（法医学专业论文）氯胺酮在豚鼠毛发中的分布与代谢研究.pdf

山西医科大学磺士学位论文 氯胺酮在豚鼠毛发中的分布与代谢研究 摘要 目的研究氯胺酮在豚鼠毛发中的分布与代谢。探索给药途径、给药模式( 偶尔或 反复用药) 、给药剂量及毛发颜色对豚鼠毛发中氯胺酮分布与代谢的影响。 方法1 分析方法：毛发样品经清洗、水解后添加内标s k f 5 2 5 ”碱化、乙酸乙酯 萃取，气相色谱质谱联用( g c m s ) 全扫面定性，内标法、工作曲线法气相色谱( g c ) 定量分析毛发中的氯胺酮及其代谢物。2 分布与代谢研究：建立豚鼠氯胺酮单次和连续 滥用模型，实验组灌胃或腹腔注射盐酸氯胺酮，给药后不同时间采集豚鼠毛发，对照组灌 胃或腹腔注射生理盐水，取其毛发作空白对照，研究氯胺酮滥用后在豚鼠不同节段毛发中 的分布与代谢。并分高、中、低给药剂量组和黑、棕、白色三组豚鼠，给药后不同时间采 集豚鼠毛发，测定毛发中氯胺酮和去甲氯胺酮的含量，分别研究给药剂量和毛发颜色对分 析结果的影响。 结果1 建立了毛发中氯胺酮及其代谢物的定性定量分析方法，毛发中氯胺酮和 去甲氯胺酮检测线性范围为o 1 1 0 0n g n a 9 1 ，最低检出限均为o 0 6l a g m g ，方法回收率 为9 2 3 6 1 0 5 8 5 ，日内精密度均小于1 0 ，日间精密度均小于1 5 。2 豚鼠给药后 可在其毛发中检出氯胺酮及去甲氯胺酮，单次给药后第三天毛发内含量最高，给药后第十 天检不出。多次给药豚鼠末次给药后第三天毛发内含量最高，检出时限最长可达二十天。 灌胃和腹腔注射两种给药途径之间氯胺酮及去甲氯胺酮的检出量无显著性差异( p o 0 5 ) 。 3 不同给药剂量间毛发内氯胺酮及去甲氯胺酮检出量有显著性差异( p 棕色 白 色。 结论1 建立的毛发中氯胺酮及其代谢物的g c 及g c m s 方法灵敏度高，重现性 好，能够应用于氯胺酮滥用和中毒案例的法医学鉴定。2 氯胺酮滥用后可进入豚鼠毛发 中，在较长时间内均可检出其原体及其代谢产物，连续用药后氯胺酮和去甲氯胺酮可在毛 发内形成蓄积，延长检出时限。提示氯胺酮滥用案件中可采取毛发进行分析，通过分析毛 发不同节段中氯胺酮及其代谢物可判断吸毒嫌疑人有无药物滥用史。3 给药剂量与毛发 内氯胺酮及其代谢物检出量之间存在相关性，因此实际应用中可根据毛发内药物检出量推 断滥用剂量。4 毛发颜色可影响氯胺酮及去甲氯胺酮在毛发内的检出量，提示在实际应 用中应考虑毛发颜色对分析结果的影响。 关键词氯胺酮，毛发，剂量，毛发颜色，气相色谱，质谱联用法 山西医科大学硪士学位论文 s t u d i e so fd i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s mo fk e t a m i n e i nh a i ro fg u i n e ap i g s a b s t r a c t o b j e c t i v es t u d i e so fd i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s mo fk e t a m i n ei nh a i ro fg u i n e ap i g sa n d e f f e c t so fa d m i n i s t r a t i o nr o u t e ，f o r m ，d o s ea n dh a i rc o l o ro ni t m e t h o d s 1 a n a l y s i sm e t h o d ：t h es p e c i m e n0 fh a i rw e r ea d d e di ni n t e r n a ls t a n d a r d o b j e c t ( s k f s 2 5 a ) a f t e rc l e a n e da n dh y d r o l y z e d ，a n dt h e nw e r ea l k a l i f i e da n de x t r a c t e dw i t he t h y l a c e t a t e t h ee x t r a c t sw e r eq u a l i t a t e db yg c m sf u l ls c a nm e t h o da n dq u a n t i t a t e db yi n t e r n a l s t a n d a r da n dw o r k i n gc u r v em e t h o d s 2 d i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s ms t u d y ：m o d e l so fg u i n e ap i g sa d m i n i s t r a t e das i n g l ed o s eo r c o n t i n u o u sd o s e so fh y d r o c h l o r i d eo fk e t a m i n ew e r ee s t a b l i s h e d t h ee x p e r i m e n t a lg r o u pw e r e g i v e nh y d r o c h l o r i d eo fk e t a m i n et h r o u g hi ga d m i n i s t r a t i o no ri p 叫e c t i o n t h eh a i rs a m p l e s w e r ec o l l e c t e da td i f f e r e n tt i m ep o i n t sa f t e rd r u ga d m i n i s t r a t i o n g u i n e ap i g si nc o n t r o lg r o u p w e r eg i v e np h y s i o l o g i cs a l i n et h r o u g hi ga d m i n i s t r a t i o no ri pi n j e c t i o n t h eh a i rs a m p l e sw e r e c o l l e c t e da sb l a n kc o n t r 0 1 t h ed i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s mo fk e t a r n i n ew e t es t u d i e db yh a i r s e g m e n ta n a l y s i s t h r e eg r o u pg u i n e ap i g so fh i g h ，m i d d l e ，l o wa d m i n i s t r a t e dd o s e sa n dt h e o t h e rt h r e eg r o u pg u i n e ap i g so fb l a c k ，b r o w n ，w h i t eh a i rw e r ee n g i n e e r e dt os t u d yt h ei n f l u e n c e 0 fa d m i n i s t r a t e dd o s ea n dh a i rc o l o rt ot h ed i s t r i b u t i o na n dm e t a b o l i s mo f k e t a m i n ei nh a m r e s u l t s1 t h el i n e a rr a n g ef o rk e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ei nh a i ro fg u i n e ap i g sb y g c m sw a s0 1 1 0 0 r i g m g 一t h el i m i to fd e t e c t i o nw a s0 0 6 n g m g 。a n da n a l y t i c a lr e c o v e r y w a s9 2 3 6 1 0 5 8 5 t h ei n t e r - a n di n t r a d a yr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n so fp r e c i s i o n sw e r e l e s st h a n1 0 a n d1 5 r e s p e c t i v e l y 2 k e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ec o u l db ed e t e c t e di nh a i ro fg u i n e ap i g sa f t e ra d m i n i s t r a t e d h y d m c h l o r i d eo fk e t a m i n e t h ec o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ew a sh i g h e s ta tt h e t h i r dd a ya f t e ra d m i n i s t r a t e dd r u gw i t has i n g l ed o s e ，a n dt h a tc o u l dn o tb ed e t e c t e di nt h et e n t h d a y i nh a i ro fg u i n e ap i g s w h i c hw e r ea d m i n i s t r a t e dd r u gw i t hc o n t i n u o u sd o s e s ，t h e c o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ew a sh i g h e s ta tt h et l l i r d d a y a f t e rt h el a s t a d m i n i s t r a t i o n k e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ec o u l ds t i l lb ed e t e c t e da tt h e2 0 t hd a y t h e r ew a sn o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb es h o w ni nt h ec o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n eb e t w e e nt h e i ga d m i n i s t r a t i o ng r o u pa n di pi n j e c t i o ng r o u p ( p o 0 5 ) 3 t h ec o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ei nh a i rs a m p l e sw a sc h a n g e dw i t ht h e a d m i n i s t r a t e dd o s e s ( p b r o w n h a i r w h i t eh a i r c o n d u s i o n1 t h eg ca n dg c m sm e t h o d sf o r t h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no f k e t a m i n ea n di t sm e t a b o l i t en o r k e t a m i n ei nh a i ro fg u i n e ap i g sw e r ee s t a b l i s h e d t 1 l em e t h o d w a sp r o v e dt ob es i m p l e s e n s i t i v ea n dr e p r o d u c i b l ea n dc o u l db ea p p l i e dt oa n a l y s ei nt o x i c a t i o n a n da b u s ec a s e so f k e t a m i n e 2 k e t a m i n ea n di t sm e t a b o l i t ec o u l de n t e ri n t oh a i ro fg u i n e ap i g sa f t e ra b u s e d ，a n dc o u l d b ed e t e c t e di nal o n gt i m e k e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ec o u l da c c u m u l a t ei nh a i ro fg u i n e ap i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dd r u gw i t hc o n t i n u o u sd o s e s ，s oi tc a nb ed e t e c t e di nal o n g e rt i m ec o m p a r e d w i t ht h a ti nh a i ro fg u i n e ap i g sw h i c ha d m i n i s t r a t e dd r u gw i t has i n g l ed o s e i ti n d i c a t et h a th a i r a n a l y s i sm e t h o dc a nb cu s e di nk e t a m i n ea b u s e dc a s e 3 n 圮d r u gc o n c e n t r a t i o ni nh a i ra n da d m i n i s t r a t e dd o s e sh a ds i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o n a b u s e di n f o r m a t i o nc a l lb ei n f e r r e df r o mh a i ra n a l y s i si np r a c t i c a la p p l i c a t i o n 4 h a i rc o l o rc o u l da f f e c tt h ed i s t r i b u t i o no fk e t a m i n ei nh a i ro fg u i n e ap i g s n ei n f l u e n c e o f h a kc o l o rt oa n a l y s i sr e s u l t ss h o u db ec o n s i d e r e di np r a c t i c a la p p l i c a t i o n k e yw o r d sk e t a m i n e ，h a i r , d o s e s ，h a i rc o l o r , g c m s 前言 2 0 0 4 年7 月，国家将氯胺酮列为一类管制精神药品。氯胺酮( k e t a m i n e ) 是苯环己哌 啶( n 一1 p h e n y c y c l o h e x y p i p c d d i n e ，p c p ) 的衍生物【l l ，属于n 甲基一d 一天门冬氨酸( n m d a ) 受体拮抗刻【2 】。临床上多用其盐酸盐作为麻醉剂，也可以作为其它麻醉剂的诱导剂【3 1 。滥 用后可引起鲜明的梦幻觉、错觉、分离状态、兴奋、易激惹行为等。在歌厅、舞厅吸食纯 度很高的氯胺酮粉末( 即k 粉、h i 药) 非常流行，另外k 粉有“迷奸药”之称，是一些不 法分子用于迷奸女性的工具。氯胺酮滥用一般是鼻吸、口服、静脉注射、肌肉注射进入体 内，多数滥用者鼻吸在5 一l o 分钟起效，很多吸食者长期服用1 4 - 7 。 检验嫌疑犯是否使用过氯胺酮的常规取材主要是尿液和血液 8 - 2 0 1 ，而其它检材如毛发、 唾液、汗液等的检验仅有少量报道【2 1 - 2 3 1 。血液样品是进行氯胺酮定量分析的首选检材，但 其采取困难，受试者顺应性差，而尿液采取容易但易替换掺假，在实际应用中存在很多问 题。而毛发样品可直接在办案人员监督下采取，防止掺假和替换，此外，毛发还具有采取 方便，无伤害，易保存，可以再次获得，并能反映滥用史和滥用强度等优点，因此毛发分 析与血液、尿液分析互为补充，已成为法医学滥用药物分析的重要方法，毛发分析结果可 作为毒品滥用疑问时的辅助认定证据，有时甚至成为提供证据的唯一手段。随着现代仪器 分析灵敏度和选择性的提高以及g c m s 法的普及，毛发中滥用药物的分析在法医学中已成 为一种日趋完善的技术。至今为止，己报道有近百种药物滥用后可在毛发中检出 2 4 1 。目前 国内外对于氯胺酮的研究主要集中于麻醉学、药效学、药动学、作用机制以及机体内氯胺 酮的分析和含量测定，法医学研究主要集中于体液内的含量测定1 8 - 2 0 1 。但体液中氯胺酮的 检出时限短，检材不易保存，只能提供个体短期滥用信息。而在实际应用中，很多氯胺酮 吸食者长期服用，这时往往需要对嫌疑犯的滥用情况和滥用史进行推断；在氯胺酮性犯罪 案件中，氯胺酮往往被加入饮料中，单次服用后，药物剂量小，体液内代谢较快，在此类 情况下毛发中毒品因代谢较慢滥用信息可长期保存，所以建立一种毛发中氯胺酮及其代谢 物的检验方法是很有意义的。目前国内外尚未见系统地利用动物实验来研究毛发中氯胺酮 的分布与代谢的报道。 本论文建立氯胺酮滥用的豚鼠动物模型，研究氯胺酮及其代谢物在豚鼠毛发中的含量 变化过程，探讨不同的给药模式( 单次用药和连续用药) 和不同的给药途径( 灌胃和腹腔 注射) 氯胺酮滥用后在豚鼠毛发不同节段中的分布与代谢。并研究给药剂量、毛发颜色对 氯胺酮和去甲氯胺酮在豚鼠毛发内分布和代谢的影响，为氯胺酮滥用的法医学鉴定提供参 考资料。 山西医科大学碗士学位论文 第一章氯胺酮及其代谢物在豚鼠毛发中的分布与代谢 氯胺酮( k e t a m i n e ，以下图表中简称k e ) 被肝微粒体细胞色素p 4 5 0 酶代谢为两种主 要产物：去甲氯胺酮( n o r k c t a m i n e ，以下图表中简称为n k ) 和脱氢去甲氯胺酮 ( d c h y d r o n o r k c t a m i n e 以下图表中简称d h n k ) ，再被转换为n 一葡萄糖醛酸结合物，由肾脏 排泄l 。氯胺酮作为麻醉药在广泛应用于临床的同时，其滥用问题也日益严重，在氯胺酮 滥用的法医学鉴定中，毛发检材可能为氯胺酮滥用强度和滥用史的鉴定提供依据，那么氯 胺酮滥用后能否进入毛发，其在毛发中的分布与代谢情况如何? 偶尔吸食氯胺酮者和长期 吸食者氯胺酮在毛发的含量变化过程是否一致? l e o n gh s t 2 1 1 等曾报道在新加坡氯胺酮滥 用者毛发中检出氯胺酮及去甲氯胺酮，但尚未见系统的利用动物实验研究氯胺酮在毛发中 的分布与代谢。本研究建立了豚鼠毛发中氯胺酮的检测方法，利用动物模型研究氯胺酮及 其代谢物在豚鼠毛发中的含量变化过程，探讨不同的给药模式( 单次用药和连续用药) 和 不同的给药途径( 灌胃和腹腔注射) 氯胺酮滥用后在豚鼠毛发不同节段中的分布与代谢。 l i 材料 1 1 1 主要仪器 r 1 乙i o a 型婴儿秤无锡市衡器厂 恒温水浴箱北京市长风仪器仪表有限公司 k l 5 1 z i 氮吹仪北京康林科技有限责任公司 q l - 9 0 1 涡旋混合器江苏海门市麟麒医用仪器厂 2 0 0 4 一m p 6 型电子分析天平 英国s a r t o r i u s 公司 d l - 5 型低速大容量离心机上海安亭科学仪器厂 华普达h y - 3 多功能振荡器常州市华普达教学仪器有限公司 t r a c e2 0 0 0 气相色谱仪( c - c ) 美国t h e r m of i n n i g a n 公司 t r a c e d s q 气，质联用仪( g c m s )美国t h e r m of i n n i g a n 公司 l 1 2 药品及主要试剂 氯胺酮、去甲氯胺酮、丙基解痉素( s k is 2 5 a ) 对照品( 公安部二所) 盐酸氯胺酮注射液( 福建古田药业有限公司，批号：国药准字h 3 5 0 2 0 1 4 8 ) 甲醇为色谱纯；乙酸乙酯、十二烷基磺酸钠、丙酮、氢氧化钠、浓盐酸均为分析纯 1 1 3 溶液的配置 储备液的制备： l m g m e 氯胺酮、去甲氯胺酮甲醇液，黄4 c 冰箱保存； 2 0 0 p g m l 4 丙基解痉素( s k f 5 2 5 ) 甲醇液，置4 c 冰箱保存。 标准溶液的制备： 取储备液适量，用甲醇稀释成浓度为o 0 0 1 、0 0 0 5 、o o l 、0 0 5 、0 1 、o 5 m g m l l 的氯胺酮、 去甲氯胺酮系列标准溶液。 2 山西医辩大学碗士学位论文 1 1 4 实验动物 黑色豚鼠，体重2 0 0 + _ 2 0 9 ，购于山西医科大学实验动物中心，适应性喂养一周。 1 2 方法 1 2 1 豚鼠的分组、给药及毛发样品的采取 豚鼠的分组及给药的实验设计见图1 1 。给药前剃去豚鼠背部中央的毛发( 8 c m x 4 c m ) 作为取样区。灌胃组( i g ) 和腹腔注射组( i p 均以2 0 m g k g1 分别灌服和腹腔注射盐酸 氯胺酮水溶液；空白组灌服或腹腔注射相应剂量的生理盐水。单次给药组给药后第二天起 连续取样十天；连续给药组隔天给药，连续七次，首次给药后第二天开始隔天取样，连续 十次，所得毛发样品分别包装、常温保存待检。 图1 1 豚鼠氯胺酮滥用实验设计图 f i g 1 1t h ee x p e r i m e n t a ld e s i g n so fg u i n e ap i g sa b u s e dk e t a m i n e 1 2 2 毛发样品准备 毛发样品依次用1 0 m l 0 1 十二烷基磺酸钠( s d s ) 、0 1 洗洁精、双蒸水和丙酮震荡 洗涤一次，自然晾干。 准确称量洗净的毛发2 0 m g 置于玻璃试管中。添加2 0 0 9 9 m l 。标准s k f 5 2 5 a 内标液5 p l ， 0 ，5 m 0 1 l 1 盐酸2 m l ，漩涡混匀后4 5 c 水浴过夜。冷却至室温后用2 m o l l - n a o h 调节p h 至1 3 0 。乙酸乙酯5 m l 提取两次，振荡混匀，3 0 0 0 r m i l l 。离心1 0 m i n ，精密吸取有机层， 合并两次乙酸乙酯萃取液，8 0 ( 2 水浴下氮气流吹干，残渣以2 0 此甲醇定容，涡旋混匀， 取2 此色谱进样。空白毛发样品洗净后添加一定量氯胺酮和去甲氯胺酮标准液做确证和阳 性对照，样品处理同上。 3 1 2 3 g c 和g c ，m s 法分析 取上述检液2 n l 进样，g c m s 定性、c , - c 定量分析，其色谱条件为： g c 分析条件： 载气：氮气，恒流模式，流速1 5 m l r a i n l 。 进样条件：进样口温度2 8 0 ，空气6 0k p a , 氢气2 3k p a ，不分流进样。 色谱柱：d b 5 ( 3 0 m x 0 2 5 m m x 0 2 50 m ) 毛细管柱。 柱温：1 5 0 c ( 1 m i n ) _ 1 2 c m i n - * 2 7 0 c ( 1 m i n ) 。 检测器：n p d ，温度3 0 0 g c ，m s 分析条件： 载气：高纯氦气( 9 9 9 9 9 ) ，流速1 0 m l r a i n 一。 色谱条件：色谱柱为d b 5 m s ( 3 0m x 0 2 5m r n x 0 2 5l a m ) 毛细管柱，其余条件同上。 质谱条件：传输线温度2 5 0 。电子轰击电离源( e 1 ) ，电子能量7 0 e v ，离子源温度 2 0 0 。自动调谐方式，发射电流强度1 0 0u a 。全扫面定性，扫描起始时间3m i t t ，扫描范 围5 0 6 5 0 锄u 。 1 2 4 统计学处理 实验所得数据用均数4 - 标准差( 石螺) 表示，用s p s s1 1 5 软件进行统计学分析。 1 3 结果 1 3 1 氯胺酮、去甲氯胺酮及丙基解痉素( s k f 5 2 5 a ) 结构及质谱图 日 辟 j ：，s , i，5 哆芋t 。f 铆 lt i i ，5 哆r t - ! 一【 i 7i 。t j i 甲 舶钟7 0 锄帅i 1 1 0i i i 柚i i 1 1 0i i 柏2 0 0 卫0 脚脚2 棚剐 - ，z 图1 - 2 氯胺酮的结构及标准质谱图 f i g 1 2f u l l s c m a s ss p g c t i aa n dc h e m i c a ls t r u c t u r eo fs t a n d a r dk e t a m i n e 4 ；售4#lh蔷 山西医科大学瑚士学位论文 鹞 1 日5 f i 轴，! 哆t - 乱t l叶 1r 物 帕铀舯，0 钟i 1 1 01 2 0i l 棚l l 1 1 0l i 舶2 0 0 埘0 蜘埘柚蜘 a z 图1 - 3 去甲氯胺酮结构及标准质谱图 f i g 1 - 3f u l l - s c a um a s ss p e c t r aa n dc h e m i c a ls t r u c t u r eo f n o r k e t a m i n e f7 翟。佩邺一跏一凯0 a z 图1 - 4s k f 5 2 5 ( i s ) 结构及标准质谱图 f i g 1 _ 4 f u l l s c a n m a s ss p e c t r a a n dc h e m i c a ls t n l c t u r e o f s k f 5 2 5 ( i s ) =j呵葺皇：=看 山西医辩大学磺士学位论文 1 3 2 水解条件的选择 称取阳性毛发每份2 0 r a g ，分别添加2 0 0 耀m l 。的标准s k f 5 嚣 内标液5 斗l ，分别按以下 条件水解： 水解条件l ：加l m l 0 1 m o l l h c l 浸润，4 5 水浴过夜 水解条件2 ：加l m l 0 5 m o l l h c l 浸润，4 5 c 水浴过夜 水解条件3 ：加l m l 0 1 m o l l h c i 浸润，1 0 0 。c 水浴3 0 m i n 水解条件4 ：加l m l 0 5 m o l l h c l 浸润，1 0 0 。c 水浴3 0 m i n 冷却后其余操作同1 2 2 ，氯胺酮和代谢物去甲氯胺酮的分析结果如图1 5 和图l - 6 所示。 图l - 5 不同水解条件下k e s k f 镕a 峰面积比 f i g ，i 一5p e a ka l g ar a t i oo fk e s k f 镕 u n d e rd i f f e r e n th y d r o l y s i sc o n d i t i o n 1 阳性毛发一2 阳性毛发二3 阳性毛发三 图1 6 不同水麓条件下n k s k f5 2 5 a 蜂面积比 f i g 1 - 6p e a ka r e ar a t i oo fn s k f 5 2 5 au n d e rd i f f e r e n th y d r o l y s i sc o n d i t i o n 1 阳性毛发一2 阳性毛发二3 阳性毛发三 6 1 3 3 方法有效性分析 1 3 3 1 工作曲线 取空白毛发l o 份，每份2 0 m g ，分别添加0 0 5 、0 1 、0 5 、1 0 、2 5 、5 、1 0 、2 5 、4 0 、 5 0 、1 0 0 、2 5 0 r i g m g 。氯胺酮或去甲氯胺酮，并加入2 0 0 t x g m l 。的标准s k f 5 2 5 a 内标液5 此， 余下处理同1 2 2 ，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标作图， 求得直线回归方程、线性范围及最低检出限。结果见表1 - 1 。 表1 - 1 直线回归方程及最低检出限 t a b 1 ll i n e a rr e g r e s s i o ne q u a t i o na n d t h e l i m i t o f d e t e c t i o n 1 3 3 2 精密度和相对回收率 取空白毛发2 0 m g ，分别添加5 、4 0 、1 0 0 n g m 9 1 氯胺酮和去甲氯胺酮，每一浓度每日 进样5 次，连续测定3 天。以工作曲线法计算样品的浓度，与实际添加浓度对比，求得精 密度和相对回收率。结果见表1 2 。 表1 2 毛发中k e 和n k 的精密度与相对回收率( n = 5 ) t a b 1 2a c c u r a c ya n dp r e c i s i o no f k e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ei nh a i rs a m p l e s ( n = 5 ) 7 山西医科大学确士学位论文 1 3 4 毛发样品分析结果 1 3 4 1 毛发样品色谱分析结果 用药后豚鼠毛发中可检出氯胺酮及去甲氯胺酮，分析结果见图1 7 和图1 8 。 t | m 帅1 呻 围1 7 毛发中标准品总离子流图 f i g 1 7 t o t a li o n c u r r e n t c h r o m a t o g r a m s o f k e t a m i n c a n dn o r k e t a m i n ei n h a i r s a m p l e s ( t i c ) 1 去甲氯胺酮，2 氯胺酮，3 s k f s 签a 1 1 m 舯日 图1 8 用药后豚鼠毛发总离子流图 f i g 1 8 t o t a l i o n c u n e n t c h r o m a t o g r a m s o f h a i r o f g u i n e a p i g s a f t e ra d m i n i s t r e dk e t a m i n e ( t t c ) 1 去甲氯胺酮，2 氯胺酮，3 s l ( b 为 i，iz 山西医科大学碗士学位论文 1 3 4 2 毛发内氯胺酮和去甲氯胺酮的含量变化过程 豚鼠灌胃组和腹腔注射组在单次用药和连续用药情况下毛发不同节段中氯胺酮和去 甲氯胺酮测定结果见表l 一3 和表1 4 。毛发不同节段内氯胺酮和去甲氯胺酮的含量变化过程 见图1 - 9 至图1 1 2 。 表1 - 3 单次用药后毛发样品中氯胺酮和去甲氯胺酮的滚度( n = 6 ) t a b 1 3t h ec o n c e n t r a t i o no f k e t a m i n ea n dn o r k e t a m i n ei nh a i ro f g u i n e ap i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a m i n ew i t has i n g l ed o s e ( n = 6 ) 4 7 1 3 1 0 4 l 7 7 8 1 也3 9 0 9 4 3 6 - t 3 1 1 7 7 5 3 5 1 8 2 9 7 0 2 5 1 5 7 4 5 8 7 3 如9 9 4 4 7 2 6 l j 0 2 9 4 2 7 4 0 8 1 7 3 8 5 0 1 1 8 5 3 1 2 8 o 9 9 3 o ，5 6 1 0 0 d 5 1 2 2 6 蝴2 4 l 1 4 4 1 0 2 2 9 1 3 2 6 如3 0 6 1 ，0 9 3 0 m 6 0 7 8 l 蝴0 8 1 0 6 0 3 如0 9 4 0 5 8 l 士0 0 9 7 0 3 9 9 - 2 0 0 0 6 o 1 8 2 0 0 9 5 7 7 0 4 2 ，3 8 l 8 8 3 3 2 0 9 9 1 0 0 4 6 士3 1 7 5 8 5 5 2 也9 4 3 8 1 1 6 + 9 4 6 2 6 2 2 7 1 8 8 5 4 8 3 3 1 0 9 4 4 0 5 8 0 9 5 2 3 0 7 9 如7 7 2 2 0 9 5 0 4 7 9 0 9 3 2 如0 5 7 1 1 9 4 0 1 1 5 1 6 9 7 如0 9 4 1 0 9 2 0 0 9 7 1 0 2 7 ：t o 0 8 2 o 7 9 3 o 0 6 9 o 6 3 9 0 0 0 3 0 5 3 7 如0 5 4 0 3 3 1 0 0 8 7 o 1 5 2 0 0 0 8 表l - 4 连续用药后毛发样品中氯胺酮和去甲氯胺酮的浓度( n - - 6 ) t a b 1 - 4 t h e c o n c e n t r a t i o n o f k e t a m i n e a n d n o r k e t a m i n e i n h a i r o f g u i n e a p i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a m i n ew i t hc o n t i n u o u s d o s e s ( n - - 6 ) 7 3 8 9 i 9 8 4 1 0 3 4 3 + 9 5 0 9 1 2 6 2 9 3 1 1 8 1 3 8 9 8 3 4 5 9 1 5 1 6 9 ：l - 4 0 d 7 1 7 3 6 8 4 1 2 8 1 8 8 7 4 必9 9 2 2 0 0 6 8 5 1 9 4 1 7 5 6 7 士4 9 1 7 1 4 0 1 8 3 8 1 5 1 2 9 5 o 0 0 7 1 6 5 8 0 0 6 2 i 7 5 9 0 0 3 3 1 8 3 4 如0 3 4 2 0 6 4 士0 5 s 9 2 1 2 7 如0 ( ) 6 2 0 2 7 0 2 1 5 2 3 1 8 0 0 9 3 1 7 7 l 0 1 4 8 i 2 1 4 0 0 0 9 5 _ 3 5 1 0 5 9 4 9 0 6 1 + 9 舳7 io 3 6 3 2 3 8 5 1 1 7 1 9 1 3 5 4 1 3 3 8 7 2 0 5 9 1 5 7 8 9 蚂3 4 1 1 7 0 7 2 士4 f 5 5 4 1 8 3 4 1 4 0 9 3 1 6 9 6 5 3 9 8 8 1 4 2 3 5 4 0 l8 i 1 4 5 蝴0 3 4 1 3 3 l 如0 8 2 1 4 7 s o 0 0 2 1 7 7 l 如加l 1 8 0 t 0 0 8 3 1 7 9 4 由3 7 6 1 8 9 3 o 0 7 3 1 9 2 7 0 4 4 6 1 5 4 7 d 0 3 9 o 8 0 9 ：t o 2 5 l 9 l 2 3 4 5 6 7 8 9 k 3 5 7 9 n b 博”悖 图l - 9 单次用药后毛发内k e 的含量变化过程 f i g i - 9 c o n c e n t r a t i o n - t i n c u r v c o f k e i n h a i r o f g u i n e a p i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a m i n ew i t ha s i n g i cd o s e 图i - 1 0 单次用药后n k 的含量变化过程 f i g 1 - 1 0c o n c e n t r a t i o n - t i m ec u r v eo f n ki nh a i ro f g u i n e ap i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a m i n ew i t has i n g l ed o s e 1 0 图1 - 11 连续用药后k e 的含量变化过程 f i g 1 - 1 1c o n c e n t r a t i o n - t i m e c u r v e o f k e i nh a i r o f g u i n e a p i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a r n i n ew i t hc o n t i n u o u sd o s e s 图l - 1 2 连续用药后n k 的含量变化过程 f i g 1 - 1 2c o n c e n t r a t i o n - t i m ec u r v eo fn ki nh a i ro f g u i n e ap i g s a f t e ra d m i n i s t r a t e dk e t a m i n ew i t hc o n t i n u o u sd o s e s 1 4 讨论 1 4 1 滥用模型的建立 氯胺酮滥用多见于娱乐场所，吸食者多为青年人，很多被检者都说自己是第一次吸食 或是误服被人加入氯胺酮的饮料，因此氯胺酮滥用的法医学鉴定不只要求定性，还需对滥 用模式及滥用强度进行分析。本实验建立了氯胺酮单次服用和连续服用两种模式，分别研 究不同给药模式下氯胺酮在毛发内的代谢与分布。氯胺酮滥用一般是鼻吸、口服、静脉注 射、肌肉注射进入体内，鼻吸和口服( 饮水或食物中添加) 情况下，氯胺酮摄入量不易控 制，本实验采取灌胃和腹腔注射两种途径研究氯胺酮在豚鼠毛发内的分布与代谢。 嚣 本研究根据药物与化学物质毒性数据 6 1 及相关论著2 7 。s l ，按每k g 体重占有体表 面积相对比值推算豚鼠灌胃和腹腔注射氯胺酮的半数致死量( l d s o ) 值，在预实验的基础 上确定以2 0m g k 菩1 作为豚鼠氯胺酮染毒量。豚鼠灌胃常规给药量为5 1 0 m l k g 一，腹腔 注射常规给药剂量为o 5 l m l k g - l 【2 9 1 。灌胃给药时应尽量减少给药容积以免引起呕吐，同 时也应保证氯胺酮水溶液充分混匀。因此选择2 m l k g 。为灌胃体积，1m l k 9 1 为腹腔注射 体积。 1 4 2 水解条件的选择 毛发是由毛乳头的毛母细胞边生长边角质化而形成的，药物先进入未角质化的毛根部 区域后随着毛发生长而被包埋于毛发的角质细胞内，因此在分析前须先消化使其呈游离态 再提取。常用的消化方法有碱水解、酸水解、酶水解等。水解方法主要包括酸水解、碱水 解，酶水解等，后两种方法将毛发全部溶解形成均一溶液后提取，毛发中基质和黑色素可 能对分析结果造成影响，酸水解法操作简便，适用于大多数药物且提取回收率较高。本实 验比较了选取条件下各方法对k e 、n k 的提取效率，由图1 - 5 和图l - 6 可知，0 5 m 0 1 l 1 盐酸 条件下，k e 、n k 的提取效率较高，4 5 条件下水解提取效率和1 0 0 条件下相当且作用较 温和，因此实验选定0 5 t o o l 。l 1 盐酸4 5 水浴过夜作为水解方法。 1 4 3 氯胺酮在豚鼠毛发内的分布与代谢 血液中的氯胺酮及其代谢产物在毛发生长过程中，进入毛发根部区域，通过毛球内的 毛细血管，进入毛发细胞中，随毛发生长便存留于毛发中。由实验g c m s 定性结果可知服 用氯胺酮后可在毛发中检出其原体和代谢物去甲氯胺酮。表1 - 3 、表1 4 显示，大多数毛发 样品中，氯胺酮为主要检出物，去甲氯胺酮与氯胺酮浓度比值在0 0 6 - o 4 7 范围平均为0 1 8 ， 这与氯胺酮的亲脂性有关，k i k l l l ar t 3 0 等曾研究药物进入毛发的机制，发现药物在毛发中 的分布符合动物模型中的药代动力学参数，这说明药物从血浆到毛发的亲和力取决于药物 本身的特性，主要包括药物的酸碱性、亲脂性以及与黑色素的亲和力。研究证明碱性大、 亲脂性高、与黑色素亲和力强的药物与毛发的结合率较高。本实验结果与该研究基本一致， 氯胺酮p k a 7 5 ，脂溶性强，而去甲氯胺酮和脱氢去甲氯胺酮因极性较大，较难进入毛发。 因此虽然氯胺酮滥用后血浆中的k e 、n k 含量基本相当【3 ”，但在毛发中相差较大。 实验每日或隔日采取根部毛发检验，分段检测结果显示氯胺酮单次用药后第二天即可 山西医科大学磺士学位论文 在毛发中