（分析化学专业论文）葫芦脲和药物与生物大分子相互作用及分析应用.pdf

山东大学博士学位论文 摘要 蛋白质和核酸是两类重要的生物大分子。蛋白质担负着各种生理功能， 从整体上维持生物体新陈代谢活动的进行，是生物性状的直接表达者，而核 酸是揭示生命遗传与变异的主要物质。因此，深入研究小分子物质与蛋白质 和核酸的作用机理，建立蛋白质和核酸快速、简便的定量分析方法，对在分 子水平上阐明生命的奥秘、开发新药和预防与治疗疑难病症等方面具有重要 的意义，是当前生物分析化学研究的前沿和热点之一。 本论文以分析化学，生物化学为研究背景，利用荧光技术、共振光散射 技术、吸收光谱技术、圆二色光谱技术、透射电镜技术和扫描电子显微镜技 术等手段研究了葫芦脲、药物与蛋白质和核酸的相互作用机理。利用荧光、 共振光散射技术建立了蛋白质和核酸快速、准确、简便、灵敏的定量分析方 法。论文共分六个部分。 论文的第一部分评述了近年来蛋白质的荧光和共振光散射探针以及核 酸的荧光探针的研究进展；并对新一代超分子主体化合物葫芦脲的分子识别 作用以及利用荧光和吸收等光分析手段对葫芦脲与有机小分子相互作用的 研究进行了综述。共引用文献1 8 8 篇。 本论文的第二部分，研究了酸性条件下，葫芦脲对a n s b s a 的荧光增强 效应，建立了灵敏的定量测定蛋白质的新方法，b s a 的线性范围 5 0 1 0 一5 0 x1 0 g m l ，检出限( s n = 3 ) 为3 4 n g m l 。将该方法用于人血 清总蛋白的测定，结果令人满意。利用吸收光谱、园二色光谱、共振光散射 光谱、荧光偏振、荧光寿命以及f 6 r s t e r 能量转移理论等对体系的作用机理 进行了研究。研究表明，c b 使得b s a 的疏水微区暴露出来，更易于与a n s 结合， 从而促进了b s a 吸收的能量向a n s 转移，导致其荧光寿命的增加和量子产率的 提高；c b 和a n s 的协同作用能导致b s a 有强的去折叠作用。基于上述研究，提 出了c b a n s b s a 夹心式结构模型，即a n s 结合在b s a 的疏水微区后，再以分子 间作用力结合c b ，形成了c b a n s b s a 夹心式结构的聚集体。 论文第三部分合成了新的纳米微粒葫芦脲银，并将其用于蛋白质的定量 测定。利用柠檬酸钠还原法制备了银纳米粒子( n a n o a g ) ，并合成了新的纳 山东大学博士学位论文 米微粒葫芦脲银。研究结果指出，与n a n o a g 相比，n a n o a g c b 具有较强的荧 光、较长的荧光寿命和更高的稳定性；并利用蛋白质对n a n o a g c b 共振光散 射强度的猝灭作用，建立了灵敏的定量检测蛋白质的新方法。在最佳实验条 件下，蛋白质的浓度与共振光散射强度的猝灭程度成正比，可用于蛋白质的 定量测定。b s a 、h s a 和e a 的线性范围分别为5 0 i 0 一- 5 0 i 0 一g m l ， 8 0 x i 0 一4 0 1 0 。g m l 和4 0 1 0 一一1 0 x i 0 一g m l ；它们的检出限 ( s n = 3 ) 分别为0 2 9 ，0 8 4 和0 3 9n g m l 。将该方法用于人血清白蛋白 的测定，结果令人满意。研究表明，n a n o a g c b 可以同时作用于b s a 的色氨 酸和酪氨酸残基，并导致b s a 去折叠作用。 论文的第四部分研究了嗯喹酸( o a ) 与蛋白质的相互作用，利用蛋白质 对体系中o a 的荧光猝灭作用，建立了灵敏的蛋白测定新方法。b s a 和h s a 的线性范围分别为3 o x i o 一一3 o x l o 。5g m l 和8 o x l o 一8 o x i o g m l ，它 们的检出限( s n = 3 ) 分别为3 4n g m l 和2 6 n g m l 。将该方法用于犊牛血 清蛋白的测定，结果令人满意。利用荧光光谱，吸收光谱、共振光散射光谱 以及t e m 研究了o a 的自聚集用。结果表明，当o a 的浓度为5 0 i 0 。m o l l 左右，开始发生自聚集。机理研究指出，b s a 能使得o a 聚集体解聚，并能 猝灭体系中o a 的荧光：o a 可以同时与b s a 的色氨酸和酪氨酸残基发生作用。 s t r e n v o l m e r 方程和荧光寿命的实验结果表明b s a 对0 a 荧光的猝灭为静态 猝灭。以上结果指出，b s a 与o a 单体形成了不发光的b s a o a 络合物。 论文的第五部分第一节中研究了0 a t b ”体系的荧光增强效应，建立了灵 敏的0 a 的定量分析方法，其检出限可达5 5 1 0 m o l l ，与其它方法相比， 该方法具有较高的灵敏度。利用连续变化和等摩尔比法测得t b ：o a 的组成比 为1 ：2 ，表观稳定常数为7 0 i 0 “。研究表明，分子内的能量转移导致了t b ” 特征荧光的增强。第二节研究了在阴离子表面活性剂s l s 存在下，蛋白质对 t b ”一o a 体系的猝灭作用，并将其用于蛋白质的测定。b s a 、h s a 和e a 的线性范 围分别为0 0 5 0 一i 0 o p g m l ，0 1 0 一i 0 o p g m l 和0 4 0 一i 0 o 肛g m l ，它们的检 出限( s n = 3 ) 分别2 i n g m l ，2 5 n g m l 和5 0 n g m l 。该方法用于鸡蛋清中总蛋 白含量的测定，结果令人满意。荧光光谱、共振光散射光谱和荧光偏振的实 验结果表明：在本文的实验条件下，荷负电的s l s 和b s a 可以与t b ”一0 a 结合， i i 山东大学博士学位论文 并形成了s l s b s a - t b ”一o a 大的聚集体；由于竞争作用和空间位阻效应，导 致o a 与t b ”间相互作用的减弱和能量转移的降低。 论文的第六部分研究了y 3 + - r u t i n c t m a b n u c l e i ca c i d s 体系的荧光光 谱特性。在p h = 6 1 0 的h m t a h c i 缓冲溶液中，核酸( f s d n a 和y r n a ) 对 y “一r u t i n c t m a b 体系的荧光强度有显著的增强作用。在最佳实验条件下， 体系的荧光强度与f s d n a 和y r n a 的浓度在一定范围内成正比，f s d n a 和y r n a 的线性范围分别为1 0 1 0 1 o xi 0 “g m l 和1 0 1 07 - 4 0 x1 0g m l ，它 们的检出限( s n = 3 ) 分别为7 5 x 1 0 “g m l 和8 0 i 0 一g m l ，据此建立了 一种测定核酸的新方法。并对其作用机制进行了探讨，研究表明，r u t i n y ” 探针分子与f s d n a 以静电和沟槽式两种方式结合，而f s d n a 和c t m a b 为体系 提供了较强的疏水微环境。 本论文的主要特点和创新点： 1 以a n s 为介体和荧光探针，研究了c b 与8 s a 的相互作用，并利用c b 存在下，b s a 对体系中a n s 荧光增强作用，建立了蛋白质定量检测的新方法。 提出了以b s a 为软模板成b s a a n s c b “夹心式”结构的聚集体模型。 2 合成了超分子纳米微粒n a n o a g c b 。与n a n o a g 相比，n a n o a g c b 具有较 强的荧光、较长的荧光寿命和更高的稳定性。并将其用于蛋白质的定量分析， 使蛋白质的检出限达i 0 1o g m l 。 3 研究指出，b s a 能够使o a 的聚集体解聚并形成不发光的b s a o a 络合 物，使体系的荧光猝灭。据此，建立了蛋白质新的检测方法。 4 在表面活性剂的作用下，研究了稀土络合物t b ”- o a 和r u t i n y 3 + 分别 与蛋白质和核酸的相互作用，并利用这些稀土络合物作为荧光探针建立了蛋 白质和核酸的荧光分析方法。 上述研究不仅丰富了小分子与生物大分子之间相互作用机制的研究内 容，扩大了超分子主体化合物葫芦脲在生物分析中的应用范围，也丰富了纳 米粒子的种类。 关键词：蛋白质葫芦脲a n s 嗯喹酸稀土离子配合物表面活 性剂核酸荧光共振光散射 i i i 一坐銮莶堂堡主堂垡笙壅 a b s t r a c t p r o t e i n sa n dn u c l e i ca c i d sa r e v e r yi m p o r t a n tb i o m a c r o m o l e c u l e s d i f f e r e n tp r o t e i n sp e r f o r maw i d ev a r i e t yo fb i o l o g i c a lf u n c t i o n s s o m ep r o t e i n s a r ee n z y m e s ，w h i c hc a t a l y z ec h e m i c a lr e a c t i o n s o t h e rp r o t e i n sp l a ys t r u c t u r a l o rm e c h a n i c a lr o l e s ，s u c ha sm a i n t e n a n c et h em e t a b o l i s mo fp l a n t sa n da n i m a l s d i r e c t l ye x p r e s sb i o l o g i cc h a r a c t e r s n u c l e i ca c i d sp l a yac e n t r a lr o l ei nt h e s t o r a g er e p l i c a t i o no fh e r e d i t a r ya n da b e r r a n c ei n f o r m a t i o na n di nt h e e x p r e s s i o no ft h i si n f o r m a t i o nt h r o u g hs y n t h e s i s i no r d e rt os u r m o u n tm a n v d i f f i c u l td i s e a s e sa n de x p l o r et h es e c r e to fl i f e ，w ef u r t h e ri n v e s t i g a t et h e i n t e r a c t i o nb e t w e e ns m a l lm o l e c u l e sa n dn u c l e i ca c i d so rp r o t e i n s ar a p i da n d c o n v e n i e n tm e t h o di sd i s c o v e r e df o rq u a n t i t a t i v e l ya n a l y z i n gn u c l e i ca c i d sa n d p r o t e i n s b a s e do nt h er e s e a r c h o f a n a l y t i c a l c h e m i s t r ya n db i o c h e m i s t r y ，t h i s d i s s e r t a t i o ni n v e s t i g a t e dt h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e ns m a l lm o l e c u l e s s u p e r m o l e c u l e so rn a n o p a r t i c l e sa n dp r o t e i n sa sw e l la ss m a l lm o l e c u l e sa n d n u c l e i ca c i d su s i n gt h em u l t i t e c h n i q u e si n c l u d i n gf l u o r e s c e n c e ，r e s o n a n c el i g h t s c a t t e r i n g ，a b s o r p t i o n ，c i r c u l a rd i c h r o i s m ，t r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p e a n ds c a n n i n ge l e c t r o nm i c r o s c o p e s e v e r a lr a p i d ，e f f i c i e n tm e t h o d s ，w h i c ha r e o fh i g hs e n s i t i v i t y ，a r e d e v e l o p e df o rd e t e r m i n i n gp r o t e i n sa n dn u c l e i ca c i d s t h i sd i s s e r t a t i o ni sw r i t t e ni ns i xc h a p t e r s t h e p r o g r e s so ff l u o r e s c e n c ep r o b e sa n dr e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n gp r o b e s f o rp r o t e i n si ss u m m a r i z e d t h ep r o g r e s so ff l u o r e s c e n c ep r o b e sf o rn u c l e i c a c i d si sr e c a p i t u l a t e d t h en e wm a c r o m o l e c u l eh o s tc o m p o u n dc u c u r b i t u r i l ( c b ) a n dt h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nc ba n dm e t a li o n so rs m a l lo r g a n i cm o l e c u l e sw e r e r e v i e w e di nt h ef i r s tc h a p t e r r e f e r e n c e s ( 1 8 8 ) a r ec i t e dh e r e ， s e c o n dc h a p t e rd e s c r i b e st h ep r o p e r t i e sa n dt h es c o p eo fa p p l i c a t i o no fc b i t i sf o u n dt h a tc bc a ne n h a n c et h ef l u o r e s c e n c eo f1 ，8 - a n s b s as y s t e mi n 山东大学博士学位论文 a c i d i cm e d i u m an e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i n sh a sb e e n d e v e l o p e d u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h ee n h a n c e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y i si np r o p o r t i o nt ot h ec o n c e n t r a t i o no fb o v i n es e r u ma l b u m i ni nt h er a n g eo f 5 0 1 0 - 8 5 0 x 1 0 一g m l i t sd e t e c t i o nl i m i t ( s n = 3 ) i s3 4n g m l t h em e t h o d ， w h i c hh a do fh i g hs e n s i t i v i t y ，s e l e c t i v i t ya n dr e p r o d u c i b i l i t y ，w a ss a t i s f a c t o r i l y a p p l i e dt o t h ed e t e r m i n a t i o no ft o t a l p r o t e i n i nt h eh u m a ns e r u m t h e i n v e s t i g a t i o no fi n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e nc b ，b s aa n d a n si ss t u d i e db y u s i n gt h ef 6 r s t e re n e r g yt r a n s f e rt h e o r ya n ds o m et e c h n i q u e s ，s u c ha sa b s o r p t i o n ， r e s o n a n c e l i g h ts c a t t e r i n g ，c i r c u l a rd i c h r o i s m ，f l u o r e s c e n c e l i f e t i m ea n d f l u o r e s c e n c ep o l a r i z a t i o n t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h ee x p a n d e dh y d r o p h o b i c d o m a i n so fb s ar e s u l t e db yc bc o u l de a s i l yi n t e r a c tw i t ha n s ，w h i c hp r o m o t e d t h ee n e r g yt r a n s f e rf r o mb s at oa n s ，e f f e c t i v e l yp r o l o n g e dt h ef l u o r e s c e n c e l i f e t i m ea n di n c r e a s e dt h eq u a n t u my i e l d so fa n s f u r t h e r m o r e ，b s ah a da s t r o n g e ru n f o l d m e n tp r o d u c e db yt h es y n e r g i s mo fb o t hc ba n da n s t h e “s a n d w i c h ”m o d e lo fc b a n s - b s aw a sp r o p o s e db a s e do nt h ea b o v er e s u l t s i n o t h e rw o r d ，t h ea n sc o m b i n e dw i t ht h eh y d r c l p h o b i cd o m a i n so fb s ai n t e r a c t e d w i t hc bb yi n t e r m o l e c u l a rf o r c e sa n df o r m e dc b a n s - b s a s a n d w i c h a g g r e g a t e s t h et h i r dc h a p t e rd e s c r i b e st h es y n t h e s i so fn a n o p a r t i c l eo fc u c u r b i t u r i l s i l v e r ( n a n o a g c b ) a n di t sa p p l i c a t i o ni nt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i n t h e s i l v e rn a n o p a r t i c l e ( n a n o a g ) ，w h i c hi ss y n t h e s i z e dw i t hs o d i u mc i t r a t em e t h o d ， r e a c t e sw i t hc bt of o r mn a n o a g c b n a n o a g c bh a ss t r o n g e rf l u o r e s c e n c e ， l o n g e rf l u o r e s c e n c el i f e t i m ea n dm o r es t a b l et h a nn a n o a g t h er e s o n a n c el i g h t s c a t t e r i n g ( r l s ) i n t e n s i t yo fn a n o a g c bs y s t e mi sg r e a t l yq u e n c h e db yp r o t e i n u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h eq u e n c h e dr l si s p r o p o r t i o n a l t ot h e c o n c e n t r a t i o no fp r o t e i n si nt h er a n g eo f5 0 x 1 0 - 9 5 o x l o g m lf o rb s a ， 8 , 0 1 0 - 9 _ 4 0 1 0 。7g m lf o rh s aa n d4 0 1 0 - 9 1 o x l o g m lf o re a a n dt h e i r v 山东大学博士学位论文 d e t e c t i o nl i m i t s ，c a l c u l a t e dt h r e et i m e st h es t a n d a r dd e v i a t i o no fe l e v e nb l a n k m e a s u r e m e n t s ，a r eo 2 9 ，0 8 4a n d0 3 9n g m l ，r e s p e c t i v e l y a c t u a ls a m p l e sw e r e d e t e r m i n e ds a t i s f a c t o r i l y i nt h ef o u r t hc h a p t e r , i ti sf o u n dt h a ti nt h et r i s - h c lb u f f e r ( p h = 2 7 5 ) ，t h e f l u o r e s c e n c eo fo x o l i n i ca c i d ( o a ) i sq u e n c h e dg r e a t l yb yp r o t e i n t h ee x a c t i o n a n de m i s s i o nw a v e l e n g t h sl o c a t ea t2 6 2 n ma n d3 6 7 n m ，r e s p e c t i v e l y t h e q u e n c h e di n t e n s i t yo ff l u o r e s c e n c ei s i np r o p o r t i o nt ot h ec o n c e n t r a t i o no f p r o t e i n t h el i n e a rr e l a t i o n s h i pi so b t a i n e db e t w e e nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t ya n d p r o t e i n c o n c e n t r a t i o ni nt h e r a n g e o f3 0 x 1 0 3 0 x 1 0 。5 g m l a n d 8 0 x 1 0 - 8 8 0 x 1 0 g m lf o rb s a a n dh s a t h e i rd e t e c t i o nl i m i t s ( s n = 3 ) a r e 3 4n g m la n d2 6 n g m l ，r e s p e c t i v e l y t h et o t a la l b u m e ni nt h ea c t u a lc a l fb l o o d s e r u mw a ss a t i s f a c t o r i l yd e t e r m i n e d t h es e l f a g g r e g a t i o no fo aw a ss t u d i e db y u s i n gf l u o r e s c e n c e ，a b s o r p t i o n ，r e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n ga n dt e m t h er e s u l t s d e m o n s t r a t e dt h a tw h e nt h eo ac o n c e n t r a t i o nw a sa b o u t5 0 1 0 一m o l l ，t h e o as e l f a g g r e g a t e sp r o d u c e d w h e r e a sb s ac o u l dr e s u l ti nt h ed i a g g r e g a t i o n o ft h eo aa g g r e g a t ea n dq u e n c ht h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fo a t h e e x p e r i m e n t si n d i c a t e dt h a tt h e r ew a sas t a t i cq u e n c h i n gp r o c e s si nt h es y s t e m ， w h i c hi sa t t r i b u t e dt ot h ef o r m a t i o no f t h en o n l u m i n e s c e n tb s a - o ac o m p l e x e s t h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n to ft b 3 + _ o as y s t e mi si nd e t a i li n v e s t i g a t e di n t h ef i r s ts e c t i o no ft h ef i f t hc h a p t e r t b 3 + c a nr e a c tw i t ho at of o r ma1 ：2 c o m p l e xi nt r i s h c ib u f f e r ( p h2 7 4 3 ) ，w h i c he m i t st h ei n t r i n s i cf l u o r e s c e n c e o ft b 3 + b a s e do nt h i s an e wf l u o r i m e t r i cm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fo ai s d e v e l o p e d u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h ee n h a n c e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y o ft h es y s t e mi sp r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no fo ai nt h er a n g eo f1 5 10 。 2 5 x 1 0 一m o l l a n dt h ed e t e c t i o nl i m i t ( s n = 3 ) i s5 5 1 0 一m o l l r e c o v e r yt e s t i s s a t i s f a c t o r y a sw e l l t h ee x p e r i m e n t si n d i c a t et h a tt h el u m i n e s c e n c e m e c h a n i s mi sa t t r i b u t e dt ot h em + ml u m i n e s c e n c e s e c o n ds e c t i o no ft h i s v i 山东大学博士学位论文 c h a p t e ri n d i c a t e st h a tt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo ft b 3 + o ac o m p l e x c a nb e g r e a t l yq u e n c h e db ya l b u m i ni nt h ep r e s o n c eo fs o d i u md o d e c y ls u l p h a t e ( s l s ) u n d e ro p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h eq u e n c h e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yi si np r o p o r t i o n t ot h ec o n c e n t r a t i o no fp r o t e i n si nt h er a n g eo f5 0 x1 0 一一1 0 1 0 5g m lf o r b o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) 。1 0 x 1 0 - 7 1 0 x 1 0 。5g m lf o rh u m a ns e r u ma l b u m i n ( h s a ) a n d4 0 1 0 - 71 0 x1 0 5g m lf o re g ga l b u m i n ( e a ) t h e i rd e t e c t i o nl i m i t s ( s n = 3 ) a r e2 1 1 0 一g m l 2 5 x 1 0 。8g m la n d5 0 1 0 一g m l ，r e s p e c t i v e l y t h e e x p e r i m e n t sp r o v et h a tn e g a t i v es l sa n db s a c a nc o m b i n ew i t ht b a + _ o aa n d f o r ms l s b s a t b 3 + o ac o m p l e x m o r e o v e rt h ei n t e r a c t i o na n dt h ee f f e c t i v e e n e r g yt r a n s f e rb e t w e e no a a n dt b 3 + i sw e a k e n e dd u et ot h ec o m p e t i t i o na n d s t e r i ch i n d r a n c e y 3 + r u t i nc o m p l e xa st h ef l u o r e s c e n tp r o b ew a ss t u d i e dt od e t e c tt r a c e a m o u n to fn u c l e i ca c i d si nt h es i x t hc h a p t e r t h ei n s t r i n cf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y o fr u t i ni ny 3 + r u t i nc o m p l e xc o u l db eg r e a t l ye n h a n c e db yt h en u c l e i ca c i d si n t h ep r e s e n c eo fc e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u mb r o m i d e ( c t m a b ) t h ee n h a n c e d e x t e n tw a si np r o p o r t i o nt ot h ec o n c e n t r a t i o no fn u c l e i ca c i d s b a s e do nt h i s ，a s e n s i t i v em e t h o df o rt h eq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no fn u c l e i ca c i d s w a s e s t a b l i s h e d u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n ，t h e r ew a sal i n e a rr e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h ee n h a n c e df l u o r e s c e n c ea n dt h ec o n c e n t r a t i o no fn u c l e i ca c i d si nt h e r a n g eo f1 0 i 0 - 7 _ 1 0 x 1 0 一g m lf o rf s d n a ，1 0 1 0 一4 0 1 0 一g m lf o ry r n a ， a n dt h e i rd e t e c t i o nl i m i t sw e r e7 5 10 8 9 m la n d8 0 x10 一g m l r e s p e c t i v e l y t h i sm e t h o dc o u l db eu s e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to fy r n ai na c t u a ls a m p l e ， a n dt h er e s u l tw a ss a t i s f a c t o r y t h em e c h a n i s ms t u d yi n d i c a t e dt h a tt h e r ew a sa c o o p e r a t i o no fe l e c t r o s t a t i ca n dg r o o v eb i n d i n gb e t w e e ny a + - r u t i na n df s d n a t h ea d d e dc t m a bc o u l dn e u t r a l i z et h ee l e c t r i cc h a r g eo fy 3 + - r u t i n f s d n aa n d f o r m e da ni o na s s o c i a t i o nc o m p l e x t h i sc o u l dn o to n l yi n c r e a s et h es t a b i l i t yo f 山东大学博士学位论文 t h ec o m p l e xb u ta l s oc h a n g ei t sm i c r o e n v i r o n m e n t t h ec h i e fc h a r a c t e r i s t i c so ft h i st h e s i sa r ea sf o i l o w s ： 1 t h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nc ba n db s aw a ss t u d i e du s i n gt h ea n sa s b r i d g e i nt h ep r e s e n c eo fc b ，b s ag r e a t l ye n h a n c e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo f a n s an e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fb s aw a sd e v e l o p e d t h e s a n d w i c h m o d e lw i t hb s aa sas o f tt e m p l a t eo fb s a a n s - c bc o m p l e xw a s p r o p o s e d 2 t h es u p e rs t a b i l es u p e r m o l e c u l en a n o p a r t i c l e sn o n o a g c bw e r e s y n t h e s i z e d c o m p a r i n gw i t hn a n o a g ，n a n o a g c bh a ds t r o n g e rf l u o r e s c e n c ea n d l o n g e rf l u o r e s c e n c e l i f e t i m e i tw a su t i l i z e d i nt h ea s s a yo fp r o t e i n t h e d e t e c t i o nl i m i tw a sd o w nt o10 。1 0g m l 3 o aa g g r e g a t e sc o u l db ed i s a g g r e g a t e db yb s aa n dt h en o n l u m i n e s c e n t b s a o ac o m p l e xw a sf o r m e d t h ed e t e r m i n a t i o nm e t h o df o rp r o t e i nw a s e s t a b l i s h e d 4 i nt h ep r e s e n c eo fs u r f a c t a n t ，b o t ht b 3 + o aa n dr u t i n y 3 + c o m p l e x e s w e r eu s e da saf l u o r e s c e n c ep r o b et oq u a n t i t a t i v e l yd e t e c tp r o t e i na n dn u c l e i c a c i d s ，r e s p e c t i v e l y t h er e s e a r c h e sa b o v en o to n l ye n r i c ht h ei n f o r m a t i o no nt h em e c h a n i s mo f i n t e r a c t i o nb e t w e e ns m a l lm o l e c u l e sa n dp r o t e i n ，a n de n l a r g et h ea p p l i c a t i o no f s u p e r m o l e c u l eh o s tc o m p o u n dc u c u r b i t u r i li nb i o a n a l y t i c a lc h e m i s t r y ，b u ta l s o d e v e l o pt h en e wk i n do fn a n o p a r t i c l e k e y w o r d s ： p r o t e i n ；e u e u r b i t u r i l ；n a n o a g c b ：a n s ；o x o l i n i c a c i d ；s u r f a c t a n t ；r a r e e a r t hi o n