（应用化学专业论文）无花果内生真菌FL25次生代谢产物的研究.pdf

无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 摘要 内生真菌长期生活在植物组织内部，与宿主协同进化，在演化过程中二 者形成了互惠共生的关系，在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要作 用。内生真菌可以产生一些重要的具有生物活性的化合物，对内生真菌次生 代谢产物的研究，可以筛选得到一些结构新颖、活性专一的物质。本文以无 花果一株具有良好抗菌活性的链格孢属似l t e r n a r i a ) 内生真菌f l 2 5 为研究对 象，通过对其次生代谢产物的研究，寻找具有良好生物活性的物质。 对具有活性的菌株f l 2 5 进行液体发酵，提取其代谢产物粗品( 4 9 9 ) ，经 硅胶柱粗分得到9 个组分f 1 f 9 。以5 株细菌金色葡萄球菌( s t a p h y l o c o c c u s a u r e u s ) 、乳链球菌( s t r e p t o c o c c u sl a c t i s ) 、枯草芽孢杆菌( b a c i l l u ss u b t i l i s ) 、绿 脓杆菌( p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a ) 和大肠杆菌( e s c h e r i c h i ac o l i ) 和lo 株植物 病原菌白菜黑斑病菌( a l t e r n a r i ab r a s s i c a e ) 、番茄灰霉病菌( b o t r y t i s c i n e r e a ) 、辣椒疫霉病菌( p h y t o p h t h o r ac a p s i c i ) 、苹果腐烂病菌( v a l s am a l i ) 、 西瓜枯萎病菌( f u s a r i u mo x y s p o r u mf s p n i v e u m ) ，烟草赤星病菌( a l t e r n a r i a a l t e r n a t a ) 、黄瓜枯萎病菌( f u s a r i u mo x y s p o r u mfs p c u c u m e r i n u m ) 、芍药炭 疽病菌( c o l l e t o t i r c h u mg l o e o s p o r i o i d e s ) 、草莓镰刀霉菌( f u s a r i u m o x y s p o r u m f s p f r a g a r i a e ) 、小麦赤霉病菌( f u s a r i u mg r a m i n e a r u m ) 以及一株霉 菌青霉菌( p e n i c i l l i u mg l a u c u m ) 为活性追踪的测试菌。结果显示，活性成分 主要集中在f 1 f 6 六个组分中。运用硅胶柱层析、s e p h d e x l h 2 0 柱层析、 薄层制备层析及重结晶等分离纯化手段，从f l 组分中得到化合物1 ；f 2 组 分得到化合物l 、2 ；f 3 组分中得到化合物3 ；f 4 组分中得到化合物4 ；f 5 组分得到化合物5 ；f 6 组分得到化合物6 。通过理化性质分析和波谱分析 ( m s ，n m r ) 最终确定了其中5 个化合物的结构：f u m i t r e m o r g i nb ( 1 ) ， f u m i t r e m o r g i nc ( 2 ) ，h e l v o l i ca c i d ( 3 ) ，c e r e v i s t e r o l ( 4 ) 和环( 苯丙丝) 二 肽( 5 ) 。光谱分析化合物6 可能是一个脑苷脂化合物。 接着对分离得到的纯品化合物( 1 ，2 ，3 和5 ) 对以上的5 种细菌、1 0 种 植物病原菌和1 种霉菌进行了最小抑制浓度( m i c ) 的测定。结果显示，四个 化合物对大部分的测试菌均具有很好的抑制效果。与阳性对照比较，化合物 3 的活性最好，其对细菌的抑菌活性在3 1 2 5 1 2 5l a 卧1 1 1 ，真菌的抑菌活性 在3 1 2 5 1 2 51 3 g r r a ；化合物1 和2 的抑菌活性相近；化合物5 的活性相对 较弱。 关键词：无花果，内生真菌，抗菌活性，次生代谢产物，最小抑菌浓度 i i s e c o n d a r ym e t a b o l i t e sf r o m f l 2 5 ，a n e n d o p h y t i cf u n g u si n 肌u sc 么r 凡： a b s t r a c t t h e r ee x i s t ss y m b i o s i sb e t w e e ne n d o p h y t i cf u n g u so f p l a n t sa n dt h e i rh o s t s ， n o wt h a te n d o p h y t i cf u n g u sl i v ei nb o t a n i c a lt i s s u e sf o ral o n gp e r i o do ft i m e ， a n de v o l v et o g e t h e rw i t ht h e i rh o s t s e n d o p h y t i cf u n g u sp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei n t h eg r o w t ha n de v o l u t i o no fp l a n t s ，a n dm a n yo ft h e mc a np r o d u c es o m e c o m p o u n d sw i t hn o v e ls t r u c t u r ea n ds p e c i f i cb i o a c t i v i t y t of i n da n t i m i c r o b i a l s u b s t a n c e s ，t h es e c o n d a r ym e t a b o l i t e so fa ne n d o p h y t i cf u n g u sa l t e r n a r i a s p f l 2 5w i t hs t r o n ga n t i m i c r o b i a la c t i v i t yf r o mf i c u sc a r i aw e r er e s e a r c h e di n t h i sp a p e r f l 2 5s t r a i nw i t ha n t i m i c r o b i a la c t i v i t yw a sf e r m e n t e di nl i q u i dc u l t u r e m e d i u m ，a n de x t r a c t e dt og i v e4 9 9c r u d ee x t r a c t t h ec r u d ee x t r a c tw a s s u b je c t e d t os i l i c ag e lu s i n gg r a d i e n te l u t i n gw i t hc h c l 3 一m e o h ( 1 ：o 一0 ：1 , v v ) t og i v e n i n ef r a c t i o n s ( f 1 - f 9 ) t h eb i o a c t i v es u b s t a n c e sc o n c e n t r a t e di ns i xf r a c t i o n s f1 - f 6 b y d e t e r m i n e do fa n t i m i c r o b i a l a c t i v i t ya g a i n s t f i v eb a c t e r i a s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ，s t r e p t o c o c c u sl a c t i s ，b a c i l l u ss u b t i l i s ，e s c h e r i c h i ac o l i ， p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a ，t e np l a n tp a t h o g e n i cf u n g iv a l s am a l i ，a l t e r n a r i a b r a s s i c a e ，b o t r y t & c i n e r e a ，p h y t o p h t h o r ac a p s i c i ，a l t e r n a r i aa l t e r n a t a ， f u s a r i u mo x y s p o r u m fs p c u c u m e r i n u m ，f u s a r i u mo x y s p o r u m fs p n i v e u m ， c o l l e t o t i r c h u mg l o e o s p o r i o i d e s ，f u s a r i u mo x y s p o r u m fs p f r a g a r i a e ，f u s a r i u m g r a m i n e a r u ma n do n em i l d e wp e n i c i l l i u mg l a u c u m s u b s e q u e n t l y , f1w a s r e c h r o m a t o g r a p h i e do ns i l i c ag e lu s i n gp e t r o l e u me t h e r - c h c l 3m i x t u r e so fa g r o w i n gp o l a r i t ya n ds e p h a d e x l h 2 0 ( c h c l 3 ：m e o h = i ：1 ) t oa f f o r dc o m p o u n d1 t h ef 2 - f 6w a sp r o c e s s e dw i t ht h es a m es i l i c ag e lc o l u m n ( c h c l 3 - - m e o h ) a n d s e p h a d e xl h 2 0t og i v ec o m p o u n d s1 ，2 ，3 ，4 ，5a n d6 t h ec o m p o u n d sw e r e i d e n t i f i e db ys p e c t r o s c o p i ca n a l y s i s ( m s ，1 h n m r , 1 3 c - n m r ) a n dc o m p a r e d w i t hr e p o r t e ds p e c t r a ld a t ai nt h el i t e r a t u r e t h em i n i m a li n h i b i t i o nc o n c e n t r a t i o n ( m i c ) o fc o m p o u n d s ( 1 ，2 ，3a n d5 ) a g a i n s tf i v ek i n d so fg e r m s ，t e nt y p i c a lp a t h o g e n i cf u n g ia n do n em i l d e ww e r e w a sm e n s u r a t e d i tw a sf o u n dt h a ta 1 1t e s t i n gc o m p o u n d se x h i b i t e da n t i m i c r o b i a l i i i a c t i v i t ya g a i n s tt h em o s tt e s t i n gm i c r o b e s c o m p o u n d3d i s p l a y e dt h es t r o n g e s t a n t i m i c r o b i a l a c t i v i t y w i t hm i cv a l u e sb e t w e e n3 1 2 5 1 2 5l ag m 1 b y c o m p a r i s o nw i t ht h ep o s i t i v er e f e r e n c e ，c o m p o u n d1a n d2d i s p l a y e ds i m i l a r a n t i m i c r o b i a la c t i v i t y ，c o m p o u n d5d i s p l a y e dw e a ka n t i m i c r o b i a la c t i v i t y k e y w o r d s ：f i c u sc a r i c a l ，e n d o p h y t i cf u n g i ，a n t i m i c r o b i a la c t i v i t y ， s e c o n d a r ym e t a b o l i t e s ，m i n i m u mi n h i b i t i o nc o n c e n t r a t i o n i v 无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 原创性声明及关于学位论文使用授权的声明 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：避 日 期： 2 迦驻玉鱼 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解陕西科技大学有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权陕西科技大学可以将本学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学 位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供 信息服务。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：望蜘师签名：墨勉目期：2 q 骘幽 无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 1 文献综述 1 1 引言 植物内生真菌( e n d o p h y t i cf u n g i ) 长期生活在植物组织内部，与宿主协同进化，在演化 过程中二者形成了互惠共生的关系，在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要作用。 植物内生真菌可以产生一些重要的具有生物活性的化合物，对内生真菌次生代谢产物的 研究，可以筛选得到一些结构新颖、活性专一的化合物。到目前为止，已经从植物内生 真菌的发酵物中分离得到了许多结构新颖、活性多样的次生代谢产物。下面就植物内生 真菌产生的次生代谢产物的研究概况作一简单介绍。 1 2 植物内生真菌次生代谢产物的研究概况 目前内生真菌的研究主要集中在抗癌药物、抗生素、抗氧化剂、免疫抑制剂、植物 生长调节物质等有潜在应用价值的代谢产物。而从目前的研究成果来看，抗菌活性成分 以及抗肿瘤活性成分是植物内生真菌产生的主要次生代谢产物。 1 2 1 抗菌活性成分 从植物内生真菌中分离得到了许多结构新颖的抗菌化合物，从结构上来看主要有生 物碱、萜类、醌类、甾体类等。 a 生物碱 1 9 9 5 年，h o r n 等【l 】从细柱o p ( s a l x g r a c i l i s t y l av a r m e l a n o s t a c h y s ) p 勺生真菌拟茎点霉菌 ( p h o m o p s i ss p ) 分离得到一个细胞松弛素类生物碱p h o m o p s i c h a l a s i n ( 1 ) ，该生物碱对枯 草芽孢杆菌( b a c i l l u ss u b t i l i s ) 、金黄色葡萄球菌( s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ) 、鸡沙门氏菌 ( s a l m o n e l l ag a l l i n a r u m ) 、白色念珠菌( c a n d i d aa l b i c a n s ) 具有明显的抑制作用。2 0 0 0 年， o s t e r h a g e 等【2 】在绿藻( u l v as p ) 中分离得到一株内生真菌a s c o c h y t as a l i c o r n i a e ，从其发 酵液中分离出具有抗菌活性的a s c o s a l i p y r r o l i d i n o n e sa ( 2 ) ，在浓度为5 0 i t g 培养皿时，对 b a c i l l u sm e g a t e r i u m ，m y c o t y p h am i c r o s p o r u m ，m i c r o b o t r y u mv i o l a c e u m 的抑菌圈分别为 5 m m ，4 m m 和2i n n 。2 0 0 2 年，h e l l w i g 等【3 】从两株植物内生真菌彳抛聊口砌s s p p 0 5 0 6 和p 0 5 3 5 的发酵物中分离得至u a l t e r s e t i n ( 3 ) 和一个已知的化合物t e n u a z o n i ca c i d ( 4 ) 。这两个化合物 对g + 菌具有很好的抑制作用。2 0 0 4 年，t a n 等【4 】从植物狗牙根c 咖d d 锄d a c t y l o n 的树叶中 分离得到一株内生烟曲霉a s p e r g i l l u s f u m i g a t u sc y 0 1 8 ，从该菌株的发酵物中首次得到一 个新生物碱化合物a s p e r f u m o i d ( 5 ) 。该化合物具有抑制白色念珠菌c a n d i d aa l b i c a n s 的活 性，其m i c 值为7 5 p , g m l 。而作为阳性对照的k e t o n a z o l e 对白色念珠菌的m i c 为3 1 5r t g m l 。 接着2 0 0 5 年，t a n 等 5 1 还从植物狗牙根( c y n o d o nd a c t y l o n ) 树叶的一株内生真菌 陕西科技大学硕士学位论文 c l a d o s p o r i u mh e r b a r u mi f b e 0 0 2 的发酵物中分离得到了吡啶生物碱a s p e m i g r i na ( 6 ) 。活 性测试显示该化合物对c a n d i d aa l b i c a n s 的最小抑制浓度为7 5 o 肛g m l 。2 0 0 6 年，朱峰等【6 1 把混合发酵技术应用于两株南海红树内生真菌( 菌株编号1 9 2 4 和3 8 9 3 ) 的培养，结果产生 了1 个新的1 异喹啉酮类生物碱m a r i n a m i d ea ( 7 ) 和其甲酯( b ) ( 8 ) 。通过完整的波谱数据 ( 主要是二维核磁共振谱) 解析其结构分别为4 ( 2 吡咯基) 1 异喹啉酮3 一甲酸( a ) 和4 ( 2 吡咯基) 1 异喹啉酮3 甲酸甲酯( b ) 。在初步抗菌活性实验中发现m a r i n a m i d e ( a ) 和其甲 酯( b ) 在浓度为l l x g m l 时，对e s c h e r i c h i ac o l i 的抑茵圈直径为1 4 和2 0c m ，对 p s e u d o m o n a sp y o c y a n e a 为0 9 和1 7c n l ，对s t a p h y l o c o c c u sa u e r e u 的抑菌直径为1 0 和1 3 e m 。2 0 0 6 年，h u 等【7 】从白菜的一株内生真菌t r i c h o d e r m as p 的发酵物中分离得到一个1 3 元的大环内酰胺生物碱i f b l a c t a m 1 ( 9 ) ，该化合物能够抑制柿子炭疽病的生长。2 0 0 7 年 p o n g c h a r o e n 等【8 】从植物g a r c i n i ad u l c i s 的叶中分离得到一株内生真菌e u t y p e l l as c o p a r i a p s u - d 4 4 ，从该菌株的发酵物中首次分离得到了两个新的生物碱s c o p a r a s i n sa 和b 。抗菌 活性显示化合物s c o p a r a s i n sb ( 1 0 ) 对m i c r o s p o r u mg y p s e u ms h m u - 4 具有抑制活性，其 m i c 为3 0 3p m 。c e r u l e n i n ( 1 1 ) 是从法国圭亚那的热带雨林植物的无症状叶内生真菌 e 9 9 4 0 1 发酵液中分离得到的，c e r u l e n i n f l 邑抑制脂肪酸和p o l y k e t i d e 合酶，从而具有抗假丝 酵母菌的活性【9 1 。此外倪志伟等【1 0 】从美登木叶中分离筛选到具抗菌活性的内生真菌 c h a e t o m i u mg l o b o s u ml y 5 0 菌株，利用活性追踪法在其发酵产物中分离得到抑制橙色青 霉菌和抑制结核分枝杆菌的化合物，经e s i m s 、n m r 等波谱数据确认该活性成分为球 毛壳甲素c h a e t o g l o b o s i na 和球毛壳乙素c h a e t o b o s i nb 。首次发现c h a e t o g l o b o s i nb ( 1 2 ) 具 有抑制结核分支杆菌活性。2 0 0 7 年，r u k a c h a i s i r i k u l 等【l l 】从植物g a r c i n i ad u l c i s 的一株内 生真菌p s u d 1 5 的发酵物中首次分离得到一个新的酰胺二聚体生物碱p h o m o e n a m i d e ( 1 3 ) 。p h o m o e n a m i d e 对细菌m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i sh 3 7 r a 具有中等强度的抑制作用， 其m i c 为6 2 5 i t g m l 。而治疗肺结核的标准药物利福平、卡那霉素、异烟肼的m i c 分别为 0 0 4 7 ，1 2 5 和0 2 5 舢。 2 2 o 3 无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 4 o hh 5 o ro h 7 a r = h ，8b r = c h 3 9 1 11 2 h h 6 o on 士 1 0 1 3 b 萜类 k o s h i n o 等【1 2 】从梯牧草( p h l e u mp r a t e n s e ) 内生真菌柱香菌( e p i c h o l o et y p h i n a ) d 尸分离得 n 7 个倍半萜类化合物c h o k o l sa g ( 1 4 2 0 ) ，通过薄层层析一生物自显影检测对草本枝孢 ( c l a d o s p o r i u mh e r b a r u m ) 有明显的抑制活性。其中c h o k o lb 、c 、d 在5 i ，t g s p o t 就能抑制草 本枝孢的生长，c h o k o la 的m i c 为2 5 1 t g s p o t ，c h o k o le 和g 的m i c 为5 0 9 9 s p o t 。k i m 等【1 3 】 从植物t a x u sc u s p i d a t e d x 枝中分离得到内生真菌p e r i c o n i as p ，其发酵液中分离出两个具 抗细菌活性的新的f u s i c o c e a n ed i t e r p e n e s ：p e r i c o n i c i n sa ( 2 1 ) 和b ( 2 2 ) 。p e r i c o n i c i na 对 g + 和g 菌都显示出很好的抑制活性，包括b a c i l l u ss u b t i l i s ，s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ， k l e b s i e l l a p n e u m o n i a e 以及s a l m o n e l l a 耖p h i m u n u m ，其m i c 为3 1 2 1 2 5 9 9 m l ，可与庆大 霉素相比。p c r i c o n i c i nb 对上述细菌也显示一定的抑制活性，其m i c 为2 5 5 0r t g m l 。以 庆大霉素为对照，这两个化合物可作为抗细菌药物的先导化合物。p e l a e z 等【1 4 】从一种刺 柏( j u n 勿e m sc o m m u n i s ) 叶子中分离得到内生真菌h o m o n e m as p ，从其代谢产物中分离得 到一个新的三萜糖苷e n f u m a f u n g i n ( 2 3 ) ，该化合物对念珠菌、曲霉菌表现出很强的抑制活 性。体内实验显示对播散性念珠菌病模型小鼠有效，此外该化合物的抗菌谱以及对烟曲 霉形态的影响与临床葡聚糖合成抑$ 1 齐l j ( p n e u m o c a n d i nb ) 几乎有相同的抗菌谱和抑制活 性。 3 硭 陕两科技大学硕士学位论文 盯1 r 、秽举吖掣? 1 r 、丫 n 1 4 c h o k o l a r = h 1 9c h o k o l f r = a c 1 51 6c h o k o lr 1 = o hr 2 = h 1 7c h o k o lr i = hr 2 = o h 小、甲、一掣 1 82 02 1 c 醌类化合物 2 0 0 1 年，k r o h n 等【1 5 】从颠茄的内生真菌m y c e l i a s t e r i l a 中分离得到6 个活性化合物 p r e u s s o m c r i n sg - l t 5 1 ( 2 4 , - , 2 9 ) ，其中j 、k 、l 为新化合物。活性测试表明p r e u s s o m e f i n s 对革 兰氏阳性菌b a c i l l u sm e g a t e r i u m 和真菌m i c r o b o t r y u mv i o l a c e u m 有中等强度的抑制作用，而 且p r e u s s o m e r i ng 据报道有显著的f p t 酶抑制活性。邵长伦等【l6 】在湛江红树k a n d e l i a c a n d e f f f 中子中分离得到一株内生真菌b 7 7 ，从该菌的培养液中分离得到4 个化合物，其中 3 - 0 一m e t h y lf u s a r u b i n ( 3 0 ) 和f u s a r u b i n ( 3 1 ) 为首次从海洋真菌中分离得到，初步的药理活性 显示，它们对s t a p h y m o c c u sa u r e u sa t c c2 7 1 5 4 的m i c 分别为5 0 0 和1 2 5 “g m l 。 m a c a s r u b a l c a v a 等从植物c a l l i c a r p aa c u m i n a t e 叶子中获得一株内生真菌e d e n i a g o m e z p o m p a e ，从其发酵液中分离出三个化合物( n a p h t h o q u i n o n es p i r o k e t a l s 且p 萘醌螺酮 缩醇) ：p r e u s s o m e r i ne g l ( 3 2 ) ，p r e u s s o m e r i ne g 2 ( 3 3 ) 和p r e u s s o m e r i ne g 3 ( 3 4 ) 。活性测 试选用来自植物c a c u m i n a t a ，v e r b e n a c e a e 的三株内生真菌( c o l l e t o t r i c h u ms p ，p h o m o p s i s s p 和g u i g n a r d i am a n g u i f e r a ) 和四种植物病原菌( p h y t h o p h t o r ac a p s i c i ，跏t h o p h t o r a p a r a s i t i c a ，f u s a r i u mo x y s p o r u m 和a l t e r n a r i as o l a n o 。这3 种化合物对所有测试菌显示很好 的抑制作用，其对四种植物病原菌的i c 5 0 为2 0 , - - 1 7 0p g m l t 17 1 。a l y 等1 1 8 1 从植4 1 j j u r o s p e r m u m p i c r o i d e s 中分离得到一株内生真菌a m p e l o m y c e ss p ，从该菌株的发酵液分离得到1 4 个化合 物，其中化合物3 - o - m e t h y l a l a t e r n i n0 5 ) 和a l t e r s o l a n o la ( 3 6 ) 对g + 菌s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ， 4 无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 s e p i d e r m i d i s 和e n t e r o c o c c u sf a e c a l i s 有很好的抑制作用，化合物3 5 对s e p i d e r m i d i s ， s a u r e u s ，e f a e c a l i s 的m i c 为1 2 5 i t g m l ，化合物a l t e r s o l a n o la 对s e p i d e r m i d i s 和e f a e c a l i s 的m i c 为1 2 5p 酌n l ，对s a u r e u s 的m i c 为2 5 1 t g m l 。2 0 0 8 年，k u s a r i 等【1 9 1 在药用植物 h y p e r i c u mp e r f o r a t u m 的茎中分离得到一株内生真菌，从其发酵液中分离得到两个 n a p t h o d i a n t h r o n e 衍生物h y p e r i c i n ( 3 7 ) 和e m o d i n ( 3 8 ) 。化合物e m o d i n 是化合物h y p e r i c i n 的 代谢途径的先驱。以g + 细菌s t a p h y l o c o c c u sa u r e u ss s p a u r e u s ( d s m7 9 9 ) ，g 细菌k l e b s i e l l a p n e u m o n i a es s p o z a e n a e ( d s m6 81 ) ，p s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a ( d s m112 8 ) ，s a l m o n e l l a e n t e r i c as s p e n t e r i c a ( d s m9 8 9 8 ) 和e s c h e r i c h i ac o l i ( d s m6 8 2 ) 以) 3 乏a s p e r g i l l u sn i g e r ( d s m 1 9 8 8 ) 和c a n d i d aa l b i c a n s ( d s m1 3 8 6 ) 为测试菌，两个化合物对上述细菌和真菌都有很好的 抑制作用。化合物h y p e r i c i n ( 9 4 ) 可作为作为工业化生产的、有经济效益、易获得的药物。 oo h oo h 3 1 r 粥气 2 5l b h2 8r = o h2 93 0 2 6r = o c h 3 2 7r = o c o c h 3 oo hoo h d 甾体类 o hoo h 3 6 oo r 3 23 3r = o h3 4 r = o c h 3 o hoo h 3 7 o hoo h 3 5 o 3 8 一露。一鸳。一露。一鬻。 争一 陕西科技大学硕士学位论文 2 0 0 0 年，l u 等【2 0 】从黄花蒿( a r t e m i s i aa n n u a ) 获得一株内生真菌c o l l e t o t r i c h u ms p ，从 其发酵物中分离得到2 个新的甾体化合物3p ，5 a d i h y d r o x y - 6 1 3 一a c e t o x y - e r g o s t a - 7 ，2 2 - d i e n e ( 3 9 ) 和3 p ，5 a d i h y d r o x y - 6 1 3 一p h e n y l a c e t y l o x y - e r g o s t a - 7 ，2 2 - d i e n e ( 4 0 ) 以及3 个已知的甾体化 合物3 d h y d r o x y - e r g o s t a - 5 - e n e ( 4 1 ) ，3 p - h y d r o x y - 5 a ，8 a e p i d i o x y - e r g o s t a 一6 ，2 2 - d i e n e ( 4 2 ) ， 3 - o x o e r g o s t a - 4 ，6 ，8 ( 14 ) ，2 2 一t e t r a e n e ( 4 3 ) 。这5 个化合物对测试细菌( b a c i l l u ss u b t i l i s ， s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ，s a r c i n al u t e a 和p s e u d o m o n a ss p ) 具有抑制活性，其m i c s 介于2 5 7 5 p g m l 。代谢物7 0 , - , 7 2 和7 4 对真菌c a n d i d aa l b i c a n s 和a s p e r g i l l u sn i g e r = 百抑制作用，其m i c s 介于5 0 1 0 0 1 x g m l 。在浓度为2 0 0 i _ t g m l 时，化合物7 0 - - - 7 3 被认为对农作物病原真菌 g a e u m a n n o m y c e sg r a m i n i sv a r r i t i c i ，r h i z o c t o n i ac e r e a l i s ，h e l m i n t h o s p o r i u ms a 疗u m 和 p h y t o p h t h o r ac a p i s i c i 具有抑制作用。2 0 0 1 年，l i 等【2 l 】在药用植物中分离出3 2 株内生真菌， 其中1 6 株的代谢产物具有抗幽门螺旋杆菌h e l i c o b a c t e rp y l o r i 的活性，h e l i c o b a c t e rp y l o r i 被认为是慢性胃炎和消化道、十二指肠溃疡的的一个重要发病原因。其中从内生真菌 a s p e r g i l l u ss p ( 菌株标号为c y 7 2 5 ) 的发酵液中分离出3 种蝴c d 蚰盯刀怕以的甾类化合 物：h e l v o l i ca c i d ( 4 4 ) ，e r g o s t e r o l ( 4 5 ) 和3 b - h y d r o x y - 5 a ，8 a - e p i d i o x y - e r g o s t a - 6 ，2 2 - d i e n e ( 4 0 3 ， m i c s 分别为8 0 ，2 0 0 和3 0 0 p g m l ，而用作h e l i c o b a c t e r p y l o r i 的阳性对照的氨苄青霉素的 m i c 为2 o p g m l 。而化合物h e l v o l i ca c i d 对供试菌的s a r c i n al u t e a ，s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s 和 c a n d i d aa l b i c a n s 的m i c s 分别为1 5 0 ，2 0 0 和3 0 0 r t g m l 。a s c o s t e r o s i d e sa ( 4 7 ) 和b ( 4 8 ) 是从 c i s t u ss a l v i f o l i u s 枝芽中分离得到的一株内生真菌e 9 9 2 9 1 发酵液中分离的。a s c o s t e r o s i d e a 能抑隹j i j b ( 1 ，3 ) 葡聚糖的合成，从而具有抗白色念珠菌的活性。a n m d i f u n g i n ( 4 9 ) 的结构 与a s c o s t e r o s i d e s 有关联，也能抑$ u b ( 1 ，3 ) 一葡聚糖的合成。最初是 ) l a r t h r i n i u ma r u n d i s 中 分离得到的。这3 个化合物具有很大的抗腐生、植物和人类病原真菌的活性，其抗真菌活 性可与a m p h o t e r i c i nb 相比l 9 j 。 4 2 6 4 1 4 3 无花果内生真菌f l 2 5 次生代谢产物的研究 1 2 2 抗肿瘤活性成分 4 5 4 7 4 9 目前为止从植物内生真菌的次生代谢产物中分离得到了许多的结构新颖的抗肿瘤活 性成分，它们主要有生物碱类、酯类、黄酮类以及其它一些结构的化合物等。 a 生物碱类 长春新碱5 0 是1 9 6 2 年由长春花中提取出的二聚吲哚类化合物，主要存在于长春花 叶中。长春新碱是一种应用广泛的抗肿瘤药物，尤其对白血病具有显著疗效，其通过干 扰癌细胞纺锤体形成使细胞有丝分裂停止于中期，从而阻止癌细胞的扩散【2 2 1 。杨显志等 【2 3 】从长春花叶中分离出一株无孢菌群菌株9 7 c y 3 ，从该菌的发酵液中发现了长春新碱化 合物，经h p l c 分析其含量达到o 2 0 5 g l 。 球毛壳甲素a ( c h a e t o g l o b o s i na ) ( 5 1 ) 是s e k i t a 掣2 4 】于1 9 8 3 年新发现的抗癌化合物，是 一种细胞分裂抑制剂，它是通过影响细胞内的收缩蛋白而抑制细胞质的分裂。张玲琪等 阅首次报道了从云南西双版纳州美登木( m a y t e n u sh o o k e r i ) 的茎、叶中分离筛选到一株内 生真菌c h a e t o m i u mg l o b o s u m9 8 m 6 ，从该菌的发酵液中得到了球毛壳甲素。 2 0 0 6 年，w a g e n a a r 等【2 6 】从传统药用植物雷公藤( 聊纪w 酽“朋w i l f o r d i i ) 株内生真菌 r h i n o c l a d i e l l as p 的发酵液中分离得到了四个生物碱c y t o c h a l a s i n sa d ( 5 2 , - 5 5 ) 。其中化 合物9 对测试的三种肿瘤细胞( 卵巢癌细胞a 2 7 8 0 s 、结肠癌细胞s w 一6 2 0 、结肠癌细胞 h c t1 1 6 ) 的细胞毒活性最强，其它三个化合物同样具有细胞毒活性，但是活性比化合物9 7 陕西科技大学硕士学位论文 相对较弱，选择性也不如化合物9 。x i n 等【2 7 】从低等植物m y c a l ep l u m o s e 的一株青霉属内 生真菌a u r a t i o g r i s e u m 的发酵液中得到了一个已知生物碱f r u c t i g e n i n e sa ( 5 6 ) 。该化合物对 癌细胞t s f t 2 1 0 具有细胞毒活性。2 0 0 6 年，t a n 等【2 8 】从植物l l m p e r a t ac y l i n d r i c a 得到一株内 生真菌c h a e t o m i u mg l o b o s u mi f b e 0 1 9 的代谢产物中得到一个新生物碱c h a e t o g l o b o s i nu ( 5 7 ) 以及4 个已知生物碱c h a e t o g l o b o s i n sc ，e ，f ( 5 8 6 0 ) 和p e n o c h a l a s i na ( 6 1 ) 。这五个化 合物对人鼻咽表皮肿瘤k _ b 细胞具有抑制活性。t a n 等t 2 9 】还从植物彳锄印办d 朋a x i l l i f l o r a 的树叶中一株内生真菌c h a e t o m i u ms p i f b e 0 1 5 的代谢产物中得到一个具有新颖结构的 生物碱c h a e t o m i n i n e ( 6 2 ) ，该化合物对白血