梅毒检测PPT课件.ppt

性病流行病学研究,流行病实验(三),流行病学教研室,1,.,一、实验目的,通过本课学习，了解性传播疾病的疫情状况；熟悉梅毒实验室快速检测方法在临床和流行病学调查中的重要作用。,2,二、性病概况,（一）性病（SexuailyTransmittedDiseasesSTD）1、传统性病的概念是以性接触为主要传播途径的传染病，现在已称它们为经典性病。有梅毒、淋病、软下疳及性病性淋巴肉芽肿四种疾病。,3,2、性病新定义,1975年WHO把以性行为接触或类似性行为接触为主要传播途径的一组传染病，称为“性传播疾病”。其定义概念有所改变，而且性病的种类也在原来的四种疾病的基础上又增加了：非淋菌性尿道炎、病毒性肝炎、细菌性阴道炎、阴道念珠菌病等等二十几种疾病。,4,3、我国性传播疾病新定义,八种：梅毒、淋病、软下疳、性病性淋巴肉芽肿、艾滋病、生殖器疱疹、尖锐湿疣和非淋菌性尿道炎。,5,（二）乙类传染病,在中华人民共和传染病防治法中把其中的艾滋病、淋病、梅毒这三种性病定为乙类传染病。,6,根据全国性病疫情报告，去年31个省份共报告8种性病859040例,较上年增长2.59。全国性病报告发病率为68.9110万,男女病例数之比为1.4:1。性传播感染是引起输卵管损伤导致女性不孕的主要原因。衣原体感染治疗不当的妇女，10%到40%发展为有症状的盆腔炎症。输卵管感染后损伤是导致30%到40%女性不孕的原因。,7,致命性最强的性传播感染之一就是人乳头瘤病毒。实际上，几乎所有的宫颈癌病例都和生殖器人乳头瘤病毒感染有关。宫颈癌是妇女第二大常见的癌症，每年有50万名宫颈癌新发病例，25万名妇女死于宫颈癌。新的预防人乳头瘤病毒感染的疫苗可减少与宫颈癌相关的死亡。,8,07.国务院防艾办常务副主任郝阳表示，我国自1985年发现首例艾滋病起，截至今年7月底，全国已累计艾滋病病毒感染者21.43万例，艾滋病患者达5.6758万例，死亡1.8246万例。2009年10月全国（不含台港澳，下同）共报告法定传染病514616例，死亡820人。报告死亡数居前五位的病种依次为艾滋病（339/1718）、肺结核、狂犬病、乙型肝炎和新生儿破伤风。,9,我国艾滋病流行的特点可以归纳为四个方面。第一，艾滋病疫情上升速度有所减缓。第二，性传播逐渐成为主要传播途径。第三，艾滋病疫情地区分布差异大。第四，艾滋病流行因素广泛存在。,10,北京晨报报道，去年全国共登记报告性病病人83.6万人,比上年上升30%多。专家估计，中国实际性病患者数在600万800万之间。北京作为流动人口聚集的大城市，性病增长率已超过40%以上。防病治病、规范市场、普及性病知识的工作已迫在眉睫。,11,（三）梅毒(Syphilis),梅毒(Syphilis)是流行全世界危害最大的性传播疾病。在中国性病图谱中，梅毒是一条陡升的曲线梅毒的增长幅度很大;自1979年我国再次报告梅毒后，报告病例数逐年增多。,12,在1993年到1999年之间成倍增长，年均增长85%，2000年全国梅毒报病数为80181例，是1993年的40倍。2000年我国8种性病的构成已发生改变，其中淋病第一，占33.25%，梅毒位居第三，占9.33%。,13,2009年10月全国共报告梅毒传染病发病26139例，死亡8人；淋病发病9663例，无死亡。报告发病数居前五位的病种依次为乙型肝炎、肺结核、痢疾、梅毒和麻疹。,14,1、危害性,梅毒是一种高致死、高致残的疾病，感染初期可发生皮肤、粘膜、骨关节和内脏器官的炎症性病变；晚期可发生心血管、脑神经、肝脾等重要器官广泛硬化和坏死性病变而导致死亡。因此梅毒是一种全身慢性传染病。,15,2、病原体,形态：梅毒的病原体为密螺旋体属苍白螺旋体（疏螺旋体属回归热螺旋体、文森氏螺旋体等），菌体细长,长约520um,宽约0.10.2um。成熟的螺旋体有612个螺旋，螺旋间的距离均匀，两端伸展、伸直。,16,梅毒螺旋体,电子显微镜下的梅毒螺旋体,17,18,活动特征,在暗视野显微镜下（低倍）观察，螺旋体运动活泼，菌体透明，折光性强，可以看到不停翻动的亮点，因此也不易着色，故称为苍白螺旋体。,19,运动方式,旋转式：依靠自己的长轴旋转，向前后移动，这是侵入人体的主要方式；伸缩螺旋间距离活动：不断地拉长身体，使一端附着，再收缩旋距而前进；蛇行式：弯曲，像蛇爬行，是常见的方式，此种特征式活动可与外阴部的其他螺旋体属相鉴别。,20,暗视野显微镜下梅毒螺旋体,21,22,理化性,梅毒为厌氧性微生物，抵抗力很低，人是唯一的宿主，离开宿主很难生存。耐冷而不耐热，-78可存活数年。但41可生存2h，60可存活35100立即死亡。病人发烧39以上，48h也可以杀死大量螺旋体，过去曾有人用发烧疗法治疗梅毒。干燥环境中生存12h，血液中储存置4冰箱，3日死亡。对消毒液敏感：高锰酸钾、石炭酸、来苏儿及酒精等均敏感。,23,3、感染途径,梅毒的传播途径主要是通过性接触；也可以通过胎盘传给下一代而发生胎传梅毒；极少数可由其他途径（如破溃的伤口或粘膜）传播。,24,三、梅毒实验室检测方法,梅毒诊断标准及处理原则GB159741995根据中华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法特制定本标准。,25,中华人民共和国国家标准梅毒诊断标准及处理原则诊断原则梅毒诊断必须根据病史、临床症状、体检及实验室检查等进行综合分析，慎重作出诊断。1.病史：应注意感染史、婚姻史、妊娠史、生育史等。对胎传梅毒应了解生母梅毒病史。2.体检：应作全面体格检查，注意全身皮肤、粘膜、骨骼、口腔、外阴、肛门及表浅淋巴结等部位，必要时进行心脏血管系统及其他系统检查及妇科检查等。3.实验室检查.,26,1)暗视野显微镜检查梅毒螺旋体。2)梅毒血清学试验：梅毒螺旋体抗原结合试验，如TPHA、FTA-ABS试验等，为证实试验。非梅毒螺旋体抗原结合试验，如VDRL、RPR、USR试验等，为筛查试验。3)组织病理检查。,27,（一）病原体检查,大体分为种，一般常规染色不行。1、暗视野检查方法：需要有暗视野显微镜。2、涂片染色法镀银法（Fontana）螺旋体为黑褐色。3、浓盐酸蒸汽显示法：螺旋体为粉红色。4、单克隆免疫荧光法（DFI）,28,浓盐酸蒸汽显示法,29,Fontana染色,30,单克隆免疫荧光法（DFI）,31,上述方法均是检测早期梅毒的最好方法，能在血清抗体出现又从病灶中分离出螺旋体，即可诊断为梅毒。如果病人有性乱史，又从病灶中分离出螺旋体，即可诊断为梅毒。,32,(二）梅毒螺旋体的血清学检查,感染梅毒后，人体内会产生两类抗体，一类是直接针对梅毒螺旋体的特异抗体；另一类则是针对类脂质的抗体。针对类脂质的抗体因不直接针对梅毒螺旋体，因此无特异性。这种抗体仅能供梅毒血清学诊断，本身无保护作用。,33,1、非特异性反应素血清学试验,人体感染梅毒螺旋体后，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，在34周机体便产生抗类脂质抗原的抗体（反应素），主要是IgM抗体。这种反应素对机体无保护作用，未经治疗的病人其血清内的反应素可长期存在，经过适当治疗后，抗体可逐渐减少甚至转为阴性，因此这种检测方法可用于治疗效果的观察和判愈。,34,检测方法类型（非特异性）,性病研究实验室试验VDRL；不加热血清反应素试验(USR)；自动反应素试验(ART)；快速血浆反应素试验(RPR）及TRUST。,35,2、特异性抗体血清学试验,用活的或死的梅毒螺旋体或其成分作抗原，测定抗梅毒螺旋体抗体。这种试验敏感性和特异性均高，一般用于对潜伏期梅毒的诊断和治愈梅毒的确认有特殊的意义，对治疗效果观察意义不大。主要用于诊断试验。,36,检测方法种类（特异性）,梅毒螺旋体血球凝集实验TPHA；梅毒螺旋体明胶颗粒凝集实验TPPA；荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTS-ABS）。,37,（四）非特异性反应素血清学试验快速血浆反应素环状卡片试验,(简称RPR),此试验是VDRL（性病实验室用心磷脂、卵磷脂和胆固醇作为抗原）试验的一种改良方法。优点是试剂及对照血清已标准化，费用低。此法快速、操作简单，肉眼即可读出结果。,38,1.实验原理,螺旋体体内的心磷脂、卵磷脂及胆固醇具有抗原性，可诱发机体产生（心磷脂或卵磷脂）反应素，该反应素可与从动物中提取的心磷脂（VDRL）抗原在体外发生抗原抗体反应。将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当遇到梅毒血清抗体(IgG、IgM)时，在物理的摇动、碰撞下，微粒便相互粘附而形成肉眼可见的黑色凝集颗粒，其结果便是阳性（+）。,39,本试验适用于一期梅毒(阳性率7585)及二期梅毒(阳性率100)诊断。也适用于疗效观察，判定复发及再感染的监测。由于操作简便，出结果快，亦适用于普查、婚检、产前检查及其它健康检查等。,40,2.试剂与器材,(1)试剂盒：梅毒快速血浆反应素诊断试剂上海科华生物技术有限公司(2)0.85生理盐水；(3)采集静脉血2.0ml,分离血清或血浆备用；(4)加样器（100ul)、吸头（100ul)。,41,3.操作步骤,孔号12345678稀释倍数原倍1:21:41:81:161:32阳性K阴性K生理盐水(ul)-50.050.050.050.050.0-样品(ul)50.050.050.050.050.050.0弃50.0-阳性血清(ul)-50.0-阴性血清(ul)-50.0抗原悬液(ul)50.050.050.050.050.050.050.050.0按每分钟100转速度，摇动卡片8-10分钟，置室温，肉眼观察结果.,42,4.结果判定,以出现凝集颗粒判为阳性。当凝集达到100%时可判+，当凝集达到75%时可判+,当凝集达到50%时可判+,当凝集达到25%时可判+,当凝集25%或无凝集现象时可判或-。活动性梅毒抗体滴度在1:8以上才有诊断意义。,43,测定结果显示,+,+,+,+,+、,阴性对照-,阳性对照+,1:2,1:8,1:4,1:32,1:16,原倍,+,44,结果表示,原倍1:21:41:81:161:32阳性K阴性K,#+.#-,测得样品中梅毒抗体滴度为1:32，梅毒抗体（+）。,45,5.注意事项,本试验在23-29环境下进行。RPR试剂使用前应充分摇匀。此方法主要用于梅毒的筛选和治疗效果的观察。初诊病人抗体滴度如果1:8时，应同时作特异性抗体试验证实或考虑其它疾病。,46,注意事项（续）,作为治疗效果观察时，恢复期病人第一年内每三个月复查一次，以后每半年复查一次观察抗体，随访2-3年。如RPR由阴性转为阳性或滴度升高4倍，属复发，应以加倍复治。,47,生物学假阳性（一般效价在1:4以内）由于TRUST法是非特异检测，因此在一般人中也有1%的假阳性。急性传染病：牛痘20%、疟疾100%、麻疹5%、猩红热20%、斑疹伤寒20%等。慢性传染病：瘤性麻风60%、性病性淋巴肉芽肿20%、乙肝10%、结核、软下疳等。自身免疫疾病：红斑狼疮20%、类风湿、皮肌炎、硬皮病等。其他：肝硬化、海洛因成瘾94.6%、淋巴肉瘤等。,注意事项（续）,48,假阴性主要是人工假阴性，试剂不敏感器材不清洁；免疫机能缺陷患者真患有梅毒则不出现反应素反应。,49,四、实习报告,1、实验目的;2、实验原理;3、试剂与器材;4、实验方法;5、结果判定;6、结果讨论与分析。（即测得结果是什么？得出的阳性、阴性的结果说明了什么？）。要求：1、字迹工整，表述清楚。2、结果要有分析讨论。,50,黄桂蓉,2009.11.,Thankyou!,51,52,性病性淋巴肉芽肿LGV是由沙眼衣原体的L1、L2和L3型引起的传染病，主要侵犯淋巴组织。,53,所用抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇的乙醇溶液。梅毒螺旋体破坏人体组织过程中，在体内释放出一种抗原性心磷脂，能刺激机体产生反应素，该反应素与从牛心中提取的心磷脂在体外可发生抗原抗体反应。卵磷脂的作用是加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂与卵磷脂遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水析出结晶，反应时结晶成为载体(核心)，在载体或核心的周围，包裹了一层心磷脂和卵磷脂，形成一种胶体微粒，这种微粒遇到梅毒血清抗体(IgG、IgM)，即粘附在胶体微粒的周围，形成疏水性薄膜，由于摇动、碰撞，使颗粒与颗粒互相粘附而形成肉眼可见的颗粒凝集和沉淀，即为阳性反应；,54,2、梅毒血清学检测梅毒血清学检查对于诊断二期、三期梅毒，以及判定梅毒的发展和痊愈，判断药物的疗效都有十分重要的意义。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验。前者常用于临床筛选及判定治疗的效果，抽血后1小时即可出结果，费用也低廉。后者主要是用于判定试验，但是它不能判定治疗效果，一旦患有梅毒，这一试验将终身阳性。(1)非梅毒螺旋体血清试验这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。常用的有三种：性病研究实验室玻片试验（VDRL）；血清不加热的反应素玻片试验（USR）；快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）。可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。(2)梅毒螺旋体血清试验包括有：荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）；梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）；梅毒螺旋体制动试验（TPI）等。这类试验