（动物学专业论文）厚凳鲂卵巢发育与卵子发生的形态和化学组分变化研究.pdf

摹 悸 q m a s t e rd i s s er ，i a t i o n s t u d i e so nt h ec h a n g e so fm o r p h o l o g ya n dc h e m i c a l c o m p o n e n t s w i t ho v a r yd e v e l o p m e n ta n do o g e n e s i s i nm e g a l o b r a m a p e l l e g r i n i c a n d i d a t e ：d u c h a n g i e i s u p e r v i s e r ：p r o f z h a n gy a o g u a n g s u r p o r t e db yt h en o n p r o f i ts p e c i a lr e s e a r c hf r o mm i n i s t r y o f a g r i c u l t u r e ( 2 0 0 9 0 3 0 4 8 0 8 ) r e s o u r c ee n h a n c e m e n ta n dr e l e a s i n go fm e g a l o b r a m a p e l l e g r i n ia n dp r o c y p r i sr a b a u d ia n ds t u d y o ne c o l o g i c a l r e s t o r a t i o ni nt h ex i a or i v e r s c h o o lo fl i f es c i e n c e ，s o u t h w e s tu n i v e r s i t y 一、 c h o n g q i n g c h i n a m a y ，2 0 1 1 独创性声明 学位论文题目：厘鱼鲑鲤篡发直生理王发生鲍壁奎盘丝堂组佥变丝 狃究 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究- f _ 作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学雠文能年钐需签字吼沙，年6 月舢 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口 保密期限至年月止) 。 学位敝储张和需 签字日期：劢年6 月矽日 目录 中英文缩略词一1 - 摘要i a b s t r a c t i i i l 前言1 1 1 鱼类卵巢发育与卵细胞形成的研究1 1 1 1 卵巢的形态和结构1 1 1 2 卵巢发育的分期1 1 1 3 卵母细胞发育时相的划分2 1 1 4 滤泡细胞和卵膜3 1 1 5 卵黄的发生和积累4 1 1 6 卵黄物质的类型5 1 2 卵巢的化学组分研究6 1 3 厚颌鲂的研究概况一8 1 4 本研究的目的和意义。8 2 材料与方法9 2 1 实验材料9 2 2 实验方法。9 2 2 1 大体解剖9 2 2 2 组织学及组织化学研究9 2 2 3 超微结构研究9 2 2 4 化学组分的测定9 2 3 实验药品及仪器设备9 3 结果1 1 3 1 卵巢发育的分期l l 3 1 1 卵巢发育的外观形态1 1 3 1 2 卵巢各发育时期的主要特征1 1 3 2 卵子发生的组织学观察1 2 3 2 1 卵原细胞时相1 2 3 2 2 单层滤泡细胞时相1 2 3 2 3 卵黄泡出现时相1 3 3 2 4 卵黄充满时相1 4 3 2 5 卵母细胞成熟时相1 4 3 2 6 卵母细胞退化吸收时相。：1 5 b l c a c s e r f c i t c l g l m m m c m t m t c n n l b n m n u n v o e o g o t c o w s p t c t e m v y g y n y p y v z r z 1 z 2 z 3 中英文缩略词 b a s i c a ll a y e r c o r t i c a la l v e o l i c h r o m o s o m e e n d o p l a s m i cr e t i c u l u m f o l l i c l ee e l l i n n e rt h e c a le e l l l o o po fg r o w t h l o o po fm e m b r a n o u s m i c r o v i l l i m i c r o v i l l a rc h a n n a l m i t o c h o n d r i a m m i t o c h o n d r i ac l o u d n u c l e a r n u c l e o l u sl i k eb o d y n u c l e a rm e m b r a n e n u c l e o l u s n u c l e a rv a c u o l e o o c y t e o o g o n i u m o u t e rt h e c a lc e l l o v a r yw a l l s p a w n i n gp l a t e t h e c a lc e l l t r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p e v e s i c l e y o l kg r a n u l e y o l kn u c l e u s y o l kp l a t e y o l kv e s i c l e z o n er a d i a t a z o n er a d i a t al z o n er a d i a t a2 z o n er a d i a t a3 基层 皮层泡 染色体 内质网 滤泡细胞 内层鞘膜细胞 生长环 膜状环 微绒毛 微绒毛孔道 线粒体 线粒体云 细胞核 核仁样体 核膜 核仁 核仁空泡 卵母细胞 卵原细胞 外层鞘膜细胞 卵巢壁 产卵板 鞘膜细胞 透射电镜 囊泡 卵黄颗粒 卵黄核 卵黄小板 卵黄泡 放射带 放射带l 放射带2 放射带3 摘要 厚颌鲂卵巢发育与卵子发生的形态和 化学组分变化研究 动物学专业硕士研究生：杜长雷 指导教师：张耀光教授 摘要 2 0 0 9 年1 1 月2 0 1 0 年9 月，从长江一级支流龙溪河泸州石洞至特兴段共收集厚颌 鲂雌鱼1 9 7 尾，用于其卵巢发育及卵子发生的相关研究。 运用组织学方法观察了厚颌鲂卵巢发育及卵子发生的形态和结构变化，运用 透射电镜观察了其卵子发生过程中的超微结构变化，运用p a s 、s b b 等组织化学 染色方法观察了糖类、脂类及蛋白质在卵母细胞发育中的形态和分布变化，通过 凯氏定氮法、索氏提取法等方法测定了蛋白质、脂类等化学组分在卵巢不同发育 时期的含量变化。结果表明： 根据卵巢外部形状大小及色泽等的不同，可将厚颌鲂卵巢发育过程分为6 个 时期：i 期卵巢呈透明状，从外表上无法辨别雌雄，组织切片可明显区分雌雄； l i 期卵巢扁带状，呈肉红色，可见有微血管分布；i i i 期卵巢扁囊状，呈浅黄色， 可见卵母细胞的粒状雏形；期卵巢圆囊状，黄色加深，可见明显卵粒，表面血 管众多；v 期卵巢囊袋状，轻压鱼腹可挤出油黄色卵粒；期卵巢即产卵后的卵 巢，卵巢空囊状，卵巢表面充血明显，内部仅余少量正在退化的成熟卵子及卵母 细胞。 根据卵母细胞的形态结构、卵黄物质的积累和滤泡细胞的变化，将卵子发生 划分为6 个时相：卵原细胞时相，主要存在于i 期卵巢内，由成团分布的卵原细 胞组成。单层滤泡细胞时相，主要存在于i i 期卵巢内，此阶段开始形成产卵板， 滤泡细胞开始出现且数目逐渐增多至呈单层分布；卵母细胞胞质内出现卵黄核； 胞核内核仁数目增多、核仁出现空泡状结构。卵黄泡出现时相，主要存在于i 期 卵巢内，此阶段滤泡细胞逐渐分化为两层；卵母细胞胞质内出现卵黄泡和生长环， 卵黄泡数目逐渐增多并开始积累卵黄物质；卵膜分化出放射带和微绒毛。卵黄充 满时相，主要存在于期卵巢内，为卵黄物质积累的主要阶段，滤泡膜三层，放 a b s t r a c t s t u d i e so nt h ec h a n g e so f m o r p h o l o g ya n dc h e m i c a l c o m p o n e n t sw i t ho v a r yd e v e l o p m e n ta n do o g e n e s i s i nm e g a l o b r a m a p e l l e g r i n i m a j o r - z o o l o g y g r a du a t e ：d uc h a n g l e i s u p e r v i s e r ：p r o f z h a n gy a o - g u a n g a b s t r a c t f r o mn o v 2 0 0 9t os e p 2 0 1 0 ，1 9 7f e m a l es p e c i m e n so fm e g a l o b r a m ap e l l e g r i n iw e r e c o l l e c t e df o rs t u d i e so fo v a r yd e v e l o p m e n ta n do o g e n e s i sf r o ml 0 n g x ir i v e r ( s h i d o n ga n dt e x i i l g r e a c hi nl u z h o u ) ，w h i c hi sam a i nb r a n c ho f y a n g t z er i v e r t h eh i s t o l o g ya n dt r a n s m i s s i o ne l e c t r o n m i c r o s c o pw e r eu s e df o r o b s e r v a t i o no ft h e m o r p h o l o g i c a la n ds t r u c t u r ec h a n g e sw i t ho v a r yd e v e l o p m e n ta n do o g e n e s i s p a s ，s b ba n do t h e r h i s t o e h e m i s t r ym e t h o d sw e r eu s e df o ro b s e r v a t i o no ft h em o r p h o l o g ya n dd i s t r i b u t i o no fg l u c i d ，f a t a n dp r o t e i ni no o g e n e s i s p r o t e i n , f a ta n do t h e rc h e m i c a lc o m p o n e n t so fo v a r yi nd i f f e r e n ts t a g e s w e r em e a s u r e db yk j e l d a h lm e t h o d , s a x h l e te x t r a c t i o na n do t h e rm e t h o d s t h er e s u l t sw e r ea s f o l l o w s ： b a s e do ns i z e ，s h a p ea n de x t e r n a lc o l o r , t h ed e v e l o p m e n to fo v a r yi nm e g a l o b r a m a p e l l e g r i n i w a sd i v i d e di n t os i xs t a g e s o v a r yi ns t a g eiw a st r a n s p a r e n t , w ec o u l dd i s t i n g u i s hm a l ea n df e m a l e o n l yb yh i s t o t o m ya n ds t a i n i n g i ns t a g ei i ，t h eo v a r yw a sf r e s hr e d ，t i m - r i b b o na n ds o m e c a p i l l a r i e sc a nb es e e n a sf o rt h es t a g ei l l ，i tw a sf l a t - c y s t i f o r ma n dp a l ey e l l o w , g r a n u l o u so o e y t e s g l e a m e di no v a r y a sf o rt h es t a g ei v ，i tw a sr o u n d - c y s t i c f o r ma n dd e e py e l l o w , g r a n u l o u so o e y t e s a n dn u m e r o u sb l o o dv e s s e l sc a l lb es e e no b v i o u s l y i nt h es t a g ev ，i tw a sb a g g y - c y s t i c f o r ma n d e g g sw o u l db ef o w i n go u tw h e nt h ea b d o m e nw a sp r e s s e d o v a r yo fs t a g e v l w a ss t a g ea f t e r o v i p o s i t i o n ，i tw a se m p t y - c y s t i c f o r ma n dc o n g e s t i v e ，o n l yf e wo o c y t e si nd e g r a d a t i o nc o u l db es e e n i no v a r y a c c o r d i n gt oc h a n g e so fi n n e rs t r u c t u r e s ，y o l ka c c u m u l a t i n ga n dd e v e l o p m e n to ff o l l i c l ec e l l s ， t h eo o g e n e s i so fm e g a l o b r a m ap e l l e g r i n ic o u l db ed i v i d e di n t os i xp h a s e s t h ef i r s tp h a s ew a sp h a s e o fo o g o n i u m ，o o g o n i u m sw e r ec l u s t e r i n gd i s t r i b u t i o na n dm a i n l yc o n s i s t e di no v a r yo fs t a g ei s e c o n d w a sp h a s eo fo o c y t e sw i t hs i n g l e - l a y e rf o l l i c l ec e l l s ，w h i c hm a i n l yc o n s i s t e di ns t a g ei i o v a r yw a l lf o r m e da n dg r e wu pi nt h i sp h a s e ，f o l l i c l ec e l lf o r m e da n dg r e wu pf r o ms p o r a d i ct o s i n g l e - l a y e r y o l kn u c l e u sa p p e a r e di nt h ec y t o p l a s m , t h en u m b e ro fn u c l e o l u si n c r e a s e da n d n u c l e o l u sv a c u o l e sw e r ef o r m e di nt h i sp h a s e t h i r d , w a sp h a s eo fo o c y t ew i t hy o l kv e s i c l e s ，w h i c h m a i n l yc o n s i s t e di ns t a g ei i y o l kv e s i c l ea p p e a r e da n dg r e wu pf r o mo u t e ro fc y t o p l a s mt oi n n e r , l o o po fg r o w t ha p p e a r e di nt h ec y t o p l a s ma n dy o l kv e s i c l e sb e g a nt oa c c u m u l a t ey o l k f o l l i c l ec e l l s d i f f e r e n t i a t e di n t od o u b l e 1 a y e rc e l l sa n do o l e m m ad i f f e r e n t i a t e dz o n ar a d i a t aa n dm i c m v i l l ii nt h i s i l l 前言 量量量量邑吕蔓量舅舅曼皇量舅皇舅i im r _ 皇皇鲁量曼皇量量量量鼍置鼍曼量喜曼皇曼皇曼曼曼曼曼曼曼曼曼量量曼量曼鲁曼曼量皇暑量曼皇曼鼍曼曼量曼 1 刖菁 鱼类从摄食获得的物质和能量，除维持耗能外，主要用于躯体和性腺的生长。 鱼类性腺发育就是把摄食所获得的物质和能量分配给性腺的过程。有关鱼类生殖 细胞发育的研究最早始于w m s 对鲑鱼( c y m a t o g a s t e ra g g r e g a t u s ) 卵巢的观察。自 m e 讧e h 提出卵巢发育的分期后，国内外学者先后对多种鱼类卵巢及其卵母细胞的 结构、发生发育及周年变化进行了深入广泛的研究【l 2 0 】，取得了丰硕的成果。 1 1 鱼类卵巢发育与卵细胞形成的研究 1 1 1 卵巢的形态和结构 硬骨鱼类的卵巢在发生上是由生殖嵴卷曲相愈合而形成，或是由生殖嵴向一 侧卷曲与体壁相愈合而形成【2 1 1 。大多数鱼类卵巢成对，呈空心囊状，位于体腔的 腹中线，紧贴于肾脏腹面两侧，在身体的后端相遇，相遇后的卵巢壁延伸形成输 卵管进入泄殖窦，由泄殖孔开口于体外。 鱼类卵巢一般由卵巢壁、卵细胞及卵巢腔构成，其中卵巢壁从外向内分为体 腔膜、白膜和生殖上皮三层。体腔膜一般较薄，白膜向卵巢内部伸进许多由结缔 组织纤维、毛细血管和生殖上皮组成的板状结构，即产卵板 2 2 1 。大多数硬骨鱼类 的卵巢有卵巢腔和输卵管，成熟的卵子先突破滤泡膜进入卵巢腔，然后经输卵管 从泄殖孔排出体外；有些鱼类如鲑科鱼类，既无卵巢腔也无输卵管，成熟的卵子 直接进入体腔，然后经泄殖孔排出体外。 1 1 2 卵巢发育的分期 卵巢形态和颜色随着卵巢的发育而改变，变化趋势为：细线状狭带状扁 带状圆囊状，最后几乎充满整个体腔；颜色由白色或乳白色微黄色或黄色， 颜色变化主要是由于卵黄物质积累所致【2 3 1 。因种类不同，鱼类性腺发育的速度和 过程也不同。为了研究鱼类性腺发育的变化规律，学者们根据发育特点将卵巢的 发育进行了分期。 关于硬骨鱼类卵巢发育的分期，目前尚没有统一的标准，前苏联学者m e f i e h 最早提出按照卵巢内各时相卵母细胞的数量比例来确定卵巢所处的发育时期，将 卵巢发育过程分为6 个时期【2 】；施琼芳等提出按照卵巢内各发育时相卵母细胞所占 的体积来划分的观点【l 】，弥补了m e f i e h 观点的不足；周定刚在研究黄鳝( m o n o p t e r u s a l b u s ) 卵巢发育时提出应以卵母细胞的不同阶段来确定不完全同步和非同步发育 型卵巢发育的分期【2 0 j ；u p a d h y a y a 等把条纹鲮( m y s t u sv i t t a t u s ) 卵巢的发育分成静 止期、卵黄积累前期、卵黄积累期和成熟期4 个时期【2 5 1 ；n a w a d i a r o 等将丝条金鳝 前言 累为标准，将硬骨鱼类卵子的发生过程与卵巢发育的6 个时期相对应 3 9 - 4 1 1 ；7 个时 相的划分以卵黄的形成变化及核仁的变化、核的迁移过程为依据划分为：核仁外 周期( p e r i n u c l e o c l a rs t a g e ) ，脂滴期( 1 i p i ds t a g e ) ，卵黄发生早期( e a r l yv i t e l l o g e n e s i s s t a g e ) ，卵黄发生晚期( 1 a t ev i t e l l o g e n e s i ss t a g e ) ，核迁移期( m i g r a t o r yn u c l e u ss t a g e ) ， 水合前期( p e r - h ) r d r a t e ds t a g e ) ，水合期( h y d r a t e ds t a g e ) 4 2 1 ；8 个时相的划分除关注核 仁变化、核的迁移及卵黄的形成外，还结合了脂滴、皮层小泡的变化：染色质核 仁期( c h r o m a t i nn u e l e o l u ss t a g e ) ，核仁外周期( p e r i n u e l e o l u ss t a g e ) ，脂滴期( o i ld r o p l e t s t a g e ) ，皮层小泡期( c o r t i c a la l v e o l is t a g e ) ，卵黄发生初期( p r i m a r yy o l ks t a g e ) ，卵黄 发生中期( s e c o n d a r yy o l ks t a g e ) ，卵黄发生末期( t e r t i a r yy o l ks t a g e ) ，核迁移期 ( m i g r a t o r yn u c l e u ss t a g e ) 4 3 4 5 】；9 个时相和8 个时相划分方法相仿，把染色质核仁期 进一步细化，即：卵原细胞期( o o g o n i a ) ，染色质核仁期( c h r o m a t i n - n u c l e o l a r ) ，核仁 外周期( p e r i n u c l e o l a r ) ，皮层小泡期( c o r t i c a la l v e o l i ) ，卵黄发生i 期( y o l ki ) ，卵黄发 生i i 期( y o l ki i ) ，卵黄发生期( y o l ki i i ) ，核迁移期( m i g r a t o r yn u c l e u s ) ，成熟期 ( m a t u r e ) t a 6 1 ：1 0 个时相的分法是直接把其发育过程命为s t a g ei s t a g e x 4 7 1 。新近 有学者直接依照普通动物卵细胞的发育将其分为原始生殖细胞( p o c ) 、卵原细胞 ( o o g o n i a ) 、初级卵母细胞( p r i m a r yo o c y t e s ) 、次级卵母细胞( s e c o n d a r yo o c y t e s ) 及卵 子( e g g ) 5 个时期j 。 纵观以上时相划分方法，基本上是以卵黄发生、细胞质内的形态变化依次展 开的。此外，还有另一种将卵母细胞外滤泡细胞发育过程和卵母细胞内卵黄物质 发育过程相结合的划分方法，将卵母细胞的发育划分为卵原细胞时相、单层滤泡 时相、卵黄泡出现时相、卵黄充满时相、卵母细胞成熟时相、卵母细胞退化时相 4 9 5 1 】。张耀光等【5 0 1 认为这种分法分期数目简化，卵母细胞发育的典型特征突出， 且与卵巢发育的分期有机吻合，便于理解和记忆。有学者认为单层滤泡细胞的形 成标志着鲇( s i l u r u sa s o t u s ) 卵母细胞小生长期的结束【5 2 1 ；双层滤泡细胞的形成标志 着鲇卵母细胞转入大生长期，是卵子营养物质积累的阶段，相对应为卵黄发生中 期【5 3 1 。 1 1 4 滤泡细胞和卵膜， 滤泡细胞是包围在卵母细胞外周的非生殖细胞，一般认为滤泡细胞来源于卵 巢基质细胞 4 9 , 5 3 - 5 5 l ，也有人认为它由小的卵原细胞分化而来【1 9 】或由生殖细胞和浆 细胞共同形成的【1 7 , 1 8 】。鱼类滤泡细胞的发育经历了由无到有，然后形成单层分布， 再到分化为多层，最后退化吸收的过程【5 1 , 5 6 1 。以南方鲇的滤泡细胞为例，其发育 具体可分为零散滤泡细胞期、单层扁平滤泡细胞期、多层扁平滤泡细胞期、立方 形颗粒细胞期、柱状颗粒细胞期、颗粒细胞分泌期、颗粒细胞退化期七个时期1 5 。 3 前言 排出物后形成卵黄小板【5 5 1 。内源性卵黄物质首先在内质网上合成，而后在高尔基 体中得到加工和修饰【7 1 1 。细鳞鱼内源性卵黄物质的积累可分为2 个阶段，早期表现 为由线粒体及多泡体组成的卵黄核的形成和迁移，晚期表现为胞质中内质网和高 尔基体的增殖及卵黄物质的沉积睁6 1 。 卵黄物质的外源性合成途径是主要途径，其合成主要体现为卵黄蛋白原在肝 脏中的合成、在血液中的运输和卵母细胞的吸收以及在胞质内的积累等过程，鱼 类的卵黄蛋白原通常由两个1 5 0 2 2 0 k d a 的同源二聚体组成，卵黄蛋白原进入卵母 细胞后衍生为卵黄脂磷蛋白、卵黄高磷蛋白和p 组分【5 6 舶，7 2 1 。根据血清蛋白磷浓 度的变化，证实了瓦氏黄颡鱼( p e l t e o b a g r u sv a c h e l l i ) 卵巢发育的i i i 期末是外 源性卵黄蛋白原大量积累的阶段【7 3 】。南方鲇外源性卵黄物质开始积累时内层滤泡 细胞演变为含丰富线粒体、内质网及高尔基体等细胞器的颗粒细胞，退化早期线 粒体中开始沉积低电子密度的絮状物质，到退化中期时已成为电子密度略高的卵 黄前体颗粒，到退化晚期时电子密度进一步增大成为中间颗粒，中间颗粒经胞饮 小泡的微胞饮作用进入卵母细胞胞质中积剥5 5 】。细鳞鱼外源性卵黄物质的积累始 于肝脏产生卵黄蛋白原，其经过血液循环运输到颗粒细胞层，经加工、修饰形成 颗粒物质，再经过质膜间隙到达卵母细胞膜，之后经过微泡饮作用被吸收，并由 运输泡转运到胞质中积剥5 们。鲤鱼( c y p r i n u sc a r p i o ) 、大西洋鲑( s a l m os a l a r ) 的 卵黄蛋白原在一种缺糖的促性腺激素刺激下经微胞饮作用进入卵母细胞1 7 4 ，7 引，宽 尾鲑的卵黄蛋白在卵母细胞内由被膜小泡吸收，再由核糖体转移到溶酶体分隔小 室中积累1 7 6 1 。 1 1 6 卵黄物质的类型 硬骨鱼类卵母细胞在生长发育过程中产生的所有内含物统称为卵黄物质1 77 j ； 根据化学成分的不同可以把卵黄物质分为脂肪卵黄、碳水化合物卵黄和蛋白质卵 黄3 类【7 8 】；根据来源不同可以把卵黄物质分为内源性卵黄和外源性卵黄两类，内源 性卵黄由卵母细胞自身合成，外源性卵黄由身体其它器官合成后转移到卵母细胞 内【7 9 1 ；根据组织学形态特点及出现时间和位置的不同，张贤芳等提出鱼类的卵黄 物质可分为3 种【s o j ：卵黄泡、卵黄颗粒、脂滴。 卵黄泡，也叫液泡、泡内卵黄，最早出现在第1 i 时相晚期或第1 i i 时相，其首 先出现在质膜内缘，并向细胞核逐渐充满细胞质。铜鱼的卵黄可分为卵黄泡、卵 黄球【6 1 1 。青鱼( m y l o p h a r y n g o d o np 觇凇) 卵子中的卵黄由泡内卵黄和泡外卵黄组成 【8 l 】。对海龙、底鲻卵黄泡的放射自显影技术研究表明卵黄泡是糖蛋白，其来源于 内质网和高尔基体f 6 3 1 ：卵母细胞早期出现的卵黄泡就是成熟卵子的皮层泡【6 2 1 。有 观点认为卵黄泡不属于卵黄成分，因为皮层泡在受精中将内含物释放到卵周隙， 5 前言 c a r p i o v a r ) 成熟卵的含水量为8 5 2 0 i 帅】，而异育银鲫( c a r a s s i v sa u r a t u sg i b e l h g ) 期卵巢的平均含水量为7 1 9 1 t 9 1 l ，渤海银鲳( p a m p u sa r g e n t e u s ) 成熟卵巢的平 均含水量为6 8 8 3 t 吲；风鲚( c o i l i am y s t u s ) 成熟卵巢的含水量为5 6 7 6 t 9 3 】。由于 其他营养物质的积累，鱼类卵巢内的含水量呈下降趋势，中国团扇鳐( p l a t y r h i n a s i n e n s i s ) 卵重由0 9 2 9 增至2 8 6 9 时，含水量先增加至6 2 ，然后下降并维持在5 0 左右【9 q ；河川沙塘鳢( o d o n t o b u t i s p o t a m o p h i l a ) 卵巢i i 至v 期发育过程中所含水 分由8 4 5 8 逐渐下降为6 2 8 0 ，产卵后含水量上升侈5 。 鱼类卵巢内积累的蛋白质、脂肪和碳水化合物是主要供能物质，是早期胚胎 发育所需物质和能量的主要来源。异育银鲫期卵巢内蛋白质的平均含量为 2 1 8 6 ，是卵巢内含量仅次于水分的成分【9 u ；建鲤4 3 8 1 1 t g 成熟卵粒内含蛋白质 4 7 3 p , g ，含量为1 0 8 0 t 9 0 1 ；江鲽4 3 9 5 1 t g 成熟卵粒内含蛋白质1 6 7 0 1 x g ，含量为 3 8 0 t s 9 1 ；渤海银鲳成熟卵巢的平均蛋白质含量为1 5 4 5 i 明；风鲚成熟卵巢的蛋白 质含量为1 8 7 9 t 9 3 】；黄颡鱼( p e l t e o b a g r u s 力u l v i d r a c o ) 成熟卵巢内含有1 6 种氨基 酸，占卵巢重的2 5 7 1 1 9 6 1 。不同鱼类卵巢内蛋白质含量的差异可能体现了鱼类卵 子内主要供能物质比例上的差异。长薄鳅( l e p t o b o t i ae l o n g a t a ) 卵母细胞内蛋白 质的含量先消耗而后逐渐增加网；随着瓦氏黄颡鱼卵巢的发育成熟，其蛋白质含 量迅速增加，至第v 期时达到最高值( 1 3 1 9 3 + 2 6 6 ) g m l ，产卵后下降 2 1 河川沙 塘鳢卵巢内水溶性蛋白的含量在产卵后降至最低，然后快速增加，在越冬期增加 缓慢，进入2 月后开始迅速增加，在繁殖期增至最大为0 1 2 5 9 m l ，其卵巢内的卵黄 脂磷蛋白含有8 种必需氨基酸和7 种非必需氨基酸，分别占5 3 5 2 和4 2 0 4 t 粥1 。 异育银鲫期卵巢内脂肪的平均含量为2 6 2 1 9 l 】；建鲤4 3 8 l p g 成熟卵粒内含脂 肪7 3 t g ，含量为1 6 7 1 9 0 1 ；江鲽4 3 9 5 “g 成熟卵粒内含脂肪5 8 鹇，含量为1 3 2 【踟； 渤海银鲳成熟卵巢的平均脂肪含量为1 2 3 7 t 叼；风鲚成熟卵巢的脂肪含量为 2 0 9 6 【叫；黄颡鱼成熟卵巢内含有2 0 种脂肪酸，其中单不饱和脂肪酸5 种、多不饱 和脂肪酸8 种、饱和脂肪酸7 种睇】。中国团扇鳐卵重由o 9 2 9 增至2 8 6 9 时，脂肪含量 随卵重增加变化趋势不明显，在1 4 9 2 1 9 0 9 范围内波动【舛】；河川沙塘鳢卵巢在 1 0 月至次年5 月发育过程中脂肪含量波动不大，维持在干重的2 0 8 7 2 6 6 3 【9 引。 不同鱼类卵巢内脂类含量的差异可能体现了鱼类卵子内主要供能物质比例上的差 异，这与与卵母细胞发育过程中是否积累脂滴相关。 异育银鲫期卵巢内无氮浸出物的平均含量为2 2 3 ，显著高于其肌肉内的含 量【9 1 1 ；渤海银鲳成熟卵巢的平均碳水化合物含量为1 8 2 1 9 2 1 ；泰山螭霖鱼 ( v a r i c o r h i n u sm a c r o l e p i s ) 卵母细胞发育过程中卵膜的p a s 染色呈阳性强阳性阳 性反应变化，放射带呈强阳性反应，液泡、核周胞质及卵黄颗粒问的细密颗粒呈 阳性反应，而成熟卵子内卵黄颗粒呈阴性反应【9 刀；中华绒鳌蟹( e r i o c h e i rs i n e n s i ) 7 材料与方法 皇曼曼皇量量罾量曼量量曼皇曼量皇量罾量曼量暮鼍喜曼|ii 量皇曼鼍曼量曼曼曼量皇舅曼邕曼鲁皇量皇曼皇曼曼量曼曼皇鼍璺曼鼍 2 材料与方法 2 1 实验材料 实验用i 期性腺厚颌鲂为当年人工繁殖饲养的幼鱼，购于重庆市北碚区静观渔 场；其余样品为2 0 0 9 年1 1 月2 0 1 0 年9 月在长江一级支流龙溪河泸州石洞至特兴 江段逐月收购的野生雌性厚颌鲂，成熟卵子由繁殖季节雌鱼人工催熟获得。 2 2 实验方法 2 2 1 大体解剖 活体测量体长、体重、全长；解剖取出卵巢，称重计算成熟系数，记录其外 观形态，取典型材料拍照。 2 2 2 组织学及组织化学研究 取卵巢前、中、后段各小块分别用b o u i n s 、s m i t h 、中性甲醛固定后石蜡切片， 液氮固定后冰冻切片，组织学、组织化学染色，n i k o n 研究用显微镜观察、测量和 拍照。在低倍镜下将切片任移1 0 个视野，以面积占7 0 以上的卵母细胞为同一发 育时期作为卵巢发育的定期标准。 2 2 3 超微结构研究 取各发育时相卵母细胞用2 5 的戊二醛4 c 固定过夜，o 1 m o l l ( p h 7 2 ) 磷 酸缓冲液冲洗3 次，系列酒精脱水，丙酮置换，国产环氧树脂6 5 0 聚合包埋，l k b - 5 型超薄切片机切片，经醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染后，用日立t s 0 0 0 透射电镜观 察并照相。 2 2 4 化学组分的测定 参照谭德清掣1 0 8 1 研究方法：取2 2 2 剩余卵巢称湿重，然后置于7 0 。c 烘箱烘 干一周，称干重，计算含水量；将干物质磨成细粉装进e p 管密封，待卵巢分期确 定后将同一时期的干物质混合作为一个样品，用凯氏定氮法测定蛋白质含量，用 索氏抽提法测定脂肪含量，用灼烧法测定灰分含量，剩余即为碳水化合物的含量。 测量结果取平均值标准差( m e a n s d ) 。 2 3 实验药品及仪器设备 组织学及组织化学药品：重铬酸钾( k 2 c r 2 0 7 ) 、磷酸二氢钠( n 枷2 p 0 4 ) 、 磷酸氢二钠( n a 2 h p 0 4 ) 、三氯甲烷( c h c l 3 ) 、茚三酮( c 9 h 4 0 3 ) 、高碘酸( h 1 0 4 ) 、 苏丹黑b ( c 2 9 h 2 料6 ) 、碱性品红( c 2 0 h 2 0 c 1 n 3 ) 、乙酸( c 2 h 4 0 2 ) 、2 ，4 ，6 一三硝基 9 结果 3 结果 3 1 卵巢发育的分期 3 1 1 卵巢发育的外观形态 厚颌鲂卵巢一对，位于消化道背面、肾脏腹面，根据其外部大小形态及色泽 变化等特征，将卵巢发育过程分为6 个期。 i 期卵巢呈透明状，紧贴肾脏，与腹膜紧连，从外表上无法辨别雌雄，组织 切片可明显区分。 i i 期卵巢呈扁带状，呈肉红色，半透明，中间部分较宽，两端变窄，可见有 微血管分布。 i i i 期卵巢呈扁囊状，浅黄色，其宽度和厚度比i i 期显著增加，血管明显变粗、 增多，可见卵母细胞的粒状雏形。 期卵巢圆囊状，浅黄色，卵粒明显可见，卵粒间相互粘连，血管众多、布 满卵巢表面。 v 期卵巢囊袋状，油黄色，卵粒饱满富有弹性和粘性，游离于卵巢腔中，轻 压腹部，即可挤出油黄色卵粒。 期卵巢蔫瘪，其内仅存少量未产出的卵子，卵巢壁明显充血，呈紫红色， 其经较短过程后恢复至i i 期。 3 1 2 卵巢各发育时期的主要特征 实验用雌性厚颌鲂共1 9 7 尾，全长3 5 3 1 5 m m ，体重1 5 6 0 5 5 9 ，年龄由1 冬 龄至4 龄；卵巢分布于i 期，重量0 0 0 7 - 4 7 9 0 9 ，成熟系数0 0 7 - 17 5 3 ，具体 情况如表l 所示。 表1 卵巢各发育时期厚颌鲂的主要特征 t a b 1c h a r a c t e r so f m e g a l o b r a m a p e l l e g r i n iw i t he a c hs t a g eo v a r y 罂詈釜竺长桨甓紫置兰卵巢甓嚣系数 采集地点和时间 育时期 ( m m ) ( g )( g )( 龄) ( ) 一 - i i n i 期 3 5 7 51 5 - 5 5 20 0 0 7 - 0 1 61 冬龄0 0 7 - 0 1 9 北碚静观渔场2 0 1 0 1 0 2 0 11 0 2 i i 期2 0 5 3 4 51 0 2 9 - 6 0 5 50 1 0 _ 4 1 01 4 +0 6 1 - 1 2 0 泸州龙溪河，2 0 0 9 1 1 2 0 1 0 1 l m 期 2 2 5 - 2 7 51 2 9 1 - 3 7 0 02 1 0 9 6 02 - - 3 0 7 l 一4 】3 泸州龙溪河，2 0 1 0 0 2 - 2 0 1 0 0 6 期2 4 5 2 9 51 7 5 6 - 2 7 0 31 1 0 3 2 1 6 02 _ 3 + 6 7 0 1 2 3 9 泸州龙溪河，2 0 1 0 0 4 2 0 1 0 0 7 v 期2 6 5 3 1 51 9 1 2 3 5 4 63 6 2 1 - 4 7 9 02 - _ 3 +1 1 0 5 - 1 7 5 3 泸州龙溪河，2 0 1 0 0 5 2 0 1 0 0 7 期2 3 7 2 9 91 8 9 4 3 2 0 5 1 9 2 3 6 62 - _ 30 6 9 1 6 l 泸州龙溪河，2 0 1 0 0 5 2 0 1 0 0 8 结果 内出现一个深蓝色的圆形卵黄核、直径5 6 6 1 0 4 7 p , m ，质膜外开始出现零星分布的 滤泡细胞( 图版i ：5 ) 。 中期卵巢开始形成产卵板，卵母细胞排列在产卵板上( 图版i ：6 ) 。卵母 细胞数目增多，体积相差较大，胞径2 1 0 5 1 2 4 6 0 2 p , m ，核径1 1 2 4 9 1 2 1 9 6 1 x m ，核 仁数目2 5 3 3 个，大小不均，多靠近核膜分布，少数散布于核质中；卵母细胞胞质 嗜酸性增强，嗜碱性减弱，滤泡细胞数目增多( 图版i i ：7 ) 。 晚期产卵板进一步发育，卵母细胞圆形或近圆形，体积进一步增大，卵膜呈 浅红色，胞质嗜酸性进一步增强；胞径2 2 3 5 1 2 5 4 o l l a m ，核径1 1 6 9 4 1 3 2 7 4 9 i n ， 核仁数目2 6 3 1 个，多靠近核膜分布，少数散布于核质中。卵黄核向胞质中心移