（化学专业论文）药物微量未知成分及降解产物的质谱研究.pdf

浙江大学硕。f ：学位论文 摘要 在药物的质量研究中，药物杂质的定性和定量分析极为重要。液质联用技术 ( h p l c e s i m s n ) 兼顾了色谱的分离与质谱的定性能力，具有灵敏度高，分析 快速简捷，样品消耗量少等优点，并能获得结构信息，已成为应用于药物在线分 析的强有力的工具。本论文运用这一技术，成功地对亚胺培南和美罗培南的降解 产物及依普罗沙坦和左氧氟羧酸中的微量杂质进行了分析研究及结构鉴定。主要 内容包括以下三个部分： 第一部分应用液质联用技术、电喷雾串联质谱法及核磁共振技术分析了亚 胺培南和美罗培南在酸性条件下的降解产物的产生过程及化学结构，通过傅里叶 变换离子回旋共振质谱( f t i c r m s ) 离线确定了这些化合物的准确元素组成。 并用核磁共振数据进行了确证。同时对其降解的中间产物进行了跟踪检测和分析 鉴定。 第二部分应用电喷雾串联质谱探讨并归纳了正离子模式下依普罗沙坦的三 条竞争性的质谱碎裂途径，并应用液质联用技术、电喷雾串联质谱法及核磁共振 技术，通过依普罗沙坦及其杂质的质谱碎裂谱图的对照比较，分析鉴定了依普罗 沙坦中微量杂质的化学结构。 第三部分应用核磁共振技术，通过对左氧氟羧酸及其杂质的核磁共振谱图 的比较，对其微小的差别进行分析，推断出了左氧氟羧酸中微量杂质的化学结构。 同时应用液质联用技术、电喷雾串联质谱法对左氧氟羧酸及其杂质f 离子模式下 的两条竞争性质谱碎裂途径进行了分析总结。 此外，论文还简要介绍了液质联用技术在药物分析中的研究进展。 关键词：药物杂质、液质联用、核磁共振、结构分析鉴定 浙江大学硕，l ：学位论文 a b s t r a c t i ti si m p o r t a n tt ou n d e r t a k eq u a l i t a t i v ea n a l y s i sa n dq u a n t i t a t i v ea n a l y s i so fd r u g i m p u r i t i e s h i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y , w h e n c o m b i n e dw i t h e l e c t r o s p r a yi o nt r a pm a s ss p e c t r o m e t r y , p o s s e s s e sh i g hs e p a r a t i o ne f f i c i e n c ya n d g r e a tq u a l i t a t i v ec a p a b i l i t y a si th o l d st h ea d v a n t a g e so fh i g hs e n s i t i v i t y , r e l a t i v e l y s h o r ta n a l y s i st i m e ，l o ws a m p l ea m o u n t ，a n dt h e a b i l i t yt o o b t a i ns t r u c t u r a l i n f o r m a t i o n ，h p l c e s i - m s “h a sb e e nw i d e l yu s e da sap o w e r f u lt o o li nv a r i o u s o n l i n e d r u g sa n a l y s i s i n t h i sd i s s e r t a t i o n ，t h e l i q u i dc h r o m a t o g r a p y e l e c t o s p r a y t a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y ( h p l c e s i - m s ) m e t h o dw a sd e v e l o p e dt oi d e n t i f yt h e d e g r a d a t i o np r o d u c t so fc r u d ed r u g s ：i m i p e n e ma n dm e r o p e n e m ，a l s ou s e dt oi d e n t i f y t h ei m p u r i t i e so fe p r o s a r t a na n dl e v o f l o x a c i nc a r b o x y l i ca c i d t h ed e t a i l sa r el i s t e d i nt h ef o l l o w i n g ： p a r tiam e t h o db a s e do nh p l c e s i m s “a n dn u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e ( n m r ) h a sb e e ne s t a b l i s h e dt oa n a l y z et h ed e g r a d a t i o np r o d u c t so fi m i p e n e ma n d m e r o p e n e mi na l la c i ds o l u t i o n ，a sw e l la st h eg e n e r a t i o np r o c e d u r e si n v o l v e d o f f i i n e f o u r i e rt r a n s f o r mi o nc y c l o t r o nr e s o n a n c em a s ss p e c t r o m e t r y ( f t i c r - m s ) w a sa l s o p e r f o r m e dt oa s s i g nt h ea c c u r a t ee l e m e n t a lc o m p o s i t i o n s t h ep r o p o s e ds t r u c t u r e sb y w e r ec o n f i r m e d b yn m rt e c h n o l o g y a f t e rc o n d u c t i n gt h et r a c i n g d e t e c t i o n e x p e r i m e n t s ，t h es t r u c t u r e so fi n t e r m e d i a t ep r o d u c t si nt h ea c i dd e g r a d a t i o np r o c e d u r e w e r et h e ni d e n t i f i e d p a r ti it h r e ec o m p e t i t i v ef r a g m e n t a t i o nm e t h o d so fe p r o s a r t a ni nt h ep o s i t i v e m o d ew e r es u m m a r i z e db ye l e c t r o s p r a ym a s ss p e c t r u mm u l t i s t a g ef r a g m e n t a t i o n e x p e r i m e n t s ( e s i m s “) i nt h i sp h a s e ，h p l c e s i m s na n dn m rt e c h n o l o g i e sw e r e e m p l o y e dt oi d e n t i f yt h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo fam i c r o i m p u r i t yb yc o m p a r i n gt h e s p e c t r a ld a t ao fe p r o s a r t a na n di t si m p u r i t y p a r ti i it h ec h e m i c a ls t r u c t u r eo ft h e m i c r o i m p u r i t yi n l e v o f l o x a c i n c a r b o x y l i ca c i dw a si d e n t i f i e db ya n a l y z i n gm i n o rd i f f e r e n c e sb e t w e e nl e v o f l o x a c i n a n dt h ei m p u r i t yi nt h en m rs p e c t r o m e t r y f u r t h e r m o r e ，t w oc o m p e t i t i v em a s s n 浙江大学硕l ：学位论文 f r a g m e n t a t i o nm e t h o d si nt h ep o s i t i v em o d ew e r es u m m e du pb ym u l t i s t a g em a s s f r a g m e n t a t i o ne x p e r i m e n t s i na d d i t i o n ，t h er e c e n tp r o g r e s so ft h el c m s “t e c h n i q u ei np h a r m a c e u t i c a l a n a l y s i sw a sr e v i e w e di nb r i e f k e yw o r d s ：d r u gi m p u r i t y , h p l c e s i m s “，n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e ( n m r ) ， s t r u c t u r a le l u c i d a t i o n i i i 浙江大学硕i 二学位论文 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝鎏盘堂或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：莫随美 签字日期：为缈年，月劈日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝鎏态堂有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和 借阅。本人授权逝姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：揪 导师签名： 签字日期：如归年j 月) 孑日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 7 l 签字日期：矽，。年7 月矽日 电话： 邮编： 知识产权保护声明 本人郑重声明：我所提交答辩的学位论文，是本人在导 师指导下完成的成果，该成果属于浙江大学理学院化学系， 受国家知识产权法保护。在学期间与毕业后以任何形式公开 发表论文或申请专利，均需由导师作为通讯联系人，未经导 师的书面许可，本人不得以任何方式，以任何其它单位作全 部和局部署名公布学位论文成果。本人完全意识到本声明的 法律责任由本人承担。 学位论文作者签名关健美 日期：知妒年月刀日 浙江人学硕：1 ：学位论文 1 1 药物杂质简介 第一章文献综述 药品是一类特殊商品，与人类的健康事业息息相关，其质量控制极为重要。 药物安全性评价的一个重要内容是药物中杂质的含量控制【i 】。杂质是指在药物 制备和贮存过程中，由于药物性质和合成方法可能会产生的物质，多指有机杂质， 也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒性的对映体。它们主要源于起始原料及 其本身所含杂质、生产过程中带入的合成中间体与副反应产物、成品在贮存过程 中产生的降解产物以及处方中辅料成分的干扰或选用了不合适的辅料【2 】。药物 中含有杂质会降低疗效、影响药物的稳定性，有的甚至对人体健康有害或产生其 他毒副作用。因此，检测有关物质、控制纯度对确保用药安全有效，保证药物质 量是非常必要的。杂质含量控制既是安全用药的基础，也是新药丌发过程质量监 控的一项重要环节。美国药典和欧洲药典对杂质含量标准作了明确的规定：在药 物临床使用前必须确证药物中含量在o 1 及其以上的杂质和表观含量在0 1 以 下但具强生物作用的杂质或毒性物质的结构1 3 - 5 1 ，在稳定性试验中生成的降解产 物，也要按上述要求进行定性和定量研究。 1 2 药物分析方法简介 药物中杂质的分析方法众多，且随着科学技术的发展而发展。色谱法以其 专属性好、灵敏度高的优势得到了分析工作者的青睐，在杂质的分析检测中最为 常用。色谱法包括薄层色谱( t l c ) 、高效液相色谱( h p l c ) 、气相色谱( g c ) 等【6 l ，在实际应用中可根据杂质理化特性进行选择。一般而言，h p l c 应用较为 普遍，可用于杂质的准确定量分析，t l c 是其补充手段，常用于h p l c 难以测 定的或不需要准确定量的杂质分析。而g c 常用于易挥发的或能转变为易挥发的 液体和固体，多用于残留有机溶剂的检测，对于高沸点的有机物、高分子和热稳 定性差的化合物以及生物活性物质则有一定限制，在测定药物杂质时多需衍生 化，因而使用较少。s f c 联用技术等近年来发展很快，具有很多独有的特点，如 在手性拆分中比h p l c 强1 0 0 倍，而且使用的流动相是超临界的c 0 2 ，既经济且 浙江大学硕 ：学位论义 环保，但因技术等方面的原因应用较少。近年来，质谱技术随着离子源、质量分 析器的不断优化改进，质谱的准确度、灵敏度和分辨率大大提高，满足了现代药 学迅猛发展对药物分析技术提出的新要求。质谱技术的应用能使一些其它色谱技 术难以定性的杂质得到准确分析。由于药物分析的对象常常涉及复杂的混合体系 中微量、痕量甚至超痕量的成分分析，这就要求药物分析的方法必须向着高灵敏 度、高精度、快速、多种手段联用以及连续化、自动化、最优化、智能化、高通 量方向发展。因此，一系列方法技术相继出现，如流动注射分析、微型全分析系 统和生物芯片等技术，具有为药物分析提供更快速、准确、高通量分离检测方法 的潜力，可以大大缩短药物开发和新药筛选的周期，已经逐步引起药物分析领域 研究人员的重视。 1 3 液质联用技术在药物杂质分析中的应用 液质联用技术( l c m s ) 以高分离能力的h p l c 为分离手段，以高灵敏度、 极强定性专属特异性的m s 为检测器，成为当代最理想的也是最重要的分离和鉴 定方法之一。液质联用技术以其高选择性、适用性广、分析时间短、需样量少并 可对感兴趣的化合物进行靶向分析等优势，广泛应用于定性分析尤其是鉴别药物 未知代谢物等药物分析、定量测定、筛选和鉴定靶药物成分，可对大量样本进行 分析，可满足现代制药工业对快速、高通量、高灵敏度和高选择性的分析要求， 成为药物研发与新药创制各个环节不可或缺的有效工具。l c m s 在药物定性研 究方面，一般可通过与标准物质或已知化合物的多级质谱图及色谱图进行比较， 或结合l c d a d u v 和l c - n m r 等分析方法，对药物中已知和未知结构的成分 进行定性分析。多数药物的副产物、杂质和降解产物保留了原药分子的骨架结构 或一些亚结构，因此在质谱碎裂实验中可能产生与原药相同的裂解途径、相同的 中性丢失或相同的碎片离子，可通过m s 扫描，迅速得到药物可能杂质和代谢物 的结构特征，并鉴定出结构。另外，电喷雾技术的引入，使液质联用技术在药物 分析中的应用得到了极大地拓展。e s i 是一种软电离技术并可产生多电荷离子， 既可以分析极性大、热不稳定的蛋白质与多肽分子r 7 ，8 】的结构，也可分析复杂 生物介质中的样品 9 1 ，包括合成有机化合物1 1 0 1 、药物及代谢产物【1 1 】、天然产 物【1 2 1 、违禁药物【l3 1 、蛋白质 1 4 1 、抗原与抗体的相互作用【15 1 、糖类【1 6 】、核苷 2 浙江人学硕：i ：学位论文 及d n a 1 7 】、类脂【1 引、生物分子聚合物【1 9 2 0 1 、无机物及金属有机化合物【2 i 】、 富勒烯、表面活性剂 2 2 】，甚至是自组装膜( s e l f - a s s e m b l e dm o n o l a y e r s ) 2 3 】和 胶束( m i c e l l e s ) 1 2 4 等物质。值得一提的是，l c m s 技术在抗生素药物分析中 得到了广泛应用。与一般的化学合成药品相比较，抗生素药品具有一些特殊的属 性：其一，抗生素药品的结构、组成更复杂，表现为：同系物多、异构体多、降 解产物多，化学结构差异甚微。其二，在发酵过程中除生成目的产物外，难免会 伴随有大量其它不易分离的杂质生成。其三，抗生素药品的稳定性一般较化学药 品差，因为抗生素的分子结构中通常含有较活泼的化学结构，而该结构通常又为 抗生素的活性中心，如1 3 内酰胺抗生素的b 内酰胺环、链霉素中的醛基等。在 生产和贮存过程中，这些活泼基团易受外界影响而变化【25 | 。因此常规分析方法 在抗生素药物的分析检测中显得无能为力，药品质量难以控制。而液质联用技术 以强大的分离和分析能力，在抗生素药物成分分析和相关物质的鉴定上显示了巨 大的优势。 近年来，我们课题组应用液质联用技术对多个药物中的微量成分进行了分析 鉴定，并由此发展了一系列在线分析技术。在对三氯苯咪唑中的微量成分的分 析【2 6 】中，我们首先对三氯苯咪唑进行h p l c 检测，发现了两个微量成分( 如图 1 1 ) ，然后通过三氯苯咪唑的合成路线模拟( 如图1 2 ) ，分析了生成杂质1 的可 能原料及杂质1 的化学结构及产生机理( 如图1 3 1 4 ) ，并用质谱及核磁数据证 实了这一推测结构( 如图1 8 ) ，同时跟踪监测了多步合成过程中中间产物8 ，9 ， l o 的结构( 如图1 5 1 7 ) ，并用同样的方法对杂质2 进行了结构鉴定( 如图1 9 ) 。 o2 48 81 0 1 21 4 1 6 8m i n 图1 1 三氯苯咪唑的h p l c 图 浙江大学硕i j 学位论文 弛即a aa 叫氐抗竺函小 h 2 罄奄溉 图1 2 三氯苯咪唑合成路线 + 、 , c a i 。a n d e s t e 蜘p 1 s t e p 2 a 蝴d 口a t i o n s t e p 3 c y c i z a t i o n 8 t e p 4 m i h y 阻- a 芍。b 峨 a 苍。b 。 a 芍。翱 a 苍。峨 i m p i l l 乜，1 w - 3 9 2 图1 4 杂质1 的合成路线 j i 。戌lx 气o i 、“_ i 3 t i h c 舢，8 h 7 呷 。 鏊文 矗 赧h 一 q 矗 雾 。，一，。，。一一 hi ， 图1 3 合物7 的g c e i m s 图 塾 _ j叩f 。，曼茹，。一i 。! + 掣厶 j ：矗。 图1 5 中间产物8 的h p l c ( - ) e s l m s 一 一 一一 、 ，k 一h 。? 厂 一 撼冷 一j 爿 ， ，一ii ，3 _ i， 。 一卫* 4 乏r 图1 6 中间产物9 的h p l c ( ) e s l m s图1 7 中间产物1 0 的h p l c ( ) e s i m s 4 b 毗 警 。 苔耋| 6 a 浙江大学硕j 二学位论文 i | lj j 玉， 图1 8 杂质1 的h p l c ( - ) e s i m s 图1 9 杂质2 的h p l c ( - ) e s l - m s 在对抗肿瘤药物诺维本进行质量监控【2 7 】时发现其中存在4 个微量成分( 如 图1 1 0 ) ，在用半制备液相色谱对每一个微量成分进行富集制备后，对各组分进 行了多级质谱碎裂实验，由于杂质是在药物的合成过程中产生的，可能存在与目 标合成药相同或相似的结构单元，在碎裂实验中可能产生相同的碎片离子或中性 丢失，因此通过杂质和合成药的多级质谱碎裂图比较( 如图1 1 1 ) 来推断杂质的 化学结构，并最终用高分辨质谱及核磁共振实验确定所推结构( 图1 1 2 ) 。 柏j* 3 5 j j 3 0 j 曲 2 5 ； i一 。 2 。0 ， i 喜 ；喜 1 0o 1 5 ： o 二_ j l r ，、一，j 、 图1 1 0 诺维本的h p l c 图 pc!qp荨oi 浙江大学硕：l ：学位论文 4 5 5 ? l6 7 ，6 5 i 。2 7 ，9 2 7 7 ：2 3 2 1 3 0 mo3 9 7 o i蹬研i 唑对2 川丁 ( a ) 3 0 0 枷5 0 06 0 07 0 08 0 0m ，z 7 23 7 2 呷m5 掣6 0 0 i一i 一i：一一 ，3 1 0 j ：j 。2 j 15 5 p i s 5 9 7 。j 。3 t ! 2：i7 。li4 4 ：0 644，1 3 2 3 0 一1 一- 。 sii酿2 _ 7 _ 一7 6 i 2 i 3 擘l3 8 3 o ，2 5 h 8 17 3 辱17 9 7 2簟￥，簟? 7 s ，乏2 s ? 。i 一呷。一，p 6 i 9 t 5 【i i 7 j 7 t 1j ，：，：。： 1 i 图1 1 l 正离子模式下( a ) 诺维本母离子m z7 7 9 的二级质谱图( b ) 杂质1 母离子m z7 6 5 的二级质谱图( c ) 杂质2 母离子m z7 9 3 的二级质谱图( d ) 杂质3 母离子m z7 6 5 的二级 质谱图( e ) 杂质4 母离子m z8 5 7 的二二级质谱图 6 臀” n x 浙江人学硕 ：学位论文 如i 一嘲1 ( 1 t k m 叭竹l v i n ”n 棚m 1 j m w “ _ ”u n ，n t 憎l ，y 一_ - ，m w i ， n v 6 4 i m l s u g l t y - 4 ( - m m w n i n m w r ，n 图1 1 2 诺维本及其微最成分的化学结构 另外我们应用h p l c m s 技术对抗精神病药物思瑞康进行了质量监控【2 引， 发现其中存在一个含量为o 4 的未知微量成分( 如图1 1 3 ) ，通过对思瑞康及其 杂质的多级质谱碎裂实验( 图1 1 4 1 1 6 ) 比较，推断杂质与思瑞康有相同的结构 单元，其差别在于r 基团不同( 如图1 1 7 ( a ) ) ，然后通过分析思瑞康4 个结构 类似物( 图1 1 8 ) 的质谱碎裂实验数据进一步佐证了以上的推断；f t i c r m s 实 验得知杂质的元素组成是c 3 0 h 2 4 n 4 s 2 ，除了我们推断的与思瑞康相同的结构单元 c 1 7 h 1 6 n 3 s 外，未知的r 基团的元素组成为c 1 3 h s n s 与碎片离子r n z 2 2 1 元素组 成相同，推断杂质的化学结构如图1 1 7 ( b ) 所示。 图1 1 3 思瑞康的h p l c 图 7 浙江人学硕上学位论文 m m瑚mmmm 柳翰辨铷柏0 口姗础 图1 1 4 正离子模式下( a ) 思瑞康的二级质谱图( b ) 杂质的二级质谱 嗣衙。 耋，。，。，把：i，一，皇：，。，。 图1 1 5 正离子模式下 ( a ) 思瑞康m z 2 5 3 的三级质谱图 ( b ) 杂质的m z 2 5 3 的三级质谱图 、 k 、少、一 i r ， l o 图1 1 6 止离子模式下 ( a ) 思瑞康m z 2 7 9 的三级质谱图 ( b ) 杂质的m z 2 7 9 的三级质谱图 ( 势) 一曼 r 钾i l f - b o c f h 舯h r l - h r ：f c ：c ：l w ，啦( ：h x r j 一( i ， 一m 图1 1 7 杂质的可能化学结构图1 1 8 思瑞康类似物的结构 在西酞普兰质量监控实验中【2 9 1 ，h p l c m s 谱中显示有5 个微量杂质，其 e i c 图如图1 1 9 所示，通过多级质谱碎裂实验分析推断出杂质l 和4 是合成西 酞普兰过程中的中间产物，杂质2 和3 的结构也得以确定。这4 个杂质的结构已 经有相关的文献报道，而未知杂质5 是一个新的结构，我们将西酞普兰和杂质5 的质谱图进行对比( 图1 2 0 ) ，其中杂质5 的碎裂实验中有两个h n ( c h 3 ) 2 丢失， 8 浙江大学顾十学位论文 推测可能含有两个含胺基的侧链，继而推测杂质5 结构中含有两个西酞普兰结构 单元，但是其连接方式还不能确定，如图1 2 l 所示。在杂质5 的碎片离子m z 5 1 4 三级质谱图中，主要碎片离子是m z 2 6 3 ，元素组成为c 1 8 h 1 2 f o + ，与西酞普兰的 碎片离子m z 2 6 2 ( c 1 8 h 1 2 f n w ) 极为相似，而结构b 和c 都不能产生这样的 碎片离子，而结构a 可以经过n c ( o ) 键断裂得到m z 2 6 2 碎片离子，所以推断杂 质5 的结构为a ，最后n m r 数据确证了我们的推测。 辨 善 差 妻 。1 。| _ u ：。4 2 、一 ， 图1 1 9 西酞普兰的e i c 图 图1 2 0 ( a ) 质子化西酞普兰的二二级质谱图( b ) 质子化杂质5 的二级质谱图 图1 2 1 杂质5 的可能化学结构 9 浙江人学硕士学位论文 药物赖诺普利是新一代血管紧张素转化酶抑制剂，在出厂前需要对其进行质量 控制【3 0 1 ，在检测过程中我们发现了两个微量杂质( 如图1 2 2 ) 。对赖诺普利及 杂质进行多级质谱碎裂实验( 如图1 2 3 1 2 4 ) ，由图可见杂质l 和2 的碎裂途径 与赖诺普利几乎相同，结合高分辨数据对裂解机理进行分析，推断两个杂质的可 能结构如图1 2 5 所示。 主1 , 0 聪 。 主 ： 量：4 o 葛 b il蔫 t 和 i ( 8 i 篙 f ； 羁 l l | 孵i 图1 2 2 赖诺酱利的h p l c 图 善” 重篡 。 主： 耋 2 o i l 2 ( 1 02 如3 3 5 04 0 04 5 0 5 0i i 2 0 01 5 0 珈3 5 04 0 04 5 0 胁 衲 5 4 加 重篡 i 0 ，姗 e 0 - 1 3 02 0 02 如3 - 图1 2 3 正离子模式下( a ) 杂质1 的二级质谱图( b ) 赖诺普利的二级质谱图( c ) 杂质 l 的m z 2 9 1 三级质谱图( d ) 赖诺普利的m z 2 9 1 的二级质谱图( e ) 杂质1 的m z 2 4 5 四级 质谱图( f ) 赖诺普利的m z 2 4 5 的四级质谱图 雷 三 重 ： o ，2 g oo 靠 喜 o l j | 删如南 ，l - 州l i m p u r i t y i 鼬。h l i 蛐2 0 0”o 3 ，阳 柚 图1 2 4 ( a ) 杂质2 的二级质谱图图1 2 5 赖诺酱利及两个杂质的化学结构 ( b ) 赖诺酱利的m z 3 0 9 的三级质谱图 l o l 一 一 i。 nvl誓v参ls耍j 浙江火学硕：l ：学位论文 在深入研究中，我们还利用质谱技术发展了区分赖诺普利和赖诺普利r s s 非对应异构体( 如图1 2 6 ) 的方法【3 l 】：在f 离子模式下多级质谱碎裂( c i d ) 实验中，质子化赖诺普利碎片离子m z 2 4 6 的丰度大约是碎片离子m z 2 4 5 的两倍， 而质子化的r s s 异构体的碎片离子m z 2 4 6 的丰度要略低于碎片离子m z 2 4 5 ；加 l i + 离子峰碎裂中，赖诺普利的碎片离子m z 3 1 5 的丰度大约是其r s s 异构体的三 倍( 如图1 2 7 1 2 8 ) 。而且此区分方法得到了质谱能量曲线数据和理论计算结果 的佐证。同时赖诺普利及其r s s 甲酯化化合物( 如图1 2 6 ) 的质谱碎裂实验也 呈现出同样的规律，进而证明了r s s 异构体可以通过化合物【m + h 】+ 和【m + l i 】+ 的c i d 实验来区分。 一i n h 2 r s si s o m e ra n dm e t h y l e s t c r 图1 2 6 赖诺普利、r s s 异构体及其甲酯化化合物的化学结构 wmmmm_ *m 图1 2 7 ( a ) 赖诺普利 m + h 】+ 的质谱碎裂图 ( b ) r s s 异构体【m + h 】+ 的质谱碎裂图 。；。，。 浙江人学硕士学位论文 i ai ，擎er 叩。i 一 i mm- l b - ” 擎! 望7峄坤6 1 4 本章小结 mm 图1 2 8 ( a ) 赖诺普利【m + l i 】+ 的质谱碎裂图 ( b ) r s s 异构体 m + l i 】+ 的质谱碎裂图 杂质分析是药物质量研究与药品生产过程中的关键内容之一，随着人们对健 康事业的高度关注，相关研究已成为热点课题。由于h p l c m s “同时具有液相色 谱的高效分离能力和质谱的强大定性功能，为分析鉴定药物杂质提供了捷径，已 成为药物杂质在线分析研究的强有力的工具。 1 2 浙江人学硕1 二学位论文 参考文献 【1 】k u m a ryr ，r a j uv v n k vp ，k u m a rrr ，e s w a r a i a hs ，m u k k a n t ik ， s u r y a n a r a y a n amv ，r e d d ym s s t r u c t u r a li d e n t i f i c a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no f i m p u r i t i e si nm o x i f l o x a c i n j p h a r m b i o m e d a n a l ，2 0 0 4 ，3 4 ：l12 5 - 112 9 【2 j o h nk ，b e l ak ，a n n e a em i m p u r i t i e si ng e n e r i cp h a r m a c e u t i c a ld e v e l o p m e n t a d v a n c e dd r u gd e l i v e r yr e v i e w s ，2 0 0 6 ，2 5 ( 4 ) ：7 7 - 8 5 【3 i m p u r i t i e si nn e wd r u gs u b s t a n c e sq 3 a ( r 2 ) i c hg u i d e l i n e g e n e v a ，s w i t z e r l a n d ， 2 0 0 6 ，o c t o b e r ，2 5 【4 u s p h a r m a c o p e i a n a t i o n a lf o r m u l a r y , u s p 2 9 - n f 2 4 ，2 0 0 5 5 】e u r o p e a np h a r m a c o p o e i a e p 5 0 ，2 0 0 5 【6 】b ixyz h a ozl ，y uwb ，w uhx s t u d yo nt h ed e t e r m i n a t i o no fr e l a t i v e s u b s t a n c e si nc o m p o u n dp a r a c e t a m o la n da m a n t a d i n eg r a n u l e sb yt l c c h i n e s e p h a r m a c e u t i c a la f f a i r s ，2 0 0 6 ，2 0 ( 3 ) ：17 5 17 6 【7 y a m a s h i t am ，f e n njb n e g a t i v ei o np r o d u c t i o nw i t ht h ee l e c t r o s p r a ys o u r c e j p h y s c h e m ，1 9 8 4 ，8 8 ：4 6 7 1 8 】k a r a sm ，b a c h m a n nd ，h i l l e n k a m pf i n f l u e n c eo ft h ew a v e l e n g t hi n h i g h i r r a d i a n c eu l t r a v i o l e tl a s e rd e s o r p t i o nm a s ss p e c t r o m e t r yo fo r g a n i cm o l e c u l e s a n a l c h e m ，19 8 5 ，5 7 ：2 9 3 5 - 2 9 3 9 9 b i r e n d r anp g a n g u l yak ，m i c h a e llg 电喷雾质谱应用技术第一版( 蒋宏 建，【美】俞克佳，译者) 北京：化学工业出版社，2 0 0 5 1 4 2 1 4 3 10 】p e r k i n sg p u l l e nf ，t h o m p s o nc a u t o m a t e dh i g hr e s o l u t i o nm a s ss p e c t r o m e t r y f o rt h es y n t h e t i cc h e m i s t ja ms o cm a s ss p e c t r o m ，19 9 9 ，10 ：5 4 6 - 5 51 1 1 l y u b a r s k a y ayv c a r rsa ，d u n n i n g t o nd ，p r e c h e rw p ，f i s c h e rsm ， a p p e l b a u mer ，j o n e scs ，k a r g e rbl s c r e e n i n gf o rh i g h a f f i n i t yl i g a n d st ot h e s r c s h 2d o m a i nu s i n gc a p i l l a r yi s o e l e c t r i cf o c u s i n g e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o ni o nt r a p m a s ss p e c t r o m e t r y a n a l c h e m ，1 9 9 8 ，7 0 ：4 7 6 1 4 7 7 0 【1 2 】b r e e m e nr bvh u a n gcr ，l uzz ，r i m a n d or ，f o n ghs ，f i t s z l o f f je e l e c t r o s p r a yl i q u i dc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r yo fg i n s e n o s i d e s a n a l c h e m ， 1 3 浙江人学硕士学位论文 19 9 5 ，6 7 ：3 9 8 5 - 3 9 8 9 13 】w uc ，s i e m sw f h i l ljhh s e c o n d a r ye l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o ni o n m o b i l i t y m a s ss p e c t r o m e t r yo f i l l i c i td r u g s a n a l c h e m ，2 0 0 0 ，7 2 ：3 9 6 - 4 0 3 【14 】c o h e nsl ，p a d o v a njc ，c h a i tb t m a s ss p e c t r o m e t r i ca n a l y s i so fm e r c u r y i n c o r p o r a t i o ni n t op r o t e i n sf o rx r a yd i f f r a c t i o np h a s ed e t e r m i n a t i o n a n a l c h e m ， 2 0 0 0 ，7 2 ：5 7 4 - 5 7 9 1 5 】何美玉现代有机与生物质谱北京：北京大学出版，2 0 0 2 16 】c h a r l w o o dj ，b i r r e l lh ，b o u v i e re s p , l a n g r i d g e ，c a m i l l e r ip a n a l y s i so f o l i g o s a c c h a r i d e sb ym i c r o b o r eh i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y a n a l c h e m ， 2 0 0 0 ，7 2 ：1 4 6 9 1 4 7 4 【17 y un ，c h i a n gsyw a l k e rve ，s w e n b e r gja q u a n t i t a t i v ea n a l y s i so f l ，3 - b u t a d i e n e - i n d u c e dd n aa d d u c t si nv i v oa n di nv i t r ou s i n gl i q u i dc h r o m a t o g r a p h y e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nt a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y jm a s ss p e c t r o m ，19 9 8 ，3 3 ： 3 6 3 3 7 6 【18 】h s uff ，t u r kj ，s t r u c t u r a ld e t e r m i n a t i o no fs p h i n g o m y e l i nb yt a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r yw i t he l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o n ja ms o cm a s ss p e c t r o m ，2 0 0 0 ，1 1 ： 4 37 4 4 9 【19 】k o s t e rs ，d u u r s m amc ，b o o njj ，h e e m nrma e n d g r o u pd e t e r m i n a t i o no fs y n t h e t i c p o l y m e r sb ye l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nf o u r i e rt r a n s f o r mi o nc y c l o t r o nr e s o n a n c em a s ss p e c t r o m e t r y ja ms o cm a s ss p e c t r o m ，2 0 0 0 ，1i ：5 3 6 5 4 3 2 0 】x i a n gb ，l ilj ，z a ip ea bl z 。a p p l i c a t i o no fl c m si nt h ea n a l y s i so f c r u d ep l a n te x t r a c t s a c t ap h a r m a c e u t i c as i n i c a ，2 0 0 2 ，3 7 ( 5 ) ：38 9 3 9 5 【21 g a u m e tj j ，s t r o u s eg ee l e c t r o s p r a ym a