（植物学专业论文）苦苣苔科植物的快速繁殖、离体保存及耐阴性研究.pdf

四川大学博一l 学位论文 苦苣苔科植物的快速繁殖、离体保存及耐阴性研究 植物学专业 研究生：汤正辉指导教师：林宏辉教授 摘要 苦苣苔科( g e s n e d a c e a e ) 植物种类繁多，除少数种类外，主要生长于热带地 区。苦苣苔科是较大的科，全世界约1 5 0 属，3 7 0 0 余种。其中有上百种美丽的 观赏品种。该科植物多具有披满绒毛的叶片，整株植物外形多为莲座状，具有 颜色鲜艳的管状或铃状花。各种苦苣苔常具有独特的开花习性。 现今在墨西哥、西印度群岛以及中、南美洲等地区具有丰富的苦苣苔资源。 许多重要的热带美洲苦苣苔种类，如大岩桐( s i a n i n g i a s ) 、可伦花( c o l u m n e a s ) 、 喜荫花( e p i s c i a s ) 等均生长在这里。非洲的苦苣苔科植物资源并不丰富，但在东 非的一小块区域却是各种艳丽的s a i n t p a u l i a 的原产地，这种苦苣苔又称为“非 洲紫罗兰”( a f r i c a nv i o l e t ) ，现已成为西方国家室内观赏花卉的重要品种。 一、许多珍贵的苦苣苔科植物生长在亚洲，其中有芒毛苣苔、唇柱苣苔、 半蒴苣苔和台闽苣苔等。中国有5 8 属( 其中2 7 属3 7 5 种特产我国) ，4 6 3 种， 均属苦苣苔亚科。人类活动使某一物种的中心分布区遭受破坏，只遗留下少数 边缘分布区的种群，这些种群就处于“致危生境”中。我国很多苦苣苔种类为 珍稀濒危物种，值得研究保护，许多品种可筛选开发成为观赏花卉。 组织培养和快速繁殖是有效保护濒危物种的手段之一。以烟叶唇柱苣苔( c h e t e r o 护i c h a ) 、弄岗唇柱苣苔( cf o n g g a n g e n s i s ) 和半蒴苣苔( hs u b c a p i t a t a ) 为主要实验材料，运用组织培养的方法，对苦苣苔植物的快速繁殖过程进行探 讨。于盛夏采取植物嫩叶为外植体离体培养能得到最好的效果：m s 培养基附加 i x 苫苣昔科植物的块速繁聃、离- 体保存及耐阴性圳究 b a 0 1 3 0m gl ，n a a 0 1m gl ，蔗糖3 0g1 4 材料增殖快。通过本实验证明 苦苣苔植物的叶片组织具有较强的再生能力。当生长调节物质，尤其是生长素 和细胞分裂素的含量适宜时，某些苦苣苔在3 4 个月内可由一片叶子再生1 0 0 0 株以上的小植株。 到目前为止，已成功培养了1 6 种( 共2 4 个栽培种) 苦苣苔科植物，栽培 成活约1 5 0 0 盆( 株) 。某些种类，如烟叶唇柱苣苔、焰苞唇柱苣苔、菱叶唇柱 苣苔、非洲紫罗兰和大岩桐等，已经开花。 二、作者在近五年的研究过程中，在苦苣苔科植物组织培养技术的基础上， 深入研究了苦苣苔叶片外植体的离体保存技术，实验结果如下： ( 1 ) 建立了烟叶居柱苣苔、焰苞唇柱苣苔、刺齿唇柱苣苔、半蒴苣苔、非 洲紫罗兰、大岩桐等2 0 余种苦苣苔一般保存及缓慢生长保存技术体系； ( 2 ) 对3 种苦苣苔的超低温保存技术研究表明：用液氮超低温保存苦苣苔 植物叶片外植体是可行的。其超低温保存技术可采用的程序为：外植体诱导一 室温自然干燥一冰冻保护剂脱水一液氮保存一基本培养基洗涤一固体培养基再 培养。 ( 3 ) 采用单因子实验设计，对3 种苦苣苔叶片外植体玻璃化法超低温保 存程序进行筛选、优化，建立了一套使用于烟叶唇柱苣苔、菱叶唇柱苣苔、半 蒴苣苔外植体玻璃化法超低温保存程序，即继代培养2 0d 的外植体一室温( 2 2 。c 一2 5 0 c ) 干燥处理3d 一2m 甘油+ 4m 蔗糖，室温( 2 2o c 一2 5o c ) 处理2 0m i n 一0 o cp v s 4 溶液处理2 0m i n 一液氮冻存一4 0 0 c 水浴化冻一1 2m 蔗糖+ m s 基本培 养基洗涤一转入m s 培养基再培养。 三、苦苣苔科植物许多具有较高的观赏价值，许多是我国特有濒危物种， 适宜在阴处生长，但其耐阴性国内外尚未见报道。本文对3 种有代表性苦苣苔 植物进行遮荫处理，研究光强对光合特性、叶绿素含量、解剖结构以及生物量 方面的影响。 通过人为控制光强，对焰苞唇柱苣苔( cs p a d i c f ，0 r 肌话) 、非洲紫罗兰( & i o n a n t h a ) 和弄岗唇柱苣苔( cl o n g g a n g e n s i s ) 在温室内全光照1 0 0 、5 0 、 3 0 、1 0 条件下的光合特性、叶绿素荧光特性、叶绿素含量、叶片解剖结构 以及生长性状进行了研究。结果表明苦苣苔有较低的光补偿点( 2 0 p m o l m - 2 s 4 ) 和光饱和点( 6 0 0p m o l r l l - 2 s 4 ) 。遮荫后的净光合速率明显大于全光下。研究了 x 四川大学博f 学位论立 实际量子效率( p h ip s i i ) 和非光化学淬灭( n p q ) 等叶绿素荧光特性的变化规 律，研究了苦苣苔对光照强度的适应性。 遮荫对叶绿素含量的影响总体表现为随光强的减弱叶绿素含量增加，而 c d c b 值降低。与对照相比，遮荫条件下叶面积增大，叶色深绿，叶片厚度以及 栅栏组织和海绵组织厚度小，维管束不发达，表现出阴生叶的特点。 植物的光补偿点、饱和点以及叶绿索含量、叶绿素a b 值都是衡量植物耐阴 性的重要指标，植物的叶片解剖结构与耐阴性关系紧密。3 种苦苣苔的耐阴性从 强到弱分别为非洲紫罗兰 焰苞唇柱苣苔 弄岗唇柱苣苔。 本研究为苦苣苔科植物的快速繁殖、离体保存及引种栽培提供理论依据。 关键词：苦苣苔科；快速繁殖：叶片外植体；离体种质保存；玻璃化法超低温 保存；光合特性；叶绿素荧光特性：耐阴性 苦苕苫科植物的快速繁殖、离体保存及耐阴性研究 s t u d i e so nr a p i dp r o p a g a t i o n ，c r y o p r e s e r v a t i o n a n ds h a d et o l e r a n c eo fg e s n e r i a c e a e m a j o r ：b o t a n y p h d c a n d i d a t e ：t a n gz h e n g h u is u p e r v i s o r ：p r o f l i nh o n g h u i t h eg c s n e r i a c e a ef a m i l y ，w i t hf e we x c e p t i o n s ，i sc h i e f l yw a r m c l i m a t e ，f o u n di n t r o p i c a l a r e a s t h i sg i a n tf a m i l yo fs o m e1 5 0d i f f e r e n tg e n u s ，a n da p p r o x i m a t e l y 3 7 0 0s p e c i e s ，i n c l u d e sh u n d r e d so fh a n d s o m e ，o f t e nv e l v e t y - l e a v e dp l a n t sw i t h s h o w yw h e e l s h a p e d ，t u b u l a r , o rb e l l - l i k ef l o w e r s t h eg e s n e r i a d sa r es ov a r i a b l ei n f o l i a g e ，t e x t u r e ，g r o w t h ，a n df l o w e r i n gh a b i t st h a to n ew o u l dh a v et ob eas p e c i a l i s t t or e a n z et h a ta l lw e r em e m b e ro ft h es a m ep l a n tg r o u p t h ew e s t e r nh e m i s p h e r e - - m e x i c o ，t h ew e s ti n d i e s ，c e n t r a la n ds o u t ha m e r i c a - - o f f e rt h eg r e a tw e a l t hi ns p e c i e so fg e s n e r i a d si nc u l t i v a t i o nt o d a y m o s ti m p o r t a n to f t h i st r o p i c a la m e r i c a ng r o u pa r et h es i n n i n g i a s ，t h ec o l u n m e a s ，a n de p i s c i a s a f r i c a i sn o ts or i c ho ns p e c i e s ，b u tf r o mar a t h e rs m a l la r e ai ne a s ta f r i c ao r i g i n a t et h e v a r i o u ss a i n t p a u l i a ，w h i c ha st h e a f r i c a nv i o l e t i se a s i l yt o d a yt h em o s ta d m i r e d l i t t l ef l o w e r i n gp l a n ti nt h eh o m eo fw e s tc o u n t r i e s 1 m a n yc u r i o u sg c s n e r i a d sc o m ef r o ma s i a ；a m o n g s tt h e ma r ea e s c h y n a n ，c h i r i t a , h e m i b o e a ，a n dt i t a n o t r i c h u ma n ds oo n f i f t ye i g h tg e n u s e s ，4 6 3s p e c i e sh a v eb e e n f o u n di nc h i n a ，a n dt h e r ea r e2 7g e n u s e sc o u l db ef o u n di nc h i n ao n l y t h e r ea r ea l l b e l o n gt oc y r t a n d r o i d e a e l o t so ft h eg e s n e r i a d sa r er a r e l ya n de n d a n g e r e ds p e c i e s ， 蚶川大学博l 学位论文 i o t so ft h e ma r eb e a u t i f u io r n a m e n t a lf l o w c r s w h e nt h eo b n t r a ld i s t r i b u t i o na r e ao fa s p e c i e si sd e s t r o y e db yh u m a na c t i v i t i e s ，r e m a i n i n gp o r t i o n so ft h ep o p u l a t i o n sa l o n g m a r g i n a la r e a so ft h ed i s t r i b u t i o nm a yn o th a v eh a b i t a ts u i t a b l et om a i n t a i nt h e s u r v i v a lo ft h es p e c i e s r a r ea n de n d a n g e r e dp l a n t su s u a l l yh a v el i m i t e dr e p r o d u c t i v e c a p a c i t i e sa n dv e r ys l o wg r o w t hr a t e s t h eu s e o fi nv i t r oc u l t u r ec a l lo v e r c o m et h e s e d i f f i c u r i e s t h i ss t u d yd e a l sw i t ht h em e t h o d sf o ri nv i t r or a p i dp r o p a g a t i o na n dc o n s e r v a t i o n o fg e s n e r i a d s a n o t h e rp u r p o s eo ft h i se x p e r i m e n ti st os e a r c ha n dd e m o n s t r a t et h e h i g hr e g e n e r a t i v ec a p a c i t yo fl e a ft i s s u eo fg e s n e r i a d s w eu s e dch e t e r o t r i c h a c l o n g g a n g e n s i sa n dhs u b c a p i t a t aa st h em a i nm a t e r i a l s t h ec o n t a m i n a t i o nr a t ew a s g r e a t l yd e c r e a s e db yu s i n gai m p r o v e ds u r f a c e - 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2 5 。c ) 3 d - - - d o a d i n go fe x p l a n t sw i t h2mg l y c e r o la n d4m s u c r o s ef o r2 0m i na tr o o m t e m p e r a t u r e ( 2 0 2 5o qd e h y d r a t i o n o f e x p l a n t si n ac o n c e n t r a t e dv i t r i f i c a t i o n s o l u t i o n ( p v s 4 ) f o r2 0m i na t0o c - - p l u n g ei n t ol i q u i dn i t r o g e nd i r e c t l y t h a w i n gi n w a t e rb a t ha t4 0o c u n l o a d i n go fe x p l a n t sw i t hm sa n d1 2ms u c r o s ef o rt h r e e t i m e s r e c u l t u r eo nm sm e d i u m 3 m a n ys p e c i e so fg e s n e r i a d sh a v eh i g h l yd e c o r a t i v ev a l u e so fb o t hl e a v e sa n d f l o w e r s s o m eo fg e s n e d a d sa r ee n d e m i ca n de n d a n g e r e di nc h i n a t h e ya r e e x c e l l e n ts h a d ep l a n t sa n da l m o s tn o n es t u d yw e r ec o n d u c t e do ns h a d e - t o l e r a n c eo f t h eo e s n e r i a c e a ep l a n t s t h ee f f e c t so fs h a d eo nt h e p h o t o s y n t h e t i cc h a r a c t e r i s t i c s ，c h l o r o p h y l l f l u o r e s c e n c ei nl e a v e s ，c h l o r o p h y l lc o n t e n t s ，l e a fa n a t o m i c a ls t r u c t u r ea n dg r o w t h c h a r a c t e r so fc s p a d i c i f o r m i s s i o n a n t h aa n dc 1 0 n g g a n g e n s j sw e r ed e t e r m i n e d u n d e rd i f f e r e n tl i g h tc o n d i t i o n s ( 1 0 ，3 0 ，5 0 a n d1 0 0 f u l ll i g h ti ng r e e n h o u s e ) w i t h i np o t s t h er e s u l t ss h o w e dg e s n e r i a c e a ep l a n t sh a dl o w e s tc o m p e n s a t i o np o i n t ( 2 0 t m o l m - 2 s 4 ) a n ds a t u r a t i o np o i n t ( 6 0 0 _ m o l m - 2 s “) 1 r h en e tp h o t o s y n t h e t i cr a t e ( 尸n ) w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri ns h a d et h a ni nf u l ll i g h t c h a n g ec h a r a c t e r i s t i c so f c h l o r o p h y l l f l u o r e s c e n c e ，s u c h a sr e a l q u a n t u me f f i c i e n c y ( p h i p si i ) ， n o n p h o t o c h e m i c a lq u e n c h i n g ( n p q ) a n ds o o n 。a n dt h e a d a p t a b i l i t y o f 3 g e s n e r i a c e a es p e c i e sw e r es t u d i e du n d e rd i f f e r e n ti r r a d i a n c e c h l o r o p h y l lc o n t e n t sw e r e i n c r e a s e da n dv a l u eo fc a ( xw a sd e c r e a s e dw i t h s h a d i n g s h a d i n ga f f e c t e dl e a fa n a t o m i c a lc h a r a c t e ra sw e l l 3g e s n e r i a c e a es p e c i e s h a v e t y p i c a l l y s h a d ea n a t o m i c a ls t r u c t u r e g r o w t hc h a r a c t e r sa td i f f e r e n t l i g h t i n t e n s i t i e sw e r es i g n i f i c a n t l ya f f e c t e d w i t hs h a d i n gl e v e l si n c r e a s i n g ，b i o m a s so ft h e p l a n t s d e c r e a s e d l i g h tc o m p e n s a t i o np o i n t s ，l i g h ts a t u r a t i o np o i n t s ，c h l o r o p h y l lc o n t e n t sa n dv a l u e o fc j c bc a na l lb ei m p o r t a n ti n d e xo fs h a d e - t o l e r a n c e ，l e a fa n a t o m i c a lc h a r a c t e rh a d c l o s er e l a t i o nw i t hs h a d e t o l e r a n c e x i v 幽川人学博士学位论文 a c c o r d i n g t ot h e i rp h o t o s y n t h e t i cr e s p o n s e st os h a d et r e a t m e n t s ，t h es h a d et o l e r a n t a b i l i t yo f3g e s n e r i a c e a es p e c i e sw a si nt h eo r d e r ：s i o n a n t h a c s p a d i c i f o r m i s c 1 0 n g g a n g e n s 括 t h e o r yg u i d e sw e i ep r o v i d e do fg e s n e r i a c e a ep l a n t so ft h e i rc u l t i v a t i o na n d p r o p a g a t i o ni ng r e e n h o u s e k e yw o r d s ：g e s n e r i a c e a e ；r a p i dp r o p a g a t i o n ；l e a fe x p l a n t s ；i nv i t r oc o n s e r v a t i o no f g e r m p l a s m ；c r y o p r e s e r v a t i o n ；p h o t o s y n t h e t i c c h a r a c t e r i s t i c s ； c h l o r o p h y l lf l u o r e s c e n c ec h a r a c t e r i s t i c s ；s h a d e t o l e r a n c e 蔷苣苔科植物的伙速繁触、离体保存发耐阴抖研究 第一章 表格目录 表t 1 中国苦苣苔科植物预危及稀有种 表1 2 不同的生长调节物对不定芽诱导分化的影响 表1 3 不同浓度n a a 和队组合对不定芽分化的影响 表1 4 蔗糖及活性炭的浓度对生根培养的影响 表1 5 不同的生长调节物对体细胞胚诱导分化的影响 表16 不同浓度n a a 和b a 组合对不定芽分化的影响一 表17 活性炭和i a a 的浓度对生根培养的影响 表1 8 不同的生长调节物对不定芽诱导分化的影响 表19 不同浓度n a a 和卧组合对不定芽分化的影响 表11 0 碳源及i a a 的浓度对生根培养的影响一 第二章 表2 1 玻璃化法超低温保存程序中关键步骤试验 袭2 2 离体保存和快繁的苦苣苔种质 表23 自然干燥处理不同时间对外植体成活率的影响 表2 4 装载溶液处理不同时间对外植体成活率的影响 表2 5 玻璃化溶液处理不同时间对外植体成活率的影响 袤2 6 去装载溶液处理不同时间对外植体成活率的影响 表2 7 玻璃化法超低温保存程序中关键步骤试验 表2 8 继代不同天数对外植体成活率的影响 第三耄 表31 遮荫处理对苦苣苔叶绿素和类胡萝i 、素含量的影响 表3 2 遮荫处理对几种苦苣苔叶片结构的影响 表3 3 遮荫处理对苦苣苔生物量的影响 表3 4 不同遮荫水平下3 种苦苣苔其他生长性状 z z黑篡篡篡竺竺篡黑= 四川大学博士学位论义 图片目录 第一章 囝1 1 烟叶唇桩苣苔快速繁殖过程 图1 2 烟叶唇柱苣苔叶片外植体诱导组织解剖图 图1 3 弄岗唇柱苣苔快速繁殖过程 图1 4 弄岗唇桂苣苔叶片外檀体发育过程组织解剖图一 图1 5 半葡苣笞快速繁殪过程 图16 半蒴苣苔叶片外植体发育过程组织解剖图 第二童 围21 焰苞唇桂苣苔常温保存及快速繁殖过程 图2 2 菱叶唇柱苣苔常温保存及快速繁殖过程 图2 3 好望角苣苔常温保存及快速繁殖过程 图2 。4 异裂苣苔和荔渡唇桂苣苔常温保存及快速繁殖过程 图2 5 非洲紫罗兰常温保存及快速繁殖过程， 图2 6 大岩桐常温保存及快速锻殖过程 图2 7 苦苣苔常温保存及缓慢生长保存 圈2 8 苦苣苔科植物的玻璃化法超低温保存 第三章 图3 1 不同遮荫处理对3 种苦苣苔净光合速率的影响6 4 图3 2 随着光强减弱3 种苦苣苔蒸腾速率8 月和o 月的差异8 5 图3 3 温室内的光合有效辐射日变化6 6 图3 4 不同遮荫处理下焰苞唇柱苣苔的净光合速率，胞间二氧化碳浓度，蒸腾速率， 叶表面温度和空气相对湿度的日变化一6 7 图3 5 不嗣遮荫处理下非洲紫罗兰的净先合速率，胞间二氧化碳浓度，燕腾速率， 叶袭面温度和空气相对湿度的日变化6 8 图36 不同遮荫处理下弄岗唇柱苣苔的净光合速率，胞间二霸化碳浓度，蒸腾速率， 计表面温度和空气相对湿虚的日变6 9 图37 苦苣苔光系统i i 光化学效率随遮荫梯度的变化7 2 v i i 芒3 “衢船盯船 一 f ， ， ， r f 舌卧跎弘弱驰耵 苦苣苔科植物的快速繁殖、搿体保存及耐阴性研究 图3 8 焰苞唇柱苣苔光系统i i 实际光化学效率、非光化学猝灭和”光化学淬灭随遮 荫梯度的变化。7 4 图3 9 非洲紫罗兰光系统i i 实际光化学效率、非光化学猝灭和”光化学淬灭随遮荫 梯度的变化7 5 雷3 1 0 弄岗唇柱苣苔光系统i l 实际光化学效率、非光化学猝灭和光化学淬灭随遮荫 梯度的变化7 6 图31 1 不同遮荫处理对3 种苦苣苔叶片组织结构的影响8 7 i i 苦苣蕾科植物的快速繁殖、离体保存及耐阴性研究 声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行 的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加 以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包含为获得四j i l 大学或其他教育机构 前学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研 究所傲的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指 导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。 心川人学博十学位论文 第一章苦苣苔科植物的组织培养与快速繁殖 摘要：烟叶唇柱苣苔( ch e t e r o t r i c h a ) 、弄岗唇柱苣苔( cl o n g g a n g e n s i s ) 和 半蒴苣苔( hs u b c a p i t a t a ) 是中国特有的苦苣苔科植物。本实验以叶片为外植 体，建立了3 种苦苣苔离体培养与快速繁殖体系。最适不定芽诱导培养基为： 烟叶唇柱苣苔m s 培养基附加0 1m g l 。1n a a 和0 1m gr 1b a ，弄岗唇柱苣苔 m s 培养基附加o 1 m g l d n a a 和o 5 m g l b a ，半蒴苣苔m s 培养基附加0 1 m g l 以n a a 和0 5 m g l b a ；最适生根培养基为：烟叶唇柱苣苔1 2 m s 附加5 9 1 4 活性炭和3 0 9 l d 蔗糖，弄岗唇柱苣苔m s 附加0 1 m 9 1 1 m ，3 09 1 。蔗糖，半 蒴苣苔1 2 m s 附加0 1 m g l 。姒，3 0g l 。 关键词：快速繁殖；叶片外植体；器官发生；体细胞胚胎发生 1 引言 ， 植物本身的原因以及人类活动的干扰破坏是造成植物濒危的两大原因( 宋 延龄等1 9 9 8 ，文和群等1 9 9 8 ，张大勇和姜新华1 9 9 9 ) 。人类对森林的滥砍乱 伐，毁林开荒，对植物资源的掠夺开发利用，是造成植物资源濒危的最主要和 直接的原因。由于绝大多数濒危植物生长在山多土地少、耕作粗放、农作物产 量很低的地区毁林开荒，造成大片难以利用的光秃石山，这种现象在广西的百 色、河池地区及云南的文山州非常普遍，森林的破坏和消失造成了植物种类和 种群数量的减少，并使生态环境恶化，使一些依赖森林的植物种类衰亡。 许多苦苣苔科种类只在石灰岩密林下阴湿处才能发现，一旦森林被破坏它 们就难以生存。基于苦苣苔科植物的上述特征，我们有必要对苦苣苔进行筛选， 对中国特有的濒危种类以及具有园艺观赏和药用价值的种类进行开发和保护。 本研究目的是建立苦苣苔科植物离体种质资源保存和快速繁殖的方法，在此基 础上收集保存苦苣苔科植物的濒危特有野生种，优良栽培品种( 适合于观赏、 园艺、药用等) ，以满足苦苣苔科植物商品化生产和生物技术研究的需要。 为使所保存的离体种质能用于生产和研究，必须达到以下要求( 陈维伦等 1 9 8 4 ，1 9 9 8 ) ：( 1 ) 要保持材料的遗传稳定性。虽然苦苣苔科的植物如非洲紫罗 兰、大岩桐、好望角苣苔等可以从花药( h r i g h e s 等1 9 7 5 ) 、叶柄f b i l k e y 等1 9 7 8 ) 。 苦苣苔科植物的快速繁殖、离体保存及耐阴性研究 表1 1 中国苦苣苔科植物濒危及稀有种 t a b l e1 1r a r e l ya n de n d a n g e r e ds p e c i e so fg e s n e r i a c e a ei nc h i n a 日l 臼 ( 宋延龄等1 9 9 8 ) 原生质体( y o i c h i r o 等1 9 9 5 ) 、花冠表皮下的组织( p e c ka n dc u m m i n g1 9 8 4 ) 经器官发生或体细胞胚胎发生再生植株，但一般选择叶片( c o o k e1 9 7 7 ， k u k u l c z a n k aa n ds u s z y n s k a1 9 7 2 ，s m i t ha n dn o r r i s1 9 8 3 ，s t a r ta n dc u m m i n g 1 9 7 6 ，常晋淑1 9 8 5 ，李惠芝等1 9 8 9 ，刘本叶等1 9 9 5 ，张丕方等1 9 8 6 ，陈家 银和朱鹿呜1 9 9 0 ) 培养的方法防止变异；( 2 ) 需保证培养物不为微生物所污染， 尽可能降低试管苗玻璃化( h 学贤和陈维伦1 9 8 7 ) 的比率。玻璃苗是植物组织培 养中出现的呈半透明状的，畸形的试管植株，它不能移栽成活于土壤或其它人 工基质中。由于它是一种很普遍的现象，在植物快速繁殖中造成的损失极大， 是试管苗生产中急待解决的个问题；( 3 ) 要有较长的继代培养时间，以省工、 省时和减少转移时的损失；( 4 ) 在需要时能够通过快繁技术得到批量的植株。 2 四川大学博士学位论史 对于未见报道的植物材料进行快速繁殖应遵循以下途径：( 1 ) 筛选效果较好的 植物激素组合；( 2 ) 筛选效果较好的植物激素浓度水平；( 3 ) 筛选效果较好的 生根培养条件。经过以上三步可以得出较好的快繁配方。 2 材料和方法 2 1 植物材料 烟叶唇柱苣苔( c h i r i t ah e t e r o t r i c h am e l l ) 属于苦苣苔科( g e s n e r i a c e a e ) 唇柱苣苔属( c h i r i t ab u c h - h a m e xd d o n ) ，产海南( 琼中、琼海、保亭、三 亚) 。生于山谷林中或溪边石上。由于分布区域受限制及种群数量少，烟叶唇柱 苣苔为我国特有的珍稀苦苣苔科植物( 王文采1 9 9 0 ，李振宇和王印政2 0 0 4 ) 。 弄岗唇柱苣苔( c h i r i t al o n g g a n g e n s i swt w a n g ) 属于苦苣苔科 ( g e s n e f i a c e a e ) 唇柱苣苔属( c h i r i t a b u c h 一h a m e x d d o n ) ，产广西( 天等、 大新、龙州) 。生于石灰岩山林边石上或阴处石缝中。根状茎在民间供药用，治 跌打损伤。全株供药用，有温补养血的功效，是广西天等县生产的成药“桂花 膏”的原料之一。为我国濒危珍稀苦苣苔科植物( 王文采1 9 9 0 ，李振宇和王印 政2 0 0 4 ) 。 半蒴苣苔( h e m i b o e as u b c a p i t a t ac l a r k e ) 属于苦苣苔科( g e s n e r i a c e a e ) 半 蒴苣苔属( h e m i b o e ac l a r k e ) ，分布于四川、云南、贵州和广西等省。半蒴苣苔 又叫降龙草，为中国特有种。在民间用于治疗皮肤炎症、麻疹、毒蛇咬伤和烧 烫伤。花和总苞外形奇特，可供观赏。在南方一些地区作野菜食用，其叶味鲜 美，略似莴苣。该种通常生长在岩缝或苔藓覆盖的岩面上，适合在半荫蔽的岩 石园或山谷多石地带种植。半蒴苣苔属有2 3 种，均产于我国，其中2 1 种为中国 特有种，有些种已处于濒危状态。在自然状态下，该属植物常籍匍匐枝行营养 繁殖，增殖速度较慢( 王文采1 9 9 0 ，李振字和王印政2 0 0 4 ) 。 试验材料由中国科学院典型培养物保藏委员会( t y p ec u l t u r ec o n s e r v a t i o n c o m m i t t e e c h i n e