大豆水溶性蛋白质测定法.doc

济南海能仪器有限公司大豆水溶性蛋白质测定仪本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。1仪器和用具1.1凯氏烧瓶：50m1；1.2圆底烧瓶：100m1；1.3万用电炉；1.4锥形烧瓶：100m1；1.5微量滴定管：5ml、刻度001m1；1.6容量瓶：50m1；1.7移液管：5m1；1.8量筒：10ml；1.9洗耳球：1.10凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。凯氏微量蒸馏装置图 1、蒸馏瓶；2、冷凝管；3、承接瓶；4、回流管；5、漏斗； 6、活塞；7、簧夹；8、烧瓶2试剂2.1浓硫酸过氧化氢水混合液(2：1：3)：在t00vtl水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后再国入30过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月；2.2混合催化剂：硫酸铜(cuso45H20)10g，硫酸钾(AR)100g，硒粉0.2g，在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用；2.3 40氢氧化钠溶液；2.4 2硼酸溶液；2.5 O01N盐酸溶液；2.6 甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于75ml 95乙醇中(先在研钵中加乙醇研磨)；2.7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80m195醇中。临用时将以上两液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈绿色。3操作方法3.1消化 按照含有1030mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.203g(w，精确到0. 0001g)，用蜡光纸卷着倒入50nnl凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同时加入硫酸过氧化氢水混合液35m1，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾l0min，取出待消化液冷却至室温后，加水1020m1，再待溶液温度降到室温后，干净地转入50rnl容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。32蒸馏 按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。 在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。 量取30m11硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5m1，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml，冲洗漏斗5。量取40氢氧化钠溶液1m1，提起活塞注入瓶1内，立即用水25m1冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时，经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶l内溶液全部吸入管4中，放松簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水4050ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一次备用。33滴定 用001N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。4结果计算粗蛋白质的干基含量按下列公式计算：粗蛋白质(干基%)=（V1-V0）* N * 14 * P *50/V * 10000/W（100-M）式中：v蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml； V1广实验用去的盐酸溶液体积，m1； v。空白试验用去的盐酸溶液体积，m1； N盐酸溶液的当量浓度，N；14每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数； P蛋白质换算系数(小麦57，其他谷物及豆类6 25)； w试样重量，mg； M_试样水分百分率，。 双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15O以下时，不超过O 2；粗蛋白质含量在15 1以上时，不超过O4。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。 注：消化过程中，若硫酸损失过多时，可酌量补加硫酸，勿使瓶内干涸。 消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏，否则应保存消化液，临用时 加水稀释。 加入蒸馏瓶1内的碱液，必须过量。 也可使用由02甲基红乙醇溶液1份和O2溴甲酚绿乙醇溶液5份 配制的混合指示剂(临用时混合)，终点为灰红色。 附录A大豆水溶性蛋白质测定法 (补充件) A.1仪器和用具 A.1.1粉碎机； A.1.2磨口带塞锥形瓶：50m1； A.1.3振荡器：国际型； A.1.4容量瓶：250m1； A.1.5离心机，附50ml离心管； A.1.6玻璃漏斗； A.1.7锥形瓶、移液管； A.1.8其他仪器和用具与本标准第1章同。 A.2试剂 所有试剂与本标准第2章同A.3操作方法A.3.1试样制备：将大豆粉碎使90以上通过60目筛。A.3.2提取：称取粉碎试样5g(w，精确至0Olg)于磨口带塞锥形瓶中，加水200rt1，摇混使均匀分散，然后在2530温度下振荡2h，取出后将混合液转移至250m1容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀后静置12min，将上层清液倒入离心管中，在每分钟转数1500转的离心机中离心10min，再将离心液用快速滤纸或玻璃纤维过滤，收集清晰滤液于锥形烧瓶中，即为样品水溶性蛋白质测定液。A.3.3定氮：吸取测定液10ml于50m1或100ml凯氏定氮瓶中，按本标准31、32、33步骤进行消化、蒸馏、滴定。记下滴定样品液及空白液消耗盐酸的数量。A.4结果计算 水溶性蛋白质含量按下列公式计算：水溶性蛋白质(干基%)=（V1-V0）* N * 0.014 * 6.25 *10/250*5/50 * 10000/W（100-M）中：V1滴定5ml样品液消耗盐酸体积，m1 v。滴定5m1空白液消耗盐酸体积，ml N盐酸溶液的当量浓度，N； 0014每毫克当量氮的克数； 625大豆含氮量换算成蛋白质系数； 10吸收提取液进行消化的体积，ml； 250总提取液的体积，m1； 5吸收消化液进行蒸馏的体积，m1； 50总消化液的体积，m1； w试样重量，g； M_试样水分百分率，双试验结果允许差不超过0.4，求其平均数，即为测定结果。测定结果取 小数点后第一位。 注：大豆氮可溶解指数()的计算方法是：以所测得的大豆水溶性蛋白 质()除以大豆总蛋白质()，再乘以100即得。 本方法采用样品制各方法及提取方法使测定结果较为稳定，但如因 粉碎样品细度达不到要求，则可采用称取试样5.00g于研钵中，加 5m1水，用手研磨10min，将混合物用200m1水转移至250m1磨口瓶 中，再在振荡器上振荡30min，然后同本标准3 2进行定容、离心、 过滤、定氮济南海能仪器有限公司Jinan Hanon Instruments Co., Ltd.地址：济南市高新区天辰大街677号 Tianchen Avenue No. 67