（生物物理学专业论文）纤维质酒精发酵的菌种选育及发酵条件的研究.pdf

吉林农业大学硕士学位论文 纤维质酒精发酵的苗种选育及发酵条件的研究 中文摘要 拳文研究了酿酒酵母 s a c c h a r o m y c e sc e r c v i s i a e y t 3 1 8 ) 发酵圩鲶素物质 烈曼券秸秆为滕耪) 转化为燃姆疆糖的工艺过程，通过紫 线诱变法选育高产 莲妹y t 3 1 8 。y t 3 1 8 菌株与出发蓠钵y 弧8 搬比，产酒精能力提高了1 5 ，发酵周期缩 短了1 2 小时。刺罔蒸汽爆破法对终雏痿艨耪预处埋其抚戡务傍为：压力劳1 2 m p a ， 持压时藏5 f n i n ，毖转化搴为6 7 7 2 。从而建立了一耪预懋理原糟对居期发酵作罔 效应的姨速分析方法。 本文还对嚣襄酒精发酵过程庭营养因子遗行了系统研究炭理y t 3 1 8 对未 糖、葡萄糖有较强的酒精发酵力+ 过高的糖浓度，有毒酾物质，温度，酸度等都 能够成为抑制发酵的西素。这些因素有盛是在发酵前期起作用，如底物抑制作用 和过高的酸度，有耍则农发酵后期影响发酵的进行，如酒精和二氧化碳，覆有瓿 陵的抑制作用。值得注意的楚本文讨论的各个因素的协同作用对发酵的抑制作用 更强。 在发酵初期高于1 0 的总糖会产生抑黼作用。因此发酵醪中低水平的底物 浓度有利于酒精产量提高。采用分批补料的供糖方式的发酵可将原料利用率从 8 2 6 2 提高到8 8 5 1 。因此在发酵初期底物抑制作甩比发酵后期酒精的毒性作 用要大。氮源的添加有利于酒精的生产。同样发酵条件下，添加氮源可以将发酵 时间太幅度缩短。尿素楚最佳的无帆氮源，由于酵母细胞对氮源吸收利用特点， 在发酵初期氧源需要保持较高水平。氧气有剥于细胞生长和存活因子的生产因 此在发酵过程中保持一定量的分子氧对发酵有促进作用。 y t 3 1 8 菌辕谗为最佳工艺发酵茸对经预楚理的玉采秸抒，最适发酵；t - 艺务件 温度3 5 ，最挂摇瘩转速，1 8 0 r m i n ，最逐p h 为5 。5 ，经过6 0 小时发酵，涟精浓度 可达5 5 v v ，残总糖在0 ，7 以下。表明该菌种对于实现缱雄质豫势灏精发酵是可 行酌。 关键谣：畿酵潘耩辫维素蘸港酵母 吉林农业大学硕士学位论文 纤维履酒精发酵的菌种选育及发酵条件的斫究 a b s t r a c t t h i s p a p e rs t u d i e dt h et e c h n o l o g i c a lp r o c e s so ff e r m e n t i n gc e l l u l o s et of u e l e t h a n o l b ys a c c h a r o m y c e sc e r c v i s i a ey t 3 1 8w h i c hw a so b t a i n e dt h r o u g hu v m u t a t i o n c o m p a r i n g t o o r i g i n a ls a c c h a r o m y c e t ey t l 8 ，y t 3 1 8i n c r e a s e d i n e t h a n o lp r o d u c t i o nc a p a c i t yb y1 5 a n dd e c r e a s e di nf e r m e n t a t i o nw i t h1 2 h t h e o p t i m i z e dc o n d i t i o n so fp r e p a r i n gc e l l u l o s ew i t hv a p o u r e x p l o d i n gw a s ：p r e s s u r ea t 1 2m p a ，t i m e5m i n ，p r o d u c t i v i t y6 7 7 2 s y s t e m a t i cr e s e a r c ho n l a t e r p a r to f a l c o h o lf e r m e n t a t i o na n dn u t r i e n tf a c t o r sw a s c o n d u c t e d i tf o u n dt h a ty t 318h a dg r e a tc a p a b i l i t yo f a l c o h o l p r o d u c t i o no ng l u c o s e a n dx y l o s e e x c e s s i v eg l u c o s ed e n s i t y ，t o x i o u sm a t e r i a l ，t e m p e r a t u r e ，a c i da n ds oo n c o u l di n h i b i tf e r m e n t a t i o n s o m ef a c t o r st o o ke f f e c ti ne a r l i e rp a r to ff e r m e n t a t i o n w h i l eo t h e r si nl a t t e r p a r t b u t t h e s y n e r g e t i c e f f e c t so ft h e s ef a c t o r si n h i b i t e d f e r m e n t a t i o ne v e nm o r e e a r l i e rp a r to ff e r m e n t a t i o nw e r ei n h i b i t e da t1 0 t o t a ls u g a rc o n c e n t r a t i o n l o w s u b s t r a t ed e n s i t yw a sb e n e f i c i a lt oi m p r o v e m e n to fe t h a n o lo u t p u t u t i l i z a t i o nr a t i o0 n r a wm a t e r i a lc o u l di n c r e a s ef r o m8 2 6 2 t o8 8 51 i nf e d b a t c hf e r m e n t a t i o n s oi t s h o w e ds u b s t r a t ei n h i b i t i o ni ne a r l i e r p a r t o ff e r m e n t a t i o nt o o km o l ee f f e c tt h a t a l c o h o lt o x i c i t yi nl a t t e rp a r to ff e r m e n t a t i o n a d d i n g o f n i t r o g e n s o u r c e h e l p e dp r o d u c e a l c o h o la n dw o u l ds h o r t e n f e r m e n t a t i o np e r i o d a r e aw a st h eb e s t i n o r g a n i cn i t r o g e n s o u r c ew h i c hs h o u l d m a i n t a i na t h i 曲c o n c e n t r a t i o n a te a r l i e r p a r t o ff e r m e n t a t i o nb e c a u s eo f s a c c h a r o m y c e t e sf e a t u r e o x y g e nw a sb e n e f i c i a lt o c e l lg r o w t ha n dl i v i n gf a c t o r sp r o d u c t i o n i tw o u l d e n h a n c et h ef e r m e n t a t i o ni ff i x e da m o u n to f o x y g e n w a sm a i n t a i n e d a st h eb e s ts a c c h a r o m y c e t et op r e p a r e dc o r ns t a l k ，y t 318h a das u i t a b l ec u l t u r e 吉林农业大学硕士学位论文纾维质酒精发酵的菌种选育及发酵条_ 牛的母= 究 c o n d i t i o n s ：t e m p e r a t u r e3 5 。c ，f l a k e rs p e e d1 0 0 r t m i n ，p h5 5 e t h a n o lc o n c e n t r a t i o n r e a c h e d5 5v ，va f t e r6 0h sf e r m e n t a t i o na n dr e s i d u a ls u g a rw a su n d e r0 7 t h i s d e m o n s t r a t e dt h a ti tw a sf e a s i b l et op r o d u c ea l c o h o li nf e r m e n t a t i o no nc e l l u l o s ew i t h y t 3 1 8 k e yw o r d s ：f e r m e n t a t i o n ，e t h a n o l ，c e l l u l o s e ，s a c c h a r o m y c e sc e r c v i s i a e y t 3 1 8 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其他教育机 构的学位证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： i4 知 il 签字日期：洲年月= 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即 吉林农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。本人授权吉林农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) ，冀一掣蛙辞蓐 吉林农业大学硕士学位论文纤维质酒精发酵的菌种选育及发酵条件的铲充 图3 一1 8 添加吐温一8 0 对酒精发酵的影响 f i g 3 - 1 8e f f e c to f t w e e n 8 0o na l c o h o lf e r m e n t a t i o n 代谢产物的抑制作用主要包括酒精和二氧化碳。酒精的抑制作用主要表现在 对细胞膜的破坏，对氨基酸的吸收抑制和质子协同输送的影响上。y t 3 1 8 可以耐 受6 的外源酒精，添加麦角甾醇和不饱合脂肪酸等营养物质可以帮助酵母抵抗 酒精的毒性。在发酵培养基中添加不同质量浓度的麦角 ； 醇、吐温一8 0 对菌株 y t 3 1 8 酒精耐受力的影响，结果见图3 1 7 、图3 1 8 。图3 1 8 的结果表明，在发 酵培养基中添加o 5 的吐温一8 0 可耐受j 0 的酒精。 3 3 8 毒性物质 3 3 8 1 有机酸 用艾式管中装入酵母合成培养基，3 0 培养2 4 h 。测定不同的有机酸浓度对 发酵的抑制作用。结果见表3 一1 3 ： 表3 - 1 3 有机酸对发酵的抑制作用 i 业! ：! ! b ! b ! ! ! ! q q q e g n 也1 4 有机睦浓度( 1产气隋 h ：钔瞻浓度“0 “7 m l j 0 0 0 2 乳舷04 0 6 0 8 o 0 + + 十+ + oo l + 十 乙酸002 + o 0 3 + 00 4 吉林农业大学硕士学位论文 纤维质酒精发酵的菌种选育及发酵条俘的斫究 表3 - 1 3 的试验结果证明0 8 的乳酸或0 0 3 的乙酸对酒精发酵有强烈的抑 制作用。 3 3 8 2 有毒物质 用艾式管中装入酵母合成培养基，3 0 。c 培养24 h 。毒性物质对发酵的抑制见 表3 - 1 4 。如表3 - 1 4 所示的5 0 0 p p mn a 。和io o p p ms o ：可以抑制酵母的发酵。钠离 子在使用蒸馏废水回用的中和过程中是常见的抑制因子，而s o ：被广泛地应用在 玉米秸杆预处理工艺中。在酒精发酵中应尽量避免。 表3 1 4 有毒物质对发酵的抑制作用 t a b l e3 1 4t h ei n h i b i t i o no f t o x i n 磊i - 蒜，产气情况 鬻慧 3 4 后期发酵工艺条件的研究 3 4 1 种子培养时间的确定 种子培养时间即种龄，以菌体处于生命力极为旺盛的对数生长中后期为宜， 此时的种子浓度大，质量高，接入发酵培养基后能较快进入对数生长，有利于缩 短发酵周期和提高发酵产酒精能力。过于年青的种子接入发酵培养基后往往出现 前期生长缓慢，使发酵周期延长；接人过老的种子，由于菌体活力不够，会引起 嚣 = 嚣。+ 吉林在业大学硕士学位论文纤维质酒精发酵曲菌种选育及发酵杀件的研究 产酒精能力下降和菌体过早衰老、自溶。每隔一定时间取出少量种子液，测定种 子液吸光度值。以培养时闻为横坐标，相应吸光度为纵坐标绘制生长曲线如图 3 一l 9 。 a 簧 签 d24681 0l z1 4l 51 8 培养时间( h ) 图3 1 9 菌株y t 3 1 8 对数生长曲线 f i g 3 - 1 9t h el o g a r i t h m g r o w t hc u r v eo fy t 3 1 8 从酒精高产菌y t 3 1 8 在种子培养基中的生长曲线图可以看出，培养4 h 后进 入对数生长期，1 4 h 结束对数生长，转入稳定期。因此，种子培养时间为1 2 h 。 3 4 2 种子接种量的确定 种子接种量的大小对发酵产酒精水平高低的影响比较大。接种量太小，菌数 增长缓慢，培养时间长，使发酵周期延长，同时会降低酵母菌种活力，不利于高 产酒精。接种量过大，会因菌数剧增过快和随接种而移入过多的代谢废物，导致 菌种容易衰老不利于高产酒精。接种量适宜，既能保证合理缩短发酵周期，又 能得到较高的发酵产酒精水平。为了考查种子接种量对酒精发酵的影响，进行了 刁；同接种量的酒精发酵实验。将种龄为1 2 h 的酵母种子按不同接种量，接入发酵 培养基中进行6 5 h 的酒精发酵实验，结果见表3 一l j 。由表3 1 5 的实验结果可知， 接种量为l o ，其酒精浓度为最高。 吉林农业大学硕士学位论文纤维质酒精发酵的菌种选育厦发酵条件的研究 表3 1 5 接种量对酒精发酵的影响 t h b l e3 1 5e f f e c t0 fs e e dv o l u m e0 na l c o h o lf e r m e n t a t i o n 接种量 ) 681 8 i 21 4 3 4 3 摇床最佳转速试验 将摇床转速设定为静止培养、5 0r m i n 、7 5r m i n 、i 0 0r m i n 、1 2 5 r l m i n 和1 5 0 r m i n 。酒精发酵结果见表3 1 6 。从表中可以看出在木糖酒精发酵时，静 止培养和1 5 0 r m i n 时残糖较高，l o o r m i n 最适转速，酒精得率、发酵周期和残 糖指标最佳。摇床转速大于l o o r m i n 时酵母的同化作用增强，酒精的挥发损失 和通风增加，因此酒精得率反而下降。 表3 1 6 不同摇床转速对酒精发酵的影响 3 4 4 最适发酵温度试验 设置不同的发酵温度，检验最适发酵温度：试验结果见表3 1 7 。分析表3 一1 7 可知25 低温发酵可保持酵母持久的活力，但发酵周期长达l o o h 。综合比较3 5 为最佳发酵温度。 吉林农业大学硕士学位论文 纤维质酒精发酵的茁砷选育及发酵条件的碜= 宽 表3 1 7 不同发酵温度对酒精发酵的影响 t a b l e3 1 7t h ei n f l u e n c eo f t e m p e r a t u r e t oa l c o h o lf e r m e n t a t i o n 3 4 5 最适p h 的单因素试验 不同p h 的酒精发酵试验结果见表3 - 1 8 。综合分析表3 - 1 8 ，p h 在4 5 - 5 5 为最适p h 发酵周期最短6 0h ，残总糖均在o 7 以下，酒精含量在5 3 以上， 可以确定p h 为5 5 最适于发酵。 表3 1 8 不同p h 对酒精发酵的影响 t a b l e3 - 1 8t h ei n f l u e n c eo f p h t oa l c o h o lf e r m e n t a t i o n 发酵周期h )酒精含量 残总糖 )残还原糖( 8 5 6 5 6 0 6 0 60 6 5 70 4 9 吉林农业大学硕士学位论文纤维质酒精发酵的菌种选育及发酵条件的研究 4 结论 ( 1 ) 通过紫外线诱变与化学诱变剂相结合的方法，经过对突变株的生化特性 及发酵能力的测定，选育出高产菌株y t 3 18 。y t 3 18 菌株最适生长温度为35 ， 最适p h 范围为4 5 - 5 5 。 ( 2 ) 通过秸秆发酵生产酒精不同预处理方法的研究结果分析，以蒸汽爆破 预处理为最好，预处理条件为在压力1 2 n p a 下爆破预处理5 m i n ，此时纤维质 总转化率为6 7 7 2 半纤维素主要成分是戊聚糖、已聚糖，不溶于水而溶于稀酸，因此在酸水 解中半纤维素能被大部分水解为还原糖，而其对木质素与纤维素的结合层破坏 不够，因此不利于进一步的酶水解。 碱处理则相反，其可促使木质素分解，破坏其与纤维素结合的加固及扩展。 因此酶解过程中碱处理的纤维质转化率要比酸处理高，但碱处理对半纤维素的 降解能力低，所以总的纤维质转化率并不高。 在蒸汽爆破预处理过程中，木质纤维原料在高温高压汽相介质下蒸煮，半纤 维素和木质素产生一些酸性物质，使半纤维素降解成可溶性糖，同时细胞间层的 木质素软化并部分降解，从而消弱了纤维问的粘结。突然减压后，物料内的汽相 介质喷出瞬间急速膨胀，同时物料内的高温液态水迅速暴沸形成闪蒸，对外做功， 使物料从胞间层解离成单个纤维细胞。所以爆破预处理比酸处理和碱处理更利于 纤维素的进一步酶解，且其总转化率也最高。 ( 3 ) 以木糖、葡萄糖为碳源，不同供给方式对酒精发酵的影响研究表明，分批 补料优于一次性供料，其结果是发酵周期平均缩短1 2 小时，原料利用率从8 2 6 2 提高到8 8 5 1 ，酒精产量增加4 ( 4 ) 氮源的添加有利于酒精的生产。同样发酵条件下，添加氮源可以将发酵时 间大幅度缩短。尿素是最佳的无机氮源，由于酵母细胞对氮源吸收利用特点，在 吉林农业太学硕士学位论文纤维质酒精发酵的营种选育及发酵务件的研究 发酵初期氮源需要保持较高水平。氧气有利于细胞生长和存活因子的生产，因此 在发酵过程中保持一定量的分子氧对发酵有促进作用。 ( 5 ) 无机物和金属离子对发酵的影响的实验结果表明，适宜硫化物( 0 1 7 5 的硫酸钠) 及磷化物( 0 02 5 h ，p o ) 对酒精发酵有促进作用；不同浓度的z n l ( 0 66 p p m ) 和m 9 2 + ( 15 0 p p m ) 可提高酒精质量；高浓度的c a “和钾离子对发酵有 抑制作用。因此，在发酵过程中要注意环境因子中的无机物及金属离子对发酵的 影响。 f6 】酒精的抑制作用主要表现在对细胞膜的破坏，对氨基酸的吸收抑制和质子 协同输送的影响上。y t 3 18 可以耐受6 的外源酒精，添加麦角甾醇和不饱合脂肪 酸等营养物质可以帮助酵母抵抗酒精的毒性。 ( 7 ) 改变传统供糖工艺可以使酒精产量大幅度提高，补加氮源特别是有机氮源 可以提高酒精产量。y t 3 1 8 玉米秸杆水解液原料发酵最适条件为：接种量l o ， 发酵温度3 5 ，p h 为5 5 ，摇床转速i 0 o r m i n 。 总体看来，作为初步研究y t 3 18 菌株以最佳工艺发酵，最优工艺进行原料预处 理( 玉米秸杆) ，原料转化率可以达到6 7 7 2 ，酒精得率可达5 5 ( v v ) ，表明该菌 种对于实现纤维质原料的酒精发酵是可行的。 吉林农业大学硕士学位论文 纤蝗质酒精发酵的菌种选育及发酵条件韵研究 参考文献 章克昌发展燃料酒精是玉米深加工的良好途径中国发酵工业协会理事会论文集 无锡：轻工业出版社，2 0 0 0 9 7 一i 0 0 2 l y n c hj m ，j a p p l b a c t e r i a l s y m p s u p p l ， 3 陈滔声化学通报，1 98 3 ，2 ：i - 6 4 刘天福，赵华龄农产品加工技术经济手册 i 9 9 2 0 二 1 98 7 ，7 二一8 3 上海：上海科学技术文献出版社，1 9 8 7 5 高寿清我国酒精工业现状与玉米生产酒精展望中国发酵工业协会理事会论文集 无锡：轻工业出版社，2 0 0 0 9 3 9 7 6 c a r r o l lr k e i me ta l ，b i o t e c h ，1 9 8 9 ，7 ，2 2 - 2 9 7 f e i n ，j e b i o t e c h l e f t 1 9 8 4 ，6 ：1 2 3 1 2 7 8 c h u n g ，i s a n dl e e ，y y e n z y e mm i c r o b t e c h 1 9 8 5 7 ：2 1 7 2 1 9 j u n h b i o t e c h l e t ：1 98 4 1 2 ：8 3 7 46 i 0 c a n l i sc o e l h od el e r r a l h o n e e o i n t i n d ，b i o t e c h ，1 9 8 7 ，6 ( 6 ) ，23 2 - 2 3 5 1 1 志水一允燃料化学原料与开发1 9 8 1 ，2 7 3 1 2 熊谷知荣子发酵工学杂志，1 9 8 2 ，6 0 ：7 7 8 4 1 3 文钱桥等中国酿造1 9 9 0 ，( 7 ) ：2 5 3 0 1 陈国符主编植物纤维化学，轻工业出版社，1 9 8 0 1 j ? s a og t e ta l ，p r o c b i o c h e m 1 9 8 2 1 7 ，3 4 3 8 l6 k o s a r i c ，n ，o n g ，s l a n dd u e j a k ，z b i o t e c h b i o e n g 19 8 2 ，2 4 ：6 9 i - 7 0 1 7 c r o m i e ，s a n dd a e l l e ，! w e u r o p e j a p p l m i c r e b b i o t e c h 1 9 8 二 ：l ：二16 1 2 1 18 陈嘉翔编著制浆化学，轻工业出版社，1 9 9 0 1 9 陈嘉翔主编制浆原理与工程，轻工业出版社，1 9 9 0 5 2 吉林农业大学硕士学位论文 纤维质酒精发酵的萤种选育及发酵条件的研究 m a t s u m o ：o ，n f u k u s k i ，o ，m i y a n a g a ，m ，e t c a g r b l o t c h e m 1 9 8 2 ， 6 ：二5 9 5 4 g 口义明主编植物纤维化学( 第二版 ，轻工业出版社，1 9 9 0 r n e e ，8 ，k ，p a g a n ，r j ，w o n g ，l i f e , e n t t e c h n c l 1 9 8 4 ，8 2 ：2 9 7 8 2 - 马瑞德等工业微生物，1 98 0 ，l ，2 3 2 5 w a y m a ne t a 1 h i o t e c h l e t t 1 99 6 ，8 0 f i 0 ) ，7 4 2 7 5 2 m a n d e l s ，m e ta 1 ，f e r m e n tt e c h n 0 1 ，1 9 7 6 ，5 4 ，26 7 m a n d e l s ，m e ta 1 ，b i o t e c h b i o e n g ，1 9 7 4 ，1 6 ，1 4 7 1 志水等木材学会志，1 9 7 7 ，2 3 ，5 6 2 东顺一高分子加工，1 98 3 ，3 2 ( 6 ) 30 - 3 5 k u m a k r ae t a l b i o r e s o u r t e c b c o i ，1 9 9 2 ，32 ，1 8 9 1 9 5 f a n ，l ：，a d v b i o c h e m e n g b i o t e c h n 0 1 ，1 9 8 2 ，2 3 ，1 5 8 18 7 9 a e l l e ，h w j a p p ! m i c r e b i 0 1 b i o t e c h 。1 9 8 2 ，1 6 ：1 3 6 4 2 g a l a n i ，i ，d r a i n a s ，c a n dt y p a s ，m ，a b i e t e c h l e t t 1 9 8 5 ，7 ：6 7 3 7 9 k o l 二e ta l ，c h e m i n n e d e n g ，1 98 8 ，3 4 ，75 4 杨斌食品与发酵工业，1 9 9 5 ，6 ，6 1 6 5 g c l d s t e i ni s e ta l ，b i o t e c h 9 9 3 ，1 8 ( 1 9 ) ，6 5 l a n n e r o ? 0 。：a n df i s h j 。0 ? p r o c e s s f o rp r o d u c i n ge z h a n o i 。u sp a t e n t 5 ，23 l ，0 1 7 2 7j u l y1 9 93 许开天编著酒精蒸馏技术。轻工业出版社，i 9 9 0 l e e ，j ，s t h em a r g e tj o n e sm e m o r i a ll e c t u r e ：a m i n oa c i d si nm a l t i n ga n d b r e w i n g j i n s t ，b r e w i n g 1 9 8 2 ，8 8 ：2 2 8 - 2 3 3 。 江西食品发酵工业科学研究所，酶制剂生产和在食品工业中的应用，轻工业出版 社，1s7 7 李洪刚，段堂荣，纤维素酶在酒精生产中的应用酿酒科技，1 9 9 6 ，总7 j ( 3 ) ：4 4 4 5 船 n 您 玛 m 拍 她 拍 ” 如 n 弛 ” “ 强 弛 弛 吉林农业大学硕士学位论文纤维质酒精发酵的菌种选育及发酵条件皓研究 1 c h e r t ，l f a n dg o n g ，c s a p p l m i c r o b i 0 1 b i o t e c h 19 85 ，25 ：20 8 2 1 2 4 2 t h o m a s ，k c i n g l e d e w ，w m ，f u e la l c o h o lp r o d u c t i o n ：e f f e c s s o ff r e e a m i n on i t r o g e no ff e r m e n t a t i o no fv e r yh i g hg r a v i t yw h e a tm a s h e s a p p l e n v i r o n m i c r o b i 0 1 ，1 9 9 0 ，5 6 ：20 4 6 5 0 4 3 j o n e s ，a m ，t h o m a s k c i n g l e d e w ，w m ，e t h a n o l i cf e r m e n t a t i o no f b l a c k s t r a pm o l a s s e sa n ds u g a rc a n ej u i c et l s i n gv e r yh i g hg r a v i t yt e c h n o l o g y j a g r i c f o o dc h e m 1 9 9 4 4 2 ：1 2 4 2 8 4 t h o m a s ，k c & i n g ! e d e w ，w m ，p r o d u c t i o no f2 1 ( v v ) e t h a n o lb yf e r m e n t a t i o n o fv e r yh i g hg r a v i t yc v h g ) w h e a tm a s h e s g 1 n d m i c r o b i 0 1 1 9 9 2 ，1 0 ：6 18 4 5 i n g l e d e w ，w m j o n e s ，a m b h a t t r y ，r s r o s s n a g e i ，b p r o d u c t i o nf r o mh u l l ! e s sb a r l e y c e r e a lc h e m ，1 9 9 5 ，7 2 ： f u e la i c o h 0 1 5 0 6 j o n e s ，m a n dp i e r c e ，j s a d s o r p t i o no fa m i n oa c i d sf r o mw o r tb yy e a s t j i n s t b r e w i n g 1 9 6 4 ，7 0 ：3 0 7 3 1 5 7 l e a o ，c a n dv a nu d e n ，n e f f e c t so fe t h a n o la n do t h e ra l k a n o l so np a s s i r e p r o t o ni n f l u xi nt h ey e a s ts a c c h a r o m y c e sc e r e v i s i a e b i o c h e m b i o p h y s a c t a i 9 8 4 77 4 ：43 48 蚰刘天福，赵华龄农产品加工技术经济手册上海：上海科学技术文献出版社，1 9 8 7 二9 9 2 0 二 9 t h o m a s k c i n g l e d e w w m ，f u e la l c o h o lp r o d u c t i o n ：e f f e c t so f f r e e a m i n on i t r o g e no ff e r m e n t a t i o no fv e r yh i g hg r a v i t yw h e a tm a s h e s a p p l e n v i r o n m i c r o b i 0 1 ，1 9 9 0 ，5 6 ：2 0 48 - 5 0 5 ：任立伟，侯霖等9 7 中国吉林玉米深加工国际研讨会论文集，4 2 6 438 5 ：刘天福，赵华龄工业微生物学上海：上海科学技术文献出版社，1 9 8 7 1 9 9 2 0 ： 5 2 杜连祥工业微生物试验技术北京：轻工出版社，2 0 0 0 1 9 9 2 0 ： 5 3 贺延龄厌氧纤维素分解菌的分离鉴定与草浆非纤维细胞的乙酸发酵，博士学位论 文，天津工业学院，1 9 8 8 5 4 赵昕，高培基半纤维素的酒精发酵工业微生物，1 99 3 ，2 3 ( 2 ) ：2 5 2 7 5 5 宋书玉，郭军英，张亚坤等酸性蛋白酶用与酒精浓醪发酵的研究酿酒科技，1 9 9 7 ， 吉林农业大学硕士学位论文皇手维质酒精发酵曲菌种选育及发酵条件前研究 9 5 f5 1 ：5 5 5 6 5 5 夏淑兰，现代微生物实验技术北京：轻工业出版社1 9 8 8 ：3 6 4 8 5 7 黄字彤，杜连祥玉米原料高浓度酒精发酵中试的研究天津轻工业学院学报，2 0 c 2 1 ：5 6 5 8 5 8 k u n k e e ，r e a n db i s s o n l f ，w i n em a k i n gy e a s t s i nt h ey e a s t s ，l o n d o n a c a d e m i cp r e s s 1 9 9 3 ，2 “v 0 1 5 ，5 9 1 2 7 j 9 s u n ，g y a n ds u n ，a y ，e t h a n o la n dm e m b r a n ei i p i d s a l c o h o lc l i n e x p r e s 1 9 8 5 ，9 ：1 6 4 8 0 6 0 g o l d s t e i n ，d e t h a n o li n d u c e da d a p t a z i o ni nb i o l o g i c a lm e m b r a n e s a n l n y a e a d s c i 1 9 8 7 ，4 9 2 ：1 8 3 一i l l ， 6 1 h e n r y s a t h em e m b r a n c ei i p i d so fy e a s t ：b i o c h e m i c a la n dg e n e t i cs t u d i e s i nt h em o l e c u l a rb i o l o g yo ft h ey e a s ts a c c h a r o m y o i e s ：m e t a b o l i s ma n dg o n e e x p r e s s i o n q e wy o r k ：c o l ds p r i n gh a r b o r 。1 9 5 2 ，1 0 1 - 5 8 5 2 k i r s c p ，b h ，d e v e l o p m e n t i nb e e rf e r m e n t a t i o n t o pe n z y m ef e r m e