（药理学专业论文）isospecific+regulation+of+nak+pump+and+its+mechanism+by+adrenergic+agonists+in+rat+cardiocytes.pdf

目录 iiffifii|ifiiiiii|ili y 19 0 0 5 5 6 中文摘要1 英文摘要4 研究论文 i s o f o m s p e c i f i cr e g u l a t i o no fn “kp u m pa n d i t sm e c h a n i s mb y a d r e n e 玛i ca g o n i s t si nr a tc a r d i o c ”e s 前言”8日舌”8 材料与方法9 结果1 4 附i 羽19 附表2 7 讨论2 8 结论 3 2 参考文献3 3 综述肾上腺素受体对心肌钠钾泵的亚基特异性调节3 9 致谢4 6 个人简历4 7 中文摘要 肾上腺素受体激动剂对大鼠心肌细胞n a k 泵的亚基特异性调节 及其机制 摘要 n a k 泵( n a kp u l n p ，n i o ) 是普遍存在于细胞膜上的一种酶，它属于p 型a t p 酶家族。n 涨泵可以逆浓度梯度转运3 个钠离子和2 个钾离子， 同时消耗1 分子的a t p 。此外，它还可以作为转运其他溶质、氨基酸、盐 类和磷酸盐等的驱动力。这种非等值的转运是一个生电的过程，并且产生 一个跨膜的电位进而引起细胞的兴奋。在许多临床疾病的发生过程中都伴 随着n a k 泵的活性的改变，例如高血压，糖尿病和其他疾病。因此，n 以 泵活性调节机制的阐明变得至关重要。 肾上腺素受体可以调节n 掘泵活性，其分为两种亚型，即0 【和p 一 肾上腺素受体，二者均可调节n 抓泵的活性，并且这种调节包括短时程 作用和长时程作用，但其分子机制仍不清楚。n 孤泵短时程和长时程调 节机制的阐明对分析细胞、组织对激素的适应性以及生物体电解质的状况 都是必需的，同时，对由于n 根泵功能紊乱所致疾病的治疗也是至关重 要的。本实验主要探讨了肾上腺素受体的短时程和长时程激活对n 根泵 活性的影响及其相关机制。 目的：众多因素对n 涨泵的调节可分为短时程和长时程调节，本研 究旨在探讨肾上腺素受体激活对大鼠心肌细胞n 根泵的调节及其机制。 方法：( 1 ) 心肌细胞的急性分离：酶解法急性分离s d 大鼠心肌细胞， 并保存在k b 溶液中。然后，分别短时程( 1 0 m i n ) 和长时程( 2 4 h ) 室温下孵 育去甲肾上腺素( n a ) ( 共孵育普萘洛尔，以阻断p 肾上腺素受体) 和异丙肾 上腺素( i s o ) 。 ( 2 ) n 以泵电流的测定：应用全细胞膜片钳技术观察细胞膜电流以检 测0 【和p 肾上腺素受体激动剂对n 振泵电流( i d ) 的影响。 ( 3 ) 全细胞蛋白、质膜蛋白和内体的提取：用药品孵育急性分离的心 肌细胞，然后用冷的裂解液裂解以获得全细胞蛋白。按照细胞表面蛋白分 离试剂盒( t h e r l n o ) 的说明提取细胞质膜蛋白。应用蔗糖梯度的方法提取早 期内体( e e ) 和晚期内体( l e ) 。b c a 蛋白试剂盒测定蛋白浓度。 中文摘要 ( 4 ) 蛋白免疫印迹：用l o 的s d s 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等量的 蛋白后电转移至p v d f 膜上，然后用t b s t 溶解的5 脱脂奶粉3 7 下封 闭1 小时。一抗是n 抓泵a l 亚基抗体( s a n t a ，1 ：5 0 0 ) 和仅2 亚基抗体( u p s t a t e ， l ：2 0 0 ) 。辣根过氧化物酶标记的抗鼠和抗兔抗体( k p l ，1 ：1 0 0 0 ) 作为二抗。 用增强型化学发光的方法对印迹条带进行曝光。 ( 5 ) m r n a 的提取：依照p r o m e g es v 总r n a 分离系统试剂盒的说明 从大鼠心肌细胞上提取总r n a 。 ( 6 ) 反转录聚合酶链反应( r t - p c r ) ：应用n 搬泵0 【l 和a 2 亚基的特异 性引物，通过p c r 技术扩增反转录产物( c d n a ) 。p c r 产物用2 的琼脂 糖凝胶电泳进行分离，并用g o l d e wi i 进行核酸染色。 ( 7 ) 实时定量p c r 对特异c d n a 的定量：选择g a p d h 作为管家基 因。对n 根泵a l 和q 2 亚基以及g a p d h 同时进行实时定量p c r 。p c r 产物用2 的琼脂糖凝胶电泳进行分析。 结果：( 1 ) 短时程激活。肾上腺素受体可以以亚基特异性的方式影响 n a 依泵电流( i 口) 。a 肾上腺素受体( a a r ) 的激活通过与n a 瓜泵0 【2 亚基相 偶联升高高亲和力泵电流( i h ) ，不影响由n a k 泵0 【l 亚基引起的低亲和力 泵电流( 1 1 ) ；p 肾上腺素受体( p a r ) 的激活通过与n a k 泵0 【l 亚基相偶联降 低i l ，对由a 2 亚基引起的i h 没有影响。 ( 2 ) 无论是a 还是p 肾上腺素受体，短时程激活均不影响n 抓泵a 亚基的1 1 1 】刚a 水平和全细胞蛋白含量。 ( 3 ) a 肾上腺素受体短时程激活可增加细胞质膜上n 根泵啦亚基蛋 白含量，不影响a 1 亚基蛋白含量；而p 肾上腺素受体短时程激活可降低 质膜上n 抓泵仅l 亚基蛋白含量，不影响仅2 亚基蛋白含量。 ( 4 ) 仅和p 肾上腺素受体短时程激活对n 搬泵的作用可被能阻止质 膜上n 根泵q 亚基转位的鬼笔环肽取消。 ( 5 ) q 肾上腺素受体短时程激活通过p k c 通路对n a k 泵活性进行调 节，b 肾上腺素受体短时程激活通过p k a 通路对n 涨泵活性进行调节。 ( 6 ) 肾上腺素受体长时程激活对n a k 泵电流密度的调节亦是以亚基 特异性的方式进行的。a 肾上腺素受体的长时程激活通过与n a k 泵0 【2 亚 基相偶联降低i h 密度，不影响由n 趣泵a i 亚基引起的i i 密度；p 一肾上腺 素受体的激活通过与n 抓泵a l 亚基相偶联升高i l 密度，对由a 2 亚基引 2 中文摘要 起的i h 密度没有影响。 ( 7 ) q 肾上腺素受体长时程激活可以减少n a k 泵a 2 亚基的蛋白表达， 不影响0 【l 亚基；p 肾上腺素受体长时程激活可以增加n 涨泵o 【，亚基的蛋 白表达，不影响啦亚基。 ( 8 ) 0 【肾上腺素受体长时程激活可以降低n 撇泵0 【2 亚基的m i a 水 平，不影响0 【l 亚基；p 肾上腺素受体长时程激活可以升高n 抓泵仅亚基 的m r n a 水平，不影响q 2 亚基。 ( 9 ) a 肾上腺素受体长时程激活通过p i 通路对n 涨泵活性进行调 节，p 肾上腺素受体长时程激活通过p k a 通路对n 抵泵活性进行调节。 结论：无论短时程或长时程激活a a r 和p a r ，均可亚基特异性调 节大鼠心肌细胞n 涨泵活性，其中洳a r 激活与n 根泵啦亚基偶联， 经p k c 通路调节高亲和力n a k 泵活性，p a r 激活与n 涨泵0 【l 亚基偶 联，经p k a 通路调节低亲和力n 涨泵活性；无论a a r 或p a r ，长时 程激活对n a k 泵活性的影响均与短时程激活时相反，且短时程激活时均 与其相应a 亚基在细胞膜上的转位有关，而长时程激活时均与其相应0 亚基的蛋白表达和m r n a 表达水平改变有关。 关键词：n a k 泵；大鼠心肌细胞；肾上腺素受体激动剂；短时程调 节；长时程调节 3 i s o f o r m s p e c i f i cr e g u l a t i o no f n a kp u m pa n di t sm e c h a n i s mb y a d r e n e r g i ca g o n i s t si nr a tc a r d i o c y t e s a b s t r a c t t h en a kp u m p ( n k p ) i sau b i q u i t o u sp l a s m am e m b r a n ee n z y m e ，l t b e l o n g st ot h ef a m i l yo fp a t p a s e t h ee n z y m ep u m p s3 n a 十a n d2 k _ i o n s a g a i n s tt h e i rc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n t ，a tt h ee x p e n s eo fa na t p m o l e c u l e i n a d d i t i o n ，i tp r o v i d e st h ed d v i n gf o r c ef o rt h et r a u l s p o r to f o t h e rs o l u t e s ，n o t a b l y a m in oa c i d s s u 2 a r a i l dd h o s d h a t e t h en o n e q u i v a l e n tt r a n s p o r tl se l e c t r o g e n l ca m m oa c l d s ，s u g a r ，a i l dp n o s p n a t e 1n en o n e q u l v a l e n r a n s p o nl se l e c 【r o g e i l l c a n dl e a d st om eg e n e r a t i o no fat r a n s m e m b m n ee l e c t r i c a lp o t e m i a la l l o w i n g c e l l st ob e c o m ee x c i t a b 】e a na l t e r e de n z y m ea c t i v i t yo c c u r si nan u m b e ro f c l i n i c a ld i s o r d e r s ，s u c ha sh y p e r t e n s l o n ，d l a b e t e sa n do t n e rd l s e a s e s 1n e r e t o r e ， -1o，”1r e l u c i d a t i n gt h er e g u l a t o 眄m e c h a n i s m st h a t u n d e r l i et h ec o n t r o lo fn k p a c t i v i t yh a sb e c o m ea ni m p o r t a n ti s s u e a d 托n e 玛i cr e c 印t o r s ( a r s ) a r ek n o w nt or e g u l a t en k p a c t i v i t i e s a n d t h ea rf i a m i l yw a sf i r s td i v i d e di n t ot w os u b t y p e s ，t h ea a n dp - a r sa s d e t e n i l i n e db yp h 鲫m a c o l o g i c a ls m d i e si ni s 0 1 a t e dt i s s u e m a l l ys t u d i e sh a v e i 1 1 u s t r a t e dt h a tt h eb o mt w or e c 印t o r sc a nr e g u l a t en k p t h er e g u l a t i o no f n k pi nv a r i o u st i s s u e si su n d e rt h ec o n t r o lo fan u n 曲e ro fc i r c u l a t i n g h o m o n e st h a ti m p a nb o t l ls h o r t a n 彤o rl o n g t e mc o n t r 0 1o v e ri t sa c t i v i t y ， w h i c hm o l e c u l a rm e c h a l l i s m sa r es t i l lu n c l e 筑u n d e r s t a n d i n gt h em e c h a n i s m s u n d e d 如n gs h o r t - 锄dl o n g - t e n nr e g u l a t i o n o ft 1 1 en k pi se s s e n t i a lf o r a n a l y z i n gt h ea d a p t a t i o no fc e l l sa i l dt i s s u e st om ee n d o c n ea n de l e c t r o l y t e s t a t u so ft h e o 唱a n i s m ， a sw e na st h e d e v e l o p i n g t r e a t h l e n tf o r p a t h o p h y s i o l o g i c a ld i s o r d e r sc a u s e db yt h e 如n c t i o n a la b n o m a l i t yo fn k p t h ep r e s e n ts t u d ya i m st oe x p l o r et h ee f f e c t so fs h o r t - a n dl o n g - t e ma r a c t i v a t i o no nt h en k pa c t i v i t ya n di t sm e c h a l l i s m o b j e c t i v e ：n a kp u n l p ( n k p ) c a nb er e g u l a t e db ym a n yf a c t o r s ，a n d t h e s er e g u l a t i o n sc 锄d i v i d ei n t os h o r t - t e 吼a n dl o n g t e l mr e g u l a t i o n t h u s ， 一_ _ - - _ _ _ _ _ - _ _ - _ _ - _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ l - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - - _ i _ _ - - - _ - _ _ - - _ _ - i l _ - - - l _ _ - _ _ - - _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ i _ - _ _ - _ l _ - - _ _ - - _ i 一 4 英文摘要 w ei n v e s t i g a t e dt h er e g u l a t i o no fa d r e n o c 印t o ra c t i v a t i o no nn k pa n di t s m e c h a n i s mi nr a tc a r d i o c y t e s m e t h o d ：( 1 ) a c u t em y o c y t ei s o l a t i o n ：s p r a g u e d a w l e y r a tc a r d i o c y t e s w e r ee n 玛，i i l a t i c a l l yi s o l a t e da n dk e p ti n k r a r b r d h es o l u t i o n t h e nc e l l s w e r ei n c u b a t e dw i t hn o r e p i n 印h r i n e ( n a ) ( p r o p r a n o l o lw a sc o i n c u b a t e dw i t h n at ob l o c kp a r ) a n di s o p r o t e r e n o l ( i s o ) ，r e s p e c t i v e l y f o rs h o r t - t e n n ( 1o m i n ) a n dl o n g - t e 肌( 2 4 h ) a tr o o mt e m p e r a t u r e ( 2 ) d e t e n n i n a t i o no fn k p c u r r e n t ：t h ew h o l e c e l lp a t c h c l a n l pt e c h n i q u e w e r eu s e dt oo b s e et h ee 脏c t so fq a n dp a ra g o n i s t so nn k p c u 仃e n t ( i p ) ( 3 ) e x t m c t i o no fw h o l ec e l lp r o t e i n ，p l a s m am e m b r a n ep r o t e i na 1 1 d e n d o s o n l e s ：t h ei s o l a t e d 1 1 y o c 妒e sw e r ef i r s t l yi n c m ) a t e dw i t hd 1 g s ，t h e n l y s e dw i t hi c e - c o l dl y s i sb u f f 酹t oo b t a i nt h ew h o l ec e l lp r o t e i n w r eh s et h e c e l ls u r f a c ep r o t e i ni s o l a t i o nk i t ( t h e r m o ) t oe x t r a c tt h ep l a s m am e n 山r a n e p r o t e i na c c o r d i n gt om a n u f a c t u r e r sg u i d e l i n e s e a r l ye n d o s o m e s ( e e ) a n d 1 a t ee n d o s o m e s ( l e ) w e r ef - r a c t i o n a c e db yas u c r o s eg r a d i e mm e t h o d t h e b c a p r o t e i na s s a yk i tw a su s e dt od e t e m i n et h ec o n c e n t e a t i o no fp r o t e i n s ( 4 ) w e s t e mb l o t t i n g ：e q u a la m o u m so fp r o t e i n sw e r es 印a r a t e db y e l e c t r o p h o r e s i so na 1o s d s - p a g eg e l s ，t 姗s f e r r e dt op o l y v i n y l i d e n e d i f l u o r i d e ( p v d f ) m e m b r a n e s ，a n db l o c k e d1h 缸3 7 0 ci n5 n o n 眦d 巧m i l k i nt b s t n k pa n t i 一0 【l ( s a n t a ，1 ：5 0 0 ) a 1 1 dn k p a n t i - 啦( u p s t a t e ，l ：2 0 0 ) w e r e u s e d 邪p r i m a 秽a 1 1 t i b o d i e s a n t i m o u s eo ra n t i r a b b i ti g gc o n j u g a t e d t 0 h 嘟删s hp 啪x i d a s e ( k p l ， l ：lo o o ) w e r eu s e d 弱s e c o n d 哪呲i b o d i e s b l o t sw e r ed e v e l o p e du s i n gt h ee i l l l a n c e dc h e m i l u m i n e s c e n tm e t h o d ( 5 ) e x t r a c t i o no fm r n a ：t o t a lr n a w a se x t r a c t e d 仃o mr a tc a r d i o c y t e s u s i n gap r o m e g as vt o t a lr n a i s o l a t i o ns y s t e m ( p r o m e g a ) a c c o r d i n gt o m a n u f a c t u r e r sg u i d e l i n e s ( 6 ) r e v e r s et m n s c r i p t i o np o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n ( i t t - p c r ) ：t h e r e v e r s et r a n s c r i p t i o np r o d u c t ( c d n a ) w a sa m p l i f i e db yp c r u s i n gn k p0 【i a n da 2 一i s o f o 锄s p e c i f i cp r i m e r s t h ep c r p r o d u c t sw e r ea n a l y z e db ya g a r o s e g e le l e c t r o p h o r e s i s ( 2 a g a r o s e ) f o l l o w e db yg o l d v i e w i ii m c l e i ca c i d s t a i n i n g 5 ( 7 ) r e l a t i v eq u a n t i f i c a t i o n o f s p e c i f i c c d n ab yr e a l - t i m ep c r ： g a p d hw a sa l s oc h o s e da st h eh o u s e - k e 印i n gg e n e r e a l - t i m ep c rw a s p e r f o m l e ds i m u l t a n e o u s l yf o rn k p0 【l i s o f o ma n d0 【2 - i s o f o l l l l ，g a p d ho n c d n a p c r p r o d u c t sw e r ea 1 1 a l y z e do n2 a g a r o s eg e l 一 r e s u l t ： ( 1 ) a d r e n o c 印t o rs h o r t t e m a c t i v a t i o nc a na f f e c t i pb y a n i s o f o n n s p e c i f i cm a n n e r t h ea c t i v a t i o no f0 c a ri n c r e a s e dt h eh i 酿a m n i t y p u m pc u n e n t ( i h ) b ys p e c i f i c a l l yi n c r e a s i n gt h ea c t i v i t yo ft h eh i g h9 1 y c o s i d e a 伍n 时a 2 一i s o f o mo fn k p b u td i dn o tc h a n g et h el o wa 伍n i t yc u n n t ( 1 1 ) i n d u c e db y0 【1 i s o f o 册；t h ea c t i v a t i o no fp - a rr e d u c e dt h ei lb ys p e c i f i c a l l y d e c r e 弱i n gt l l ea c t i v i t yo f t h el o wg l y c o s i d ea m n i 够n k pa 1 - i s o f o mb u td i d n o ti n f l u e r l c et h ei hi r l d u c e db yq 2 一i s o f o n n ( 2 ) w r l l a t e v e r 仅一o rp - a ra c t i v a t i o n ，n os i g n 湎c a n tc h a n g e si nm r n a l e v da i l dp r o t e i nd b u n d a n c eo fn k pa i s o f - o 啪w e r eo b s e r v e di nw h o l ec e l l h o i n o g e n a t e sf o ra r s h o r t t e 衄a c t i v a t 如n ( 3 ) t h es h o r t - t e m la c t i v a t i o no fa a ri n c r e a s e dt h ep l a s m am e n l b r a n e p r o t e i na b u n d a n c eo fn k pa 2 一i s o f - o m ，b u t d i dn o ta 虢c tt h e 仅l i s o f o m p r o t e i na b u n d a n c e ；t h es h o r t - t e ma c t i v a t i o no fp - a ri n d u c e dar e d u c t i o ni n t h ep l a s m am e m b r a n ep r o t e i na _ b u n d a n c eo fn ! k p 仪1 i s o f o n n ，b u td i dn o t a f f e c tt h eq 2 一i s o f o mp r o t e i na b u n d a n c e ( 4 ) t h ee f i f e c to fs h o r t - t e ma c t i v a t i o no f 洳a n dp a ro nn k pa c t i v i t y c o u l db ea b o l i s h e db yp h a l l o i d i nw r h i c hb l o c bt h e 仃a n s l o c a t i o no fn k p a - i s o f 0 姗o np l a s m am 黜【i b r a n e ( 5 ) 伐一a rs h o r t t e 眦a c t i v a t i o nc a nr e g u l a t en k pa c t i v i t yt h r o u g hp k c p 砒w 嘲a n dp - a rs h o r t t e n na c t i v a t i o nc a nr e g u l a t en 时a c t i v i t yt h r o u 曲 p k a p a t h w a y ( 6 ) a d r e n o c 印t o rl o n g t e ma c t i v a t i o nc a na f f e c tt h ed e n s i t yo fi pb ya n i s o f o m s p e c i f i cm a n n e r t h ea c t i v a t i o no f 0 【一a rr e d u c e dt h ed e n s i t yo fi hb y s p e c i f i c a l l yd e c r e a s i n gt h ea c t i v i t yo ft h eh i g hg l y c o s i d ea m n i t yo 【2 - i s o f o mo f t h en k p ，b u td i dn o tc h a n g ei li n d u c e db yql i s o f o m ；t h ea c t i v a t i o no fp - a r i n c r e a s e dt h ed e n s i t yo fi lb ys p e c i f i c a l l yi n c r e a s i n gt h ea c t i v i t yo ft h el o w g l y c o s i d ea f ! f i n i t yq i i s o f o mo ft h en k p ，b u td i dn o tc h a n g ei hi n d u c e db y 6 仅2 - l s o f o n n ( 7 ) t h el o n g - t e ma c t i v a t i o no fa a rr e d u c e dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no f n k pc 【2 。i s o f o n i l ，b u th a dn oe f f e c to na l i s o f o mp r o t e i ne x p r e s s i o n ；p a r l o n g t e r ma c t i v a t i o ni n d u c e da ni n c r e a s i n gi nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fn k p a l - i s o f o m ，b u th a dn oe 虢c to n 仅2 i s o f o mp r o t e i ne x p r e s s i o n ( 8 ) 仅- a rl o n g - t e ma c t i v a t i o nc o u l dr e d u c et h e 】e v e lo fn k po 【，i s o f o n n m r n a ，b u th a dn oe 任i e c to na 1 i s o f o 瑚m r n al e v e l ；p a r1 0 n g t e m l a c t i v a t i o nc o u l di n d u c ea ni n c r e a s i n gi nt h el e v e lo fn k p q 1 i s o f o n nm r n a ， b u th a dn oe f r e c to n0 c 2 - i s o f o mm r n al e v e l ( 9 ) a - a rl o n g - t e ma c t i v a t i o nr e g u l a t e dn k pa c t i v i t yt h r o u g hp k c p a t h w a y ，a n dp - a rl o n g t 锄a c t i v a t i o nr e g u l a t e dn k pa c t i v i t yt h r o u g hp k a p a t h w a y c o n c l u s i o n ：t h e s er e s u l t ss u g g e s tt h ee f i f e c t so fs h o r t o ri o n g t e n n a d r e n e 玛i ca c t i v a t i o no nn k pa c t i v i t yi nh e a ni sai s o f o m l s p e c i f i c t h e a c t i v a t i o no fa a ra n e c t s i ht h r o u g hap k c d e p e n d e n tp a t h w a 弘w h i c h c o u p l e dw i t ht h eh i g hg l y c o s i d ea 衔n i t yq 2i s o f o mo fn k p i nc o n t r a s t ，t h e a c t i v a t i o no fp - a ri n n u e n c e si l t h r o u g hap k a d 印e n d e n tp a t h w a y ；w h i c h c o u p l e dw i t ht h el o wg l y c o s i d ea f j f i n i t y 仪li s o f o r mo fn k p h o w e v e r ， w h a t e v e r 仅- o r p a d r e n e 玛i ca c t i v a t i o n ，t h es h o r t t e m la c t i o n so nn k pi n d u c e d an e g a t i v ef e e d b a c kg nt h e i r1 0 n g - t e 衄e f f e c t s t h es h o r t t e n nr e g u l a t i 6 ni s m e d i a t e d b yt h et r a n s l o c a t i o no ft h en k ”m pq i s o f o m ；a n dt h el o n g t 锄 r e g u l a t i o ni sm e d i a t e db yt h ec h a n g e so fp r o t e i ne x p r e s s i o na n dt h el e v e l so f m r n a k e yw o r d s ： n a k p u r n p ； r a t c a r d i o c y t e s ；a d r e n o c 印t o ra g o n i s t ； s h o r t - t e mr e g u l a t i o n ；l o n g - t e mr e g u l a t i o n 7 研究论文 i s o f o r m - s p e c i f i cr e g u l a t i o no fn a kp u m pa n d i t sm e c h a n i s mb y a d r e n e r g i ca g o n i s t si na d u l tr a tc a r d i o c y t e s i n t i o d u c t i o n t h en a 瞅p u m p ( n k p ) i sau b i q u i t o u sp l a s m am e m b r a n ee n z y m e ，i t b e l o n g st ot h ef a m i l 夕o fp a t p a s e 【1 1 t h ee n 刁嘲ep u m p s3 n a + a n d2 k + i o n s a g a i n s tt h e i rc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n tl ，a tt h ee x p e n s eo f a na t pm o l e c u l e i n a d d i t i o n ，i tp r o v i d e st h e 血v i n gf o r c ef o rt h et r a n s p o r to fo t h e rs o l u t e s ，n o t a b l y a m i n 0a c i d s ， s u g 虬 a n dp h o s p h a t e z 。t h en o n e q u i v a l e n t t r a n s p o r t i s e l e c t r o g e n i c a n dl e a d st ot h eg e n e m t i o no fat r a n s m e m b r a n ee l e c 研c a l p o t e n t i a la l l o w i n gc e l l st o b e c o m ee x c i t a b l e a na l t e r e de n z y m ea c t i v i t y o c c u r si nan u m b e ro fc l i n i c a ld i s o r d e r s ，s u c ha sh y p e r t e n s i o n ，d i a b e t e sa n d o t h e rd i s e a s e s 【j j t h e r e f o r e ，e l u c i d a t i n gt h er e g u l a t o 哕m e c h a n i s m st h a t u n d e r l i em ec o i l t r o lo fn k p a c t i v i t yh a sb e c o m ea ni r n p o r t a n ti s s u e t h e r ea r em a n ym e c h a n i s m si np l a c e or e g u l a t et h en k pa c t i v i t yi na t i s s u e - s p e c i f i cm a n n e r t h en k p i s s u b j e c tt or e g u l a t eb yaw i d ev 撕e t yo f f a c t o r si nt h e 姑d n e y 【4 ，5 1 ，s k e l e t a li n u s c l e s 【6 1 ，h e a l t 【7 】a n ds e v e r a lo t h e rt i s s u e s t h ee f f e c t so ft h es p e c i f i ci n t r a c e l l u l a rs i g n a l i n gp a t h w a y si n v o l v e di nt h e r e g u l a t i o no fp u m pa c t i v i t y a n ds u b c e l l u l a rd i s t r i b u t i o n ，w i t hp a n i c u l a r c o n s i d e r a t i o hg i v e nt 0t h ee a e c t so fp r o t e i ni ( i n a s e sa i l dp h o s p h a t a s e s a d r e n o c e p t o r s ( a r s ) a r em e m b r a n eb o u n dr e c 印t o r sl o c a t e dt h r o u g h o u t t h eb o d yo nn e u r o n a la n dn o n - n e u r o n a l t i s s u e sw h e r et h e ym e d i a t ead i v e r s e r a n g eo fr e s p o n s e st om ee n d o g e n o u sc a t e c h 0 1 a m i n e s ，n o r a d r e n a l i n ea n d a d r e n a l i n e a r sa r ek n o w nt or e g u