（基础兽医学专业论文）庆大林可霉素的安全毒理学研究.pdf

；，。詹爹。j_lll二，、。目录删暑t o n 詈i 皇曼皇鼍詈詈詈詈曼曼詈詈詈詈篁皇皇! 拿葛皇皇曼皇皇詈詈詈詈曼詈詈詈詈曼! ! 詈詈詈皇! 曼! ! 皇曼詈曼! 曼詈鲁量鲁量鼍鼍皇詈詈皇詈詈詈詈置o = _ 二皇= 鼍目录摘要ia b s t r a c t i i l1 弓l 言11 1 庆大霉素一林可霉素注射液的概述。l1 1 1 庆大霉素的化学组成11 1 2 庆大霉素的抗菌特性11 1 3 林可霉素的化学组成11 1 4 庆大霉素的毒性作用21 1 5 庆大霉素的肾毒性机制31 2 药物安全评价及毒理学研究。31 2 1 药物的安全性评价31 2 2 药物毒理学研究51 2 3 药物毒理学发展趋势与展望71 3 体外模型在药物肾毒性评价中的应用。81 3 1 离体灌注肾脏81 3 2 离体肾单位。81 3 3 肾脏切片91 3 4 离体肾小球和肾小管节段91 3 5 离体培养的细胞91 4 本研究的目的意义1 12 材料与方法1 22 1 试验材料。122 1 1 试验药物1 22 1 2 试验动物1 22 1 3 试验仪器1 22 1 4 主要试剂1 32 1 5 溶液的配制1 32 2 试验方法132 2 1 一般毒理学1 42 2 2 靶动物的安全性试验1 72 2 3 庆大一林可霉素对猪肾p k - 1 5 细胞的毒性评价2 12 2 4 数据处理2 43 结果2 53 1 一般毒理学2 53 1 1 急性毒性试验2 53 1 2 溶血试验2 5，、，t毫东北农业大学农学硕士学位论文3 1 3 血管刺激性试验2 63 1 4 肌肉刺激性试验。2 63 1 5 皮肤刺激试验2 63 1 6 全身过敏性试验2 73 1 7 皮肤过敏试验2 73 2 靶动物安全性评价2 73 2 1 l 豳床观察2 73 2 2 对血常规的影响2 83 2 3 病理变化2 93 2 4 肝肾功能的监测3 03 3 庆大一林可霉素对猪肾p k - 1 5 细胞的毒性评价3 l3 3 1 细胞形态学3 l3 3 2 庆大一林可霉素对猪肾p k - 1 5 细胞的抑制作用3 23 3 3 l d h 、n a g 漏出量3 34 讨论3 44 1 急性毒性试验3 44 2 刺激性试验3 44 3 靶动物安全性评价3 54 3 1 庆大林可霉素注射液对仔猪血象的影响k 3 54 3 2 庆大林可霉素注射液对仔猪肝肾功能的影响3 54 4 庆大和林可霉素对猪肾p k 1 5 细胞的毒性评价3 64 4 1 细胞形态学3 64 4 2 庆大一林可霉素对猪肾p k - 1 5 细胞的抑制作用3 64 4 3 l d h 、n a g 漏出量3 75 结论3 9致谢4 0参考文献4 l附录4 5攻读硕士期间发表的学术论文。4 9，一c o n t e n t sc o n t e n t sc h i n e s ea b s t r a c t ia b s t r a c t i i i1i n t r o d u c t i o n 11 1o v e r v i e wo fg e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o n 11 1 1t h ec h e m i c a lc o m p o s i t i o no fg e n t a m i c i n 。l1 1 2t h ea n t i b a c t e r i a lp r o p e r t i e so f g e n t a m i e i n l1 1 3t h ea n t i b a c t e r i a lp r o p e r t i e so fl i n c o m y c i n 。11 1 4g e n t a m i c i nt o x i c i t y 21 1 5m e c h a n i s mo fg e n t a m i c i nn e p h r o t o x i c i t y 31 2d r u gs a f e t ye v a l u a t i o na n dt o x i c o l o g y 31 2 1s a f e t ye v a l u a t i o no fd r u g s 31 2 2d r u gt o x i c o l o g y 51 2 3t r e n d sa n dp r o s p e c t so f d r u gt o x i c o l o g y 71 3r e n a lt o x i c i t yi nv i t r om o d e li nd r u ge v a l u a t i o n 81 3 1i s o l a t e dp e r f u s e dk i d n e y 8i 3 2i s o l a t e dn e p h r o n 81 3 3r e n a lb i o p s y ；91 3 4i s o l a t e dg l o m e r u l ia n dt u b u l a rs e g m e n t s 91 3 5c u l t u r e dc e l l si nv i t r o 91 4o b j e c t i o na n ds i g n i f i c a n t 112m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 1 22 1e x p e r i m e n t a lm a t e r i a l s 1 22 1 1e x p e t i m e n t a lm e d i c i n e s 1 22 1 2e x p e r i m e n t a la n i m a l s 1 22 1 3m a i ni n s t r u m e n t s 1 22 1 4m a i nr e a g e n t s 1 32 1 5p r e p a t a t i o no f s o l u t i o n 1 32 2e x p e r i m e n t a lm e t h o d s 1 32 2 1g e n e r a lt o x i c o l o g y 1 42 2 2t a r g e ta n i m a ls a f e t yt e s t 172 2 3t h et o x i c i t ye v a l u a t i o no fg e n t a m i c i nl i n c o m y c i ni n j e c t i o no nk i d n e yp k 一15c e l l212 2 4d a t ap r o c e s s i n g 2 43r e s u l t s 2 53 1g e n e r a lt o x i c o l o g y 2 53 1 1a c u t e t o x i c i t y t e s t 2 53 1 2h e m o l y s i st e s t 2 5东北农业大学农学硕士学位论文3 1 3v a s c u l a ri r r i m t i o nt e s t 2 63 1 4m u s c u l a rs t i m u l a t i o nt e s t 2 63 1 5s k i ni r r i t a t i o nt e s 2 63 1 6s y s t e m i ca l l e r g yt e s t 2 73 1 7s k i na l l e r g yt e s t 2 73 2t a r g e ta n i m a ls a f e t yt e s t 2 73 2 1c l i n i c a lo b s e r v a t i o n 2 73 2 2i n f l u e n c eo f t h ed r u go np i g sb l o o dr e g u l a r 。2 8：；2 3p a t h o l o g i c a lc h a n g e s 2 93 2 4i n f l u e n c eo f t h ed r u go nf u n c t i o no f l i v e ra n dk i d n e yo f p i g 3 03 3t h et o x i c i t ye v a l u a t i o no f g e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o no nk i d n e yp k 一1 5c e l l 3 13 3 1c e l lm o r p h o l o g y 3 1：；3 2m t ta s s a y 3 23 3 3l d h 、n a gl e a k a g ea s s a y 3 34d i s c u s s i o n 3 44 1a c u t et o x i c i t yt e s t 3 44 2i f i i t a t i o nt e s t 3 44 3t a r g e ta n i m a ls a f e t yt e s t 3 54 3 1i n f l u e n c eo f t h ed r u go np i g sb l o o dr e g u l a r 3 54 3 2i n f l u e n c eo f t h ed r u go nf u n c t i o no f l i v e ra n dk i d n e yo f p i g 3 54 4t h et o x i c i t ye v a l u a t i o no f g e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o no nk i d n e yp k - 1 5c e l l 3 64 4 1c e l lm o r p h o l o g y 3 64 4 2m t ta s s a y 3 64 4 3l d h 、n a gl e a k a g ea s s a y 3 75c o n c l u s i o n 3 9a c k n o w l e d g e m e n t 4 0r e f e r e n c e 4 la p p e n d i x 4 5p a p e r sp u b l i s h e di nt h ep e r i o do fm d e d u c a t i o n 4 9薹，ljl 、0 0 j t研究生学位论文独创申明和使用授权书独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得l 洼! 垫遗直墓丝霞墓挂别直明的：奎拦亘窒或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：食蝎籼日期：卅口年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：囔囱鞫日期：刃肜年月j 厂日导师签名：孑、 盏饧日期：御形年月，日0，摘要摘要兽药安全性评价是新兽药开发过程中不可缺少的部分，是传统意义上的对上市之前新兽药进行的毒性评价，主要通过动物实验发现新兽药的单剂量和多剂量给药时产生的毒性作用。庆大一林可霉素注射液是用于治疗猪链球菌病的一种新药，本课题对其进行了一般毒性、靶动物安全性和细胞毒理性试验研究，从而为该药在临床上的安全、合理使用提供理论基础和试验依据。肌内注射庆大一林可霉素注射液，对小鼠进行急性毒性试验，测定其半数致死量( l d 5 0 )为4 9 8 9 m l k g ( 亦即0 3 9 9 9 k g ) ，相当于临床剂量的1 5 倍，说明此药急性毒性较小。采用家兔进行了该注射液的溶血及肌肉、血管和皮肤刺激试验，采用豚鼠进行了全身过敏性及皮肤过敏性试验。结果表明，o 1 , - - , 0 5 m l 该注射液在4 h 内对兔红细胞不产生溶血和凝聚作用；静脉注射部位血管及周围组织均未见充血、水肿、出血和坏死等病理改变；肌肉注射部位充血范围在0 5 e m x l 0 e m 以下，4 块股四头肌反应级的最高与最低之差等于o ，家兔四块股四头肌反应级之和小于1 0 ，此药的肌肉刺激试验符合规定；以相当于临床用量2 倍的剂量涂抹皮肤，停药后l h 、2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 镜下观察均未见明显异常的病理变化；豚鼠首次致敏后第1 4 d 及2 1 d 静脉注射液攻击，在观察期内未见过敏反应。在靶动物安全性实验中，分别对仔猪肌肉注射相当于临床用量的1 、3 、5 倍剂量的庆大一林可霉素注射液，每天一次，连续7 d ，观察用药后仔猪临床症状，测定其血常规、肝肾功能等指标，对仔猪进行病理解剖学和组织学检查。试验结果表明：该注射液对仔猪的生长无明显影响，各项血液学及肝功能的指标无显著差异性改变，但随着药物浓度升高，肾功能指标发生显著性变化。0 2 - 3 2 m g m l 庆大一林可霉素注射液作用于体外培养的猪肾p k 1 5 细胞2 4 - - 7 2 h ，m t t 法测定庆大一林可霉素对细胞增殖的抑制率；采用试剂盒测定l d h 、n a g 的漏出量。结果说明庆大林可霉素注射液对猪肾p k - 1 5 细胞的增殖具有抑制作用，抑制率具有药物浓度和作用时间依赖性；随着庆大林可霉素注射液浓度的增加，l d h 、n a g 的漏出量也增加。表明庆大、林可霉素对细胞有一定的毒性，但作用机制有待进一步研究。关键词庆大林可霉素注射液；急性毒性；刺激性；靶动物安全性评价；细胞毒理r，；，1a b s t r a c ts t u d yo nt h esa f e t yt o x i c l o g yo fg e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n je c t i o na b s t r a c tt h es a f e t ye v a l u a t i o nf o rv e t e r i n a r yd r u g si sa ni n t e g r a lp a r tf o rd r u gd e v e l o p m e n tp r o c e s s i ti st h et r a d i t i o n a lt o x i c i t ye v a l u a t i o nf o rn e wv e t e r i n a r yd r u g sa ts i n g l ea n d o rm u l t i p l ed o s ea d m i n i a t r a t i o nv i aa n i m a l se x p e r i m e n t s o e n t a m i c i n - - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o ni san e w l ys t u d i e dd r u ga g a i n s ts t r e p t o c o c c u ss u i s i nt h i ss t u d y ，t e s t so ft h eg e n e r a lt o x i c i t y ，t a r g e ta n i m a ls a f e t ya n dc e l lt o x i c i t yw e r et a k e nt op r o v i d eat h e o r e t i c a la n de x p e r i m e n t a lb a s i sf o ru s i n gi ti nc l i n i c a ls a f e t ya n dr a t i o n a ld o s e l d s oo fg e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o nb yi n t r a m u s c r u l a ra d m i n s t r a t i o ni nm i c e ，w a s4 9 8 9m l k g ( i e0 3 9 9 9 k g ) ，e q u i v a l e n tt o15t i m e so ft h ec l i n i c a ld o s e ，s h o w i n gt h a ti t sa c u t et o x i c i t yw a sl e s s i r r i t a n tt e s t si n e l u d e dt h ee x p e r i m e n t a lh e m o l y s i s ，m u s c l es t i m u l a t i o n ，v a s c u l a ri r r i t a t i o nt e s ta n ds k i ni r r i t a t i o nt e s ti nr a b b i t s ，t h eg e n e r a la n da l l e r g i cs k i na l l e r g yt e s t si ng u i n e a - p i g s t h er e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ：h e m o l y s i so rc o a c e r v a t i o ni nt h er e db l o o dc e l l si nr a b b t sd i dn o to c c i rf o r0 1 o 5 m lo ft h ei n j e c t i o ni n4 h ；p a t h o l o g i c a lc h a n g ss u c ha sh y p e r a e m i a , e d e m ao rh e m o r r h a g ew e r en o te x a m i n e di nt h ev e i n sw h e r et h e yw e r ei n j e c t e di n t r a v e n o u s i ya n di nt h e i rs u r r o u n d i n gt i s s u e s ，h y p e r a e m i ao c c u r r e dr a n g e db e l o w0 5 c m x1 0 c mo nt h ei n t r a m u s c u l a ri n j e c t i o ns i t e ，t h ed i f f e r e n c ev a l u eb e t w e e nt h em a x i m u ma n dt h em i n i m u mo r d e ro fr e a c t i o ni nq u a d r i c e p sw a sz e r om o r e o v e rt h es a mo ft h e mw a sl e s st h a n10 ；d o u b l ed o s eo ft h ec l i n i c a ld o a g eo ft h ei n j e c t i o nw a ss m e a r e do nt h er a b b i ts k i n , o b v i o u sp a t h o l o g i c a lc h a n g e sw e r en o to b s e r v e da f t e rt h ed r u gw i t h d r a w a lf o rlh 、2 4 h 、4 8 ha n d7 2 h ；a n a p h y l a c t i cr e a c t i o nw a sn o to b s e r v e di nt h eg u i n e ap i g sa f t e rt 1 1 e yw e r ef i r s ts e n s i b i l i z e df o r1 4a n d2 1d i nt h et a r g e ta n i m a ls a f e t ye x p e r i m e n t s ，p i g l e t sw e r ea d m i n i s t r a t e da t1 ，3 ，5t i m e so ft h ec l i n i c a ld o s eo fg e n t a m i c i n - - l i n c o m y c i ni n j e c t i o nf o rs e v e nd a y s ，o n c ead a y t h ec l i n i c a ls y m p t o m sw e r eo b s e r v e d ，t h eh e m a t o l o g i c a la n df u n c t i o n a lp a r a m e t e r so fl i v e ra n dl ( i d n e yw e r ed e t e r m i n e di ne a c hg r o u p t h e np a t h o l o g i c a la n a t o m ya n dh i s t o l o g ye x a m i n a t i o no ft h ep i g l e t sw e r ec a r r i e do u t t h er e s u l t ss h o w e dt h a t ，t h ed r u g sh a dn oe f f e c to nt h eg r o w t ho fp i g l e t s ，a n dt h e r ew e r en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e si nt h ei n d i c a t o r so ft h eb l o o da n dl i v e r w i t ht h ei n c r e a s i n go ft h ei n j e c t i o nc o n c e n t r a t i o n ，r e n a lf u n c t i o n a li n d i c a t r i x e sh a ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sa m o n ga l lt r e a t m e n t a lg r o u p s i no r d e rt oe v a l u a t et h et o x i c i t yo fg e n t a m i c i n m l i n c o m y c i ni n j e c t i o no nc e l l s ，p k 一15c e l l sw e r et r e a t e dw i t hi t ( 0 2 3 2 m g m l ) f o r2 4 7 2 h i t se f f e c to fg r o w t hi n h i b i t i o no nc e l l sw a sm e a s u r e db y3 ( 4 ，5 d i m e t h y l t h i a z 0 1 ) 一2 ，5 一d i p h e n y l t e t r a z o l i u m b r o m i d e ( m t t ) t h ed e t e r m i n a t i o ni i i东北农业大学农学硕士学位论文o fl e a k a g eo fl d ha n dn a gw a sp e r f o r m e du s i n gac o m m e r c i a lk i t t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h eg e n t a m i c i n - - l i n e o m y c i ni n j e c t i o ni n h i b i t e dt h eg r o w t ho fp k 1 5c e l l s ，a n dm o r e o v e r ，t h ei n h i b i t i o ni n e r e a s e dl i n e a r l yw i t ht h ei n c r e a s eo ft h ei n j e c t i o nc o n c e n t r a t i o n sa n dt i m e so fi n c u b a t i o n ，n a m e l y ，a si t sc o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e d ，l d ho rn a gl e a k a g ea l s oi n c r e a s e d i ti sc o n c l u d e dt h a tt h eg e n t a m i e i na n dl i n c o m y c i ni n j e c t i o ne x e r t e dc e r t a i nt o x i c i t yo nc e l l s k e yw o r dg e n t a m i c i n - - l i n c o m y e i ni n j e c t i o n ；a c u t et o x i c i t y ；i r r i t a t i o nt e s t ；t a r g e ta n i m a ls a f e t ye v a l u a t i o n ；c e l lt o x i c i t yi vc a n d i d a t e ：j i ah a i y a ns p e c i a l i t y ：b a s i cv e t e r i n a r ys c i e n c es u p e r v i s o r ：p r o fl ij i c h a，f，毒引言1 引言1 1 庆大霉素一林可霉素注射液的概述庆大霉素、林可霉素主要通过抑制细菌蛋白质的合成而达到抑杀病原微生物的作用，二者配伍应用具有协同增效的作用。为适应猪场食欲下降发病猪的临床治疗需要，可以将林可霉素一庆大霉素制成复方注射剂便于治疗伴有食欲下降症状的细菌感染性发病猪只。1 1 1 庆大霉素的化学组成庆大霉素是由绛红小单孢菌、棘孢小单孢菌等发酵产生的氨基糖苷类抗生素，是由2 脱氧链霉胺、绛红糖胺、加拉糖胺组成的多组分混合物，并以c 族复合物为主。2 脱氧链霉胺分别在4 、6 位上通过苷键连接绛红糖胺和加拉糖胺，因绛红糖胺c 6 上的甲基化程度不同，形成了c i 、c 2 、c 1 a 3 个主要组分，这3 个组分中，c 1 、c 2 、c l a 的疗效和毒性互不相同：c 1 组分毒副作用最小且不易产生耐药性，但疗效稍差c 2 和c l a 组分疗效高，但毒性较大且容易产生耐药性。1 1 2 庆大霉素的抗菌特性庆大霉素呈碱性、易溶于水、性状稳定，与硫酸结合成临床上使用的硫酸庆大霉素。它的抗菌谱较广，对绿脓杆菌、大肠杆菌、产气杆菌、克雷白杆菌、奇异变形杆菌、某些吲哚变形杆菌、某些奈瑟菌、某些无色素雷杆菌和志贺菌等革兰氏阴性菌有抗菌作用，而且对革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄球菌也有很强的抗菌作用，其抗菌作用机理是直接与3 0 s 核糖体亚单位1 6 r r n a 的解码区的a 部位结合，从而导致菌体死亡。但是，随着庆大霉素的广泛使用，一些细菌逐渐对其产生了耐药性，j a k o b s e nl 等曾报道了1 2 0 株对庆大霉素耐药的大肠埃希菌的最小抑菌浓度( m i c ) 和耐药机制的关系( j a k o b s e nle ta l ，2 0 0 7 ) 。1 1 3 林可霉素的化学组成林可霉素又称沽霉素，由链丝菌变异菌株的发酵液中提取的林可胺类杭生素，其化学名称是为6 - ( 1 一甲基- 反4 一丙基- l - 2 - 毗咯烷甲酞氨基) - l 一硫代- 8 一二脱氧d 一苏式一a - d - 半乳辛吡喃糖普盐酸盐一水合物。临床上应用于革兰氏阳性菌引起的各种感染，特别适用于耐青霉素、红霉素菌株的感染或对青霉素过敏的患畜，如肺炎、蜂窝织炎、骨髓炎和败血症等疾病。东北农业大学农学硕士学位论文1 1 4 庆大霉素的毒性作用在临床上，由于庆大霉素的抗菌谱广，疗效好而且费用低廉，而深受医生和患者的欢迎，故其使用非常广泛。但是由于庆大霉素的有效血清浓度和毒性浓度相近，造成的耳、肾毒性时有发生，甚至出现严重的后果。1 1 4 1 肾毒性庆大霉素长期或者超剂量使用会引起肾毒性，主要是g m 经肾小球过滤后在近曲小管内聚集，并与近曲小管刷状缘泡状结构上的酸性磷脂受体结合，g m 绝大多数被膜上富含酸性磷脂的初级溶酶体吞饮摄取，它能抑制溶酶体内磷脂酸a 和c 的活性，使磷脂降解障碍，导致磷脂堆积，使膜结构改变，膜通透性增高、膜破裂和多种水解酶溢出并引起细胞的继发性损伤。庆大霉素进入机体后，最终几乎全部以原形经肾小球滤过，当其在肾小管内的浓度增加至中毒浓度时，可直接损伤肾小管上皮细胞，所造成的肾毒性是急性肾衰竭( a c u t er e n a lf a i l u r e ，a r f ) 的主要原因之一。据报道，庆大霉素肾毒性的发生率为2 - 3 0 ，增加剂量与延长疗程可达6 6 ，重症死亡病例时有出现。对于a r f 的诊断，可以通过检查尿液中的尿素、肌酐、碱性磷酸酶等指标予以确诊，但更常用的是血清学诊断，检查血清中的血尿素氮( b u n ) 、肌酐( s c r ) 和内生肌酐清除率( c c r ) 等。由于庆大霉素引起的a r f 多为多尿型，而且肾功能有很强的代偿能力，故血清生化指标的正常并不一定代表肾脏没有病理改变。而一旦出现异常，肾脏的病理损害可能已达到相当的程度，应当引起高度重视( 杜兆鹏，1 9 9 6 ) 。在形态学方面，可见肾体积增大似球状，呈亮黄色，肾皮质增厚：光镜可见肾小球明显缩小，肾小囊明显扩张；p a s 染色显示肾小球基底膜散在性破坏，呈不连续状；肾小管尤其是近端小管损害较严重，细胞严重浊肿，胞浆疏松，部分细胞空泡变性，脂肪变性，出现片状坏死，管腔内有较多的细胞碎片及颗粒管型；有些管腔则明显扩张，管壁变薄，管腔内多量蛋白、颗粒管型。电镜下可见次级溶酶体明显增加，髓样体形成：线粒体肿大，嵴间隙扩张，嵴消失，甚至整个线粒体崩解；近端小管上皮细胞微绒毛融合、裂解，部分缺失，排列紊乱( 黄巨恩，2 0 0 0 ) 。1 1 4 2 过敏反应及过敏性休克死亡庆大霉素为非蛋白质半抗原，进入体内与体内蛋白质结合变成抗原而产生致敏抗体。机制尚未清楚，有学者认为主要与某些患者对庆大霉索在有过敏性或变态反应体质有关。可能是速发型超敏反应或复合物沉积型( i i 型过敏反应) 。与青霉素过敏反应相类似，即时给氧。肾上腺素、地塞米松等静脉注射一般都能好转。也有经积极抢救无效而发生过敏性休克死亡者。庆大霉索引起的过敏性反应有首次注射发生者，也有注射2 1 5 次后发生者。应引起临床医师注意。1 1 4 3 消化系统的副作用2引言常有恶心、呕吐、食欲减退、腹胀等。据报道，用庆大霉索治疗后出现转氨酶升高等肝脏损害表现，停用庆大霉紊后肝功能恢复正常。另外，庆大霉紊和氨苄西林( 氨苄青霉素)合用可使肠道苗群失调，发生顽固性细菌性肠炎( 苗丽娜，1 9 8 8 ) 。1 1 5 庆大霉素的肾毒性机制庆大霉素经肌注或静脉滴注进入体内后，分布于细胞外液中，不在体内代谢。除1 经胆道排泄之外，9 9 均经肾小球滤过，滤液中的庆大霉素约4 0 被近端小管重吸收，因此，肾间质中庆大霉素浓度约为血浆浓度的2 0 3 0 倍。在肾小球滤液中的庆大霉素，其阳离子氨基基团与肾小管上皮细胞膜上的阴离子磷脂膜受体相结合，并以吞饮方式将其摄入胞内，形成囊泡与溶酶体结合，而成次级溶酶体及髓样小体，细胞内庆大霉素积累，使溶酶体膜破裂，释出的庆大霉素又与线粒体相结台，使线粒体功能和能量发生障碍，导致细胞死亡。长期以来，在人医方面，有关肾毒的机理研究很多，也提出了很多的学说，但多数学者认为，氨基糖甙( 如庆大霉索) 经肾小球滤过后，主要在近曲小管通过上皮细胞“摄粒”作用重吸收进人上皮，并贮存于细胞的溶酶体内。此时，溶酶体内的浓度远远高于其它细胞器或血内药物浓度，甚至是细胞外液浓度的1 0 - - 1 0 0 倍。由于庆大霉素可抑制磷脂酶活性，引起溶酶体内磷脂沉积，致使溶酶体肿胀、破裂，释放蛋白水解酶、毒素和大量药物，由此，引起其它亚细胞单位和细胞膜损害，肾小管上皮坏死，致使少尿、闭尿、蛋白尿，血清肌酐、尿素氮、磷、钾升高等现象发生。之外，庆大霉素类还能继续与线粒体结合，使细胞的氧化磷酸化过程受损，某些电解质离子( 如钾、钙、镁等) 代谢紊乱，能量代谢发生障碍( 金星方，2 0 0 9 ) 。1 2 药物安全评价及毒理学研究1 2 1 药物的安全性评价药物是一种用于预防、治疗、诊断疾病的特殊商品，在促进人类的发展和社会的进步中起到了十分重要的作用。药品使用不安全或使用不当都会给人们的健康、生活质量、社会的安定以及发展建设造成严重威胁。胡锦涛总书记在党的十七大报告中提出了：在新的发展阶段继续全面建设小康社会、发展中国特色社会主义，必须坚持以邓小平理论和“三个代表”重要思想为指导，深入贯彻落实科学发展观。而药物的安全性问题恰是政府和人民关心的头等大事，也是科学发展观中政府执政为民、以人为本的具体体现。在科技迅速发展、社会进步的新时代，我们要切实贯彻落实“全面、协调、可持续发展”的科学发展观，保证药物在上市后是安全有效的良药。1 2 1 1 药物安全性评价的目的与意义3东北农业大学农学硕士学位论文在人类与疾病斗争寻找新药的征途上，由于对新药安全性评价的重要性认识不足，药政法规不完善，科学技术水平有限，曾经付出了惨痛的代价。2 0 世纪3 0 年代的磺胺事件，造成当时上百人死亡，其原因就是未进行认真的动物毒性试验。2 0 世纪5 0 年代法国的有机锡胶囊事件，因其不合理的实验设计和不充分的动物实验，上市后造成2 0 7 人中毒，1 0 2人死亡。1 9 5 9 一- 1 9 6 2 年的“反应停”事件，因限于当时的试验条件，未进行充分的动物致畸试验，孕妇服用后导致上万名产儿先天畸形。2 0 世纪6 0 7 0 年代日本的氯典喹啉事件，造成上千人失明或下肢瘫痪，也是安全性评价不完善造成的。这些不幸事件的发生，促使各国药政部门不断提高对新药临床前安全性评价的要求，随着科学技术的发展，许多新技术、新方法也不断用于新药的安全性评价中。但是，临床前安全性评价水平的提高、工作的增加并不意味着可以杜绝药物不良反应的发生。在新药的开发研究的整个过程中，耗时最长、花费最大的两个阶段是毒理学研究和临床试验，而毒理学研究始终贯穿于新药开发的全过程，正是安全性评价在新药研制与开发过程中占有如此重要的地位，又要耗费大量的财力和时间，各大制药公司对安全性评价既重视又慎重。安全性评价工作在新药发现过程的作用和地位也日益受到重视。现在，不仅进行高通量的药效筛选以寻找新的药物，还进行高通量的毒性筛选，以早日排除不适宜成为“药物”的结构，降低新药研制成本。各国药政管理部门也对安全性评价的质量提出了严格的要求，这就是实验研究质量规范( g p l ) 和药品注册技术要求国际协调的原因。我国也加强了这方面的法规建设，2 0 0 1 年1 2 月开始实施的药品管理法明确提出，新药的非临床研究必须实施g l p 管理，国家药品监督管理局也开始了g p l 实验室认证工作。1 2 1 2 我国新兽药安全性评价我国从2 0 世纪8 0 年代后期开展新兽药评审工作，设立了新兽药评审小组，重点问对下岗我国注册的进口兽药进行评审，目的是保障用药的效果。随着审评工作的深入，农业部设立了专门的技术审评机构一农业部兽药审评委员会及其办公室，新兽药审评工作走向规范化、科学化发展轨道，并要求对新兽药进行安全性、有效性和质量可控性三个方面的评价，使新兽药的审评更加全面、科学。年月农业部兽药评审中心正式挂牌，标志着兽药评审工作正式走向制度化、专业化。安全性评价是传统意义上的对上市之前新兽药进行的急性、亚急性、慢性( 简称三性)和致突变、致畸胎、致癌( 简称三致) 评价。主要通过实验动物发现新兽药的单剂量和多剂量给药时产生的毒性作用，通过体内、外实验模型发现新兽药的三致作用，从而发现最敏感的靶动物种类和最低无作用剂量。安全评价流程：对兽药的安全性进行评价一般采取毒理学评价方法，包括三性( 急性、亚慢性、慢性毒性) 试验和三致( 致突变、致畸胎、致癌) 试验，以预测新兽药的安全性。根据新兽药研发过程，新兽药安全评价过程一般分为实验动物试验阶段和靶动物试验阶段两个阶段。实验动物试验阶段即通常所说的安全性评价试验，包括体内试验和体外试验，单剂量和多剂量试验。靶动物试验阶段包括靶动物安全试验、安全药理学试验和上市后不良反应监测。新兽药安全评价流程一般是先进行实验动物阶段试验，然后进行靶动物试验阶段试验。在实验动物试验阶段，一般首先进行单剂量染毒试验，确定新兽药急性染毒的4而乒爹y智参曩p。，。，、引言毒性级别，然后进行多剂量试验。1 2 2 药物毒理学研究毒理学一词是由希腊文“t o x i k o n ”和“l o g o s ”两个词组和演变而来的，原文含义是指描述毒物的科学。药物毒理学是研究药物在一定条件下对生物体的损害作用，并对药物毒性作用进行定性、定量评价以及对靶器官毒性作用机制进行研究的一门科学。药物毒理学研究的毒性数据是评价药物安全性的唯一依据，同时也是新药评审的重点内容之一。药物毒理学是以分子生物学、遗传学、解剖学、动物学、病理学、统计学等为基础学科而发展起来的。它研究的内容包括对药物的一般毒性、特殊毒性以及对靶器官的毒性作用机制研究，通过这些方面的研究为正确评价药物的安全性、危害性提供科学依据，对临床的安全用药具有重要意义。从生物学的观点看，一种药物的毒性是有许多可变因素决定的，并受到多种因素的影响，如药物的理化性质，吸收途径，进入生物体内的转运、转化过程及所产生的毒性反应是否可逆等。此外，毒性反应并不限于一般的反应，在剂量足够大时，几乎所有的药物都产生特殊类型的毒性。例如损害某一特殊器官，或某一特殊的酶活性受到影响而引起中毒症状。因此，药物毒理学还要研究药物的这些特殊的毒性作用。毒理学研究一般以实验动物为模型，主要研究其给药后的表现、血液学、临床生物化学和组织病理学等指标，作为器官损伤的指示剂，进行药物毒性的评价，并将此毒理学研究结果外推至人中毒原型，以便最终保证人类健康( s t c i n e rs ，2 0 0 0 ) 。实验动物的选择，主要根据两种因素：一是作为人类实验模型的适合性，即该种动物对选定的化学因子反应与人体反应十分相似；二是经济上的考虑，要用容易得到的和价格便宜的动物。啮齿类动物一般适合于急性毒性和重复实验，但在测定某些特殊类型的毒性时，只能用与人类反应相似的某些哺乳动物。对于精神药物以及与营养和衰老有关的毒性研究，这些情况尤其如此。虽然实验动物多以哺乳动物为主，而且哺乳动物在解剖学、生理学、生物化学及外源化学物在机体内的代谢转化等方面与人类有共性的一面，但是哺乳动物在物种进化上、遗传上及其所决定的生理、生殖等方面毕竟与人类有本质的区别。并且动物与人对药物反应存在种属差异，有的反应仅出现于动物，有的反应仅出现于人，动物和人共同出现的仅占一部分。如：l i t c h f i e l d 统计了六类药物在狗和大鼠中的毒性表现与人的相似程度，结果发现准确性并不高。在5 0 0 例病人中共观察到5 3 个药物反应症状，由大鼠预测的占3 4 ，由狗预测的占5 5 ，两种动物一起也仅能预测5 7 ( 王治桥，1 9 9 7 ) 。由于还没有合适的人体代用物，因此毒理学的许多方面还必须依靠不太合适的模型系统。但是随着医学科学的发展以及一些新方法的提出，正在使毒理学研究得到不断的发展和完善。如：对致癌物质的评定将使用一种定量的模型，它所重视的是从高剂量到低剂量的推导，而不是动物到人的种属间的推导( 吴德昌，1 9 9 7 ) 。我们在承认传统毒理学的发展为人类所做出的巨大贡献的同时，还应该不断发展和完善现代毒理学研究。毒理学在6 0 年代以前主要以描述为主，瑞士人p a r a c e l s u s 奠定了毒理学的基础，明确提出剂量概念，指出所有物质都是有毒的，只是依剂量不同以区别是药物还是毒物。最近4 0 年内毒理学才真正摆脱了以描述为主，发展成为多学科交叉的科学。它从生理学、药物学、新陈代谢、行为学、遗传学、胚胎学、5东北农业大学农学硕士学位论文化学和数学等许多基础学科中汲取数据和方法。1 2 2 1 药物毒理学的目的( 1 ) 了解药物的毒性反应。药物用于防病治病，但它有很强的两重性，一方面可以给人们带来福音，造福于人类；另方面或多或少的会对用药的人产生一定的有害作用。这种有害作用有赖于药物毒理学工作者加以分析阐述。同时，药物毒理学研究的目地就是发现受试药物的中毒剂量，初步了解反复给药时产生毒性反应的剂量，为进一步毒性研究和临床研究计量设计提供依据。( 2 ) 确定药物毒作用的靶组织或靶器官，进而确定药物毒性作用的机制。因为，药物并不是对所有组织或器官都具有同等强度的作用，尽管这里的原因往往并不十分的清楚，但靶器官的确定往往有助于分析毒性作用机制。毒性机制的研究是药物毒理学研究的一个中心环节，它即对已发现的毒性作用的性质加一认识，同时，也可知道进一步的毒性研究工作，为临床上的安全用药提供一定的安全保证。( 3 ) 确定毒性作用的剂量范围，或换言之确定治疗的安全范围。在这方面研究的意义在于划分毒物与药物的界限即了解“剂量反应”关系。如果一个新药研制出来的化合物其治疗剂量与中毒剂量十分接近，毫无疑问它作为药物开发利用的价值就几乎不存在了。另一方面，对于药物的这一特性的了解在临床上有