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(法医学专业论文)家兔创伤性多器官功能障碍综合征肝抗氧化能力变化的研究.pdf.pdf 免费下载
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文档简介
中文摘要 家兔创伤性多器官功能障碍综合征 肝抗氧化能力变化的研究 摘要 静f 多器官功能障碍综合征( m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o n s 出、洒e ,m o d s ) 是当今国内外医学界正积极研究的时代 性重要课题。系严重创伤或损伤、感染、烧伤等原因导致 的机体同时或序贯地出现两个或两个以上器官功能障碍甚 至衰竭的综合征。但m o d s 时肝抗氧化能力的变化至今 尚不清楚。 、本实验通过挤压家兔双后肢肌肉丰富部位复合 静脉注射内毒素造成了创伤性m o d s 模型,通过观察肝 肾功能、多器官形态学改变以及肝脏氧化损伤、抗氧化能 力的变化,来探究m o d s 的发病机理,为法医实践中对 多发损伤导致死亡的定性提供一定理论依据;并可为临床 有效救治严重多发损伤提供科学依据。 ( 方法:健康新西兰大耳白兔4 0 只,体重1 8 2 2 始, 雌雄不拘,随机分组。m o d s 模型制备:实验前2 4 小时 禁食,自由饮水。动物俯卧位,用自制带槽兔台固定双后 肢( 防止股骨被压碎) ,双后肢肌肉丰富部位上压2 2 5 k g 标准重物,3 小时后解压,间隔3 0 分钟后,再负重3 0 分 钟,重复2 次,然后耳缘静脉注射内毒素 ( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e ,l p s ) 2 m g k gb w ,笼中饲养,达到预定时间采血、收集标本待检。 实验分为4 组,挤压复合内毒素1 0 小时组即( c + l 。) 组, 挤压复合内毒素2 小时组即( c + l ) 组,单纯挤压组( c ) 中文摘要 组和假手术组s h a m 组。测定血中丙氨酸氨基转移酶( a l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e ,a l t ) 、天门冬氨酸氨基转移酶( a s p m a m e a m i n o t r a n s f e r a s e ,a s t ) 、尿素氮( b l o o d u r e a n i t r o g e n , b u n ) 、肌酐( c r e a t i n i n e ,c r ) 含量;取肺、肝、。肾部分组织测 定湿干重比、水含量;动物活杀后取肝组织测定丙二醛 f m a l o n d i a l d e h y d e , m d a ) 、超氧化物歧化酶( s u p e r o x i d e d i s m u t a s e ,s o d ) 、过氧化氢酶( c a t a l a s e , c a t ) 、谷胱甘肽过氧 化物酶( g l u t a t h i o n ep e r o x i d a s e ,g s h - p x ) 、总抗氧化1 n 以j ( t o t a l a n t i o x i d a n tc a p a c i t y ,t - a o c ) ;取各器官1 0 中性缓冲福 尔马林固定后进行光镜观察。采用p o m s 软件进行统计分 析。 结果:1 肝功能和肾功能的变化:p 岍于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组分别为3 5 9 6 6 u l ,1 5 0 9 0 3 9 0 贝。 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、7 2 1 2 + 1 2 3 8 u l ( 分别与s h a m 组、 c 组比较p 0 0 1 ) 、1 9 6 7 1 + t k 7 8 u l ( 分别与s h a m 组、c + l 2 组比较均为p 0 0 1 ) 。 a s t 于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组分别为1 5 6 2 5 3 2 u l ,1 6 4 6 0 + 8 5 7 2 u l ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、1 2 3 6 2 + 3 1 1 4 u l ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、3 3 4 4 3 _ + 1 4 8 1 3 u l ( 与s h a m 组、c 组、c + l ,组比较均为p 0 0 0 。 b u n 于s h a m 组、c 组、c + l ,组和c + l 1 0 组分别为6 4 9 _ 2 5 5 m m o l l 、1 2 , 8 5 2 5 i m m o l l ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、 ( 1 0 , 8 7 3 1 6m m o l l ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、1 9 1 8 4 勘a m a o l l ( 分别与s h a m 组、c 组、c + l ,组比较p 0 0 1 ) 。 c r 于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组分别为8 0 7 5 1 4 7 0 岬o l l 、8 2 2 0 2 1 5 0 9 n o l l 、8 3 1 2 1 4 0 1 9 n o l l 、m 6 5 0 中文摘要 4 6 2 3 邮o 分别与s h a m 组、c 组、c + l 2 组比较p 0 0 1 ) 。 2 肺脏、肝脏、。肾脏湿干重比、水含量 2 1 肺脏湿干重比于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组 分别为3 3 4 _ _ _ 0 1 3 、4 9 1 _ _ _ 0 4 3 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、4 9 0 + 0 2 3 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、5 7 4 + 1 0 5 ( 与s h a m 组、c 组、 c + l 组比较p 0 0 1 、p 0 0 5 、p 0 0 5 ) ;水含量于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l 1 0 组分别为7 0 0 0 _ _ 1 1 1 、7 9 4 8 _ _ _ 1 加( 与 s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、7 9 3 7 + 0 9 9 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、 8 2 1 9 _ _ _ 2 3 1 ( 均与s h a m 组、c 组、c + l ,组比较p 0 0 1 ) 。 2 2 肝脏湿干重比于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组 分别为3 6 5 + 0 1 9 ,3 斟q 1 5 ( 与s h a m 组比较p 0 0 5 ) 、3 8 , 5 0 1 4 f 与s h a m 组比较p 0 0 5 ) 、6 4 0 + 1 6 9 ( 分别与s h a m 组、 c 组、c + l 2 组比较p 0 0 1 ) ;水含量于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l 1 0 组分别为7 2 5 5 + 1 4 4 、7 3 9 7 - t - 1 0 0 ( 与s h a m 组比较 p 0 0 5 ) 、7 4 0 14 - 0 9 1 ( 与s h a m 组比较p 0 0 5 ) 、8 3 4 6 + 3 9 1 ( 均 与s h a m 组、c 组、c + l 2 组比较p 0 0 1 ) 。 2 3 肾脏湿干重比于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组 分别为3 9 0 + 0 3 6 , 4 5 2 + 0 2 3 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、4 5 4 + 0 2 5 ( 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、5 1 4 _ + o 6 5 ( 分别与s h a m 组、 c 组、c + l ,组比较p 0 叭、p 0 0 5 、p 0 0 5 ) 。水含量于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l 】o 组分别为7 4 1 5 _ + 2 3 6 、7 7 8 2 1 1 2 f 与s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、7 7 9 2 1 1 4 ( 与s h a m 组比较 p 0 0 1 ) 、8 0 3 1 _ + z 0 3 ( 分别与s h a m 组、c 组、c + l ,组比 较p 0 0 1 ) 。 3 肝氧化损伤及抗氧化能力变化 ( i ) m d a 含量于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组 主壅塑墨 分别为0 , t 2 + 0 舾m a o l m gp r o t 、0 4 6 _ + o o 缸m o l m gp r o t ( 与 s h a m 组比p o 0 1 ) 、0 5 3 + 0 0 2 n m o l m gr ) r o t ( 与s h a m 组、c 组比较均为p o 0 1 ) 、0 | 6 6 _ 撇o l m gp r o t ( 分别与s h a m 组、c 组、c + l 2 组比较p o 0 1 ) 。 ( 2 ) s o d 活性于s h a m 组、c 组、c - 也2 组和c + l l o 组分 别为3 5 1 9 2 _ _ _ 2 4 2 1 1 q u m g p r o t 、2 9 1 3 7 _ 1 2 3 5 n u m g p r o t ( s h a m 组比较p 0 0 1 ) 、2 6 5 1 2 _ 9 3 2 n u m gp r o t ( 与$ h s n 组、c 组 比较均为p 0 0 1 ) 、2 3 0 3 3 + 2 3 0 4 n u m gp r o t ( 分别与s h a m 组、 c 组、c + l 组比较p 0 0 1 ) 。 ( 3 ) c a t 活性于s h a m 组、c 组、c + k 组和c + l l o 组 分别为1 0 0 + 0 x ) u gp r o t 、0 7 6 4 - 0 1 3 6 u gp r 皈与s h a m 组比较 p 0 0 1 1 、0 6 3 + 0 ( b u gp r o t ( 与s h a m 组、c 组比较均为 p o 0 1 ) 、0 5 5 ( 1 0 2 u gp r o t ( 与s h a m 组、c 组、c + l 2 组比 较均为p o 0 1 ) 。 ( 4 ) g s h - p x 活性于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c + l l o 组分别为4 3 1 2 + 8 7 8 u m gp r o t 、3 0 4 3 _ + 2 2 3 u m gp r o t ( 与s h a m 组比较p o 0 1 ) 、2 3 6 6 + 1 4 t a j m gp r o t ( 与s h a m 组、c 组比 较均为p 0 0 0 、1 2 1 4 + _ _ 4 7 3 u m gp r o t ( 与s h a m 组、c 组比 较均为p 0 0 1 ) 。 ( 5 ) t - a o c 能力于s h a m 组、c 组、c + l 2 组和c 十l 1 0 组分别为l d 8 _ _ 0 0 7 u m gp r o t 、0 8 5 0 0 5 u m g p r o t ( 与s h a m 组比较p o 0 0 、0 7 2 + 0 0 7 u r a gp r o t ( 与s h a m 组、c 组比 较均为p o 0 1 ) 、0 5 7 + ( 1 ( b 2 j m gp r o t ( 与s h a m 组、c 组、c + l 2 组比较均为p o 0 1 ) 。 4 光镜观察 受压肌肉肿胀,断裂破碎,肌纤维横纹模糊不清或消 中文摘要 失有的肌纤维边缘呈锯齿状,间质出血、水肿及白细胞浸 润。 肝脏:中央静脉扩张淤血,白细胞数量明显增多,可 见微血栓形成;肝细胞肿胀,胞浆疏松,溶解样,有阿肝 细胞胞浆凝聚、嗜酸性增强;肝窦变窄,白细胞数目较多, 弥漫分布,可见串珠样变形红细胞。木 结论;1 挤压双后肢肌肉丰富部位复合静脉注射内毒 素较好复制外伤后m o d s 2 肝脏的抗氧化能力下降和 氧化损伤可能是m o d s 发生、发展过程中肝功能障碍的 重要发病原因。 关键词:氧化应激;创侮,多器官功能障碍综合征; 内毒素;法医病理学 、 茎壅塑里 _ 一 s t u d i e so nc h a n g e so fr a b b i t l i v e ra n t i o x i d a n t c a p a c i t y w i t ht r a u m a t i cm u l t i p l eo r g a n d y s f u n c t i o ns y n d r o m e a b s t r a c t o b j e c t i v e :m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n d r o m e ( m o d s ) i s a ni m p o r t a n tt o p i ci n v e s t i g a t e di nt h er e a l m o fm e d i c i n e i ti sas y n d r o m et h a tt w oo rm o r eo r g a n s s i m u l t a n e o u s l yo rs e q u e n t i a l l ya p p e a rd y s f u n c t i o n e v e n f a i l u r ea f t e rs e v e r et r a u m ao ri n j u r y ,i n f e c t i o na n db u r n a n ds oo n c h a n g e so fl i v e ra n t i o x i d a n ta b i l i t yw i t hm o d s w a ss t i l lu n c l e a r i nt h i ss t u d y , t h er a b b i tm o d e lo fm o d s w a sd e v e l o p e dt h r o u g hl p sv i at h ev e i na n dc o m p r e s s i n g h i n d l i m b sw h e r em u s c l ei sa b u n d a n t ,w eo b s e r v e d m o r p h o l o g i c a la n df u n c t i o n a lc h a n g e so ft h eo r g a n s a n d l i v e ra n t i o x i d a n ta b i l i t y ,a n di n v e s t i g a t e di t sp a t h o g e n e s i s i nf o r e n s i cm e d i c i n ea n dd i r e c t t h e r a p y i nc l i n i c a l m e d i c i n e m e t h o d s :f o r t yh e a l t h yn e w z e a l a n dw h i t er a b b i t so f e i t h e rs e x ,w e i g h t i n g1 8 - 2 2 k gw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o f o u rg r o u p s t h er a b b i t sw e r ef r e eo fc h o w ,a c c e s st ow a t e r f r e e l y2 4 hb e f o r ee x p e r i m e n t r a b b i tm o d e lo f m o d s :t h e h i n d l i m b sw e r ec o m p r e s s e dw i t h 2 2 5 k g s t a n d a r d h e a v y o b j e c t f o r 3 h ,r e l e a s i n gc o m p r e s s i o n f o r3 0 m i n ,t h e n c o n t i n u i n gb e i n gc o m p r e s s e d f o r3 0 m i nt w i c e a f t e r 6 英文摘要 c o m p r e s s i o n ,l p s ( 2 m g k g b w ) w a si n j e c t e di n t ot h ev e i n e x p e r i m e n t w a sd i v i d e di n t ol p sp l u sc o m p r e s s i o nf o r10 h ( c + l 1o ) g r o u p ,l p sp l u sc o m p r e s s i o nf o r2 h ( c + l 2 ) g r o u p ,s i m p l ec o m p r e s s i o n cg r o u pa n dn o r m a lg r o u p ( s h a m g r o u p ) i n e a c h g r o u p ,b l o o ds a m p l e s f o r d e t e r m i n i n g t h e1 e v e l so f a l t ,a s t ,b u na n dc r ,t i s s u e s f o rd e t e r m i n i n gt h ei e v e l so fm d ac o n t e n t sa n ds o d , c a t ,g s h - p xa c t i v i t ya n dt a o c ,w e r et a k e na f t e r e x p e r i m e n t a n i m a l sw e r ep u tt od e a t ha n dt i s s u e sw e r e f i x e df o r m i c r o s c o p e p o m s s o f t w a r ew a su s e df o r s t a t i s t i c a la n a l y s i s r e s u l t s :1 c h a n g e s o fl i v e ra n d k i d n e y f u n c t i o n s : p l a s m aa l tv a l u ew a s3 5 9 1 6 6 u l ,1 5 0 9 0 3 9 0 9 u l ( p 0 0 1v ss h a mg r o u p ) ,7 2 1 2 1 2 3 8 u l ( p 0 0 lv s s h a ma n dc g r o u p ) ,1 9 6 7 l 7 8 7 8 u 见( p 0 0 1v ss h a ma n d c + l 2g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2a n dc + l l og r o u p , r e s p e c t i v e l y p l a s m aa s tv a l u ew a s1 5 6 2 5 3 2 u l ,1 6 4 6 0 8 5 7 2 u l ( p 0 0 1v ss h a m g r o u p ) ,1 2 3 6 2 3 1 1 4 u l ( p 0 0 1 v ss h a m g r o u p ) ,3 3 4 4 3 1 4 8 1 3 u l ( p 0 0 l v ss h a m ,c a n dc + l 2 g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2 a n dc + l l og r o u p , r e s p e c t i v e l y p l a s m ab u nv a l u ew a s6 4 9 2 5 5 m m o l l ,1 2 8 5 2 5 1 m m o l l ( p 0 01v ss h a m g r o u p ) ,1 0 8 7 _ + 3 1 6 m m o l l ( p 0 01v ss h a m g r o u p ) 1 9 1 8 - - + 4 8 2 m m o l l ( p 0 0 1 v s s h a m ,ca n dc + l 2 g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2a n dc + l l o 英文摘要 一 一 g r o u p ,r e s p e c t i v e l y p l a s m ac rv a l u ew a s8 0 7 5 1 4 7 0 i r g n o l l ,8 2 2 0 2 1 5 0 i u n o l l ( p o o 1y ss h a mg r o u p ) ,8 3 1 2 1 4 0 1 p m o l l ( p 0 o1v ss h a m g r o u p ) ,1 4 6 5 0 + 4 6 2 3 r n o l l ( p o o 1v s s h a m ,ca n dc + l 2g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2 a n dc + l l o g r o u p ,r e s p e c t i v e l y 2 w e tt od r y w e i g h tr a t i oa n dw a t e rc o n t e n t so fl u n g ,l i v e r a n d k i d n e y 2 1 l u n gw dr a t i ow a s3 3 4 0 1 3 ,4 9 1 0 4 3 ( 尸 0 0 1w s h a m g r o u p ) ,4 9 0 0 2 3 ( p 0 0 1 v ss h a mg r o u p ) ,5 7 4 1 0 5 ( p o 0 1 ,p o 0 5 ,p 0 0 5v ss h a m ,ca n dc + l , g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2 a n dc + l l o g r o u p ,r e s p e c t i v e l y w a t e r c o n t e n t s i n l u n g w a s 7 0 0 0 1 1 1 ,7 9 4 8 1 7 0 ( p 0 o l y ss h a m g r o u p ) ,7 9 5 7 - - + o 9 9 ( 尸 o 0 iv ss h a m g r o u p ) , 8 2 1 9 2 3 1 ( j p 0 0 lv ss h a ma n dc g r o u p ) i n s h a m ,c , c + l 2 a n d c + l 1 0g r o u p ,r e s p e c t i v e l y 2 2l i v e rw dr a t i ow a s3 6 5 0 1 9 ,3 8 4 0 1 5 ( p 0 0 5v s s h a m g r o u p ) ,3 8 5 - + 0 1 4 ( p o 0 5v ss h a mg r o u p ) ,6 4 0 1 6 9 ( p o 0 1v ss h a m ,ca n dc + l 2 g r o u p ) i ns h a m , c ,c + l 2 a n dc + l l og r o u p ,r e s p e c t i v e l y w a t e rc o n t e n t si n 1 i v e rw a s7 2 5 5 1 4 4 ,7 3 9 7 1 0 0 ( p o 0 5v ss h a m g r o u p ) ,7 4 o l - + 0 9 1 ( p o 0 5v ss h a mg r o u p ) ,8 3 4 6 3 9 1 ( j p 0 0 1v ss h a m ,c ,c + l 2 g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2 a n dc + l l og r o u p ,r e s p e c t i v e l y 2 3k i d n e y w dr a t i ow a s3 9 0 - + 0 3 6 ,4 5 2 0 2 3 ( p o o1v s s h a m g r o u p ) ,4 5 4 - + 0 2 5 ( p o 0 1v ss h a mg r o u p ) ,5 1 4 8 英文摘要 0 6 5 ( p o 01 ,p 0 0 5 ,p 0 0 5r e s p e c t i v e l yy ss h a m , ca n dc + l 2g r o u pi ns h a m ,c ,c + l 2a n dc + l 1 0g r o u p , r e s p e c t i v e l y ) w a t e rc o n t e n t s i nk i d n e yw a s7 4 1 5 _ _ _ 2 3 6 , 7 7 8 2 1 1 2 ( p 0 0 5v ss h a m g r o u p ) ,7 7 9 2 1 1 4 ( p o 0 5 v ss h a mg r o u p ) ,8 0 3 1 2 0 3 ( p o 0 1 r e s p e c t i v e l y v s s h a m ,ca n dc + l 2 g r o u p ) i ns h a m ,c ,c + l 2 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l y m o r p h o n u c l e a rl e u k o c y t e 多形核白细胞 s u p e r o x i d ed i s m u t a s e 超氧化物歧化酶 t o t a la n t i o x i d a n tc a p a c i t y总抗氧化能力 t u m o rn e c r o s i sf a c t o r肿瘤坏死因子 家兔创伤性多器官障碍综合征肝抗氧化能力的研究 家兔创伤性多器官功能障碍综合征 肝抗氧化能力的研究 前言 多器官功能障碍综合征( m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n d r o m e ,m o d s ) 是当今国内外医学界正积极研究 的时代性重要课题。系严重创伤或损伤、感染、烧伤等 原因导致的机体同时或序贯地出现两个或两个以上器官 功能障碍甚至衰竭的综合征。1 9 7 3 年由t i l n e y 首先描 述【1 1 ,1 9 7 5 年b a u e 给其正式命名为多器官功能衰竭 ( m u l t i p l eo r g a nf a i l u r e ,m o f ) i 2 1 。1 9 9 2 年美国胸科医师 学会和危重病学会共同倡仪将沿多年m o f 改称 m o d s t 鲥。目前m o d s 已成为临床急救病房最常见的死 亡原因,而在法医实践中创伤性m o d s 也是常见的死 亡原因之一。本实验采用挤压双后肢肌肉丰富部位复合 内毒素感染造成了实验动物( 家兔) 的m o d s 的模型, 并通过观察肝肾功能、多器官形态学改变以及肝氧化损 伤、抗氧化能力的变化,来探究m o d s 发生、发展过 程中肝脏损伤的发病机理,旨为法医实践中对广泛性软 组织损伤导致死亡的鉴定提供一定理论依据;并可为临 床有效救治严重多发损伤提供科学依据。 1 实验材料 1 1 仪器设备 材料与方法 家兔创伤性多器官障碍综合征肝抗氧化能力的研究 1 t g l 1 6 b 型离心机 2 7 2 2 型光栅分光光度计 3 恒温水浴箱 4 p m 1 0 a 型光学显微镜 5 a e 2 4 0 电子分析天平 6 t n 型托盘式扭力天平 1 2 药品及试剂 上海安奇科学仪器厂 上海第二分析仪器厂 北京市医疗设备厂 0 l y m p u s 瑞士m e t t l e r 公司 上海第二天平仪器厂 1 l i p o p 0 1 y s a c c h a r i d e s i g m ac h e m i c a lc o 2 天门冬氨酸氨基转移酶( a
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