免疫凝集试验.ppt

免疫凝集试验,教学目的,掌握：直接凝集反应和间接凝集反应的试验原理、类型；抗球蛋白参与的试验原理熟悉：凝集反应的特点、应用,第一节免疫凝集试验的基本原理凝集反应(agglutinationreaction),是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）发生特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。,分两个阶段：抗原抗体的特异性结合阶段出现肉眼可见的凝集现象,第一节免疫凝集试验的基本原理,可见反应形成,第二节直接免疫凝集试验,直接凝集反应(directagglutination)细菌、螺旋体、红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象。,一、玻片凝集试验(slideagglutinationtest),Y,Y,Y,+,红细胞悬液,BA,方法评价:定性试验简便和快速敏感度低,临床应用:菌种鉴定血清学分型血型鉴定,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,二、试管凝集试验,试管凝集试验,免疫血清123101：10阴性对照血清稀释度1:201:401:80步骤：1）加生理盐水0.5ml2）依次倍比稀释免疫血清3）加相同浓度的细菌悬液0.5ml,方法评价：半定量试验简便、快速敏感度低可有假阳性,临床应用：WidalreactionWeil-felixreactionWrighttest:布鲁菌病交叉配血试验,第三节间接免疫凝集试验间接免疫凝集试验(indirectagglutination)将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,正向间接免疫凝集试验反向间接免疫凝集试验间接免疫凝集抑制试验协同免疫凝集试验,一、间接免疫凝集试验的类型,抗原致敏载体-检测抗体,（一）正向间接免疫凝集试验,（一）正向间接免疫凝集试验特点：简便快速，敏感性和特异性均高，成本低廉。应用：伤寒沙门菌的多糖抗原致敏绵羊红细胞测伤寒抗体。抗原抗体载体颗粒抗原致敏颗粒,（二）反向间接免疫凝集试验,用抗体致敏载体-检测抗原,（二）反向间接免疫凝集试验应用：检测HbsAg、AFP等。特点：本方法快速、敏感性高、特异性强。抗体抗原载体颗粒抗体致敏颗粒,（三）间接免疫凝集抑制试验,用抗原致敏载体-检测抗原,（三）间接免疫凝集抑制试验+说明标本中不存在相应抗原说明标本中含有相应抗原,抗原抗原致敏颗粒A抗体抗原抗体不凝集复合物抗原致敏颗粒无抗原B抗体游离抗体凝集,结果判定试验结果+(凝集)-(不凝集)检测结果-+,SPA:SPA-IgGFc;SPA抗体致敏-测抗原反向间接凝集反应,（四）协同免疫凝集试验,（四）协同免疫凝集试验载体：金黄色葡萄球菌。,优点：特异、灵敏、简便、快速。应用：可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的快速检测。,载体种类：常用的载体有动物或人红细胞、聚苯乙烯胶乳颗粒、明胶颗粒和活性炭等。,二、间接免疫血凝试验,（一）载体：是以红细胞作为载体的间接免疫凝集试验。常用的载体有：绵羊、家兔、鸡红细胞和O型人红细胞。,二、间接免疫血凝试验,（二）致敏蛋白质致敏红细胞的方法有：直接法和间接法。（三）血凝试验微量滴定板或试管标本倍比稀释（1：64）1滴+0.5%致敏红细胞悬液1滴,充分混匀室温1-2h,血凝反应强度示意图,二、间接免疫血凝试验载体：红细胞优点：红细胞来源广，价格低。该试验为最经典的抗原抗体反应之一。应用：常用于测定抗核抗体、类风湿因子等。,三、颗粒免疫凝集试验（一）胶乳颗粒凝集试验,（一）胶乳颗粒凝集试验,载体：聚苯乙烯胶乳优点：性能稳定，均一性好。缺点：敏感度不及血凝试验。,应用：临床常用于检测抗溶血素0和类风湿因子等。,（二）明胶颗粒凝集试验,（三）炭颗粒凝集试验（四）甲苯胺红颗粒凝集试验,第四节抗球蛋白红细胞免疫凝集试验(antiglobulintest),抗球蛋白试验又称Coombs试验,一、直接Coombs试验,检测红细胞上抗体不完全抗体,一、直接Coombs试验,可用玻片法定性，也可用试管法半定量分析。临床应用：新生儿溶血症、特发性自身免疫性贫血、自身免疫性溶血症、和医源性溶血性疾病等的检测。,二、间接Coombs试验,检测血清中的抗红细胞抗体,二、间接Coombs试验,检测血清中游离的不完全抗体标本中不完全抗体抗球蛋白抗体具有特异抗原的红细胞凝集,临床应用：1.检测母体Rh(D)抗体，以便尽早发现和避免新生儿溶血症发生。2.输血前交叉配血或不相容输血后抗体检测。,第五节自身红细胞凝集试验与一般间接免疫血凝试验不同之处在于反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞。,第六节免疫凝集试验的临床应用一、直接免疫凝集试验的临床应用1、玻片凝集试验:定性检测，如细菌菌种鉴定及分型、ABO血型鉴定等2、试管凝集试验:半定量检测，如辅助诊断伤寒、副伤寒的肥达试验等。,第六节免疫凝集试验的临床应用二、间接免疫凝集试验的临床应用（一）抗原的检测病原体可溶性抗原、各种蛋白质检测（二）抗体的检测检测细菌、病毒等产生的抗体、自身免疫病抗体、超敏反应抗体等,第七节临床常用免疫凝集试验试剂方法特点一、诊断菌液二、载体颗粒红细胞、胶乳、炭粉粒子三、其他,第八节影响免疫凝集试验的主要因素一、抗原因素二、抗血清因素三、致敏颗粒试剂四、血清标本五、试验条件,凝集反应常用的实验方法：1、玻片法:定性检测2、试管法:半定量检测,小结,正向间接凝集反向间接凝集间接凝集抑制试验协同凝集试