吡啶类药物分析.ppt

吡啶类药物的分析,胡少聪2019，4，17,目录,吡啶类药物的分子结构中均含有氮吡啶环。典型代表药物有异烟肼、尼可刹米、硝苯地平、尼莫地平和尼群地平。,化学结构与性质,化学结构与性质,化学结构与性质,1.戊烯二醛反应（Konig反应）：指当溴化氰与芳香第一胺作用于吡啶环，使环上氮原子由3价转变成5价时，吡啶环水解，形成戊烯二醛后再与芳香第一胺缩合成有色的戊烯二醛衍生物的反应。注意戊烯二醛衍生物的颜色随所用芳香第一胺不同而有所不同，如与苯胺缩合形成黄至黄棕色；与联苯胺则形成淡红至红色。,一、吡啶环的开环反应,方法：取尼可刹米1滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰试液2ml与2.5%苯胺溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。,戊烯二醛反应（Konig反应）：,二硝基氯苯反应（Vongerichthe反应）原理：在无水条件下，将吡啶及其某些衍射物与2,4-二硝基氯苯混合，共热或使其热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色的反应。注意：尼可刹米、异烟肼和异烟腙等，需经适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后才有此反应。中国药典已用于异烟腙的鉴别。,一、吡啶环的开环反应,二硝基氯苯反应（Vongerichthe反应）,方法：取异烟肼5mg，加乙醇溶解后，加2，4-二硝基氯苯0.1g，置水浴锅上加热5分钟，放冷，加氢氧化钠-乙醇溶液（110）1ml,溶液即显紫红色。,1、还原反应（银镜反应）：原理：异烟肼具有酰肼基，酰肼基的还原性较强，当与氨制硝酸银试液作用时，即被氧化成异烟酸胺，并生成金属银黑色浑浊和气泡（氨气），在玻璃试管壁上产生银镜。中国药典将其用于异烟肼的鉴别。,二、酰肼基的反应,方法：取异烟肼约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡（氮气）与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。反应式如下：,1、还原反应（银镜反应）,2、缩合反应：原理：异烟肼具有末端酰肼基，酰肼基可以与芳醛缩合形成腙，析出结晶型，可测定其熔点。最常用的芳醛为香草醛，其次是对二甲氨基苯甲醛、水杨醛等与1，2萘醌4磺酸在碱性介质中可缩合显红色，凡具有NH2或活性CH2基者均有此反应。,二、酰肼基的反应,方法：取本品0.1g，加水5ml溶解后，加10%香草醛的乙醇溶液1ml，摇匀，微热，放冷，即析出黄色晶体；滤过，用稀乙醇重结晶，在105干燥后；测定熔点，其熔点为228231，熔融时同时分解。（异烟腙，黄色）,2、缩合反应：,（1）原理：本类药物具有吡啶环的结构，可与重金属盐类（如氯化汞、硫酸铜、碘化铋钾）及苦味酸等试剂形成沉淀。如尼可刹米可与硫酸铜及硫氰酸铵作用生成草绿色配位化合物沉淀。,三、形成沉淀的反应,（2）方法：取尼可刹米2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸氨试液3滴，即生成草绿色的沉淀。,原理：尼可刹米与氢氧化钠试液加热，酰胺键水解，即可有二乙胺臭味逸出，使红色石蕊试纸变蓝；中国药典采用此方法鉴别尼可刹米。,四、分解产物的反应,方法：取尼可刹米10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙胺的臭气，使红色石蕊试纸变蓝；,1、与氢氧化钠试液共热,2、与无水碳酸氢钠或氢氧化钙共热,原理：异烟肼，尼可刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味析出。,紫外-可见分光光度法,原理：,紫外与红外对吡啶类的鉴别,中国药典利用紫外-可见分光光度法对托吡咔胺进行鉴别，方法为：取本品，加0.1mol/l硫酸溶液制成每1ml中约含有25ug的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在波长220350nm范围内，仅在254nm的波长处有最大吸收。红外吸收光谱特征性强，能专属性的反义分子结构的官能团信息，常用于原料药的鉴别。中国药典对异烟肼，尼可刹米，托吡卡胺的吡啶类药物均用红外分光光度法进行鉴别，利用供试品的红外吸收图谱与对照品的图谱一致进行鉴别。,高效液相色谱法,高效液相色谱法具有高压、高速、高效、高灵敏度等优点，适用于分析含有较多有关物质的杂环类药物。中国药典利用该方法对异烟肼、异烟肼片、和托吡卡胺滴眼液进行鉴别。规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。,概述：异烟肼是一种不稳定的药物，其中的游离肼是由制备时原料引入，或在贮存过程中降解而产生。而肼又是一种诱变剂和致癌物质，因此国内外药典多数规定了异烟肼原料药及其制剂中游离肼的限量检查。常用的方法有薄层色谱法，比浊法和差示分光光度法。,异烟肼的杂质检测项目和方法,（1）原理：中国药典对异烟肼及异烟肼片中游离肼的检查方法采用薄层色谱法，利用薄层色谱法分离肼后，以对二甲氨基苯甲醛与肼反应生成腙显色，进行比较。方法：溶解液：丙酮-水（1；1）供试品：异烟肼（1ml/100mg）对照品：硫酸肼（1ml/0.08mg=游离肼20ug）系统适用性试液溶液：（供试品+对照品）各吸取5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-丙醇（3；2）为展开剂展开，晾干。喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液（显色剂），15min后检视，系统适用性试液溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离。游离肼的Rf值约为0.75，异烟肼的Rf值约为0.56,在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,1、异烟肼中游离肼的检查,方法：供试品：异烟肼（1mg/0.5mg）对照品：异烟肼（1mg/0.005mg）按照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10ul注入液相色谱仪，调节灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%；再精密量取供试品溶液和对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照品主峰面积的0.35倍（0.35%）各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液主峰面积（1.0%）。,2、异烟肼中有关物质的检查,方法：供试品：尼可刹米(4mg/ml)对照品：尼可刹米(0.04mg/ml)填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇-水（30：70），检测波长为263nm。理论塔板数按尼可刹米峰计算不低于2000，尼可刹米峰与其相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液10ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%；再精密量取供试品溶液和对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的（0.5%）。,尼可刹米中有关物质检查,异烟肼含量测定方法的依据是：异烟肼中酰肼基具有还原性。可采用氧化还原滴定法测定其含量，溴酸钾法、碘量法、溴量法最为常用。中国药典（1963年版）曾采用溴量法测定异烟肼的含量。我国药典自1977年版改为在强酸性溶液中用溴酸钾滴定液直接滴定法，用甲基橙指示剂（小于3.1红色，3.14.4橙色，大于4.4黄色）指示终点；同时采用本法测定异烟肼片和注射剂的含量。,含量测定,1、溴酸钾法,方法：取注射用异烟肼装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取0.2g，置100ml量瓶中，用水定容，摇匀；精密量取25ml，加水50ml，盐酸20ml与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定。（温度保持在1820）至粉红色消失。每1ml溴酸钾试液=3.429mg异烟肼。,原理：吡啶类药物分子中的吡啶环具有碱性，在冰醋酸溶液（非水溶剂）中与高氯酸定量反应生成高氯酸盐，以结晶紫（pH0.5（绿）2.0(蓝）为指示剂指示终点。方法：取尼可刹米约0.15g，精密称定，加冰醋酸10ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于17.82mg的尼可刹米。,非水溶液滴定法,原理：吡啶类药物含有吡啶环，具有特征的紫外吸收特征。测其最大吸收波长处的吸光度，再利用此波长处的百分吸光系数计算其含量。方法：尼可刹米注射液的含量测定：用移液管精密量取本品2ml，置于200ml量瓶中，用0.5%硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，加0.5%硫酸溶液定量稀释成每1ml中约含有尼可刹米20ug的溶液。照紫外-可见分光光度法，在263nm的波长处测定吸光度，按尼可刹米的吸收系数为292计算即得。,紫外-可见分光光度法,1.原理：中国药典采用高效液相色谱法对异烟肼，异烟肼片和注射用异烟肼的含量