（物理化学专业论文）新型仿生膜的构筑及传感性能的研究.pdf

一一一一至越山型盟墅鲻盟免媸撼幽鼬噩l 一! 摘要 一、血红蛋白一壳聚糖纳米碳酸钙仿生膜的直接电化学和电催 化 通过基于生物聚合物壳聚糖和无机纳米材料碳酸钙的复合体系固定血红蛋 白，制备了血红蛋白一壳聚糖纳米碳酸钙仿生膜，实现了血红蛋白与玻碳电极间 的直接电子传递过程。将血红蛋白一壳聚糖纳米碳酸钙修饰的玻碳电极置于p h7 0 的p b s 缓冲溶液中，扫描速率为1 5 0 m v s 。时，循环伏安扫描在一o 8 0 2 v 范围 内有一对稳定的、准可逆的血红蛋白辅基血红素f e ( i i i ) f e ( i i ) 电对的氧化还原 峰，峰位置大约在0 3 7 5 v ( v s s c e ) 左右。 固定在壳聚糖纳米碳酸钙复合物中的血红蛋白的直接电化学反应是一个表面 控制的、非理想薄层电子传递过程，并在一个电子传递的同时伴随着一个质子传 递。它的电子传递速率常数大约是1 8 s 1 。血红蛋白壳聚糖纳米碳酸钙修饰的玻 碳电极具有较高的热稳定性，在6 0 c 仍保持良好的电催化特性。固定化血红蛋白 的表观米氏常数k 铲为7 5 1 0 4m ，这说明血红蛋白对过氧化氢具有较高的电催 化活性。红外、紫外等结果说明血红蛋白和生物纳米复合物之间存在弱的相互作 用力，且血红蛋白在仿生膜中保持了它原有的结构。 二、聚丙烯腈固定化血红蛋白的直接电化学行为 将血红蛋白固载在多孔聚丙烯腈膜中，形成了一种新型的仿生膜。在p h7 0 的 p b s 缓冲溶液中，聚丙烯腈一血红蛋白仿生膜的的循环伏安扫描范围内有一对较好 的氧化还原峰，这对峰产生于血红蛋白辅基血红素f e ( m ) f e 0 i ) 对的氧化还原。 血红蛋白中f e ( i i i ) f e ( i i ) 的标准峰电位e o 随p h ( 5 0 - - , 9 o ) 的增加而呈线性下降， !扬州入学硕士学位论文 直线斜率为5 4 m v p h ，这说明电化学反应是电子传递伴随质子转移的过程。在聚 丙烯腈膜中血红蛋白的吸收峰位置跟它原来的位置相似，这说明在仿生膜中血红 蛋白保持了它原有的高级结构。聚丙烯腈固定化血红蛋白具有生物催化功能，可 以实现过氧化氢的电催化；过氧化氢浓度在8 3 1 0 石到5 1 0 4m 范围内，电催 化响应与浓度呈线性关系；当信嗓比为3 时，检测下限为8 3 1 0 击m 。 三、基于原位电化学聚合法制备的仿生膜 采用原位电化学聚合法制备了一种新型的仿生膜。将含有葡萄糖氧化酶的苯 胺原位电化学聚合在聚丙烯腈c o 聚丙烯酸( p a n a a ) 多孔膜修饰的铂电极上， 形成可检测葡萄糖的仿生膜电极。扫描电镜的结果显示了葡萄糖氧化酶被成功地 固定到了聚苯胺聚丙烯腈丙烯酸复合膜中。用这种方法制备的葡萄糖传感器，与 电化学吸附法制备的葡萄糖传感器相比，显示了更好的选择性和操作稳定性。对 膜制作的参数以及外加电位、溶液p h 值、温度对仿生膜性能的影响作了详细的研 究。 二醴盈趔世丛煎碰丝篮鲢噬熊瞧一! a b s t r a c t 1 d i r e c t e l e c t r o c h e m i s t r y a n d e l e c t r o c a t a l y s i s o f h e m o g l o b i n - c h i t o s n a n o c a c 0 3b i o l o g i cf i l m i m m o b i l i z e dh e m o g l o b i n ( h b ) i nah i i g hb i o e o m p a t i b l ec o m p o s i t es y s t e m b a s e do nb i o p o l y m e rc h i t o s a ( c h t ) a n di n o r g a n i cn a n o m a t e r i a lc a c 0 3n a n o p a r t i c l e s ( n a n o c a c 0 3 ) ，h e m o g l o b i n c h i t o s n a n o c a c 0 3b i o l o g i cf i l mi so b t a i n e d ，a n dt h ed i r e c t e l e c t r o nt r a n s f e rb e t w e e nh e m o g l o b i na n dt h eu n d e r l y i n gg l a s s yc a r b o ne l e c t r o d e ( g c e ) c a r lb er e a d i l ya c h i e v e d c y c l i cv o l t a m m e t r yo fh b c h t n a n o - c a c o f l g c es h o w e da p a i ro fs t a b l ea n dq u a s i r e v e r s i b l ep e a k sf o rh bf e ( i i i ) f e ( i i ) r e d o xc o u p l ea ta b o u t o 3 7 5vv e r s u ss a t u r a t e dc a l o m e le l e c t r o d e ( s c di np h7 0b u f f e r , a tt h es c a nr a t eo f 1 5 0m v s t h ee l e c t r o c h e m i c a lr e a c t i o no fh bi m m o b i l i z e di nc h t n a n o c a c 0 3 c o m p o s i t em a t r i xe x h i b i t e da s u r f a c e - c o n t r o l l e da n dn o n i d e a lt h i n - - f i l mp r o c e s sw i t ha l l e l e c t r o nt r a n s f e ra c c o m p a n i e ds i n g l ep r o t o nt r a n s p o r t a t i o n t h ee l e c t r o n t r a n s f e rr a t e c o n s t a n tw a se s t i m a t e dt ob e1 8 s t h i sm o d i f i e de l e c t r o d es h o w e dah i g ht h e r m a l s t a b i l i t yu pt o6 0 。c t h ea p p a r e n tm i c h a e l i s m e n t e nc o n s t a n tw a sc a l c u l a t e dt ob e7 5 10 。4m i n d i c a t i n gah i g hc a t a l y t i ca c t i v i t yo ft h ei m m o b i l i z e dh bt o w a r dh 2 0 2 t h e i n t e r a c t i o nb e t w e e nh ba n dt h i sb i o - l l a n o c o m p o s i t em a t e r i a lw a sa l s oi n v e s t i g a t e d u s i n gf t - i ra n du v - v i ss p e c t r o s c o p y , i n d i c a t i n gt h a th br e m a i n e di t sn a t i v es t r u c t u r e i nt h i sh y b r i dm a t r i x 2 s t u d i e so nd i r e c te l e c t r o nt r a n s f e ra n db i o c a t a l y t i cp r o p e r t i e so f h e m o g l o b i ni np o l y a c r y l o n i t r i l em a t r i x i m m o b i l i z e dh e m o g l o b i n ( 1 a b ) i np o l y a c r y l o n i t r i l e ( p a n ) ，an e wt y p eo f b i o l o g i c f i l mw a sa c h i e v e d t h ep r o t e i n - p a nf i l me x h i b i t e dap a i ro f w e l l d e f i n e da n d q u a s i r e v e r s i b l ec y c l i cv o l t a m m e t r i cp e a k sf o rh bf e ( i l i ) f e ( i i ) r e d o xc o u p l ei nap h 7 0p h o s p h a t eb u f f e r t h ef o r m a lp o t e n t i a lo fh bh e m ef e ( i i i ) f e ( i i ) c o u p l ev a r i e d ! 扬州大学硕十学位论文 l i n e a r l yw i t ht h ei n c r e a s eo fp h i nt h er a n g eo f5 0 - 9 0w i t has l o p eo f5 4m v p h ， w h i c hi m p l i e dt h a ta p r o t o nt r a n s f e ri sa c c o m p a n i e d w i t he a c he l e c t r o nt r a n s f e ri nt h e e l e c t r o c h e m i c a lr e a c t i o n p o s i t i o no fs o r e ta b s o r p t i o nb a n do f l i b p a nf i l ms u g g e s t e d t h a tt h eh bk e p ti t ss e c o n d a r ys t r u c t u r es i m i l a rt oi t sn a t i v es t a t ei nt h ep a nm a t r i x t h e h bi np a nm a t r i xw a sa c ta sab i o l o g i cc a t a l y s tt oc a t a l y z er e d a c t i o no f h y d r o g e n p e r o x i d e t h ee l e c t r o c a t a l y t i cr e s p o n s es h o w e dal i n e a rd e p e n d e n c eo nt h eh z 0 2 c o n c e n t r a t i o nr a n g i n g f r o m8 3 1 0 击t o5 1 0 。m w i t ha d e t e c t i o n l i m i t o f 83 1 0 6 ma t3 3 t h eb i o l o g i cf i l mw a s p r e p a r e db yi ns i t ue l e c t r o p o l y m e r i z a t i o n i ns i t ue l e c t r o p o l y m e r i z a t i o nw a su s e df o ran e wt y p eo fb i o l o g i cf i l md e s i g n t h e b i o l o g i cf i l mw a sp r e p a r e db yi ns i t ue l e c t r o p o l y m e r i z a t i o no f a n i l i n ei n t om i c r o p o r o u s p o l y ( a c r y l o n i t r i l e c o a c r y l i ca c i d l 一c o a t e dp l a t i n u me l e c t r o d ei nt h ep r e s e n c eo fg l u c o s e o x i d a s e t h er e s u l t ss e mi n d i c a t e dt h es u c c e s si m m o b i l i z a t i o nf o re n z y m ei nt h e c o m p o s i t ep o l y m e rf i l m t h en o v e lg l u c o s eb i o s e n s o re x h i b i t e db e t t e rs e l e c t i v i t ya n d o p e r a t i o n a ls t a b i l i t yc o m p a r ew i t hp r e v i o u sg l u c o s eb i o s e n s o ro p t i m i z a t i o no ft h e b i o s e n s o rc o n s t r u c t i o na sw e l la se f f e c t so fa p p l i e dp o t e n t i a l ，p hv a l u eo fs o l u t i o n ， t e m p e r a t u r ei n v e s t i g a t e da n dd i s c u s s e d j 羞亟直型逛脚幽筮2 蝼监醢逝盟l 一! 仿生膜的简介 第一章绪论 随着生命科学的发展进入分子水平，有人预言2 l 世纪将是生命科学的世纪， 将是检验医学的世纪，即从分子水平对疾病进行诊断和治疗“1 “。这就要求临床生 物化学检验准确、快速、简便，标本微量化，方法标准化，且经济实用。而生物传感 器横跨生物、化学、物理、信息等领域，综合了生物技术“6 删、材料技术、纳米技 术和微电子技术等学科知识，广泛应用于医疗、食品、环境及分析等领域，是当今 学科发展的前沿，已引起世界各国的广泛重视o ”“。 生物传感器是类特殊的化学传感器，它是以生物活性单元( 如，酶、抗体、核 酸、细胞等) 作为生物敏感基元，对被测目标物具有高度选择性的检测器。”。它通 过各种物理、化学型信号转换器捕捉目标物与敏感基元之间的反应，然后，将反应 的程度用离散或连续的电信号表达出来，从而得出被测物的浓度。”。自2 0 世纪8 0 年代起，国际上对生物传感器进行了广泛的研究和探索，近些年来，已经研制出一 系列在环境监测、临床检验和生化分析等方面具有实用价值的生物传感器。 在生物传感器的研制过程中，仿生界面膜的构筑是关键步骤。所谓仿生膜是 指：生物体的细胞膜是由高度有序排列的蛋白质和脂质膜组成的，由于蛋白质高 次结构的变化，使得细胞膜具有渗透选择性。在环境刺激下，细胞膜上的受体能 够识别并结合细胞外的分子，将此过程转变为信号，引起细胞内分子构象变化。 细胞膜的这种分子识别与信号传导的特性可作为生物传感器的仿生蓝本，从而制 成仿生膜。生物传感器的敏感膜层中含有某些生物活性分子，能有选择性地识别 目标物质，产生的物理或化学信号通过换能器转变为可测量的信号，所以仿生膜 中生物分子的活性和膜的渗透选择性是生物传感器的重要性能指标。因此，开拓 仿生固定化的新材料、新途径，研究生物分子在仿生界面的固定化、空间取向、 生物活性变化的规律，将对生物传感器、生物芯片、生物催化等领域的发展有着 !扬卅【大学硕十学位论文 重要意义。 生物传感仿生界面的研制过程存在的难点之一就是生物分子在界面膜中既 要达到一定的表面浓度，又要保持良好的生物活性。前者要求载体材料具有高的 吸附性能和对生物分子的结合能力，以达到提高传感器的灵敏度的目的；后者要 求载体材料能通过对生物分子的结合实现活性中心的定向。同时，为加快响应速 度，提高抗干扰能力，生物传感膜还需具有渗透选择性。有时这些目标是相互制 约、顾此失彼的，构成了生物传感器发展和实用化的瓶颈。为解决这一问题，设 计精巧的仿生膜构筑方法、选择优良的生物分子载体材料一直是研究的热点，也 是未来的发展趋势。 仿生载体材料的选择 在仿生载体材料的选择中，纳米材料和聚合物材料最为广泛。纳米材料是近 年来发展起来的一类新型材料。其微区尺寸在纳米级( 1 1 0 0r l m ) 范围内，大于原 子簇而小于通常的微粒，处于原子簇和宏观物体交界的过渡区域。纳米粒子具有极 小的粒径和极大的比表面积，使之产生很大的表面效应、体积效应和宏观量子隧道 效应等，这样就导致其具有一系列不同于普通材料的优异性能，使材料具有多种特 定的功能，具有一定化学结构的材料表现出更多的功能性。利用碳酸钙纳米颗粒的 比表面积大、表面反应活性高、表面活性中心多、催化效率高、生物兼容性好、 吸附能力强等特性，把纳米碳酸钙引人到我们的研究中是我们的创新之一。纳米结 构材料和纳米复合材料用于生物传感界面的构筑主要由于其具有特殊的结构层 次、很强的吸附能力、良好的生物相容性“。采用纳米材料构筑的仿生膜提高了 生物传感器的灵敏度、稳定性，加快了生物分子与换能器之间的信号传递，将纳 米仿生膜固定在电极上，可实现生物分子与电极之间的直接电子传递1 “。 导电聚合物可用于增强医疗诊断上生物传感器测量的速率、灵敏度和多功能 化，因此找到了导电聚合物在医学诊断试剂上的更大用途“”。自从s h i n a k a w a 等 王差霞；堑型鱼生堪盥均筮丛佳盛：睦髭的虹究7 人于二十世纪7 0 年代末采用导电聚合方法合成导电聚乙炔以来，由于其具有特殊 的结构和优异的物理化学性能，使得导电聚合物的研究和应用取得了许多进展。 聚合物一生物分子仿生膜的构筑主要通过将生物活性分子包埋、吸附、掺杂在 聚合物链中而得到啪4 “。由于聚合物材料具有优良的成膜性能和粘附能力，使得其 在生物电化学传感界面的构筑中更加显示出了优势”“。近年来，已应用于固定生 物分子制备生物传感器的导电聚合物主要有聚乙炔、聚噻吩、聚吲哚和聚苯胺等 “- s a 。此外还有文献详细阐述了基于绝缘电聚合膜如多酚，聚问苯二胺，过氧化 态聚吡咯的生物传感器“。r a m a n a t h a n 已将葡萄糖氧化酶固定于不同导电聚合 物载体上，例如聚吡咯、聚苯胺、聚氨基苯酸，并详细研究了它们的响应特性和 寿命。r a m a n a t h a n 等人还研究了聚吡咯固定葡萄糖氧化酶后绝缘参数的变化”“。 在各种导电聚合物中，聚吡咯和它的衍生物显示可主导作用，这是由于它们灵活 多变的应用性和与毗咯基团联接基团种类的多变性”3 。最近还报道了很多将不同 酶固定于聚苯胺膜的文章“4 。 生物分子血红蛋白简介 蛋白质的直接电化学研究一直是大家关注的热门话题，它可以在无介体的情况 下研究生命物质的电子转移过程，并为构筑第三代生物传感器提供了理论依据。 对氧化还原蛋白质和酶的直接电子转移反应的研究不仅可以获得蛋白质和酶的热 力学和动力学性质等方面的重要信息，而且还可以促进电极物质与具有高效、专一 催化活性和生物传感特性的生物大分子间的结合：对于了解生命体系的能量转换 和物质代谢、了解生物大分子的结构和各种物理化学性质的关系、探索蛋白质和 酶等生物大分子在生命体内的生理作用及机制具有重要的理论意义：对于开发新 型的生物电化学传器及酶催化剂在生物燃料电池等方面的应用具有十分重要的指 导意义 蛋白质的准可逆直接电化学出现于1 9 7 7 年，y e h 等。”得到了细胞色素c 在二 氧化锡的氧化铟电极上良好的循环伏安响应，同时e d d o w e s 等”1 将4 ，4 一联吡啶加 ! 扬州大学硕十学位论文 入细胞色素c 的溶液中，在金电极上得到了很大的进展。r u s i n g 等”“广泛地利用 类脂膜的催化作用研究肌红蛋白的电子转移过程，还有人利用纳米粒子的催化作 用对辣根过氧化物酶”“、铁蛋白”了研究。本文主要采用的生物分子是血红蛋白。 血红蛋白( 分子量为6 4 ，5 0 0 ) 是一种亚铁血红素蛋白质，是生物体内一种重要的 蛋白质，包括两个n 链、两个p 链，是变构象蛋白质的典型”4 。我们对血红蛋白的 结构已有较清楚的认识o ，因而常选作探讨生物大分子的电化学行为的模型分 子血红蛋白( h b ) 在生命活动和生物代谢过程中起着重要的作用，其主要功能是 运输晚尽管血红蛋白不参与生物体系的电子传递，但它具有过氧化物酶和细胞 色素p 4 5 0 的活性”“”1 此外，还能与n o 结合，起着平衡血液和骨骼肌中n o 浓度 的作用”“所有这些生理过程都涉及到一系列氧化还原反应用电化学方法研究 这种血红素蛋白质，可进一步阐明其生理功能：利用其选择识别某些生物子的特点， 制备生物电化学传感器 但是血红蛋白分子不同于其他亚铁血红素分子，在大多数情况下血红蛋白分 子比较难显示出异类的电子传递过程，这也就是说它的直接电子传递过程很慢“”。 这是由于血红蛋白分子具有一种可以延伸的三维立体结构，且电活性中心不易接 近，要想电极和血红蛋白分子之间直接电子传递过程变得更容易一些便具有一定 的挑战性。因此，为了改进血红蛋白分子的直接电子传递机制，我们作了很多的 努力。例如，我们利用一些不可溶的表面活性剂”、生物聚合物”、水凝胶聚合 物“1 及纳米材料”“1 等来加快它的电子传递过程。我们采用了生物聚合物和纳米 材料作为血红蛋白的载体材料。这样不但找到了理想的仿生载体材料，也获得了 较好的生物分子一血红蛋白。 本论文主要研究内容及创新之处 ( 1 ) 纳米粒子的特殊结构使它具有许多特殊性质，本文展开了用纳米颗粒固定 血红蛋白以开辟制备直接电子传递第三代生物传感器的新途径。我们第一次利用 纳米碳酸钙颗粒的比表面积大、表面反应活性高、表面活性中心多、催化效率高、 王羞藿；莸型笾生噬的掏菹盈佳感性篚的班究9 吸附能力强、生物兼容性强等特性，克服了血红蛋白分子的结构庞大，电活性中心 被包埋，且在常规电极上强烈吸附和变性，使其在普通电极上难以得到好的电化 学响应等缺点，实现了血红蛋白在电极上的直接电子传递过程。并引入壳聚糖到 碳酸钙中形成混合膜，增加了血红蛋白在电极上的稳定性。 ( 2 ) 大多数情况下血红蛋白分子比较难显示出异类的电子传递过程，这也就是 说它的直接电子传递过程很慢。为了改进血红蛋白分子的直接电子传递机制，我 们作了一些尝试，我们利用不可溶的生物聚合物聚丙烯腈( p a n ) 作为固载材料， 从而加快了它电子传递过程。同时证明了在电化学反应过程中电子传递时还伴随 一个质子转移，聚丙烯腈血红蛋白仿生膜对过氧化氢具有较好的亲合力。 ( 3 ) 为了改善酶电极的性能，将羧基( c o o h ) 嵌入丙烯腈上形成聚丙烯腈 亲水性更强的共聚物( 聚丙烯腈丙烯酸) ，并得到了共聚物多孔膜。采用原位电化 学聚合的方法将葡萄糖氧化酶掺杂到共聚物膜修饰的电极上制成酶电极，并与采 用恒电位聚合法相比较，得出两种方法的优劣。经过测定传感器灵敏度，操作稳 定性和寿命等因素后得知：原位电化学聚合法结合了多孑l 聚合物材料和电化学聚 合法制备生物传感器的优点，所得的传感器比恒电位吸附法制得的传感器更好( 响 应灵敏度高、操作稳定性好、寿命长、抗干扰性好等) 。 参考文献： f 1 p r o g r e s so ns t u d yo f n a n o p a r t i c l e ss t r e n g t h e n e n z y m eb i o s e n s o r sf u n c t i o n w ul i nc a os h u c h a oy id e l i a nq i nx i a o r o n g o u y a n g z h a o h u i ( app l i e dc h e m i s tr yr e s e a r c hin s t i t u t e ，w u h a nu n i v e r s i tyo fs c i e n c ea n d t e c h n o l o g y ，h u b e i w u h a n4 3 0 0 8 1 ) 2 】f a nch ，z h u a n gy ，l igx ，e ta 1 d i r e c te l e c t r o c h e m i s t r ya n de n h a n c e dc a t a l y t i c a c t i v i t yf o rh e m o g l o b i ni nas o d i u mm o n t m o r i l l o n i t ef i l m j 】 e l e c t r o a n a l y s i s ，( 2 0 0 0 ) 3 3 ( 1 4 ) ：11 5 6 f 3 】f a nch ，p a n gjt ，s h e npp ，e ta 1 n i t r i co x i d eb i o s e n s o r sb a s e d0 1 1 h b p h o s p h a t i d y l c h o l i n ef i l m s j 】a n a 2 1 y t i c a ls c i e n c e ，( 2 0 0 2 ) 1 8 ：1 2 9 4 】f a nch ，c h e nxc ，l igx ，e ta 1 d i r e c te l e c t r o c h e m i c a lc h a r a c t e r i z a t i o no f t h e 旦扬州人学硕七学位论文 i n t e r a c t i o nb e t w e e nh a e m o g l o b i na n dn i t r i co x i d e j 】p c c p ，( 2 0 0 0 ) 2 ：44 0 9 【5 】f a nch ，l igx ，z h ujq ，e ta 1 ar e a g e n t l e s sn i t r i co x i d eb i o s e n s o rb a s e do n h e m o g l o b i n d n af i l m s 【j 】a n a l y t i c ac h i m i c aa c t a ，( 2 0 0 0 ) 4 2 3 ：9 5 6 】f a nch ，w a g n e rg ，l ig x e f f e c to fd i m e t h y ls u l f o x i d eo nt h ee l e c t r o nt r a n s f e r r e a c t i v i t yo f h e m o g l o b i n j 】36l 第2 期逢键涛等：电化学方法在生命科学研 究中的应用b i o e l e c t r o c h e m i s t r y ，( 2 0 0 1 ) 5 4 ：4 9 7 】f a nch ，l igx ，g uqr ，e ta 1 e l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o no fc e c r o p i nc m 4g e n e b ys i n g l es t r a n d e dp r o b ea n dc y s t e i n em o d i f i e dg o l de l e c t r o d e j 】a n a l l e t t ，( 2 0 0 0 ) 3 3 ( 8 ) ：14 7 9 【8 】f a nch ，h uxf ，l igx ，e ta 1 a d s o r p t i v eb e h a v i o ro f h e m o g l o b i na tap l a t i n u m e l e c t r o d ea n di t sa p p l i c a t i o nt ot h ed e t e r m i n a t i o no f p r o t e i n s j 】a n a l s c i ，( 2 0 0 0 ) 1 6 ：4 6 3 9 】f a nch ，s o n ghy ，h uxf ，e ta 1 v o l t a m m e t r i cr e s p o n s ea n dd e t e r m i n a t i o no f d n aa tas i l v e re l e c t r o d e j 】a n a l b i o c h e m ，( 19 9 9 ) 2 7 1 ：1 【1 0 】f a nch ，s u z u k il ，c h e r tq ，e ta 1 a nu n m e d i a t e dh y d r o g e np e r o x i d es e n s o rb a s e d o nah e m o g l o b i n s d sf i l m m o d i f i e de l e c t r o d e j 】a n a l l e t t ( 2 0 0 0 ) 3 3 ( 13 ) ：2 6 3 1 1 1 】f a nch ，w a n ghy ，z h udx ，e ta 1 i n c o r p o r a t i o no f h o r s e r a d i s hp e r o x i d a s ei na k i e s e l g u h rm e m b r a n ea n d t h ea p p l i c a t i o nt oam e d i a t o r f l e eh y d r o g e np e r o x i d e s e n s o r j 】a n a l s c i ，( 2 0 0 1 ) 1 7 ：2 7 3 1 2 】w a n ghy ，g u a nr ，f a nch ，e ta 1 ah y d r o g e np e r o x i d eb i o s e n s o rb a s e do nt h e b i o e l e c t r o c a t a l y s i so f h e m o g l o b i ni n c o r p o r a t e di nak i e s e l g u b rf i l m j 】，s e n s o r s a n da c t u a t o r s ，( 2 0 0 2 ) 8 4 ：2 0 4 【1 3 】f a nch ，g a oqx ，z h udx ，e ta 1 a nu n m e d i a t e dh y d r o g e np e r o x i d eb i o s e n s o r b a s e d0 nh e m o g l o b i ni n c o r 2 p o r a t e di nam o n t m o r i l l o n i t em e m b r a n e j 】t h e a n a l y s t ，( 2 0 0 1 ) 1 2 6 ：10 8 6 1 4 】l igx ，c h e nl ，z h ujq ，e ta 1 h i s t i d i n em o d i f i e de l e c t r o d ea n di t sa p p l i c a t i o nt o t h ee l e c t r o c h e m i c a ls t u d i e s o f h e m e p r o t e i n s j 】e l e c t r o a n a l y s i s ，( 1 9 9 9 ) 1 1 ( 2 ) ：1 3 9 1 5 】f a nch ，l igx ，z h udx ，e ta 1 r e d o xr e a c t i o n so f c y t o c h r o m ecf a c i l i a t e db y 王萱霞i 堑型笾生堪盥控魏缝佳感：眭篚的班宜 1 1 i m i d a z o l e s i l v e rc o m p l e x j 】c h i n e s ej c h e m ，( 2 0 0 0 ) 1 8 ( 1 ) ：11 5 【1 6 】l i u ，j i n g ；b j o i t i s s o n ，l o v i s a ；m a t t i a s s o n ，b o i m m o b i l i z e da c t i v a t e ds l u d g eb a s e d b i o s e n s o rf o rb i o c h e m i c a lo x y g e nd e m a n dm e a s u r e m e n t b i o s e n s o r sa n d b i o e l e c t r o n i c s1 4 ( 2 0 0 0 ) 8 8 3 8 9 3 1 7 1m o t o o ，k o h e i ；a r a i ，f u m i h i t o ；f u k u d a , t o s h i o ；k a t s u r a g i ，t o h o r u ；i t o i g a w a , k i c h i h i g hs e n s i t i v et o u c hs e n s o rw i t hp i e z o e l e c t r i ct h i nf i l mf o rp i p e t t i n gw o r k su n d e r m i c r o s c o p e s e n s o r & a c t u a t o r sa ：p h y s i c a l1 2 6 ( 2 0 0 6 ) 1 - 6 【18 】d e l a c yc o s t e l l o ，b p j ；e w e n ，r j ；r a t c l i f f e ，n m ；s i v a n d a n d ，p s t h i c kf i l m o r g a n i cv a p o u r s e n s o r sb a s e do nb i n a r ym i x t u r e so f m e t a lo x i d e s s e n s o r s & a c t u a t o rb ：c h e m i c a l9 2 ( 2 0 0 3 ) 1 5 9 - 1 6 6 【l9 w i l “n s i m m o b i l i z e de n z y m e sf o ru s ei na l le l e c t r o c h e m i c a ls e n s o r e n z y m ea n d m i c r o b i a lt e c h n o l o g y1 9 ( 1 9 9 6 ) 6 2 8 【2 0 】b r o g a n ，k a t h r y nl ；w a l t ，d a v i dr o p t i c a lf i b e r - b a s e ds e n s o r s ：a p p l i c a t i o nt o c h e m i c a lb i o l o g y c u r r e n to p i n i o ni nc h e m i c a lb i o l o g y9 ( 2 0 0 5 ) 4 9 4 5 0 0 【2 1 】h e i m ，s ；s c h n i e d e r ，i ；b i n z ，d ；v o g e l ，a ；b i l i t e w s k i ，u d e v e l o p m e n to f a n a u t o m a t e dm i c r o b i a ls e n s o rs y s t e m b i o s e n s o r sa n db i o e l e c t r o n i c s1 4 ( 1 9 9 9 ) 1 8 7 1 9 3 【2 2 】t o l e d a n o ，m i c h e lb ；d e l a u n a y ，a g n e s ；m o n c e a u ，l u d i v i n e ；t a c n e t ， f r e d e r i q u e m i c r o b i a lh 2 0 2s e n s o r sa sa r c h e t y p i c a lr e d o xs i g n a l i n gm o d u l e s t r e n d si nb i o c h e m i c a ls c i e n c e s2 9 ( 2 0 0 4 ) 3 5 1 3 5 7 2 3 】m u l c h a n d a n i ，p r i t i ；l e i ，y u ；c h e r t , w i l f r e d ；w a n g ，j o s e p h ；m u l c h a n d a n i ，a s h o k m i c r o b i a lb i o s e n s o rf o rp - n i t r o p h e n o lu s i n gm o r a x e l l as p a n a l y t i c ac h i m i c aa c t a 4 7 0 ( 2 0 0 2 ) 7 9 8 6 2 4 】n a g a m i n e ，k u n i a k i ；k a y a , t a k a t o s h i ；y a s u k a w a , t o m o y u k i ；s h i k u ，h i t o s h i ； m a s u e ，t o m o k a z u a p p l i c a t i o no f m i c r o b i a lc h i pf o ra m p e r o m e t r i cd e t e c t i o no f m e t a b o l i ca l t e r a t i o ni nb a c t e r i a s e n s o r s & a c t u a t o r sb ：c h e m i c a l1 0 8 ( 2 0 0 5 ) 6 7 6 6 8 2 2 5 】w a n g ，j o s e p h e l e c t r o c h e m i c a lb i o s e n s o r s ：t o w a r d sp o i n t o f - c a r ec a n c e r d i a g n o s t i c s b i o s e n s o r sa n db i o e l e c t r o n i c s2 1 陀0 0 6 ) 1 8 8 7 1 8 9 2 【2 6 】w a n g ，j o s e p h d n ab i o s e n s o r sb a s e do np e p t i d en u c l e i ca e i d ( p n a ) r e c o g n i t i o n l a y e r s ar e v i e w b i o s e n s o r sa n db i o e l e c t r o n i c s1 3 ( 1 9 9 8 ) 7 5 7 7 6 2 里扬州人学硕十学能论文 2 7 】c o n n o l l y ，p a t r i c i a c l i n i c a ld i a g n o s t i c so p p o r t u n i t i e sf o rb i o s e n s o r sa n d b i o e l e c t r o n i c s b i o s e n s o r sa n db i o e l e c t r o n i c s1 0 ( 1 9 9 5 1l 一6 【2 8 】l u o n g ，j o h nh t ；b o u v r e t t e ，p i e r r e ；m a l e ，k e i t hb d e v e l o p m e n ta n d a p p l i c a t i o n so f b i o s e n s o r si nf o o da n a