（药物化学专业论文）osmac方法在海洋来源真菌曲丽穗霉spicaria+elegans+kla03研究中的应用.pdf

i ： o s m a c 方法在海洋来源真菌 曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 学位论文完成日期：丛垃：坚：羔l 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： ， 曼 ， ， 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 ! 洼! 垫逡直基丝霞墨挂型直塑竣：奎拦亘窒2 或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：南辞勿蜀签字日期：冽驴年莎月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后 适用本授权书) 学位论文作者签名：南普也两 导师签字： 签字日期：伽j 睥占月 1 3 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 签字日期：沙p 年彤日 电话： 邮编： 摘要 o s m a c 方法在海洋来源真菌 曲丽穗霉s p i c a d ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 摘要 微生物次级代谢产物的结构多样性赋予其广泛的生物活性，是药物先导化合 物的重要来源。然而传统单一的培养方法限制了微生物中大量代谢途径的表达， 以至于许多代谢产物不能产生。因此，本文利用一株菌多种次级代谢产物( o n e s t r a i nm a n yc o m p o u n d s ，o s m a c ) 策略对已知产生新骨架细胞松弛素的活性菌株 曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 进行研究，旨在激活该菌株潜在的沉默代谢途 径获得多种新类似物，研究内容包括：不同培养条件下菌株代谢产物的比较和优 化；目标产物的分离纯化及结构鉴定；单体化合物体外抗肿瘤活性的初步评价。 本实验室在前期工作中发现k l a 0 3 活性菌株能够产生系列新骨架开链细胞 松弛素化合物，该类化合物具有显著的细胞毒活性和酪氨酸激酶抑制活性，具有 抗肿瘤药物先导结构的优势。本论文首先对菌株k l a 0 3 进行了改变培养条件的 研究。通过选择几种不同的培养基进行试验，发现菌株在原培养基基础将氮源由 味精改为氯化铵，采用摇床和静置两种培养方式都能引起代谢产物发生很大的变 化。通过改变氮源静置培养分离到1 0 个化合物( 1 - 1 0 ) ，其中包括3 个新的细胞 松弛素类化合物( 1 - 3 ) ，并在此菌中分离到t r i c h o d c n n a m i d eb 的前体( 1 0 ) ，首 次报道了其理化性质及波谱特征；进而在相同的培养基条件下采用摇床培养则分 离到4 个异苯并呋喃类化合物( i i 1 4 ) ，其中包括2 个新的异苯并呋喃单体聚合 物( 1 1 1 2 ) ，化合物1 1 为罕见的具有螺环结构的异苯并呋喃单体聚合物。 其次，本论文还研究了由原培养条件中的自来水发酵改变为蒸馏水后对菌株 k l a 0 3 代谢产物的影响：采用蒸馏水发酵后，从中分离到9 个细胞松弛素类 化合物( 1 5 2 3 ) ，包括5 个新化合物( 1 5 1 9 ) ；所分离的化合物大多为6 ， 7 脱氧化的细胞松弛素，这与之前所做的加入p 4 5 0 氧化酶抑制剂( 美替拉酮) 后所得到的化合物具有很大的相似性，论文初步推测了这两个实验之间的关系。 最后，本论文添加前体l t r p 对菌株k l a 0 3 进行了o s m a c 研究，以便同 之前所做的添加前体d - t r p 进行对照。l - t r p 的加入刺激了菌株k l a 0 3 的代谢 的变化从中分离得到1 个新细胞松弛素( 2 4 ) ，1 个首次在此菌中分离得到的 a s p o c h a l a s i n 类化合物( 2 6 ) 。但是菌株k l a 0 3 同样没有利用前体l t r p 生成 摘要 带有色氨酸结构片段的细胞松弛素，由所分的两个苯的衍生物( 2 9 ，3 0 ) 推测 l t r p 可能在被菌株利用过程中发生了降解。 采用m t t 和s r b 法，对所分得的单体化合物的体外抗肿瘤活性进行了初步 评价。发现4 个细胞松弛素类化合物( 2 ，1 6 ，1 7 ，1 8 ) 对a 5 4 9 细胞具有不同程度 的抑制活性，化合物l o 对p 3 8 8 细胞具有较强的抑制活性。对不含碳酸酯结构的 细胞松弛素进行了构效关系的初步评价，发现c 6 位的环外双键和c 7 位羟基是 保持其活性必需的基团。化合物进一步的抗肿瘤活性评价还在进行中。 总之，本文通过对已知菌株k l a 0 3 进行o s m a c 的研究，共得至l j 3 0 个化合物单 体，其中新化合物1 2 个，包括9 个新的细胞松弛素类化合物，2 个异苯并呋喃类二 聚体，并首次报道了t r i c h o d e r m a m i d eb 前体的波谱特征及其理化性质。评价了包 括细胞松弛素类和异苯并呋喃类化合物在内的部分化合物的生物活性，既为抗肿 瘤新药提供了新的可能先导结构，也为今后o s m a c 策略在微生物天然产物中的 应用和推广提供了一定的实验依据。 关键词：o s m a c ：细胞松弛素；海洋真菌；抗肿瘤；代谢产物 l i s t r u c t u r e so ft h ec o m p o u n d s 2 3 2n a w 1 2 8 1 1n e w 1 2 1 1 1 o 2 3n 9 1 2 1 5 n ，w 1 2 o 1 8n e w 1 2 1 2 o 1 9 o c h 3 o c h 3 1 2 1 2 1 2 2 n 删 o o h ：凇c c k 5 ) h h o h 翰c 。 o o s m a c a p p r o a c ha n da p p h c a f i o ni nt h er e s e a r c ho f m a r i n e - d e r i v e df u n g i s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 a b s t r a c t m i c r o b i a ls e c o n d a r ym e t a b o l i t e sh a v eaw i d er a n g eo fb i o l o g i c a la c t i v i t i e sd u et o t h e i r s t r u c t u r a l d i v e r s i t ya n dh a v eb e e np r o v e dam a j o rs o u r c ef o rd r u gl e a d c o m p o u n d s h o w e v e r , t h et r a d i t i o n a lm e t h o do fas i n g l ec u l t u r er e s t r i c t st h em e t a b o l i c p a t h w a y so fm i c r o o r g a n i s m sa n da sar e s u l tm a n ym e t a b o l i t e sc a nn o tb ef o r m e d s o ， t h es t u d yo fu s i n gt h eo s m a c a p p r o a c ho naf u n g u ss p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3w h i c h y i e l d e das e r i e so fc y t o c h a l a s i n sw a sp e r f o r m e dt oa c t i v a t et h es i l e n tb i o s y n t h e t i c p a t h w a ya n dp r o d u c em o r ea c t i v ec y t o c h a l a s i n sa n a l o g s s t u d i e si n c l u d e dc o m p a r i n g a n do p t i m i z i n gf o rm i c r o b i a ls e c o n d a r ym e t a b o l i t e s 、析n ld i f f e r e r n tc o n d i t i o n s ； i s o l a t i o n , p u r i f i c a t i o n a n ds t r u c t u r a le l u c i d a t i o no f m e t a b o l i t e s ；e v a l u a t i o no f a n t i t u m o ra c t i v i t i e sf o rp u r ec o m p o u n d s o u rp r e v i o u sw o r kh a dr e p o r t e dt h ei s o l a t i o no fn e ws k e l e t o nc y t o c h a l a s i n sf r o m t h em a r i n e - d e r i v e df u n g u ss p i c a r i a e l e g a n sk l a 0 3 ，w h i c hs h o w e do b v i o u s l y c y t o t o x i c i t y a n dp t ki n h i b i t i o n a c t i v i t y a n dm i g h tb ed e v e l o p e da s l e a d i n g c o m p o u n d sf o ra n t i t u m o rd r u gd i s c o v e r y o u rs t u d yf i r s t l yb e g a n 、耐t l la l t e r i n gc u l t u r e c o n d i t i o n s b ys e l e c t i n gd i f f e r e n tc u l t u r em e d i u m s ，t h es e c o n d a r ym e t a b o l i t e so f k l a 0 3w e r ed r a s t i c a l l ys h i f t e dw h e nt h en i t r o g e ns o u r c eo ft h ei n i t i a lm e d i u mw a s r e p l a c e dt on h 4 c 1f r o mg l u t a m a t ew h e t h e ri ns t a t i co rs h a k ec u l t u r ec o n d i t i o n s t e n c o m p o u n d s ( i - 1 0 ) w e r ei d e n t i f i e d ，a m o n gt h e m ，t h e r ew e r et h r e en e wc y t o c h a l a s i n s ( 1 - 3 ) ，a n do n ep r e c u r s o ro ft r i c h o d e r m a m i d eb ( 1 0 ) ，t h ep h y s i c o - c h e m i c a lp r o p e r t y a n ds p e c t r a lc h a r a c t e r so fw h i c hw e r ef l r s t l yr e p o r t e d t h e nk l a 0 3w e r ec u l t u r e d 埘t l l s h a k ei nt h es a m em e d i u m ，a n dt h r e eu n u s u a li s o b e n z o f u r a nd i m m e r ( 1 1 1 3 ) w e r e i s o l a t e d ，m o r e o v e r , c o m p o u n d1 1w a sa ne x c e p t i o n a ls p i r oc o m p o u n d s e c o n d l y , t h es t r a i nk l a 0 3w e r ec u l t u r e di nt h ei n i t i a lm e d i u mm a d eu pw i t l l d i s t i l l e dw a t e ri n s t e a do ft a pw a t e rr e s u l t e di nt h ei s o l a t i o no fn i n ec y t o c h a l a s i n s ( 15 2 3 ) ，a n df i v e o ft h e m w e r en e wc o m p o u n d s ( 1 5 - 1 9 ) ；f u r t h e r m o r e ，t h e s e c o m p o u n d sw e r ea l m o s t6 ，7 - d e o x i d a t i o ne y t o c h a l a s i n s ，w h i c hh a dm o r es i m i l a r i t y 谢t ht h ep r e s e n ts t u d yo fa d d i n gc y t o c h r o m ep - 4 5 0i n h i b i t o ri nt h i ss t r a i n ，a n dt h e r e l a t i o n , b e t w e e nt h e s et w oe x p e r i m e n t sw e r ed i s c u s s e d v f i n a l l y , t h ea p p l i c a t i o no fo s m a cm e t h o di nf u n g u ss p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 w a sc a r r i e do u tb ya d d i n gt h ep r e c u r s o ro fl t r pi no r d e rt oc o m p a r ew i t ht h ep r e s e n t r e s u l t so fa d d i n gd t r p l t r pt o o ke f f e c t so nt h eg r o w t ho fk l a 0 3 ，w h i c hr e s u l t e d i no n en e wc y t o c h a l a s i n s ( 2 4 ) ，o n ea n a l o go fa s p o c h a l a s i n ( 2 6 ) ，w h i c hh a dn o tb e e n f o u n di nt h i ss t r a m b u tl - t r pw a sn o tu t i l i z e db yf u n g u sk l a 0 3t og e n e r a t e c y t o c h a l a s i n sw i t ht r y p t o p h a nf r a g m e n ta n d m i g h tb ed e g r a d a t e di n t os e v e r a lb e n z e n e d e r i v a t i v e sf r o mt w oc o m o u n d s ( 2 9 ，3 0 ) t h ea n t i - t u m o ra c t i v i t i e so ft h e s ec o m p o u n d sa r ee v a l u a t e d nv i t r ob ys r ba n d m t tm e t h o d s a m o n gt h e m4n e wc y t o c h a l a s i n s ( 2 ，1 6 ，1 7 ，i s ) w i t hs i g n i f i c a n t c y t o t o x i c i t i e sa g a i n s ta - 5 4 9c e l ll i n e ，a n dc o m p o u n d1 0s h o w e das i g n i f i c a n t c y t o t o x i c i t ya g a i n s tp 3 8 8c e l ll i n e f o rt h ec y t o c h a l s i n sw i t h o u tt h ee n o le s t e rm o i e t y a tc 一21 ，t h ee x o c y c l i cd o u b l ea tc 一6a n dt h ec 7 - o hm i g h tb et w oe s s e n t i a lp a r t sf o r t h ea c t i v i t y t h ef u r t h e re x p e r i m e n t sa r es t i l li np r o c e s s i naw o r d ，t h es t u d yo f u s i n gt h eo s m a ca p p r o a c ho n af u n g u ss p i c a r i ae l e g a n s k l a 0 3r e s u l t e di nt h ei s o l a t i o no f3 0c o m p o u n d s ，谢t 1 11 1n e wc o m p o u d s ， i n c l u d i n gn i n ec y t o c h a l a s i n sa n dt w oi s o b e n z o f u r a nd i m m e r s ，a n df i r t l yr e p o r t e dt h e p h y s i c o - c h e m i c a lp r o p e r t ya n ds p e c t r a lc h a r a c t e r so ft r i c h o d e r m a m i d eb sp r e c u r s o r ( 1 0 ) n e a n t i - t u m o ra c t i v i t i e so fs o m ec o m p o u n d sl i k ec y t o c h a l a s i n s o r i s o b e n z o f u r a nd i n l l n e r 8w e r ee v a l u a t e d t h es t u d ym a yn o to n l yp r o v i d eam a j o r s o u r c ef o rd r u gl e a dc o m p o u n d s ，b u ta l s os u p p l ye v i d e n c ef o rt h ea p p l i c a t i o no f o s m a cm e t h o d si n t h er e s e a r c ho fn a t u r a lp r o d u c t s k e yw o r d s ：o s m a c ；c y t o e h a l a s i n s ；m a r i n e - d e r i v e df u n g i ；m e t a b o l i t e s ； a n t i t u m o r 缩略词语 缩略词语 n d e l r i 1 玎垤b c h m q c c o s y n o e s y n o e l d n m 吸 2 d n m 吸 m u v e s 耵讧s 日r e s 垤s l 肌c m p g z m i c s o m t p b s p i s r b m e o h c h c b p e t d m s o e t o a e t l c v l c r e c r y s n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e d i s t o r t i o n l e s se n h a n c e m e n tb yp o l a r i z a t i o nt r a n s f e r 1 h d e t e c t e dh e t e r o n u c l e a rm u l t i p l eb o n dc o n n e c t i v i t y 1 h d e t e c t e dh e t e r o n u c l e a rm u l t i p l eq u a n t u m c o h e r e n c e s h i f tc o r r e l a t i o ns p e c t r o s o c o p y n u c l e a ro v e r h a u s e re f f e c ts p e c t r o s c o p y n u c l e a ro v e r h a u s e re f f e c t o n ed i m e n s i o n a ln m r t w od i m e n s i o n a ln m r i n f r a r e d u l t r a v i o l e t - v i s i b l e e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nm a s ss p e c t r a 1 l i g hr e s o l u t i o ne l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nm a s ss p e c t r a l l i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m o t o g r a p h y m e l t i n gp o i n t g a p 2 m i t o s i s h a l fi n l l i b i t o 巧c o n c e n t r a t i o n 3 ( 4 ，5 一d i m e t h y l 一2 - t h i a z o y l ) - 2 ，5 d i p h e n y l - t e t r a z o l i u mb r o m i d e p h o s p h a t e - b u f f e r e ds a l i n e p r o d i u m i o d i d e s u l f o r h o d a m i n eb m e t h a n o l c h l o r o f o r i l l p e t r o l e u m d e m e t h y l s u l f o x i d e e t h y la c e t a t e t h i n l a y e rc h r o m a t o g r a p h y v a c u u ml i q u i dc h r o m a t o g r a p h y r e c r y s t a l l i z e 目录 目录 育钉言j 1 第一章o s m a c 方法在曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用1 一改 变培养条件5 第一节 曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 次级代谢产物多样性的考察6 第二节化合物的结构鉴定1 3 第三节分析与讨论3 7 第四节实验部分4 0 第五节化合物表征4 2 第六节小结4 5 参考文献。4 6 第二章o s m a c 方法在曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用2 一 添加前体4 9 第一节前体的添加对曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 次级代谢产物的影 响4 9 第二节化合物的结构鉴定5 1 第三节实验部分。5 8 第四节化合物表征5 9 第五节结果与讨论6 0 参考文献6 1 第三章单体化合物抗肿瘤活性评价6 3 第一节实验仪器、材料及试剂6 3 第二节细胞毒活性检测方法6 3 第三节单体化合物活性初步评价结果6 6 第四节小结6 9 参考文献7 0 综述：o s m a c 方法及其在微生物代谢产物研究中的应用7 1 1常见的o s m a c 方法 7 l v 1 目录 2o s m a c 与基因组扫描技术结合7 6 3o s m a c 在发现细胞松弛素类化合物中的应用7 8 4 结语8 0 参考文献8 0 结语和创新点j 8 4 个人简历、本论文相关研究成果8 5 致谢8 6 附图8 7 o s m a c 方法在海洋来源真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n ak l a 0 3 研究中的应用 上- 刖 置 微生物能够产生结构新颖、活性多样的次级代谢产物，一直以来都是药物 先导化合物的重要来源。微生物次级代谢产物具有抗菌、抗肿瘤、抗心血管病、 免疫调节、受体拮抗、抗氧化和细胞因子诱导等多种活性，显示出巨大的药物开 发价值。微生物生存于种类各异的生态环境，决定了其次级代谢产物具有化学结 构多样性，结构的多样性赋予其活性的多样性，因此，从微生物中寻找药物先导 化合物是目前创新药物研究最活跃的领域之一。 随着d n a 测序技术的飞快发展和基因组扫描技术( g e n o m em i n i n g ) 技术在 微生物天然产物中的应用，针对许多微生物的基因组测序显示，其具有的潜在生 物合成基因的复杂程度远远超出其在常规培养下所产生的代谢产物种类的多样 性。这些在普通条件下没有表达的基因被称为“沉默基因”【l l ，它们的激活很可能 会产生十分惊人的代谢产物多样性，从中可以发现各种有药理或生物活性的新化 合物的机率将远远高于目前常规培养微生物的方法，很可能给微生物天然先导化 合物的发现带来革命性的影响。所以如何激活这些“沉默基因”，产生结构类型更 加多样的微生物次级代谢产物，挖掘和开发潜在的药用资源，成为研究的热点。 在这种大形势的推动下，z e e k 等人总结自己和前人的研究成果，提出了一株菌 多种次级代谢产物( o n es t r a i nm a n yc o m p o u n d s ，o s m a c ) 的研究策略【2 j ，强调 通过不断改变培养基、培养条件、添加生合成前体以及添加代谢途径中关键酶抑 制剂等干扰因素尽可能发挥菌株产生次级代谢产物的潜力，从而获得更大的天然 产物多样性。目前这种o m s a c 的策略和方法在药物先导化合物的发现中，发挥 了其新鲜的生命力。 细胞松弛素( c y t o c h a l a s i n s ) 是一类结构和生物活性相关的真菌次级代谢产 物，a l d r i d g c ，d c 等人最早于19 6 7 年从h e m i n t h o s p o r i u md e m a t i o i d e u m 的发酵物 中首次分离得到细胞松弛素类化合物c y t o c h a l a s i n sa 和b 1 3 】，以后几年里该小组又 从其它真菌中陆续分到c 、d 、e 和f 1 4 , 5 】。随后科学家们发现这类化合物对于细 胞有许多不寻常的和有趣的作用，当c a r t e r ，s b 1 9 6 7 在n a t u r e 上首次发表文章 e f f e c t so f c y t o c h a l a s i n so nm a m m a l i a nc e l l s ) ) 6 1 阐述该类化合物具有抑制细胞质 的分化，不可逆转的抑制细胞运动以及诱导细胞核分泌到细胞外的生物活性时遂 o s m a c 方法在海洋来源真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 掀起了研究该类化合物生物活性的一个热潮，在随后的十几年里科学家们又陆续 发现c y t o c h a l a s i n s 可以抑制某些过程如吞噬作用1 7 血小板聚集反应以及血块消退 作用【8 】，还可以促进葡萄糖转移，甲状腺分泌和某些生长因子的释放【9 】。该类化 合物最重要的生物活性是能够与肌动蛋白结合从而改变其聚合反应，在功能上类 似于c a p p i n gp r o t e i n s 而产生肌松效果，这也正是该类化合物的得名原因。近年来 的研究还发现细胞松弛素具有细胞毒活性【1 0 , 1 1 1 ，所以寻找细胞松弛素类抗肿瘤药 物先导化合物也是目前抗肿瘤药物研究的重要内容。 本实验室近年来主要从事微生物抗肿瘤活性菌株筛选及其次级代谢产物研 究，初步建立了包括微生物分离纯化、活性筛选、化合物提取分离及结构鉴定的 研究平台，并初步取得了一些可喜的成果。在对细胞松弛素的抗肿瘤活性方面的 研究中，本实验室从真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 中获得了一系列结构 新颖的细胞松弛素c y t o c h a l a s i r l sz t - z 1 5 【1 2 , 1 3 】。其中具有新骨架类型的开环细胞松 弛剂c y t o e h a l a s i nz l o ，显示了对a 5 4 9 肿瘤细胞的选择性抑制活性，并首次发现 具有酪氨酸激酶抑制活性，显示了作为药物先导化合物的优良条件。之前的研究 还发现，菌株k l a 0 3 在两种不同的条件下培养，能通过两种不同的生合成途径 产生不同类型的代谢产物【1 2 , 1 3 , 1 4 ，说明该菌株代谢产物具有多样性的特点。 在上述理论背景下，本论文以获得新型细胞松弛素类似物为主要目的开展了 对菌株k l a 0 3 的活性次级代谢产物研究，利用o s m a c 方法( 包括改变培养基、 培养条件及添加代谢前体等) ，旨在激活潜在的沉默代谢途径获得新型细胞松弛 素类似物，对获得的化合物进行活性评价，最终得到抗肿瘤先导化合物。 本论文采用的方法及技术路线 本论文涉及的研究方法包括： 1 微生物学的相关研究方法和技术。具体包括菌种发酵条件的优化及菌种发酵。 2 天然产物化学的研究方法。具体包括薄层层析、柱层析、h p l c 等分离纯化手 段；有机质谱、紫外、红外、旋光、核磁共振等现代波谱学手段对化合物进 2 o s m a c 方法在海洋来源真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 行结构鉴定。 3 肿瘤细胞生物学的研究方法。本文采用m t t 法，s r b 法等生物学测试方法对 得到的单体化合物进行了初步的抗肿瘤活性评价。 本论文所采用的技术路线如下图所示： 、 s c r e , n i a g u s i n go s m a ca p p r o a c h la d d i t i o no fp r e c u r s o r s ， 气 7 a l t e r i n gc u l t i v a t i o n u p a r a m e t e m ，e t c ) f e a s i b l eo s m a c1 - i m e t h o d 1 图o 1 论文的研究内容、方法和技术路线 f i g 0 - 1r e s e a r c hc o n t e n t s ，m e t h o d sa n dt e c h n o l o g yp a t h w a yo f t h ed i s s e r t a t i o n o s m a c 方法在海洋来源真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 参考文献 1 s c h e r l a c hkh e r t w e c kc ，t r i g g e r i n gc r y p t i cn a t u r a lp r o d u c tb i o s y n t h e s i si nm i c r o o r g a n i s m s o r g b i o m o lc h e m , 2 0 0 9 , 7 ：1 7 5 3 - 1 7 6 0 2 b o d eh b ，b e t h eb ，h o f ske ta 1 b i ge f f e c t sf r o ms m a l lc h a n g e s ：p o s s i b l ew a y st oe x p l o r e n a t u r e ) sc h e m i c a ld i v e r s i t y c h e m b i o c h e m2 0 0 2 ，3 ：6 1 9 - - 6 2 7 3 a l d r i d g ed c ，a r m s t r o n gj j ，s p e a k sr a n ，t u r n e rw b ，t h es l r u c t u r e so fc y t o c h a l a s i n saa n d b 4 a l d r i d g ed c ，t u r n e rw b ，s t r u c t u r e so f c y t o c h a l a s i n sca n dd b d 1 9 6 9 , 9 2 3 9 2 8 5 a l d r i d g ed c ，b u r r o w sf f ，t u r n e rw b ，t h es l n l c t u r e so ft h ef u n dm e t a b o l i t e se y t o c h a l a s i ne a n df c h e m c 锄册研1 9 7 2 ，1 4 8 - 1 4 9 6 c a r t e rs b ，e f f e c t so fc y t o c h a l a s i n so nm a m m a l i a nc e l l s n a t u r e2 1 3 ，2 61 - 2 6 4 7 a l l i s o na c , d a v i e sp d ep e t r i ss ，r o l eo fc o n t r a c t i l em i c r o f i l a m e n t si nm a c r o p h a g em o v e m e n t a n de n d o c y t o s i s n a tn e wb i o l1 9 7 1 ，2 3 2 ( 31 ) ，15 3 - 15 5 8 h a s l a mr j ，i n h i b i t i o no fb l o o dp l a t e l e tf u n c t i o nb yc y t o c h a l a s i n s ：e f f e c t so nt h r o m b o s t h e n i n a n do ng l u c o s em e t a b o l i s m b i o c h e mz 1 9 7 2 ，1 2 7 ( 2 ) ，3 4 9 m c p h e r s o nm a ，s c h o f i e l dj g ，c y t o c h a l a s i nb ，p i t u i t a r ym e t a b o l i s m ，a n dt h er e l e a s eo fo x g r o w t hh o r m o n ei nv i t r o f e b s l e t t 1 9 7 2 ，2 4 ( 1 ) ，4 5 - 4 8 1 0 d a g n ee ，g u n a t i l a k aa a l ，a s m e l l a s hs ，e ta 1 t w on e we y t o t o x i cc y t o c h a l a s i n sf r o m x y l a r i ao b o v a t a t e t r a h e d r o n ，1 9 9 4 ，5 0 , 5 6 15 5 6 15 11 c u ic m ，l ix m ，l ic s ，p r o k s c hp , w a n gb g c y t o g l o b o s i n sa - g ，c y t o c h a l a s a n sf r o ma m a r i n e - d e r i v e de n d o p h y t i cf u n g u s ，c h a e t o m i u m g l o b o s u mq e n - 1 4 j n a t p r o d , 2 0 1 0 1 2 l i u 心g uq q ，z h uw m ，e ta 1 10 - p h e n y l - 【1 2 】- c y t o c h a l a s i n s7 - , 7 ，z sa n dz 9f r o mt h e m a r i n e - d e r i v e df u n g u ss p i c a r i ae l e g a n s j o u r n a lo f n a t u r a l p r o d u c t s ，2 0 0 6 ，6 9 ：8 71 - 8 7 5 1 3 l i url i nz j ，z h ut j ，e ta 1 n o v e lo p e n - c h a i nc y t o c h a l s i n sf r o mt h em a r i n e - d e r i v e df u n g u s s p i c a r i ae l e g a n s j n a t p r o d , 2 0 0 8 , 7 1 ：1 1 2 7 - 1 1 3 2 1 4 l i nz j ，z h ut j ，w e ih j ，e t a 1 s p i c o c h a l a s i naa n dn e wa s p o c h a l a s i n sf r o mt h e m a r i n e - d e r i v e df u n g u ss p i c a r i ae l e g a n s e u rj o r gc h e m ，2 0 0 9 ：3 0 4 5 - 3 0 51 4 o s m a c 方法在海洋来源真菌曲丽穗霉s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用 第一章o s m a c 方法在曲丽穗霉 s p i c a r i ae l e g a n sk l a 0 3 研究中的应用1 一改变培养条件 许多真菌本身基因编码的化合物远远多于它们实际能产生的化合物，真菌能 根据环境的需要而选择性地激活某些基因的转录，而特定的生产某种化合物。因 此，我们实验室环境下单一的培养条件不可能完全发挥某一株菌产生