（水产养殖专业论文）发酵制备腺苷甲硫氨酸及其对凡纳滨对虾的应激保护.pdf

1 c l a s s i f i e di n d e x ：$ 9 4 5 4 + 6 s e c u r i t yc l a s s i f i c a t i o n ： u d c ：6 3 9 5 s e c u r i t yp e r i o d ： d i s s e r t a t i o nf o rt h em a s t e r sd e g r e e s t u d i e so np r e p a r a t i o no f s - - a d e n o s y l - - l - m e t h i o n i n eb ym i c r o b i a l f e r m e n t a t i o na n dt h es t r e s sp r o t e c t i o no f t j l l t 0 d e n a e u sv a n n a m e l c a n d i d a t e ： s u p e r v i s o r ： s p e c i a l i t y ： r e s e a r c hf i e l d ： u n i v e r s i t y ： - s u b m i s s i o nd a t e ： l i ux l a om l n p r o f q i ud eq u a n a g r i c u l t u r e i m m u n o l o g y a n dd i s e a s ec o n t r o l o f a q u a t i ce c o n o m i ca n i m a l g u a n g d o n g o c e a nu n i v e r s i t y a p r i l2 0 1 0 9 川7删060舢8 iiiiiy 广东海洋大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得 的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个 人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承 担。 作者签名多 瓶2 小年多月多日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完伞了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于1 、保密口，在年解密后适用本授权书。 2 、不保密团。 ( 请在以上相应方框内打“ ) 作者签名： 导师签名： 2 。卜年多月日 2 0 口年多月多日 发酵制备腺苷甲硫氨酸及对凡纳滨对虾的应激保护 摘要 s 腺苷甲硫氨酸( s a d e n o s y l l m e t h i o n i n e ，简称s a m ) ，是一种存在于所有活细 胞中的重要代谢中间体，在生物体的生理代谢中具有细胞膜保护功能和抗氧化作用。 本文主要研究s a m 高密度发酵培养工艺和检测方法，同时还研究了它对儿纳滨对虾 的应激保护。结果如下： 通过纸层析法、高效液相色谱检测法定性定量分析检测利用酿酒酵母发酵生产 的s a m ，得到发酵液中s a m 的含量为o 3 5 9 l 通过单因素实验对发酵工艺进行优化，得到最佳的发酵培养基为( 1 ) ：k h 2 p 0 42 ， z n s 0 4 7 h 2 00 1 ，m g s 0 4 7 h 2 00 1k a h p 0 41 ，( n h 4 ) s 0 44 ，柠檬酸三钠5 ，m n s 0 4 0 3 ， c a c l 2 0 1 ，葡萄糖3 0 ，l 蛋氨酸3 ，酵母浸出物l 。最佳发酵条件：p h = 5 5 ，摇床转 速为1 6 0 r m i n ，温度为2 8 ，装液量为2 5 m l 2 5 0 m l ，接种量为1 0 ，经过优化s a m 的发酵量由0 3 5 l 提高到0 9 0 4 9 l 。 把由于捕捞和运输处于应激状态的儿纳滨对虾随机分为七组，一个为阴性对照 组，三个实验组，三个阳性对照组。阴性对照组注射灭菌双蒸水，实验组分别i t 射浓 度l m g m l 、o 5 m g m l 、0 1 m g m l 的s a m 注射液，于3 0 h 小时内记录对虾数量并于 5 h ，9 h ，1 2 h ，2 4 h ，3 0 h 时间点测定其免疫指标的变化。阳性对照组养殖两周，应激 消失后，也分别注射浓度1 m g m l 、o 5 m g m l 、0 1 m g m l 的s a m ，记录并观察其存活 数。结果如下，阴性对照组的死亡率最高，达到2 0 ，阳性对照组没有死亡，死亡率 为0 。儿纳滨对虾死亡率：阴性对照组 实验组2 实验组l 实验组3 阳性对照组， 结果显示注射s a m 降低了应激凡纳滨对虾的死亡率。比较实验组与阴性埘照组，儿 纳滨对虾血淋巴中的n o s 、p o 、血蓝蛋白、血细胞数量等免疫指标都表现了显著差 异( p 0 0 5 ) 。阴性对照组血细胞数量呈下降趋势，且在每个采样时间点差异显著( p 0 0 5 ) 。除5 h 之外，其余采样时间点阴性对照组血细胞数量与实验组差异显著( p o 0 5 ) ，并且均低于实验组。注射s a m 以后，儿纳滨对虾血液中血细胞数量且呈 先上升再下降的趋势，在1 2 h 时，数量达到峰值，且各组之间的差异显著( p o 0 5 ) 。 注射s a m 的实验组儿纳滨对虾，血蓝蛋白呈先上升再下降的趋势，在1 2 h 的时间点 值最大，且各组之阳j 差异显著( p 0 0 5 ) 。阴性对照组血蓝蛋白呈上升趋势，在各 个采样时间点差异显著( p 0 0 5 ) ，且高于任何一个实验组，实验组之间差异也显 著( p 0 0 5 ) 。儿纳滨对虾注射s a m 以后血液中n o s 呈先上升后下降的趋势，每 一个采样时间点实验组n o s 都低于阴性对照组，且阴性对照组之间的差异都显著( p o 0 5 ) ，实验组2 除9 h 外，与其他实验组差异显著( p 0 0 5 ) 。阴性对照组的n o s 呈上升的趋势，2 4 h 小时前每个采样时间点差异都显著( p 0 0 5 ) 。注射s a m 的儿 纳滨对虾p o 呈先上升再下降的趋势，在1 2 h 达到最高值( p o 0 5 ) ，且各组问差异最 显著。阴性对照组的p o 呈下降趋势，在各采样时间点差异显著( p 阴性对照组3 ；实验组1 实验组2 实验组3 ： 阴性对照组1 实验组1 ，阴性对照组2 实验组2 ，阴性对照组3 实验组3 ，s a m 降低了凡纳滨对虾的死亡率。比较实验组和阴性对照组对虾血淋巴中的n o s 、血蓝蛋 白、p o 值、血细胞数量等免疫指标，结果显示差异显著( p 0 0 5 ) 。对照组儿纳滨 对虾的血细胞数量明显低于实验组( p 0 0 5 ) ，且呈下降趋势。实验组的血细胞数量 0 1 0 h 呈上升趋势( p 0 0 5 ) ，1 0 - - - 4 8 h 之间，血细胞数量逐渐下降的趋势，并且随 着时i 日j 变化与同时问点的阴性对照组血细胞数量有显著性差异( p o 0 5 ) ，4 8 h 后， 血细胞数量趋于稳定，且高于阴性对照组。阴性对照组的n o s 值呈先升高后降低的趋 势，1 2 h 达到最高，明显高于实验组，且与实验组的差异显著( p 0 0 5 ) ，且明显低于实验前。实验组凡纳滨对虾血 液的n o s 值0 - - - 2 4 h 呈下降趋势，2 4 一- 4 8 h 呈上升趋势，4 8 小时后n o s 值趋于稳定， 并且随着时问变化与同时间点的阴性对照组n o s 值有显著性差异( p 0 0 5 ) 。阴性对 照组的血蓝蛋白含量在0 - - 2 4 h 明显高于对应的实验组，3 6 一- - 7 2 h 均明显低于实验组。 阴性对照组的血蓝蛋白含量0 1 0 h 先显著上升( p 0 0 5 ) ，1 0 h 后持续下降，并且 逐渐向实验前的含量靠近；实验组儿纳滨对虾的血蓝蛋白含量0 - 3 6 h 呈上升趋势( p 0 0 5 ) ，3 6 h 后，血蓝蛋白有缓慢的下降趋势，并且随着时间变化与同时| 日j 点的对 照组差异显著( p 0 0 5 ) 。实验组的p 0 值在7 2 h 前大于 实验前，7 2 h 时与实验前接近。阴性对照组儿纳滨对虾的p o 值在0 h - - 一3 6 h 呈上升趋 势，3 6 h 降到最低值，3 6 h 后p o 值开始上升，7 2 h 时接近实验前。通过单因素方差分 析可知，阴性对照组与实验组之间差异显著( p 0 0 5 ) ，7 2 h 时实验组与对照组之间 差异不显著，全部向实验前靠近。综合考虑死亡率和各免疫指标的变化得出s a m 对儿 纳滨对虾的应激有保护作用。 关键词：腺苷甲硫氨酸；发酵制备；凡纳滨对虾；应激保护 n s t u d i e so np r e p a r a t i o no f s - a d e n o s y l - l - - m e t h i o n i n eb y m i c r o b i a lf e r m e n t a t i o na n dt h es t r e s sp r o t e c t i o no f l i t o p e n a e u sv a r m a m e i a b s t r a c t s - a d e n o s y l l - m e t h i o n i n e ( s - a d e n o s y l l - m e t h i o n i n e ，a ss a m ) ，i si m p o r t a n tm e t a b o l i c i n t e r m e d i a t ew h i c hw i d e l ye x i s t si na n i m a l s ，p l a n t sa n dm i c r o o r g a n i s m s i tp a r t i c i p a t e si n m o r et h a n4 0k i n d so fb i o c h e m i c a lr e a c t i o n s ，a n d p l a y i n ga ni m p o r t a n t r o l eo n p h y s i o l o g i c a lm e t a b o l i s mm e t a b o l i s mi no r g a n i s m t h e r ea r ev a s tm a r k e tf o rs a ma s n u t r i e n ta n dd r u g s a mo ft h i sp a p e rh a v ec a r r i e do u taf e r m e n t a t i o nw i t hh i g hc e l ld e n s i t y a sw e l la st e s t i n gm e t h o d sa n de f f e c t so ni m m u n i t ya n da n t i - s t r e s s r e s u l t sa r ea sf o l l o w s ： t h ee x a m i n em e t h o do fp a p e rb u i l t - u p ，d i v i n g l i g h ti n t e n s i t yw i t hu l t r a v i o l e tr a ya n d h p l cw i t hm e t h a n o l - b u f f e r ( o b t a i n e d1 - o c t a n e s u l f o n i ca c i ds o d i u ms a l t m o n o h y d r a t e 1 o ga n da m m o n i u mf o r m a t e5 8 9i n l0 0 0m lw a t e r , f o r m i ca c i dt oa d j u s tt h ev a l u eo fp h3 0 ) f o rf l u i dl i q u i dm u t u a l l ym e t h o dw e r eb u il tu p t h ef e r m e n t a t i o nc o n t e n to fs a mi s 2 5 0 m g l s i n g l e f a c t o re x p e r i m e n th a sb i u l tt oo p t i m i z et h ef e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s ，t h eb e s t f e r m e n t a t i o nm e d i u mi sk h 2 p 0 42 ，z n s 0 4 7 h 2 0o 1 ，m g s 0 4 7 h 2 00 1k 2 h p 0 41 ，( n h 4 ) 2 s 0 44 ，s o d i u mc i t r a t e5 ，m n s 0 4 0 3 ，c a c12 0 1 ，g l u c o s e3 0 ，l m e t h i o n i n e3 ，y e a s te x t r a c t l ( l ) i t w e r es t u d i e da n di d e n t i f i e dt h eb e s ti n i t i a lp hi s 5 5 ；b e s tf e r m e n t a t i o n t e m p e r a t u r ei s2 8 ，t h eb e s tr o t a t i o ns p e e di s16 0 r m i n ，b e s tm e d i u mv o l u m e2 5 m l 2 5 0 m l ， b e s ti n o c u l u mi s10 a f t e ro p t i m i z e d ，s a m b a t c hp r o d u c t i o ni s2 5 0 m g lu pt o 9 0 4 m g m l l i t o p e n a e u sv a n n a m e i ，w h i c hu n d e r t h es t r e s sr e s p o n s ei sc a u s e db yc a p t u r ea n dt r a n s p o r t w e r ea l l o t e di n t os e v e ng r o u p sr a n d o m l y ，t h ef i r s t i sc o n t r o lg r o u p ，t h et h r e eo t h e r sw e r et h e t r e a t e dg r o u p s t h ec o n t r o lg r o u pw a si n j e c t e dw i t hs t e r i l ed o u b l ed i s t i l l e dw a t e lt h e t r e a t e dg r o u p sw e r er e s p e c t i v e l yi n j e c t e dw i t ht h es a mi n j e c t i o nw h o s ec o n c e n t r a t i o n si s lm g m l ，0 5 m g m l ，0 1m g m l t h en u m b e ro fd e a dl i t o p e n a e u sv a n n a m e iw e r er e c o r d e d a n dd e t e r m i n e dt h ei m m u n i t ya f t e r5 , 9 ，12 ，2 4 ，3 0 h t h er e s u l t sa r ea sf o l l o w s ：d e a t hr a t i o ： 0 5 m g m lt r e a t e dg r o u p l m g m lt r e a t e dg r o u p 0 1m g m lt r e a t e dg r o u p c o n t r o lg r o u p w ec a ns e et h a ti n j e c t i o no fs a mc o u l dl o w e rt h ed e a t hr a t i oo fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i i m m u n o l o g ye f f e c t o r so fs h r i m pb l o o d ，s u c ha s ，n o s ，p o ，b l o o dc o r p u s c l en u m b e r b e t w e e nt r e a t e dg r o u pa n dc o n t r o lg r o u pw e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) b l o o d c o r p u s c l en u m b e ro fc o n t r o lg r o u pi si nd r o p i n gt r e n d ，a n dw a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c ea t i i l e a c ht i m ep o i n t s ( p o 0 5 ) c o m p a r e dc o n t r o lg r o u po fl i t o p e n a e u sv a n n a m e iw i t h t r e a t e d g r o u po fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i ，b l o o dc o r p u s c l en u m b e rw e r es i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p 0 0 5 ) e x c e p t5 h ，a n dl o w e rt h a nt r e a t e dg r o u p a f t e ri n j e c t e ds a m ， b l o o dc o r p u s c l en u m b e ri ns h r i m pb l o o di n c r e a s e df i r s t l ya n dt h e nd e c l i n e d ，r e a c h e d i t sp e a ka t12 h ，a n ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h eg r o u p s ( p 0 0 5 ) t h et r e a t e dg r o u p o fl i t o p e n a e u sv a n n a m e ii n j e c t e d s a m ，h e m o c y a n i n i ni n c r e a s i n gt r e n da tf i r s t ，t h e n i nd r o p i n gt r e n d ，a t12 h ，u pt om a x i m u mv a l u e ，a n ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s ( p 0 0 5 ) h e m o c y a n i nv a l u eo fc o n t r o lg r o u pi si nr i s i n gt r e n da ta l lt i m ep o i n t s ，a n ds i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) c o m p a r e dc o n t r o lg r o u po fl i t o p e n a e u sv a n n a m e iw i t ht r e a t e dg r o u p o f l i t o p e n a e u sv a n n a m e i ，t h eh e m o c y a n i nv a l u ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) m e a n w h i l eh i g h e rt h a na n yo t h e rt r e a t e dg r o u p sn o so fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i i n j e c t e ds a mi ns h r i m pb l o o di n c r e a s e df i i r s t l ya n dt h e nd e c l i n e d a te a c ht i m ep o i n t t h e v a l u eo fn o si nt r e a t e dg r o u pw e r el o w e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p ，a n ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c e b e t w e e nt h ee a c ht r e a t e dg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) ，t h et r e a t e dg r o u po f 0 5 m g m l w e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sc o m p a r e dw i t ht h eo t h e rg r o u p se x c e p t9 h ( p 0 0 5 ) n o so f t h ec o n t r o lg r o u pw e r ei na nu p w a r dt r e n d ，a n dw e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n t c ea te a c ht i m e p o i n tb e f o r e2 4 hh o u r s ( p 0 0 5 ) p h e n o io x i d a s ei nt h eb l o o do fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i i n j e c t e ds a mi n c r e a s e df i r s t l ya n dt h e nd e c l i n e d ，u pt ot h eh i g h e s tv a l u ea t12 h ( p o 0 5 ) ， a n dw e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h eg r o u p s p ov a l u eo ft h ec o n t r o lg r o u pw a si na d o w n w a r dt r e n d ，a n di na l l s a m p l i n gt i m ep o i n t ss i g n i f i c a n t c ed i f f e r e n c e ( p 1 0 t h et r e a t e dg r o u p ，15 c o n t r o lg r o u p 15 t h et r e a t e dg r o u p i tc a nb e s e e nt h a ts a ml o w e rd e a t hr a t i oo fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i c o m p a r ec o n t r o lg r o u po f l i t o p e n a e u sv a n n a m e iw i t ht r e a t e dg r o u po fl i t o p e n a e u sv a n n a m e i ，t h ev a l u eo fn o s ，p o ， l v b l o o dc o r p u s c l e n u m b e r ，h e m o c y n i nw e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) b l o o d c o r p u s c l en u m b e ro fl i t o p e n a e u sv a n n a m e ii nc o n t r o lg r o u pw a ss i g n i f i c a n tl o w e rt h a nt h e t r e a t e dg r o u p ( p o 0 5 ) ，a n di nd o w n w a r dt r e n d b l o o dc o r p u s c l en u m b e ro ft r e a t e dg r o u p i si nu p w a r dt r e n db e t w e e n0 1 0 h ( p o 0 5 ) ，b l o o dc o r p u s c l en u m b e rg r a d u a l l yd e c r e a s e d a m a n g10 4 8 h ，a n dw e r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n tc o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u pa tt h e s a m et i m ep o i o n t ( p 0 0 5 ) ，a f t e r4 8 h i ti sg r a d u a l l y s t a b i l i z i n g a n dh i g h e rt h a nt h ec o n t r o l g r o u p n o sv a l u eo fl i t o p e n a e u sv a n n a m e ib l o o di nc o n t r o lg r o u pw a sf i r s t l yi n c r e a s e d a n dt h e nd e c r e a s e d i tsu pt ot h eh i g h e s tp o i o n ta t12 h ，c o m p a r e dt ot h et r e a t e dg r o u p n o sv a l u ew a ss i g n i f i c a n t d i f f e r e n t c e ( p 0 ，0 5 ) 。a n d s i g n i f i c a n tl o w e rt h a np r e - t e s t n o sv a l u eo fl i t o p e n a e u sv a n n a m e ib l o o di nt r e a t e dg r o u d w a si n d r o p i n gt r e n da m a n g0 2 4 h ，2 4 4 8 h ，i ti n r i s i n gt r e n d ，t h ev a l u eo fw a s s t a b i l i z i n ga f t e r4 8h o u r s ，a tt h es a m et i m ep o i o n t ，v a l u eo ft h ec o n t r o lg r o u pt h e r ew a s s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sc o m p a r e dw i t ht h en o sv a l u eo ft h ec o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) i n0 2 4 h ，c o n t r o lg r o u p sh e m o c y a n i nw a ss i g n i f i c a n th i g h e rt h a nt h ec o r r e s p o n d i n gt r e a t e d g r o u p ，b u ts i g n i f i c a n tl o w e rt h a nt h et r e a t e dg r o u pa m a n 9 3 6 7 2 h t h ec o n t r o lg r o u pt s h e m o c y a n i nw a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s ef i r e t l yi n0 1 0 h ( p 0 0 5 ) ，1o hs t a r t e dt o d e c l i n e a n dg r a d u a l l yn e a rt op r e - t e s t ；h e m o c y a n i no ft r e a t e dg r o u pw a si nr i s i n gt r e n db e t w e e n0 3 6 h ( p 0 0 5 ) ，a f t e r3 6 h ，i tj i o n e di nas l o wd o w n w a r dt r e n d ，a n d s i g n i f i c a n td i f f e r e n t c e a tt h es a m et i m ep o i n t s ( p 0 0 5 ) p ov a l u e so ft h et r e a t e dg r o u p b i g g e rt h a np r e t e s tb e f o r e7 2 h ，a t7 2 h ，c l o s e dt op r e t e s t p ov a l u eo fl i t o p e n a e u s v a n n a m e li nc o n t r o lg r o u pi sr i s i n gb e t w e e no h 一3 6 h ，d r o pt oam i n i m u m v a l u ea t3 6 h o u r s ，i tb e g a nt or i s ea f t e r3 6 h ，c l o s e dt op r e t e s ta t7 2 h b ys i n g l ef a c t o ra n a l y s i so f v a r i a n c e ，i tc a nb ek n o wt h a tt h ep ov a l u ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sb e t w e e nt h ec o n n d l g r o u pa n de x p e r i m e n t a lg r o u p ( p 0 0 5 ) ，a n da l lc l o s et ot h ep r e t e s t c o n s i d e r i n gd e a t h r a t i oa n dc h a n g e so f i m m u n o l o g yi n d e x ，i tc a nb ed r a w no ns a mh a sap r o t e c t i v ee f f e c o ns a l i n i t ys t r e s s 。 k e y w o r d s ：s a m ；f e r m e n t a t i o n ；l v a n n a m e i ；i m m u n es t r e s sp r o t e c t i o n v 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 1文献综述1 1 1s 一腺苷甲硫氨酸及其功能1 1 1 1s a m 的体内代谢2 1 1 2s a m 的制备方法3 1 1 3s a m 的定性和定量分析5 1 1 4 腺苷甲硫氨酸的生理功能。1 5 1 2 对虾及其应激反应6 1 2 1 虾类应激反应6 1 2 2 对虾的抗应激研究8 1 3 1 研究内容1l 1 3 2 研究线路11 2 s 一腺苷甲硫氨酸的发酵制备及检测1 2 2 1 实验材料1 2 2 1 1 菌种1 2 2 1 2 主要药品1 2 2 1 3 辛要仪器1 2 2 1 4主要培养基1 3 2 1 5 主要试剂的配制1 3 2 2 实验方法1 3 2 2 1 菌种的培养及保存1 3 2 2 2 纸层析法分析s a m o “删1 4 2 3 结果与讨论1 5 2 3 1 纸层析法定性分析s a m 1 5 2 3 2 高效液相法定量分析s a m 1 5 2 3 3 讨论1 7 3s 一腺苷甲硫氨酸发酵工艺的优化1 9 3 1 材料1 9 3 1 1 菌种1 9 3 1 2 主要药品1 9 3 1 3 仪器1 9 3 1 4 主要培养基1 9 3 2 方法2 0 3 2 1s a m 的分析检测方法n 嘲2 0 3 2 2 培养基的优化2 0 3 2 3 培养条件的优化2 l 3 3 结果与讨论2 2 3 3 1 发酵培养基的最佳碳源2 2 3 3 2 发酵的最佳氮源2 3 3 3 3 磷源的最佳浓度2 4 3 3 5 蛋氨酸最适加入量2 6 3 3 6 发酵最佳p h 值2 7 3 3 7 最适装液量2 7 3 3 8 最适接种量2 7 3 3 9 发酵的最适温度2 8 3 3 1 0 摇床转速的影响2 9 3 3 1 1 讨论2 9 4s 一腺苷甲硫氨酸对凡纳滨对虾捕捞和运输的应激保护3 1 4 1 实验材料3 1 4 1 1 实验对象3 1 4 1 2 材料与试剂3 1 4 1 3 实验仪器3 2 4 2 实验方法3 2 4 2 1 实验条件3 2 4 2 2 腺苷蛋氨酸注射浓度的确定3 2 4 2 3 血液中各指标的测定3 2 4 3 结果与讨论3 3 4 3 1 结果3 3 4 3 2 讨论3 8 5s 一腺苷甲硫氨酸对盐度变化下凡纳滨对虾的应激保护4 1 5 1 实验材料4 l 5 1 1 实验对象4 l 5 1 2 材料与试剂4 l 5 1 3 实验仪器4 1 5 2 实验方法4 1 5 2 1 实验对象4 2 5 2 2 腺菅甲硫氨酸对凡纳滨对虾盐度应激的保护作用4 2 5 2 3 血液中各指标的测定4 2 5 3 结果与讨论4 3 5 3 1 结果4 3 5 3 2 讨论4 6 论文总结4 9 参考文献5 0 致谢6 0 作者简历6 1 导师简介6 2 广东海洋大学硕士学位论文 1文献综述 1 1s 一腺苷甲硫氨酸及其功能 s 一腺苷甲硫氨酸( s - a d e n o s y l l m e t h i o n i n e ，简称s a m ) ，化学名称为5 一 ( 3 s ) - 3 - 氨基- 3 - 梭基一丙基 甲基一( s ) 一枫 _ 57 一脱氧腺苷，分子式为c 。h 艘n 。0 ；s ，分 子量为3 9 8 4 4 ，1 9 5 2 年首先由c a n t o n i 1 发现，是一种存在于所有活细胞中的重要代 谢中间体。在生物体内，s a m 在细胞内的合成是由腺苷甲硫氨酸合成酶 e c 2 5 1 6 催化腺苷三磷酸( a t p ) 和甲硫氨酸( m e t ) 合成的，即来自于a t p 的腺苷部分结合到甲硫 氨酸分子中硫原子上的等分子反应( 如图l ) 。s 一腺苷甲硫氨酸是双手性物质，有2 种 异构体，( r ，s ) - s a m 和( s ，s ) 一s a m 。但是，只有( s ，s ) - s a m 也就是( 一) 一s a m 才具有 生物活性瞳，才能在生物体内发挥其作重要的生理功能。 h 呼x & + 肼 hn h 2 h 叩 坚! ：竺：一- 盯。n i 乇 _ _ - - _ - _ _ _ - l 务反 图ls m n 4 的化学合成结构 f i g 1s , 厶d v is t r u c t u r eo ft h ec h e m i c a ls y n t h e s i s 国外，5 0 年代开始制备s a m n 3 7 1 。从文献”3 町报道来看，主要有两条工艺路线来 生产s a m 。一是培养基中外加蛋氨酸发酵培养微生物，使菌体内积累s a m ，然后分离、 提取s a m 。另一个方法是用a t p 和蛋氨酸作为合成底物，由微生物培养法制得的s a m 合成酶催化a t p 和蛋氨酸偶联、合成s a m 。近年来，国内有不少研究者开展了s a m 的 发酵研究。董函竹等对诱变选育的酿酒酵母产生s a m 的摇瓶发酵条件进行了优化，其 s a m 产量可达0 9g l “0 2 3 。陈小龙等人对土壤中筛选到的酵母菌q 9 5 培养条件进行 了优化，使s a