（基础兽医学专业论文）产蛋氨酸益生菌的筛选及应用研究.pdf

i i r ll l ii i rl ! l l rli i 1rll 17 8 7 5 0 8 目录 目录 摘要i 英文摘要i i 1 引言l 1 i 益生菌的概述i 1 1 1 益生菌的定义l 1 1 2 益生菌的种类与功能l 1 1 3 益生菌的应用现状2 1 2 益生菌在奶牛饲养中的应州现状3 1 3 蛋氨酸的概述4 1 3 1 蛋氨酸的生产现状4 1 3 2 蛋氨酸的检测方法4 i 3 3 蛋氨酸在奶牛饲养中的应川5 1 4 微生物凶种的鉴定技术5 1 4 1 传统的鉴定技术5 1 4 - 2 分子生物学鉴定方法6 1 5 研究的目的和意义7 2 材料与方法9 2 1 材料。9 2 1 1 实验材料。9 2 1 2 实验动物一9 2 i 3 实验试剂。9 2 1 4 培养基9 2 1 5 实验仪器l0 2 1 6 试剂配方1 l 2 2 方法l l 2 2 1 菌种的分离培养i i 2 2 2 菌种的形态学观察1 2 2 2 3 生化实验12 2 2 4 蛋氦酸标准曲线的建立1 2 2 2 5 高效液相色谱检测1 3 2 2 6 菌种的鉴定1 3 2 2 7 产蛋氨酸益生凶的菌种发酵液住奶牛饲喂中的应川1 4 3 结果与分校。、6 3 1 菌珠的分离培养1 6 3 2 蛋氨酸标准曲线的建立1 6 3 3 高效液相色谱测定各菌株中蛋氨酸的含量1 7 4 3 2 生化实验鉴定2 6 4 3 3 分子生物学鉴定2 6 4 4 益生菌产蛋氨酸能力分析2 6 4 5 高产蛋氨酸箍生菌的发酵液对奶牛产奶性能的影响2 7 5 结j 沦2 9 致谢3 0 参考文献3l p 付录3 5 攻读硕士学位期间发表的学术论文3 6 c o n t e n t s c o n t e n t s c h i n e s ea b s t r a c t “i e n g l i s ha b s t r a c t i i 1i n t r o d u c t i o n 。1 1 io v e r v i e wo f p r o b i o t i c s l 1 1 1c o n c e p to fp r o b i o t i c s “1 1 1 2t y p e sa n df u n c t i o no fp r o b i o t i c s i 1 1 3a p p l i c a t i o no f p r o b i o t i c s 2 1 2a p p l i c a t i o no fp r o b i o t i c so nc o wf e e d 3 1 3o v e r v i e wo f m e t h i o n i n e 4 1 3 1p r e s e n ts i t u a t i o no f y i e l d i n go f m e t h i o n i n e “4 1 3 2d e t e c t i o n so f m e t h i o n i n e 4 1 3 3a p p l i c a t i o no f m e t h i o n i n eo nc o wf e e d 5 1 4i d e n t i f i c a t i o nt e c h n o l o g yo fm i c r o o r g a n i s m 5 1 4 1c o n v e n t i o n a li d e n t i f i c a t i o nt e c h n i q u e s 一5 1 4 2m o l e c u l a rb i o l o g yi d e n t i f i c a t i o nt e c h n i q u e s ：“6 1 5o b j e c t i v ea n ds i g n i f i c a n c eo f t h i st e s t 7 2m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 9 2 1m a t e r i a l s 。9 2 i 1e x p e r i m e n t a lm a t e r i a l s 9 2 1 2e x p e r i m e n t a la n i m a l s 9 2 i 3r e a g e n t s 9 2 1 4m e d i u m 9 2 1 5i n s t r u m e n t s 1 0 2 1 6p r e s c r i p t i o no fs t a i n i n gr e a g e n t s 1l 2 2m e t h o d s 11 2 2 1i s o l a t i o na n dc u l t u r eo fb a c t e r i a 1l 2 2 2t h em o r p h o l o g yo fb a c t e r i a 12 2 2 3b i o c h e m i c a lt e s t 12 2 2 4s t a n d a r dc u r v ee s t a b l i s h e do fm e t h i o n i n e 12 2 2 5d e t e c t i o no fh p l c 13 2 2 6l d e n t i f yo f s t r a i n s 13 2 2 7a p p l i c a t i o no f f e r m e n t a t i o no f m e t - y i e l d i n gp r o b i o t i c si nc o wf e e d 1 4 3r e s u l t sa n da n a l y s i s 16 3 1i s o l a t i o na n dc u l t u r eo f b a c t e r i a 。1 6 3 2s t a n d a r dc h i v ee s t a b l i s h e do f m e t h i o n i n e 1 6 3 3d e t e c t i o no f c o n t e n to f m e t h i o n i n ei nf e r m e n t a t i o no f b a c t e r i a 1 7 东北农业人学农学顶i ：学位论文 3 4i d e n t i f yo fm e t - y i e l d i n gs t r a i n s 18 3 4 1o b s e r v a t i o no f c o l o n i a lm o r p h o l o g y i8 3 4 2b i o c h e m i c a it e s t 1 9 3 4 31 6 s r d n aa n a l y s i sr e s u l t s 2 0 3 4 4e x p e r i m e n t a la n a l y s i so fs p e c i e s - s p e c i f i cp c r 2 0 3 5t b s to fc o w 21 3 5 1a f f e c to fm i l kp r o d u c t i o nb yf e r m e n t a t i o no fp r o b i o t i c s 21 。 3 5 2a f f e c to fm i l kq u a l i t yb yf e r m e n t a t i o no fp r o b i o t i c s 2 2 4d i s c u s s i o n 2 4 4 1i s o l a t i o na n dc u i t u r eo f b a c t e r i a 2 4 4 2d e t e c t i o no f c o n t e n to f m e t h i o n i n ei nf e r m e n t m i o no f b a c t e r i ab yh p l c 2 4 4 3l d e n t i f yo fm e t y i e l d i n gs t r a i n s 2 5 4 3 1o b s e r v a t i o no fc o l o n i a lm o r p h o l o g y 2 5 4 3 2b i o c h e m i c a lt e s t 2 6 4 3 3m o l e c u l a rb i o l o g yi d e n t i f i c a t i o n 2 6 4 4t h ea n a l y s i so f a b i l i t yo f m e t - y i e l d i n go f t h ep r o b i o t i c s 2 6 4 5a f f e c to f m i l kp r o d u c t i o na n dm i l kq u a l i t yb ym e t - y i e l d i n gs t r a i n s 2 7 5c o n c l u s i o n 2 9 a c k n o w l e d g e m e n t 3 0 r i f e r e n c e s 31 a p p e n d i x 3 5 p u b l i s h e da r t i c l e sd u r i n gs p e c i a l i z i n gt h ed e g r e eo fm a s t e r 3 6 研究生学位论文独创声l j 和版仪使用授权书 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 ( 逵! 塑遗直墓丝盂蔓壁星童明的! 奎拦亘窒2 或其他教育机构的学位或证 书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位敝储签名：寸伏 日期：2 p fd 年乡月夕日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解 密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 寸微 签名：孝孑彳 只期：矧矿年多月罗日 r 期：少加年石月夕r 摘要 摘要 益生菌通过改善宿主微生态平衡而发挥有益作用，达剑提高宿主健康水平和健康状 态的活菌制剂及其代谢产物，可供人类或动物直接使用和喂食。它可改善动物肠道菌群的 平衡，降低肠道内有害物质，增强动物机体免疫能力，促进动物生k 发育。益生菌作为饲料 添d h f f , i 具有提高动物生 乏性能、无毒副作用、无残留等特点，是一种新型的绿色添加荆，可 作为抗生素替代物的理想产品。 蛋氨酸是动物体内具有重要作用的限制性氨基酸之一，也是提供动物体内蛋白质营养以 及合成动物蛋白的必需氨基酸之一。饲用蛋氮酸具有补充动物体内营养，平衡小肠内氨基酸 吸收等作用，是一种理想的饲川添加剂。本研究的目的是从分离山的菌株中筛选出蛋氨酸含 量相对较高的益生菌作为奶牛饲刚添加剂，为提高奶牛产奶避和改善奶品质提供新的技术。 本实验从面包、麻花、馒头、发面饼、人列巴等发酵谷物的生面团、米酒、白酒曲酒曲 中以及实验室提供的菌种中分离山4 8 株菌进行培养、发酵，利用高效液相色谱检测各菌株发 酵液中蛋氨酸的含量，筛选出蛋氨酸含餐较高的菌株，并利用1 6 sr d n a 分析及b l a s t 分析、 特异性引物p c r 等技术对所选菌株进行鉴定。最后将含量相对较高的菌株制成菌种发酵液， 作为饲料添d 1 1 7 i ：, j 饲喂奶牛，测定奶牛产奶量以及乳成分的各个指标。 通过划扳分离培养、镜检等常规方法和高效液相色谱技术筛选出蛋氨酸含量较高的2 株 益生菌。利川分子生物学方法鉴定出这2 株菌为纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌，其发酵液中 蛋氨酸含量分别为2 1 0 8 9 l 、1 9 3 8 9 ，l 。在奶牛实验中，应用纳豆芽孢杆菌作为饲料添加剂， 奶牛产奶量和乳成分均有提高。奶牛奶产量提高4 4 3 ，乳脂率提高1 0 6 ，乳糖质量分数 提高0 8 9 ，乳蛋白质量分数提高1 0 4 ，干物质质鼍分数提高o 6 1 。统计分析表明，试 验前后乳蛋白质量分数差异显著( 尸 o 0 5 ) ，乳脂率、乳糖质量分数、干物质质量分数筹异极 其显著( p 0 0 1 ) 。实验结果提示，纳豆芽孢杆菌发酵液中蛋氨酸含量较高可能是提高乳产量 和乳品质的原囚。 关键词：发酵食品；蛋氨酸；益生菌：奶牛；产奶性能 a b s t r a c t s c r e e n i n ga n da p p l i c a t i o no fm e t h i o n i n e - - y i e l d i n g p r o b i o t i c s a b s t r a c t p r o b i o t i c sa r em i c r o b i a lo r g a n i s m s ，p l a y i n gb e n e f i c i a la f f e c tb yi m p r o v i n gt h eb a l a n c eo fm i c r o b i a l i nh o s t ，t h e yc a ni n c r e a s et h eh e a l t hl e v e la n dh e a l t hc o n d i t i o n p r o b i o t i c sc a nb eu s e sa n df e dd i r e c t l yt o h u m a na n da n i m a l s i tc a ni m p r o v et h ee q u i l i b r i u mo ff l o r aa n dr e d u c eh a r m f u ls u b s t a n c ei na n i m a l i n t e s t i n e s ，i n c r e a s et h ei m m u n o c o m p e t e n c eo fa n i m a lb o d y ，p r o m o t ea n i m a l sg r o w t ha n dd e v e l o p m e n t a n di m p r o v ea n i m a l sp e r f o r m a n c et r a i t i ti san e w - s t y l eg r e e nf e e da d d i t i v e m e t h i o n i n ei so n eo ft h el i m i t i n ge s s e n t i a la m i n oa c i d sa n di ti so n eo ft h ea m i n oa c i d sw h i c hi s e s s e n t i a lf o rt h es y n t h e s i so fa n i m a lp r o t e i ni ni n t e r n a lo fa n i m a la n di tc a np r o v i d ep r o t e i nn u t r i t i o n m e t h i o n i n ec a nb a l a n c et h ea b s o r p t i o no fa m i n oa c i d si ns m a l li n t e s t i n ea n di ti sad e s i r a b l ef e e d a d d i t i v e t h ep u r p o s eo ft h i se x p e r i m e n ti st os e l e c ts e v e r a ls t r a i n so fm e t h i o n i n e - y i e l d i n gp r o b i o t i c s f r o mt h ei s o l a t e ds t r a i n s i nt h i se x p e r i m e n t ，4 8k i n d so fs t r a i n sw e r ei s o l a t e da n dc u l t u r e df r o md o u g ho fb r e a d ，t w i s t e d ， b u n s ，s e c t i o nc a k e ，r u s s i ab r e a d ，r i c ew i n e ，y e a s to fd i s t i l l a t es p i r i t ，a n ds t r a i n ss u p p l i e db yl a b o r a t o r y m e t h i o n i n ei nt h e s ef e r m e n t a t i o nb r o t h sw a sd e t e c t e db yh i g he f f i c i e n c y l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y m e t h i o n i n e - y i e l d i n g s t r a i n sw e r es e l e c t e da n di d e n t i f i e d b y 16 s r d n a ，b l a s t a n a l y s i s ，a n d s p e c i e s - s p e c i f i cp r i m e r sp c r a tl a s t ，f e r m e n t i n gl i q u o ro fh i g h - y i e l d i n gm e t h i o n i n es t r a i n sa s a p r o b i o t i ca d d i t i v ew a su s e di nd a i r yc o wf e e dt oe x p l o r ei t si n f l u e n c eo nc o w sp r o d u c t i o nt r a i t t w om e t h i o n i n e y i e l d i n gs t r a i n sw e r ei s o l a t e d ，c u l t u r e da n ds c r e e n e db yc o n v e n t i o n a lm e t h o d ， s u c h 弱p l a t ei s o l a t i o n a n do b s e r v a t i o n b yl i g h tm i c r o s c o p e a n dh i 【g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y i d e n t i f i c a t i o nh a sb e e nm a d eb y 16 sr d n a ，b l a s ta n a l y s i s ，a n ds p e c i e s s p e c i f i c p r i m e r sp c r t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e s es t r a i n sw e r eb a c i l l u sn a t t oa n db a c i l l u ss u b t i l i sa n dt h e a m o u n to fm e t h i o n i n ei nt h ef e r m e n t a t i o nb r o t h so ft h e mw a s2i 0 8 la n di9 3 8 9 lr e s p e c t i v e l y f e r m e n t i n gl i q u o ro fb a c i l l u sn a t t oa sap r o b i o t i ca d d i t i v ew a su s e di nd a i r yc o wf e e d ，t h ec o w sm i l k p r o d u c t i o nw a si n c r e a s e db y4 4 3 ，c o n t e n tp e r c e n t a g eo fm i l kp r o t e i nb y1 0 4 ，t h el a c t o s ea n dd r y m a r e ri nm i l kb y0 8 9 a n d0 61 ，r e s p e c t i v e l y ，t h em i l kf a tb y1 0 6 r e s u l to fs t a t i s t i c a la n a l y s i s s h o w e dt h a tt h ed i f f e r e n c eo fc o n t e n tp e r c e n t a g eo fm i l kp r o t e i nw a sp r e d o m i n a n t ( j d o 0 5 ) a n dt h e d i f f e r e n c eo ft h el a c t o s e ，d r ym a t t e ri nm i l ka n dm i l kf a tw e r ee x t r e m e l yp r e d o m i n a n t ( p 0 0 1 ) t h e r e s u l to ft h i se x p e r i m e n ts h o w e dt h a tt h ea m o u n to fm e t h i o n i n ei nt h ef e r m e n t a t i o nb r o t ho fb a c i l l u s n a t t ow a sh i g h e rt h a no t h e r sa n di tm i g h tb et h er e a s o no fi n c r e a s e m e n to f t h ep r o d u c t i o na n dq u a l i t a t i v e o f m i l k k e yw o r d s f e r m e n t e dc e r e a l s ；m e t h i o n i n e ；p r o b i o t i c s ；d a i r yc o w ；m i l kp r o d u c t i o n i i i 东北农业人学农学硕l ：学位论文 c a n d i d a t e ：y uw 色i s p e c i a l i t y ：b a s i cv e t e r i n a r ym e d i c i n e s u p e r v i s o r ：p r o f g a ox u e j u n 引言 1 引言 1 1 益生菌的概述 1 1 1 益生菌的定义 益生菌这个词最初起源丁希腊语，是有益r 生命的意思。直剑1 9 6 5 年经过数年的发展， 第一次提出益生菌的概念( l i l l ya n ds t i l l w e l l ，1 9 6 5 ) ，目前。人们所接受的定义是：添加活的 微生物通过改善肠道微生物的平衡对宿主产生有益的影响( f u l l e r ，1 9 8 9 ) 。目前普遍认为作 为益生菌的细菌应该具备以卜条件：对宿主有i ；i ：无毒性作刚和无致病作用；能在消化道存 活；能适应胃酸和胆盐；能在消化道表面定殖；能够产生有h j 的酶类和代谢物；在加【：和贮 存过程中能保持活性；具有良好的感官特性。 表1 1 发表的益生菌定义 t a b 1 1p u b l i s h e dd e f i n i t i o n g so fp r o b i o t i c s 发表的定义参考文献 益生凶产生的物质可以刺激其他微生物生长的微生物l i l l ya n ds t i l l w e l l ， 1 9 6 5 有利丁肠道平衡的生物体和物质p a r k e r ， 1 9 7 4 补充活的微生物可以改善肠道微生物平衡，对宿主产生 f u l l e r ，1 9 8 9 有益的影响 微生物应用了：动物或人时可以改善内在的微生物菌群对h a v e n a a ra n dh u i si n v e l d ， 1 9 9 2 宿主产生有益的影响 当摄取一定量活的微生物时对身体产生的好处已经超过 s c h a a f s m a ，1 9 9 6 它们自身提供的营养 益生菌是指通过食用这种微生物对宿主产生有益的影 n a i d ue ta 1 ， 1 9 9 9 响，主要是通过调控肠道和免疫系统，也改善了肠道中 营养和微生物的平衡 活的微生物当达到一定苗时对宿主健康产生有益的影响 f a o w h or e p o r to c t o b e r2 0 0 l 指某种微生物制剂对宿主产生有益的生理作i f j ，它通过康杰，2 0 0 8 定殖作用改变宿主某一部位菌群的组成，从而产生有利 丁宿主健康作川的单微乍物或组成明确的混合微生物 1 1 2 益生菌的种类与功能 益生菌的种类繁多，主要来源是动物肠道正常生理性菌和非肠道菌。1 9 8 9 年美国食品和 率。益生菌可通过自身及其代谢产物调整菌群之间的关系，维系菌群最佳优势组合。 三r h a m n o s u s1 9 0 7 0 2 和l r e u t e r id s m1 2 2 4 6 的搭配混服，可有效减轻轮状病毒肠炎症状。虽 然益生菌可通过刺激肠粘蛋白的过表达实现对肠道的保护作用，但有些致病菌可分泌粘蛋白 酶而降解粘蛋白，冈此益生菌对病毒性腹泻的治疗更为有效。抗生素使用不当会引起肠道菌 群火调和腹泻的发生，益生菌对抗生素相关性腹泻也有良女r 的预防和治疗作片j 。g o t z 等对7 9 名接受阿司匹林治疗的患者的研究发现，嗜酸乳杆菌( l a c i d o p h i l u s ) 和保加利亚乳杆菌 ( l b u l g a r i c u s ) 能有效地防治抗生素相关性腹泻( g o t zvr o m a n k i e w i c zj a ，2 0 0 5 ) ；a k a l i n ( 2 0 0 3 ) 等分别给小鼠饲喂鲜牛奶和含有嗜酸乳杆菌的酸奶，发现饲喂含乳酸凶的酸奶可显 著降低小鼠血浆i j _ b i 古i 醇和高密度脂蛋白hf l l _ i l i l 醇浓度( a k a l i n a s ，2 0 0 3 ) ；k a i z u 等( 2 0 0 3 年) 利 川动物试验进行了乳酸菌抗氧化能力的研究，从5 7 0 株乳酸菌中筛选出1 9 株具有抗氧化活性 的菌株，其中l a c t o b a c i l l u ss p s b t2 0 2 8 表现出了最强的抗氧化作川：s a w a d a 等( 2 0 0 1 ) 发 现l c a s e i 细胞鼙成分对白发性高压血人鼠( s h r ) 和肾性高血压人鼠( r h r ) 具有明显降压 作用，这种降压作用星现出一定的剂量效, 麻( s g o u r a sd ，2 0 0 4 ) ；s e k i n e 等( 1 9 8 5 ) 将从b i n f a n t u s a t c cl5 6 9 7 细胞罐分离出的肽壁糖和肿瘤细胞混合后进行皮卜注射，观察剑明显的抑制肿 瘤生k 的效果。动物实验表明干酪乳杆菌l c a s e if 1 9 可通过对细胞冈子自介索1 0 的调。1 ，而 缓解结肠炎的症状( m i e t t i n e nm ，2 0 0 3 ) 。 1 1 3 益生菌的应用现状 益生菌应用丁食品中，益生菌可参与发酵或不参与发酵直接添加，益生菌7 0 应h jt 乳 制品中。益生菌可以赋予产品芳香，提高产品风味，减少香精、香料在产品中的添加，从而 使产品更趋于天然，如j 二酮乳链球菌、肠膜明串珠菌及乳酪链球菌等，可产生乙二酰、乳 酸、乙酸及r 二酮等风味物质。此外，益生菌还能够增加乳制品的粘稠度。现阶段应h j 益生 菌开发的功能性食品，主要有酸奶、干酪等。酸奶中的菌种有保加利弧乳杆菌、发酵乳杆菌、 2 引言 嗜热乳杆菌、叔歧杆菌等，酸奶通过微生物或酶作用使牛奶发生生化改变，产生对人体有益 的成分。干酪作为益生菌的载体，发酵剂和非发酵剂乳酸菌构成了干酪主要菌。嗜热菌 l b u l g a r i c u s 和s t h e r m o p h i l u s 是硬质意人利和瑞士干酪的常用菌；嗜温菌c a s e i 和 l p l a n t a r u m 是多种干酪成熟的主要1 f 发酵剂。k a m a l y 进行了双歧杆菌豆乳产品研究，蛋白 水解物和氨基酸能促进双歧杆菌的生k 酸化，并能够生产出以双歧杆菌为唯一发酵菌种的质 地优良的豆乳产品。功能性食品中常见益生菌主要有两种，一类为舣歧杆菌，如两歧双歧杆 菌、婴儿双歧杆菌、长舣歧杆菌、短舣歧杆菌、青春舣歧杆囟、动物舣歧杆菌等；另一类为 乳杆菌，如嗜酸乳杆菌( l a c t o b a c i l l u sa c i d o p h i l u s ) 、干酪乳杆菌( l a e t o b a c i l l u sc a s e i ) 、鼠李 糖乳杆菌( l a c t o b a c i l l u sr h a m n o s u s ) 、植物乳杆菌( l a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m ) 和罗伊氏乳杆菌 ( l a c t o b a c i l l u sr e u t e r i ) 。 益生菌在各牧业中获得了“泛的应用，起点较高，发展迅速，表现出良好的正效应。在 反刍动物养殖上，有资料表明，犊牛日粮中使朋益生素可使日增重提高5 3 ，饲料利用率提 高5 2 ，还可使牛腹泻发病率由8 2 降至3 5 ，死亡率由1 0 2 降至2 8 ，且病情减轻。 李义海等( 1 9 9 8 ) 报道，在奶牛中戍用益生菌，可使奶牛产奶量提高7 0 o , - 1 0 ，乳蛋白含量提 高0 1 - , 4 ) 2 个单位，乳脂率提高0 1 o 3 个单位。傅义刚等( 1 9 9 7 ) 报道，在鸡饲粮中添加0 5 “强 力益生素”( 其菌种是从国外引进的益生素菌株- 芽孢杆菌和乳酸菌) ，鸡血液球蛋白水平提高， 血氨减少，鸡的抗病力增强，死亡率降低。陈兵等川纳豆枯草芽孢菌剂饲喂a a 鸡，能提高 十二指肠消化酶( 总蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶) 的活力5 2 2 8 9 2 ，添加纳豆芽孢菌2 0 0m g k g 时，a a 鸡平均日增重和平均日采食量分别提高2 4 7g 和5 1 lg 。刁其玉等报道，向饲料中加 入j ；i 生菌制剂对反刍动物生产和健康均有明显促进作用。奶牛日粮中添加纳豆芽孢杆菌，试 验组体细胞数低于对照组，可以看出添加纳豆芽胞杆菌有降低牛奶中体细胞数的趋势，这可 能与纳豆菌具有广谱抗菌作用有关。 1 2 益生菌在奶牛饲养中的应用现状 益生菌作为饲料添加剂，是动物配合饲料的核心，有提高饲料利用率、动物生产性能和 经济效益的作用。由丁抗生素、激素及一些化学药品的过度使用，对机体健康造成严重威胁， 冈而益生菌的席川越来越受剑重视。益生菌以其独特的优点在防治腹泻方面具有良好效果。 一些益生凶能够抢先竞争黏附在肠道，形成保护性屏障，减少有害细菌的植入。饲料中添加 益生菌可激活奶牛瘤胃微生物的活性，促进瘤胃内有盗菌的生长繁殖，产生多种消化酶，提 高饲料利用率，最终提高奶牛的产奶量。，干振华等( 2 0 0 5 ) 住荷斯坦奶牛日粮中分别添加含有 活菌数l 1 0 9 、5 1 0 9 和2 1 0 1 0 c f u d 的枯草芽孢杆菌微生态制荆，产奶量显著增加3 0 7 、 2 3 3 0 币h1 9 8 0 ( p o 0 5 ) ，不同小写 字母表示筹异显著( p 0 0 5 ) ，不同大写字母表示差异极显著( p 0 0 1 ) 。 囱 由 图3 1 0 牛乳中乳脂率变化图3 ii 牛乳中乳蛋白含鼙变化 f i g 3 - 10t h ec h a n g e so f m i l kf a tc o n t e n t f i g 3 11t h ec h a n g e so f m i l kp r o t e i nc o n t e n t 结果j 分析 一46 4 r 4 6 2 蠹棚4 6 ； 蒜4 两i 壬4 嗣： 辱4 5 2 。4 5l 一一 组别( g r o u p ) 。工。 r l ：、。一 组刺( g r o n p ) 图3 12 牛乳中乳糖含量变化图3 13 牛乳中干物质含量变化 f i g 3 1 2t h ec h a n g e so f l a c t o s ec o n t e n tf i g 3 - 1 3 t h ec h a n g e so f d r ym a t t e rc o n t e n t 本试验中，以发酵液的形式向奶牛饲喂的基础日粮中添加较高剂量的纳豆芽孢杆菌。纳 豆芽孢杆菌作为饲料添加剂，进入肠道后具有促进优势菌生长繁殖，抑制病原菌生长，提高 机体免疫应答的能力。试验期间乳中的乳脂率、乳蛋白质量分数、乳糖质量分数和干物质质 量分数均有改善，提高率分别为1 0 6 、1 0 4 、0 8 9 、0 6 1 。统计分析表明，试验前后 乳蛋白质量分数差异显著( p 0 0 5 ) ，乳脂率、乳糖质量分数、干物质质量分数差异极其显著 ( p 0 0 1 ) 。实验结果证明蛋氨酸含量较高的纳豆芽孢杆菌饲喂奶牛，不仅能够提高奶牛产奶 量，对乳品质也有一定的影响。 由： 一甲 ，i，1l ；三 表示；面包中分离剑7 株，用“o ”表示：麻花中分离到3 株，用“t ”表示；发面饼中分离剑4 株，刚“f ”表示：白