乳腺组织中的表达高 2 1 , 2 2 1 。 r e s n i k 等人将i g f i r 在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的功能情况进行比 对，发现i g f i r 在乳腺癌组织中的表达是正常组织的1 4 倍，其自体磷酸 化和激酶活性要比正常细胞高2 - 4 倍【2 3 1 。这些说明了i g f i r 在诱导乳腺 癌发生上有重要意义。t u r n e r 等学者通过研究发现在乳腺癌组织中i g f i r 的表达强度与手术及放疗后的局部复发有密切关系【2 4 1 。我国吴心君等人经 过回顾性调查分析，作出以下报道“2 5 例乳腺癌手术和放疗后局部复发病 人的i g f i r 表达情况，复发组的i g f i r 阳性表达约为7 6 明显高于对照 组的2 2 ( p o 0 5 ) ”。这样的结果同样证实了i g f i r 的表达强度与手术和 放疗后局部复发呈正相关表现，这就提示i g f i r 的表达与乳腺癌细胞的 放射耐受性相关【2 5 1 。对于乳腺癌的预后是否与i g f i r 的表达有关系，或 研究论文 者有什么样的关系，目前尚未达成共识。目前仍然是众说风云。p a p a v 等 人发现i g f i r 的阳性率在低风险组中明显比在高风险组【2 6 】要高。但r a i l 等人的研究却认为i g f i r 的表达与乳腺癌的预后无关【4 2 1 。 本实验利用免疫组化s p 法检测4 7 例乳腺癌和4 0 例乳腺纤维腺瘤中 i g f i r 的表达情况，发现i g f i r 在乳腺癌中的阳性率( 8 8 1 ) 明显高于 乳腺纤维腺瘤中阳性率( 4 6 7 1 4 例) ，两者有显著性差异( p 0 0 5 ) 。因本实验样本量有限，且未就i g f i r 的表达和乳腺癌的预后指 标的相关性进行分析，因此对i g f i r 在乳腺癌预后方面的价值了解有限。 2p c n a 在乳腺癌中表达及其意义 增殖细胞核抗原( p c n a ) 是增殖细胞合成d n a 所必需的蛋白，通过电 泳技术可分离出该蛋白，其合成速度受生长因子刺激调节1 2 8 , 2 9 1 。而且该蛋 白仅合成或表达于增殖细胞的核内，与细胞周期有关【3 0 1 。p c n a 开始出现 在细胞核内是在细胞增殖周期的g 1 期，大量表达于s 期。因此，通过免 疫组化法显示p c n a 表达阳性的细胞是处于d n a 合成s 期细胞，也就是 正在分裂的细胞，且从理论上来说p c n a 和d n a 这两种分子物质随细胞 周期时相变化而变化的规律是具有一致性的【”】，可以认为，p c n a 的阳性 率随着组织学分级的增高而增高，过度表达说明癌组织处于高度增殖状 态，临床上则表现为肿瘤生长速度快，局部浸润和淋巴结转移的可能性大。 本研究发现：( 1 ) p c n a 在乳腺癌中的表达率为7 4 5 ，在乳腺纤维腺瘤 组织中的表达率为3 2 5 。二者相比，p c n a 在乳腺癌中的阳性率明显高 于乳腺纤维腺瘤中的表达( p o 0 5 ) 。说明：p c n a 可用于乳腺良恶性肿瘤的 鉴别诊断。( 2 ) 乳腺癌中，p c n a 阳性表达率在i 级是7 9 ，i i 级是8 2 6 ， 在i i i 级是8 5 7 ，相比有统计学意义( p o 0 5 ) ，说明：不管乳腺癌的分化程 度是什么样，其恶性细胞都有较高的增殖活性。( 3 ) 一些作者报道，在乳 腺癌组织中p c n a 的阳性表达与腋淋巴结转移有密切关系。本组研究结 果显示，在乳腺癌组织中p c n a 阳性表达率为7 7 8 ，并随癌组织分化程 度降低，淋巴结转移数目增加，t n m 分期增高而表达增强，与之相符。 随着淋巴结转移的发生，p n c a 的阳性表达率明显升高，统计学差异显著， 研究论文 提示乳腺癌中p c n a 阳性表达率高的患者比p c n a 阳性表达率低的更容 易发生淋巴结转移，可作为判断淋巴结转移的一项辅助指标。( 5 ) p c n a 与病理学分类及肿瘤大小不相关，无统计学意义。故检测p c n a 的表达 情况在了解乳腺癌细胞的增殖状态、正确判断其生物学行为及鉴别诊断方 面有很高的价值f 3 2 t ，3 3 】。p c n a 的表达程度可以作为乳腺癌细胞增殖活性 和恶性程度的指标之一。并且在乳腺肿瘤的良恶性的鉴别、恶性程度的确 定等方面有重大意义【3 4 1 。检测p c n a 表达有利于对容易出现转移的高危 患者及早综合治疗，提高患者的生存率。p c n a 阳性表达状况可作为乳腺 癌辅助性诊断指标，为病理形态学提供有价值的补充。 3i g f i r 和p c n a 在乳腺癌中表达的关系 许多学者针对恶性肿瘤发生过程癌基因的作用方面，提出了基因协 同作用假说，认为在恶性肿瘤发生发展以及转移的各个阶段，功能不同的 异常激活的基因各自发挥不同的作用，并在时间和空间上相互配合，协同 促进了细胞的癌变。 本实验发现：( 1 ) 乳腺癌中i g f i r 和p c n a 之间呈正相关。说 明：i g f i r 通过促进细胞的有丝分裂，抑制细胞凋亡，增强细胞的增殖能 力，导致细胞的失分化，表现为肿瘤的恶性行为。i g f i r 阳性率高的乳 腺癌，增殖活性同样也高，即p c n a 的表达程度高。也就是说i g f i r 不 仅在乳腺癌中有表达，而且与乳腺癌细胞p c n a 的表达呈明显正相关， i g f i r 和p c n a 有可能在时间和空间上相互配合，协同促进了细胞的癌 变。不过本实验应用免疫组化方法只能检测i g f i r 和p c n a 在乳腺癌中 的表达情况，发现它们之间有协同相关性，尚不能证明它们在乳腺癌发生 过程中的相互协作的可能。 综上所述：通过本实验我们发现i g f i r 和p c n a 的表达呈正相关， p ( o 0 5 ) ，证实了乳腺癌中i g f i r 的高表达和p c n a 的高表达都是乳腺 癌发生，发展过程的重要分子生物学标记，可以将i g f i r 和p c n a 联合 检测作为乳腺癌分子生物学的诊断指标。 研究论文 结论 1 i g f i r 和p c n a 在乳腺癌组织中的表达明显高于在乳腺纤维腺瘤中的 表达，说明i g f i r 和p c n a 的高表达与乳腺癌的发生发展有关。 2 p c n a 在乳腺癌组织中的高表达与腋窝淋巴结转移有关，有淋巴结转移 的表达率明显高于无淋巴结转移的表达率。所以，p c n a 可以作为乳腺癌 的预后指标用于临床。 3 p c n a 和i g f 一工r 在乳腺癌组织中的表达呈正相关，并且它们在乳腺癌 的发生发展过程中可能有相互协同作用。 研究论文 参考文献 1 吴阶平，裘法祖黄家驯外科学【m 北京：人民卫生出版社，2 0 0 4 ， 8 3 0 8 3 1 2 郭仁宣。乳腺癌外科学【m 】辽宁：辽宁科技出版社，2 0 0 3 ，2 2 - 2 3 ，3 0 2 3 0 3 3 吴亚群，薛新波乳腺肿瘤 m 湖北：湖北科学技术出版社，2 0 0 2 ，8 4 9 0 ， 9 2 9 3 4 高淑萍，王强浅谈乳腺癌的易患因素 j 中华临床医学研究杂志，2 0 0 5 ， 11 ( 1 6 ) ：2 4 2 1 5 熊静帆，周海滨，池洪珊等深圳市1 9 9 9 2 0 0 4 年恶性肿瘤发病趋势分 析j j 中华肿瘤防治杂志，2 0 0 6 ，1 3 ( 8 ) ：2 5 2 2 5 6 6 孙燕乳腺癌居京津沪女性恶性肿瘤发病首位【j 】首都医药，2 0 0 5 ， 7 ：3 6 3 8 7 吴家刚，方亚女性乳腺癌危险因素研究进展【j 】医学与社会，2 0 0 5 ， 1 8 ( 1 ) ：1 6 - 1 8 8g r o s s j m ，y e ed t h e t y p e - 1 i n s u l i n l i k e g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r t y r o s i n e k i n a s e a n d b r e a s tc a n e e r ： b i o l o g y a n d t h e r a p e u t i c r e l e v a n c e j c a n c e rm e t a s t a s i sr e v 2 0 0 3 d e e ；2 2 ( 4 ) ：3 2 7 3 6 9au l l r i c h ，ag r a y ，e t a l i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o ri r e c e p t o rp r i m a s - t r u e t u r e ：c o m p a r i s o n w i t hi n s u l i n r e c e p t o rs u g g e s t s s t r u c t u r a l d e t e r m i n a n t h a td e f m ef u n c t i o n a l s p e c i f i e i t y j e m b o j 19 8 6 o c t o b e r ：5 ( 1 0 ) ：2 5 0 3 - 2 51 2 10s a m a n i a a ，b r o d tp t h er e c e p t o rf o rt h et y p e1i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r a n di t s1i g a n d sr e g u l a t em u l t i p l ec e l l u l a rf u n c t i o n st h a t i m p a c t o n m e t a s t a s i s j s u r go n c o lc l i nn a m ，2 0 01 ，10 ( 2 ) ：2 8 9 312 11j o n e s j l ，c l e m m o n sd r i n s u l i n l i k eg r o w t hf a c t o r sa n dt h e i r b i n d i n g p r o t e i n s ；b i o l o g i c a la c t i o n s j e n d o c r i n er e r ，1 9 9 5 ，1 6 ( 1 ) ：3 3 4 12s t e w a r tc e h ，r o t w e i n p g r o w t h ，d i f f e r e n t i a t i o na n ds u r v i v a l ：m u l t i p l e p h y s i d o g c a lf u n c t i o n s f o ri n s u l i n l i k eg r o w t hf a c t o r s j p h y s i o lr e v ， 1 9 9 6 ，7 6 ( 4 ) ：1 0 0 5 1 0 2 6 13s u r m a e ze ，s e l lc ，s w a n t e kj ，e t a l d i s s o c i a t i o no fm i t o g e n e s i s 研究论文 a n d t r a n s f o r m i n ga c t i v i t yb y c e r m i n a lt r u n c a t i o no ft h ei n s u l i n - l i k e g r o w t h f s c t o r - ir e c e p t o r j e x pc e l lr e s 1 9 9 5m a y ：2 1 8 ( 1 ) ：3 7 0 8 0 1 4 王芳，糜漫天b r v a l 与乳腺癌研究进展 j 国外医学卫生分册， 2 0 0 3 ，3 0 ( 6 ) ：3 4 7 3 51 15z h e n gl ，l i s ，b o y e r tg ，e t a l l e s s o n sl e a r n e df r o mb r c a1a n d b r c a 2 j o n c o g e n e ，2 0 0 0 ，1 9 ( 5 3 ) 6 1 5 9 - 6 1 7 5 16s a c h d e vd ，l i s l ，h a r t e l l j s ，e t a l ac h i m e r i ch u m a n i z e ds i n g l e c h a i n a n t i b o d ya g a i n s tt h et y p ei i n s u l i n l i k eg r o w t hf a c t o r ( i g f ) r e c e p t o r r e n d e r sb r e a s tc a n c e rc e l l s r e f r a c t o r y t ot h e m i t o g e n i e c e f f e c t so f i g f - i j c a n c e rr e s 2 0 0 3 f e b l ：6 3 ( 3 ) ：6 2 7 3 5 17b a s e r g ar t h ei n s u l i n l i k eg r o w t hf a c t