（分析化学专业论文）保健食品中功效成分检测方法的研究.pdf

摘要 随着社会滟进步窝经济抟发展，人们对食翰有了燮耨的认识和要求，已经 不仅仅满足于吃饱穿暖。更希望通过饮食防病强体，不断提高生活质鼙，进而达 到延年益寿的融的。随着各种营养过乘“文明病”不断出现和高发病率，入 门列 自身的健康状况给与了更多的关注，营养保健成为越来越强烈的要求。在此种情 况下，绦健食品作为一种能够满足此类需求的特殊食品使出现了，并很快得到了 大家的汲可，从 恧缓褥僳毽食熬行业迅速发联。绦健食黼是分予食品鄹药品之国 的一类特殊产晶，具有特定的保健功能，适寅予特定人群使用，但叉不以治 疗疾瘸为嚣豹豹食燕。功效残分是傈毽食品绦超功楚懿关键所在。也是j t 品质量的主要搬标，因此，功效成分的枪测便成为固内外保健食品开发研究i - 5 重鬣斡个环节。要壤缣毽食赫长期稳定靛键袋发展，舞清葵功效蕊分并释决蔫 定方法有着重要的意义。但目前许多保健食品尤其是以中草药提取物为功效成分 的徐键食品，藏功效成分商没有舀家统一的检涮方法，便禳难对瑟类产。结歼裂质 量控制。在本研究中，对几种尚没有标准检测方法的保健食品功效成分的捡测方 法进行丁研究，利用先进的高教液桶芭谱仪，对实验条件和参数进行了优化，援 出了快速、简便、准确的毅检测力法。主要研究了人参皂贰r b l 和酸枣仁迎 贰a 的同时测定、牛蒡甙、芦荟甙和芍药甙的高效液栩测定方法。 入参为聂妇科人参羼檀懿a 参p a n a xg i n s e n gc ，a m e y 。【s c h i n - s e n gn e e s 3 的根，具有安神，益锂的作用，其主要成分为人参皂拽r b l 鳟。酸枣仁为鼠李 辩植物z i z i p h u s j u j u b am i l l ，v a r , s p i n o s a ( b u n g e ) h ue x 。f c h o u 的干僚成熟静予。 用于治疗虚烦不眠，慷悸多梦簿，其主要成分为酸枣仁皂甙a 。将二二者应用于保 健食晶中可相互键迸，超到改蘩睡眠潦洚用。本研究中建立了羊孛丽铡。裣测两种 功效成分的方法，从丽为此类样品的检验节省了时间，提高了效率。实验条件： c ! s 液楣色谱襁，用乙祷1 7 r ( v l v ) = 3 0 7 0 作流动相，检测波 ( ：2 0 3 n m 。酸枣f ：皂懿 a 和人参皂式r b l 的测定范圈分别是o 0 0 3 4 0 3 4 m g m l 、0 0 0 3 7 o 3 7 m g m l ： 相关系数分别为o 9 9 9 9 8 、o 9 9 9 7 0 ：检测限分别为1 o u m l 、l ，5 u g m llr s d 分 爨为3 。9 、3 。7 。酸枣 二皂裁a 回收率在9 8 8 0 3 ：人参皂甙r b l 回收率 在9 8 9 1 0 1 。 牛蒡子为菊科植物牛蒡ar c t i u n l a p p a 三的干燥成熟果实，是常片j 中药，j _ ；i = 有疏散风热、宣肺透疹、解毒利咽等功能，牛蒡甙是其主要功效成分，检测条件 为：w a t e r ss y m m e t r yc 。( 3 9 m m 1 5 0 m m ，5 m ) 流动相：甲醇一水( 4 0 6 0 v i v l ， 流速：08 m l m i n ，检测波长；2 3 0 n m 或2 8 0 n m 。当检测波长为2 3 0 m n 时午蒡 甙在0 0 2 5 u g 一5 0 u g 范围内与响应值峰面积有良好的线性关系，叫归力程为 y = 2 5 5 3 3 7 9 x 5 3 7 9 6 ，相关系数为r = 0 9 9 9 8 ；当检测波长为2 8 0 h m ：曩，存 o 0 5 u g 一5 o u g 范围内线性关系良好，回归方程为y = 9 3 1 6 6 6 x 一3 9 8 4 4 ， g 关系数 为r = 0 9 9 9 9 。按两倍信噪比求得最低检出量为o8 n g ( 2 3 0 1 m 1 ) 、3 n g ( 2 a o n n l ) = 回收率为9 4 6 一- 1 0 5 ( 2 3 0 n m ) ，9 9 2 一1 0 4 ( 2 8 0 n m ) ；悃对标准偏筹1 ： ( 2 8 0 n m ，n 一1 0 ) ，1 0 7 ( 2 3 0 h m ，n = 9 ) 。 芦荟甙的实验条件为：c l8 柱，流动相为甲醇一水( 5 05 0 ) ： 流速 】o m l m i n ；检测波长：2 9 8 n m 。回归方程y = 一9 19 9 + 】6 6 4 3 9 6 x f 。1 1 最坻 检出量为o 0 0 2ug( s n = 2 ) 。方法平均回收率在9 9 o 10 1 9 问。 芍药具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗的功能。其主要成分是芍药甙。 芍药甙的实验条件为：s y m m e t r yc 。，色谱柱，以甲醇水为流动；g ( 3 0 7 0 v v ) ，自j 2 3 3 n r n 处检测。浚方法的检出限为0 0 0 2ug ，悃对标准偏差为l9 9 ，平均圳收 率在9 5 6 一1 0 4 0 之间。 关键同：高效液相色谱保健食品 人参皂甙r b l 和酸枣f 皂j 芄a7 l 二蒡j 茂 芦 荟甙芍药甙 s t u d i e so nt h ed e t e r m i n a t i o no fa c 1iv e i n g r e d i e n t si nf u n c t l 0 nf o o d s m a j o r ：a n a l i t i c a lc h e m i s t r y p o s t g r a d u a t e ：s u y u nl i s u p e r 、，i s o r ：p r o f g u o s h e n gy a n g a b s t r a c t w i t ht h ed e v e l o p m e n to ft h es o c i e t ya n dt h eg r o w t ho fe c o r ! o m y ，t h e r ei s a n e vc o n c e p to ff o o d s p e o p l ei sn ol o n g e rs a t i s f i e dw i t hf o o dt o 矗i lt h es t o m a c h t h e y w a n tt op r e v e n td i s e a s ea n ds t r e n g t h e nt h e i rb o d y i m p r o x et h el i f eq u a l i t ya sw e l ta s p r o l o n gt h el i f es p a n f a c e dw i t ht h em o r ea n dm o r e “c i v i l i z a t i o nd i s e a s e ”c a u s e db 、r e x c e s s i v en u t r i t i o n ，p e o p l ep a ym o r ea t t e n t i o nt ot h e i rh e a l t hu n d e rt h i sc i r c u m s t a n c e f t m c t i o nf o o de m e r g e sa sak i n do fs p e c i a lf o o dt om e e tt h i sa n db e c o m ep o p u l a rs i ) o f i f u n c t i o nf o o di sas o r to fs p e c i a lf o o db e t w e e ni b o da n dm e d i c i n e ，w h i c hh a so n eo r m o r es p e c i a lf u n c t i o n sf o rs p e c i f i cp e o p l e b u tn o tc u r ed i s e a s ef u n c t i o n a li n g r e d i e n t i st h ek e yo ft h ef i m c t i o nf o o d ，a l s ot h ei m p o r t a n tf a c t o rt oe v a l u a t et h eq u a l i t v t h e r e f o r e t h ed e t e c t i o no fa c t i v ei n g r e d i e n t sb e c o m ea n i m p o r t a n ts e c t o ro ft h e r e s e a r c ha n dd e v e l o p m e n to fn e w f u n c t i o nf o o d t of i n do u tt h ea c t i v ei n g r e d i e n ta n d e s t a b l i s ht h ed e l e c t i o nm e t h o d sa r et h em o s ti m p o r t a n tt ot h ed e v e l o p m e n fo r n e f u n c t i o n a lf o o d b u t ，a tp r e s e n t ，m o s to ft h ef u n c t i o nf o o d sw h i c he s p e c i a l l yi n v o h ，e i nc h i n e s eh e r be x t r a c t sh a v en os t a n d a r dd e t e c t i o nm e t h o do ft h ea c t i v ei n g r e d i e n t s i t i sd i f f i c u l tt oc a r r yo u tq u a l i t yc o n t r o lo ft h o s ep r o d u c t s i nt h i ss t u d y w e d e v e l o p e d as e to fr a p i da n da c c u r a t eh p l cf c l , e t l l o d st od e t e c ts e v e r a la c t i v ei n g r e d i e n t sw h i c h h a v en os t a n d a r dm e t h o db e f o r e t h e i re x p e r i m e n t sc o n d i t i o na n dp a r a m e t e rh a v e b e e no p t i m i z e d i ti sc o m p o s e do ff o u rp a r t s ：t h em e t h o dt od e t e c tg i n s e n o s i d er b l a n dj u j u b o s i d eas i m u l t a n e o u s l y , ；t h em e t h o dt od e t e c t b a r b a l o i n ；t h em e t h o dt o d e t e c ta r c t i i n ；t h em e t h o dt od e t e c tp a e o n i f l o r i n ：g i n s e n o s i d er b ia n dj u j u b o s i d ea c a nb ed e t e c t e d s i m u l t a n e o u s l yb y c18 c h r o m a t o g r a p h i c c o u m l l u s i n g a c e t o n i t r i l e ：w a t e r ( 3 0 ：7 0 ) a sm o b i l ep h a s e a t2 0 3 n m t h ed e t e c t i o n r a n g e o t j u j u b o s i d e aa n dg i n s e n o s i d er b li s 0 0 0 3 4 - 0 3 4 m g m 1 0 0 0 3 7 03 7 m g m l r e s p e c t f v e l y t h er e l a t e dc o e f f i c i e n t i s0 9 9 9 9 8a n do 9 9 9 7 0 ；d e t e c t i o nl i m i ti s 1 0 u g m la n d1 5 u g m l ；r s di s3 9 a n d3 7 t h er e c o v e r yr a t eo fj u j u b o s i d eai s 9 8 8 一1 d 3 ：t h er e c o v e r yr a t eo f g i n s e n o s i d er b li s9 89 - 1 0 1 a r c t i i nc a nb ed e t e c t e db yw a t e r sc18 s y m m e t r yc o l u m nu s i n g m e t h a n o l ：w a t e r ( 4 0 ：6 0 ) a sm o b i l ep h a s ew i t hf l o wr a t eo f0 8 m l m i na t2 3 0 n mo r 2 8 0 r i m w h e nt h ew a v e l e n g t hi s2 3 0 n m ，t h ea r c t i i ni si ng o o dr e l a t i v et op e a ka r e a f r o mo 0 2 5 u gt o 5 0 u g ，t h el i n e a re q u a t i o n i sy 2 2 5 5 3 3 7 9 x 一5 3 7 9 6 ，t h er e l a t e d c o e f f i c i e n ti s0 9 9 9 8 ；w h e nt h ew a v e l e n g t hi s2 8 0 n m ，t h ea r c t i i ni si ng o o dr e l a t i v et o p e a ka r e af r o mo 0 5 u gt o5 0 u g ，t h el i n e a re q u a t i o ni sy = 9 31 6 6 6 x 一- 3 9 8 4 4 ，t h er e l a t e d c o e f f i c i e n ti so 9 9 9 9 w h e nt h er a t i oo fs i g n a lt on o i s ei s2 t h ed e t e c t i o nl i m i ti so 8 n g a n d3 n ga t2 3 0 n ma n d2 8 0 h mr e s p e c t i v e l y t h er e c o v e r yr a t ei s9 4 6 一1 0 5 ( 2 3 0 n m ) 9 9 2 - 1 0 4 ( 2 8 0 n m ) ；t h e r e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o ni s 1 0 7 ( 2 3 0 n m ，n = 9 ) a n d 1 1 2 ( 2 8 0 n m ，n = l o ) b a r b a l o i nc a nb ed e t e c t e d b y w a t e r sc18 s y m m e t r y c o l u m nu s i n g m e t h a n o l ：w a t e rr 5 0 ：5 0 ) a sm o b i l ep h a s ew i t hf l o wr a t eo f10 m l m i na t2 9 8 n m t h e l i n e a re q u a t i o ni sy = 一9 1 9 9 + 1 6 6 4 3 9 6 x ( u g ) t h ed e t e c t i o nl i m i ti s o 0 0 2 u g ( s n = 2 ) t h ea v e r a g er e c o v e r yr a t ei sb e t w e e n9 9 o a n d101 9 ， p a e o n i f l o f i nc a nb ed e t e c t e db yw a t e r sc 18s y m m e t r yc o l u m nu s i n g m e t h a n o l ：w a t e rf 3 0 ：7 0 ) 踮m o b i l ep h a s ea t2 3 3 n m t h ed e t e c t i o nl i m i ti so 0 0 2 u g , r s di s1 9 9 t h ea v e r a g er e c o v e r yr a t ei sb e t w e e n9 5 6 a n d10 4 o k e yw o r d s ： j u j u b o s i d ea h p l cf u n c t i o nf o o dg i n s e n o s i d er b la n d a r c t i i nb a r b a l o i n p a e o n i f l o r i n 鞋p l c t l c g c d 嚣a d h a e p a s o d 符譬说溺 鞋i 馥p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y 裔效液褶色谱 l a y e rc h r o m a t o g r a p h y 薄滢捅撼匏港 g a sc h r o m a t o g r a p h y气褶色谱 d e h y d r o a n d r o s t e r o n e 去氯表攘掰酮 a l lc i s 4 ，7 ，1 0 ，1 3 ， 6 ，】9 一d o c o s a h e x a e n o i ca c i d 二十二碳五烯酸 a l lc i s 一5 ，8 ，ll ， 4 ，1 7 * o i e o s a p e n t a e n o i ca c i d二十碳五爝酸 s u p e r o x i d ed i s m u t a s e 超氧化物竣化酶 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导 下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容 外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科 研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：塑! 墨 r 期：i 。垒山：西 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国 家有关部或机构送交论文的复印件和电子舨，允许论文放布阅利借阅：本人授权山 永人学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有荚数据库进行检索，可以采h 影 印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：查盘墨导师签名期：汹车f 馏 山东大学颂1 擘位论文 引言 人类的进化史在很大程度上是获得食物的历史，远古时代人 们对食物与健康就有直观的感性认识，在中国春秋战国时期的著作 山海经中已有精辟论述：“囊木之实，食之使人多力；枥木之实 食之使人不忘：a 生，食之善走”。表明我们的祖先认识到某些食物与 增强记忆、抗疲劳等人体机能存在直接联系。但是，这些客观存在 的联系必须用科学的方法加以证明，才能形成系统的学术体系。随 着社会的发展，人们对食品的保健功能也有了更新的认识，提出了 保健食品的概念。现在世界上尚未有统一的保健食品定义，各国的 称谓也各有特点。大多数国家对保健食品仅仅有学术上的概念和分 类，保健食品所包含的范围各不相同，少数几个将保健食品的管理 纳入法制轨道的国家和地区，如中国、只本和欧共体，概念与分类 也各有千秋。 l 、日本厚生省1 9 9 1 年率先提出保健食品的定义是“凡附有特 殊标志说明属于特殊用途的食品，在饮食生活中为达到某种特定保 ， 健目的而摄取本品的人，可望达到该保健目的的食品”。日本要求 保健食品必须是天然食品形态，而且审批制度很严。 2 美国于1 9 9 4 年通过的“膳食补充剂与健康教商法f d s h e a ) ” 2 i 中规定膳食补充剂( 即保健食品) 的定义是“一种旨在补充膳食的 产品( g g 非烟草) ，它可能含有一种或多种膳食成分，如维生素、矿物 质、草药、氨基酸等，用以补充膳食的食物成分，增加每h 总掇入量。” 本产品可以是以上物质的浓缩物、代谢物、组成物、提取物或其综 合产物，可以是丸剂、胶囊、片剂或液体，但不能代替普通食物或膳 食中的唯一品种。产品有扼制疾病的生理功能，食用对象有人群选 择性。 ( 3 ) 1 9 9 6 年我国卫生部界定的保健食品定义是“保健食品系指 表明具有特定保健功能的食品。即适宜于特定人群食用，具有调节 山东大学硕士学位论文 机体功能，不以治疗疾病为匿的的食品”p l 。 ( 4 ) 1 9 9 8 年欧盟学术界对功能食品( 即保健食品) 规定的定义是 “一种食品如果具有一种或多种与保持人体健康或减少致病危险 有关的靶功能，能产生适当的良性影响，它就是功能食品” 4 , 5 1 。并称 此类食品主要是有一定功能的天然食品、添加或去除某种成分的食 品、或兼有这些情况的食品。 此外，1 9 9 6 年加拿大引、1 9 9 9 年台湾地区 7 1 也均有保健食品类 似的定义与说明。 综上可以看出，人们对保健食品的性质与功能等主要特征认识 上是基本相同的、明确的。主要包括：( 1 ) 保健食品是食品而不是 药品或其他物品。各国基本都存在如何区分保健食品与药品这个问 题，而且意见较为统一f 8 。1 引。( 2 ) 保健食品与药品的最大区别是不以 治疗为目的，在提供营养、满足人们的感官需要的同时，还调节人体 的生理状态，除特殊情况外，无剂量限制，长期大量食用不会引起毒 副作用1 8 i 。而以治疗疾病为目的的药品其有选择性、严格的适应症、 禁忌症与程度不等的毒性，有严格的剂量限制、用法及疗程的限制， 不能长期过量使用，即使在剂量范围内服用，有时也会引起毒副作用 也必须在医生指导下服用。不能依个人喜好放弃使用。( 3 ) 保健食 品的保健功能来源于其中所含的功效物质( 功效成分或活性分 子) 【1 1 1 ，主要分为三类。一是现已认知或以前未曾强调过其功能的 己知营养素，如维生素a 、e 、c 、胡萝h 素、硒等抗氧化剂，作为葡 萄糖耐量因子( g t f ) 有效降低i j 型糖尿病人血糖的微量元素铬与 锌等。二是本来就存在于天然食品中的成分，以前不仅未承认其为 营养物质，而且对其保健功能也未能认知，例如有降血脂、抗氧化、 提高免疫力、抑制肿瘤等多种保健功能的大豆异黄酮、大豆皂甙： 有改善肠道菌群、改善消化与便秘、降低热值和防龋作用的各种低 聚糖；其他如存在于食用植物中，以前统称为“植物化学物 ( p h y t o c h e m i c a l s ) ”的多酚类、植物甾醇、花青甙、叶绿素、功能性 多糖等。三是来自中药材的功效物质。我国已批准的5 0 0 0 多种 保健食品，在原料中不用中药材的极少。国外也目益重视，正在成为 开发鲍热点。 随着经济的发展与生活水平的提高，人们啦现了拇种营莽过 剽黪“文爨璃”，营养猱链戏为a 铜越来越强烈螫求。麓时社会向老 龄化发展，人们不仅希望撼年益寿，还渴望吃到防病健体的食i 提麓生活袋量。人们对于食品酶要求正逡步囱溢魄型向感官满足雯 转变，继而向营养保健型即通过麒常饮食达到预防疾病、氓蘩彭“枣 生璃状态目的豹饮食观转变 j 2 罅| ，保健食品正是适应入阳逆逻改善 饮食增强体质这羊申要求磷发展起寒的。研究表明，人体的楚壤状；强 与膳食有关，人们已搞清或基本搞清了许多有益二r 人体健壤的食：功 成分以及痰滚数发生与腾食魄稳互关系，先逆技术在食最工渡j ： 的应用也傻食物中的有益成分在加工过程l 扣被破坏的糍发火火i 一“ 小1 12 t 、蠢此人们透过改善瓣食和发挥食品本身的生理调节甥黪达 到提高人类健康的翻的成为可能。除了以上的群众基础之外，保健 食菇的发袋还纛簧一定斡科学瑾论依鬻。( 1 ) 食物蠹育麓诵整梳体 机能的物质因子，即功效成分。营养学、药理学研究发明，食龆睥 麴活性多糖、低聚糖、多不饱和脂肪酸等功畿性泊强、氨基敞、，薹；= 、 维生素、常量和微爨元素、黄酮类化合貔等功效成分有其明确的生 理活性功能和量效关系。( 2 ) 根据生物化学、毒理学、药理学等实 验方法聪食品的保健功能器安全佳作出客观蠡勺科学性评徐。安鉴 室基本上能定量地检出保健食品中功效成分的岔翳或潜图i “：迸过 动魏模型鞠人群予琰实验，霹以捡定镙筵食品所声称熬深筵功熊。 卫生部发布了包括免疫调节、延缀衰老、改善i 已咒等1 2 种功能的 “绦毽食磊学评徐程序帮捡验方法”t 1 5 1 ，自2 0 0 3 年5 月1h 以焉， 可以申报的保健功能已经增加到2 7 个。 有了上述的发麓曹景和萋硪，隧蓿经济迅速发鼹，形成毽界诖“保健 食品热”是预料之中的。姜培珍等鲥报道，日本的保健食晶已形成食品 工、韭化生产和销售体系，8 0 年代生产企业5 0 0 多家，到9 0 年代发鹱育3 0 0 0 多家，产品达2 万多穗，年产值_ 已达亿美元。德燃的保健食品年产悠 达5 0 多亿马克，在食品市场上占2 0 3 0 的份额。于守洋“报道美 国t 9 7 0 年良压保毽食品每年产蘧以2 0 毂邃壤递增。我舀充分剽嗣巾匮 由毫大学聚：e 学缱蚤曼 憋食甥券生理论与实践缀验，绦继食品监也磐到了迅速的发涟。1 9 9 4 年 全国有保健食品企业3 0 0 0 多个，生产品种约3 6 0 0 种，年产值近3 0 0 亿人 瓮委，占全簪食燕总产筑麓1 0 h “。1 9 9 5 年里，生罄嘉l 定的臻链食品管 理办法颁布后，截至1 9 9 8 年8 月已批准的保健食品1 2 6 7 个，5 5 郾j 保 链食鑫酃跫与中瀚话统食疗有关0 产箍，截至2 0 0 4 年5 月，里釜都已擞 礁的保健食品有5 2 3 2 个。专家预测，n - 0 一o 年，中国保健晶年销售 额将达一千二酉亿元入谶币。由此可见，发震绦健食品大有作为，具有增 强国民素质的社会效益，又能促进民族食品工业的发展，进而取得良好的 经济效藏。 保健食品的发展大体经历三个除段鼓称为“三代”产黯。第一代保健食 品，包括备类强化食品，是最原始的保健食品，仪根据食品中备类营养絷 或强纯黎葬素豹功裴寒攘鞭这类食是的功耗，焉这些凌栽没有经过任俘实 验予以诞实，鼹前欧美各国已将这类产品刑为一般食品。篇二代保健食品 绥经过人体及动物实验，涯弱该产晶具有菜矮生理调节功戆，露欧美等嚣 所强调的真实性和科学憔。目前我国卫生部审批的保健食晶绝大多数属第 二代产品，氇就是璃麓鳞确的豫健食燕。第三代保键食晶不仅需饔经遥人 体及动物实验诞明具有菜项生理调节功能，还嚣礴知具肖该项功能因子的 结稿和含量，以及功能谶子在食品中应有的稳定形态。鞲翁欧荑、e ：| 本等 国都在大力开发这一代产悬，蕊且逛只允许这类产品进入欧美市场。 中豳的保憾食品从8 0 年代中后期开始兴起，初期市场较乱。1 9 9 6 年， 翌生邦感台了绦键食菇管理办法，镁保继食熬鲍管理扶无露走囊了法 制化、规范化的道路。2 0 0 1 年，中国加入了世界贸易组织( wt0 ) ，与其他 嚣照一榉，保鼹食品嚣鼗瞧覆瞧篓重丈豹梳遥与撬战。中溪保健食鑫鲡傍 适应开放的国际、国内市场，它的发展方向何在，是一个德得研究的课题。 经j 妻考察瀚内井绦键食晶静魂、狡，我们可以发现：第三代傈德食品楚 保健食灏发展的最终目标，是战略目标旭不是目前情况下中国保健食品的 发展方向。在中国的缳健食品产品中，宵一大部分是我潮传统中医药理论 和食疗理论的发展与创颛，其保健功能确切有效，但功效成分主要是中草药 提取物，也包括少许动物原料。受传统理论和现代技术的限制，它们的功效 成分不潺楚。睬勇1 1 9 1 捷燃把这部分保健食品n q 馓有中国特售的绦健食最。 发展有中国特色的像健食品是我国的优势之所在。尽管i ；s i j ：, 的希波觉拉戚 约2 5 0 0 年蓊也提密了“让食物成为药耪，迂药物成为食物”的殍论| 2 援膏j 现代意义上的保健食品却是以我园“药食同源”、“食疗养生”等传缆弹沦 为瑗论指导酌，这一点也得到了国际社会的承认。翻行我国的历史可 以发现有许多本草秘药典上郯记载了确关饮食傈继方面的璎论，同时，我 国逐有丰富的保健食品原料。有理论来指导，有原料可利用，才是我因保 健食品领域的优势之所在。 随着人类崇尚自然、追求健康、重视预防的观念流行，也由于中草药 远霓年在殛方枣场挺立戆良好影象，瑗杰，援方人越来越谈谈妥，多耱成 分的相互配合( 复方) 要优于单一成分。欧洲许多国象椰允许中草药掇取物 豹链售4 2 “，连一囊对中莩药箨严谨悉夏麓美国， 童竣变了态度。图际环 境正在发生转变，正在向有利于天然草药的方向发联。这刈中医药现代化 是一个好消怠，对书函韵傈健食品、监茨震也是一令妻子消息。但按照第三代 保健食品的发展要求，要确知具套保健功能的功效成分的绻构及其会量。 且在保健食晶中有稳定韵形态。显然，有中甍特色的保健食隔并不符合萁 发麟舞求。豳为功效成分是保健食是波关键骶在，只寄将功效成分磷究潺 楚，彳不仅w 以阐明其梳理，做到安全有效，还可以方便地控制质擞，更 容易与国际接软。毽是，蠛实静帻凝是，我黧麓秘拔实力落后予欧荚曩等 发达国家，程功效成分研究方而也是如此。而且，目前很多保健因子蹙从 n p i - s l 遴戆l 勰。 ? 对于保健食品，国际上蘑视两方面的内容，首先是安全陡和质量保证 方嚣，葵次才莛有效健方西。麸遥几年麓市场情况采看，安全性和有效毪 是没有问题的因此我们现在的重点是抓质蕨保证，或者说是质量控制， 这不仅楚e + 鞠保健食品发展酾重点，也是一个瓶颈。我国是把功效成分作 为质量控，的指标，由于功效成分不滚，或卷功效成分滂楚但没有桴悠鲍 检测方法，缭质量控制带来了一定的难度。 ；i i 于设育确定功效成分及解决 功效成分的测定方法，是造成我国传绞鸵像键食品长期在低求乎耄 矧令 主要原因。 我国叁发爨绦链食燕以寒，冬蟪食品至雯硷验掇捣、丈专陵搜、秘瑟 院所投入了大量人力、物力研究保健食品功效成分的测定方法。为了提赢 山东大学硕i 学位论文 保健食品功效成分测定方法的水平，1 9 9 9 年6 月卫生部食品卫生监督检 验所组织召开了保健食品功效成分钡i 定方法协作组会议，对当前我国保健 食品功效成测定方法的现状进行了交流，并提出了部分功效成分检测方法 的讨论稿，有待于各相关机构在工作中对其不断加以完善、优化，最终实 现标准化。王竹天i 圳指出了我国保健食品检测方法所存在的问题：( 1 ) 由 于保健食品较传统食品是新事物，研究方面空白较多，无基础、无积累， 储备性研究不够。企业在开发保健食品时也没有投入人力、物力研究功效 成分及其测定方法，这样当检测机构靠政府的投入无法满足研究需要时， 就导致了我国的保健食品功效成分检测方法远远滞后于保健食品的开发。 ( 2 ) 基质干扰严重。现行的分析方法大多出鲁药典、药学文献报导或厂 家提供的方法。药品检验与保健食品检验有很大的不同，药品检验主要是 检验药品成分，在成分确定后，按gmp 生产，从而确保有效成分的含量 和产品的质量，因此药品检验干扰成分很少，甚至没有。雨由于我国大多 数保健食品未实施g m p 生产，或功效成分与原料一体，而且实施的是终 产品检验，保健食品中蛋白质、脂肪、糖类对测定有干扰，使功效成分的 分析难度增加。( 3 ) 缺乏统一的对照标准和对照标准品。一些以中草药为 原料的保健食品，含有多种功效成分，以什么作为对照及对照所用标准品 质量，决定其检测的结果。因此，我们有必要加大对功效成分检测方法研 究的投入，以满足不断发展的保健食品业的检测工作需要。 目前我国保健食品功效成分的主要检测方法有hplc 、tlc 、g c 、比色法。 由图l 可见，使用最多的是hplc ，占5 5 ，主要检测洛伐它 丁、褪黑素、d h e a 、维生素类等。其次gc 占1 5 ，检测d h a 、 epa 、dpa ，等。tlc 法占1 0 ，检测总葸醌化合物、前花青索、 葡萄籽提取物等。比色法主要用于检测总黄酮、茶多酚、总皂甙、sod 等。液相色谱和气相色谱分析的都是功效成分明确的物质，定性、定量准 确，薄层色谱主要用于定性鉴别，比色法测定的指标目前还不能令人满意， 一般是测定一大类物质的混合体，测定的结果不能确切代表功效成分，是 过渡的测定方法，因此，色谱方法是今后的研究重点，在此基础上，色谱 质谱连用进一步明确功效成分的结构。在保健食品功效成分测定方法协作 组撮如的中遴旗曩橱中，特别提出了要建立 p l c 法对珏天然植物为媛 料的保健食晶的鉴别试验：异构体产品的鉴别中也爱依赖h p l c 方f ：! 、 应爰。 图i 各种分析手段所占比例 按照检测方法发展方向和要求，在本研究中主要以商效液相色，谱仪为 羧测手段，对遴没蠢蓍家统一裣测弥准瓣芦棼甙、芍药最、串势甙、凡参 皂甙和酸枣仁皂甙提出了新的h p i 。c 检测方法，并对实验条件进行了优 纯，以利于方法酶稳广和应鞴。该疆究中掰建立的方法可应髑于企弛内部 的质蹙控制，也可应用于检测、监管机构，便予更好地对此类保健食品进 行藤蓬控制和监管，打击骰博伪劣商晶，斌范保健食品 i 场，维护企业和 广大消费者的合法刹益，保护人民群众的身心继康。 出象犬拳颈二i 学稼谴文 第一蠢人参皂戴r b l 移酸枣仁皂裁a 的圊时梭测 零寒罴羁麓效滚穗琶谱法，鞋久参皂戴r b t 窝酸枣 二皂贰a 混台 标准品为标准溶液，制定了一种快速、高效同时测定此两种成分的新方法。 该方法采箱c 1 8 色谱柱，乙翡水体系为流动稽，在2 0 3 n m 处可溺时稔溺 人参皂甙r b l 和酸枣仁皂甙a 。 人参系五加科植物人参p a n a xg i n s e n gc am e y e r 的干燥根渊。人参 傺为滋於珍品，融套二予多年蛉历史。它奄“大 元气，安亳申蕊键”之功 效。目前含有人参的保健食品很多，为鉴别其质爨和真伪，对其功效成分 滋嚣溅是交零黪露耋要。久参熬藏分复杂，人参毫蕊( g i n s e n o s i d e ) 是其奎 臻活性成分，常被用来作为人参制剂中的定量指标。人参慰甙系三萜皂甙， 多数为遮玛媲鼙毽甙，鞠人参毫贰r mr 心r 卟r * 2 、r “3 、r 。、 r 。等；少数为齐墩果酸型( c 型) 皂羲，如人参皂甙r o 。 己柯许多学者建立了不同系统的测定人参璐甙的方法，目前国内外测 定人参奄贰弱主要方法蠢薄黑手习接法( t l c ) 、魄色法、赢效渡褪色谱法 ( h p l c ) 、气相骰谱法( g c ) 、h p 。c m s 、h p l c i r 等 2 6 - 2 8 1 。h p l c m s 虽 然有较麓戆灵敏菠，餐仪器昂贵，搡铎笺杂，对撩季莹环境酾太虽商较裹静 要求，仪器的配备和操作人员的培训都不是一般嶷验室所糍办到的，所以 嗣前还不能得到普遍推广。h p l c i r 宙予选用瀚是示豢折光褴测器，检 测灵敏度相对较低，不g 满足检测人参皂贰保健食品中微量人参皂贰的要 求，只遗用于直接检测人参中商浓度的人参皂甙。t l c 用于人参皂甙的 分离鉴爨、定量测定，獒毒筵蠖实嗣、赞蠲低廉熬慌势，毽测定对象均为 含量较高且在薄层板上分离度较好的r 小少数文献i2 9 | 涉及r 。、r 蠢在祥赫筵瑾、薄层震野分离及显色等方嚣也茏多大教迸。蘸努，篷予 t l c 法测定结聚的准确性和重现性受薄层板均匀度、显色时间及温度等 多种西索的影晌，不便佟为标准方法进行推广。诧色法一般弼予a 参总麓 贰的测定，最常用的是褥革醛比色法。人参皂载取香草麟、离氯黢反应生 成紫红饶络合物，5 6 0 r i m 处比色。也有以浓硫酸鼹色用紫外分光光度法1 3 0 1 测定筑。皂蔑是囊鬟钵藏三蘸类亿合物佟隽贰元与糖绩台褥或鲮一类低聚 山鬈人学领l 学位论文 糖甙，在自然界分布缀广，约一半植物乃至一些海洋生物中也含有皂贰， 因此旗甙具有多样性、复杂性的特点。总皂甙的概念太广，如黄豆有皂甙， 人参奄总皂，剑麻也森皂贰，它们著无巢一季孛共蠲的药理功效。对保 健食晶而占测其总融甙不能体现其菜种具体的保德功能，用总皂甙作质 量摇轹镑薅镶不强。人参娶戴的高效滚提叁落分毒厅始予2 0 超纪7 0 年代术， 由于分离效果好、准确、样品制各简单，随后得到了广泛发展。根据不同 的营静和要求，正稠、反栩鬯谤均有斑餍。紫外分光光度法检测在h p l c 中最为常用，但由于人参皂甙缺乏发饿豳，故只能使髑较低的紫外检测波 长。陈薇等3 1 郴均利羽h p l c 对人参毫甙进行了检测，流动栩较为一致， 主要是乙踌水体系。 j 酸枣仁为鼠李科植物z i z i p h u sj u j u b am i l l v a l s p i n o s a ( b u n g e ) h ue xh fc h o u 夔干蠊残熬耱子。控首、酸、平。熏予治疗蕊矮不躐，豫穆多梦 等1 3 8 l 。其主要成分为酸枣仁皂甙a 等。将人参皂甙和酸枣仁皂甙同 嚣寸应翊予傈键食晶审，可资同作用，扶雨更好的发挥教善睡躐的效嗣，已 经有此类保健食品出现。虽然人参皂拣的检测商多种方法。但针对酸枣仨 皂甙的检测，研究较多的是采用薄屡捆描法 4 0 4 5 1 ，高效液相色谱法尚未见 报道。在本磷究中，投据人参皂贰和皴枣仁毫披豹摆似之处，尝试采用高 效液相色谱法检测酸枣仁皂甙a 。通过实验发王见，不仅可以用高效液捆包 谱检测酸枣仁逛贰a ，蠢曼霹叛在目一实验条臀下同时有效分离这藩耱物 质，建立了种快速、准确、离效的检测方法，从而节省了此类样品自勺检 验分街时闼，提高了工俸效率。 一、实验部分 l 。仪器。 1 1w a t e r s 6 0 0 e 高效液相色谱仪( 包括6 0 0 泵；m i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站 二辍喾薄弱捡溅器；2 0 u l 定羲进拜舔。) 1 2 超声波清洗仪 1 3 医瘸离心机 2 。试剂： 山东大学硕士学位论立 2 1 酸枣仁皂甙a ：购于中国药品生物制品检定所，纯度大于9 95 2 2 人参皂甙r b l ：购于中国药品生物制品检定所，纯度大于9 9 5 2 3 乙膪：色谱纯 2 4 水：试验一级用水 3 色谱条件 3 1 色谱柱：n o v a p a k c t s 柱； 3 2 柱温：室温 3 j 流动相：乙腈水( 3 0 ，7 0 ) ； 3 , 4 流速：i 0 m l m i n 35 脱气：在线h e 脱气。5 m l m i n 3 6 检测波长：2 0 3 n m 4 样品处理 取适量样品于容量瓶中。加入8 m t 流动相，超声提取3 0 m i n ，然后 用流动相定容到1 0 0 m l ，用高速离心机离心1 0 m i n ( 4 0 0 0 r p m ) ，取上清液 过o 、4 5 u r n 滤膜，收集滤液，上机测试。 5 ，计算方法 本方法采用外标法，根据保留时间r t 定性，色谱峰面积定量。色谱 峰的积分采用m i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站自动积分。 二、结果与讨论 i 流动相的选择 根据人参皂甙和酸枣仁皂甙的结构和性质，选用乙精水体系作流动 相，分别试验不同的配比以找出最佳条件。当乙腈水的比例为5 0 5 0 时， 二者的保留时间均太短，不能实现完全分离；当乙腈，水为2 0 1 8 0 时，人 参皂甙r b l 和酸枣仁皂甙a 能达到完全分离，但保留时间又太长，不符 合实验方法省时的要求。经过对分离度和保留时间的平衡，最终选择乙腈 ：g ( 3 0 7 0 ) 作为流动相，该条件下保留时间适宜，r 1 , 5 。标准品、样 品色谱图如图1 品色谱图如图1 出袭 = 孝嫒i 漕 髓论交 0 2 0 0 15 o 10 o 0 5 o o o m i n u t e s 2 。0 0碡。0 0 6 0 0 8 ，0 0 0 0 0 12 0c m i nu t e 墼l 。标准菇、撵鹣色谱鹫( 上零拣难熬：4 f 强样晶) 2 样晶处瑾方法静遥弹 豁取楣圊爨的样晶，分别周回流、超声的方法在不同时间下提取，所 得提取液最爝均定窬到稻同体积，取定量撬取液离心1 0 m i n ， ( 4 0 0 0 r p m ) ，上清渡过o 4 5 u m 滤膜，滤波震2 0 u l 定爨进样坯避样，比较 不同提取方法所褥提取液的对应色谱蜂响应德大小( 以峰面积表示) ，各 蠹鬏毯麴表l 掰示。 山东大学硕士学位论文 袤1 样品前处理方式的选择 提取方式 谣积值 溺漉3 0