（遗传学专业论文）小鼠myosin+Ⅹ基因启动子的分析鉴定.pdf

- ici 一0 l 1 月 独创性声明 本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研究工作所 取得的成果。据我所知，除了特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果。对本人的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中作了明确的说明。本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名弛丕 日期：丝：互：亟： 学位论文使用授权书 本学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅。本人授权东北师范大学可以将学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇 编本学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：套坠指导撕签名：拯篁址 日 期：丛：! g 赵 1 3 + 期：2 1 ；竺：厶：客 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 电话： 邮编： ；， 摘要 肌球蛋白x ( m y o s i nx ，m y ox ) 是最近发现的一种仅表达于脊椎动物中的 非传统的肌球蛋白，分子量为2 4 0 k d a 左右。最近的研究表明，在大脑的发育过 程中还表达一种分子量为1 6 5 k d a 左右的m y 0x ，同全长的m y ox 相比，它同 样具有三个p h 结构域( p l e c k s t r i nh o m o l o g yd o m a i n ) ，一个m y t h 4 结构域 ( m y o s i n - t a i lh o m o l o g y4d o m a i n ) 和一个f e r m ( b a n d - 4 1 e z r i n r a d i x i n m o e s i n ) 结构 域，但缺少头部动力区，完全被5 u t r ( 4 8 0 b p ) 取代。这两种不同形式的m y o x 是m y 0x 基因的不同的转录产物。 为了分析m y ox 基因的转录调控机制，我们分别选取全长和无头m y ox 基 因o r f ( 蛋白编码框) 的5 侧翼区2 0 0 0 b p ，对它们进行了生物信息学的分析， 并且成功的构建了荧光素酶报告基因质粒p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和 p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 。通过对它们在2 9 3 细胞系中的荧光素酶活性检测分析， 我们发现两者都具有启动子活性，但是无头m y ox5 侧翼区2 0 0 0 b p 的序列的启 动子活性相对于全长的较弱。接着我们对全长和无头m y ox 的启动子进行了截 短突变，发现他们的核心启动子区位于靠近转录起始位点的5 0 0 b p 内。为我们进 一步研究m y 0x 的转录调控机制奠定了基础。 关键词：m y o s i nx ；启动子 二”1一 ，il_il 1tilir a bs t r a c t m y o s i n x ( m y 0x ) i sak i n do fr e c e n t l yd i s c o v e r e dm y o s i ni nv e r t e b r a t e s ， w h i c hi sa p p r o x i m a t e l y2 4 0k d a i na d d i t i o nt of u l l - l e n g t hm y 0x ，b r a i ne x p r e s s e sa s h o r t e rf o r mo fm y oxt h a tl a c k sam y o s i nh e a dd o m a i n t h i s h e a d l e s s m y 0xi s t h u su n a b l et of u n c t i o na sam o l e c u l a rm o t o r ，b u ti so t h e r w i s ei d e n t i c a lt of u l l - l e n g t h m y 0xa n d ，l i k ei t ，c o n t a i n st h r e ep l e c k s t r i nh o m o l o g y ( p h ) d o m a i n s ，am y o s i n t a i l h o m o l o g y4 ( m y t h 4 ) d o m a i n ，a n dab a n d - 4 1 e z r i n r a d i x i n m o e s i n ( f e r m ) d o m a i n t h e s et w o p r o t e i n sa r et h ed i f f e r e n tt r a n s c r i p t so fm y o x g e n e t oa n a l y z et h et r a n s c r i p t i o n a lc o n t r o lo fm y ox g e n e ，2 0 0 0 b yo ft h e5 - u p s t r e a m s e q u e n c e so ft h em o u s ef u l l - l e n g t hm y 0x c d n aa n dh e a d l e s sm y 0xe d n aw e r e a n a l y z e db yt h eb i o - i n f o r m a t i c s t of u n c t i o n a l l yc h a r a c t e r i s em y 0xp r o m o t e r a c t i v i t i e s ，t h e5 - u p s t r e a ms e q u e n c e sw e r ei n t r o d u c e di np g l - 3b a s i cv e c t o ra n d p r o m o t e ra c t i v i t y w a st e s t e d i nd i f f e r e n tc e l ll i n e s l u c i f e r a s er e p o r t e ra s s a y s i d e n t i f i e df u l l - l e n g t hm y 0xe x h i b i t i n gh i g hp r o m o t e r - l i k ea c t i v i t y , b u tl o wo f h e a d l e s sm y 0x f u r t h e r m o r e ，s e r i a ld e l e t i o n so ft h ep r o m o t e rs e q u e n c e sw e r ei n t r o d u c e di n p g l - 3b a s i cv e c t o ra n dp r o m o t e ra c t i v i t i e so ft h e s e5 a n d3 - d e l e t e dc o n s t r u c t i o n s w a st e s t e di n2 9 3c e l l l i n e k e yw o r d ：m y 0x ；p r o m o t e r n i1|l fi；， 目录 摘要i a b s t r a c t i i 目录i i i 引言1 1 肌球蛋白x 1 2 m y ox 的不同转录本2 3 启动子的研究4 材料与方法6 1 实验材料6 1 1 细胞株6 1 2 质粒6 1 3 主要试剂和试剂盒6 2 实验方法6 2 1 生物信息学分析的数据来源、分析方法6 2 2 小鼠基因组的提取7 2 3 报告基因质粒的构建7 2 4 缺失突变报告基因质粒的构建9 2 5 质粒的大量制备9 2 6 细胞培养1 0 2 7 细胞转染1 0 2 8 荧光素酶活性测定1 1 2 9 数据处理1 1 结论1 2 1 生物信息学分析结果1 2 1 1 转录因子结合位点分析1 2 1 2 c p g 岛分析及启动子活性分析1 5 2 含有m y ox 启动子的荧光素酶报告基因质粒p g l 3 一f m ( 一1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和 p g l 3 - h m ( - 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 的构建及鉴定1 5 3 m y ox5 上游2 k b 序列在2 9 3 细胞中的启动子活性检测1 6 4 m y ox 截短突变启动子的荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定1 7 5 m y ox 启动子的截短突变分析1 7 6 m y ox 启动子在不同哺乳动物细胞中的活性检测1 8 讨论2 0 参考文献2 2 i i i y-一lo f-l，ll-j 气 f 一 东北师范大学硕士学位论文 1 肌球蛋白x 引言 肌球蛋白( m y o s i n ) 是真核细胞内一种超家族蛋白质，1 8 6 4 年由k u e h n e 在研究骨骼肌收缩时发现并命名的【1 1 。分为非传统型肌球蛋白与传统型肌球蛋 白两大类。现己知有2 0 个亚家族组成，依据发现的先后顺序分别命名。肌球 蛋白是由一个重链和几个轻链组成，具有三个结构和功能不同的结构域：头部 结构域是最保守的结构域，它含有与肌动蛋白、a t p 结合的位点，负责产生力。 与头部相邻的结构域是a 螺旋的颈部( a h e l i c a ln e c kr e g i o n ) ，含有0 - 6 个i q m o t i f 和铰链区，可以通过同钙调蛋白或类钙调蛋白的调节轻链亚基的结合来 调节头部的活性。尾部结构域含有决定尾部是同膜结合还是同其它的尾部结合 的位点，它们的长短和功能在肌球蛋白各成员间的差别很大。研究表明，肌球 蛋白是一种分子马达，对细胞的形态、运动、运输以及信号传导起着重要的作 用【2 】【3 1 。例如肌球蛋白i i 在肌肉收缩和细胞分裂的过程中扮演了重要的角色。 在非肌肉细胞中，肌球蛋白也是细胞骨架的组成成分之一。肌球蛋白与神经系 统的很多生命活动相关，如细胞迁移、形态建成、生长锥运动、轴突生长、轴 突内物质的运输、突触囊泡的形成、信号传导以及感觉等。肌球蛋白的缺失可 导致多种神经系统疾病，已有研究表明肌球蛋白和肌球蛋白xv 的缺失可导 致人类的遗传性耳聋【4 】【5 】【6 】【刀。 肌球蛋白x ( m y o s i nx ，m y ox ) 是最近发现的一种仅表达于脊椎动物中 的非传统的肌球蛋白，最先在牛蛙内耳感觉上皮中发现i s ，分子量大小大约为 2 4 0 k d a 。同肌球蛋白i i 相比，m y ox 在脊椎动物的不同组织中的表达具有广 泛性，但表达水平相对较低，且在不同的细胞和组织中表达量是不一样的。 n o r t h e r n b l o t 结果表明m y ox 在睾丸、肾脏、胰腺、卵巢、甲状腺、脑垂体 腺、肺、胃、肝脏、结肠、小肠、胎盘和脑的大部分区域中均有较高水平的表 达；在前列腺、唾液腺、肾上腺、脾脏、乳腺和气管中有中等水平的表达：在 心脏、骨骼肌、主动脉、子宫和膀胱中表达水平很低【9 】【1 0 1 。m y ox 重链由头、 东北师范大学硕士学位论文 颈和尾三部分组成【9 】【1 明( 图1 ) 。头部动力区与肌动蛋白及a t p 结合的【1 1 】；其 颈部的i q 区域与钙调蛋白结合，螺旋结构域参与形成二聚体【1 1 】【1 2 】；其尾部区 域包括一个p e s t 蛋白水解位点，3 个连续的能参与p 1 3 k 信号通路的p h 结构 域【1 2 】 1 3 1 ，以及c 端的m y t h 4 和f e r m 结构域【1 4 1 。内源的m y ox 主要存在于 胞体、神经炎、生长锥、丝足顶端和富含a c t i n 的细胞突出。m y ox 能够与a c t i n 结合，沿微丝滑行，定位于丝状伪足的顶点，启动丝状伪足的形成和延伸，调 节神经突起的生长和导向，是一种马达分子【1 5 】【1 6 1 。m y ox 可以通过尾部结构 域结合n e v i n 受体d c c t l 7 1 、b m p 受体a l k 6 t 1 羽、钙调蛋白( c a l m o d o l i n ) 1 1 】、 微管( m i c r o t u b u l e s ) 和1 3 整合素( 1 3 i n t e g r i n s ) 【14 】【1 9 】，进而与神经元突起生 长与投射、内皮细胞迁移、细胞粘附及有丝分裂中纺锤体的形成等过程密切相 关。 - c a l p a i nc l e a v a g e 3 p h d o m a i n s 一 h n ap i p ad o w n s t r e a m 晴p 1 3 k ? b y - r 附d o m a i n - - - - - - - - - - - - - - - - - 一 h n d smj c t o t u b “e s r 薯r 啊d o m a i n b i m l s 即n t e 9 n n s q 露9 图1 肌球蛋白x 功能结构域模型 2 m y ox 的不同转录本 最近研究表明，在大脑发育过程中还表达另一种分子量为1 6 5 k d a 左右的 无头形式的m y ox 【9 】【2 0 1 ，同全长的m y ox 相比，这种无头形式的m y o s i nx 同 样具有三个p h 结构域( p l e c k s t r i nh o m o l o g yd o m a i n ) ，一个m y t h 4 结构域 ( m y o s i n - t a i lh o m o l o g y4d o m a i n ) 和- - 个f e r m ( b a n d - 4 1 e z r i n r a d i x i n m o e s i n ) 结 构域，但缺少动力头部区，因此不具备分子马达的功能【2 0 】( 图2 ) 。已有研究表 2 一 ， 全 东北师范大学硕士学位论文 明，过表达无头形式m y o s i nx 的n l t 细胞，粘着斑减少，细胞铺展和迁移能 力显著下降【2 i 】。且这种无头形式m y o s i nx 的表达具有明显的组织特异性，目 前只在大脑的发育中检测到其表达，提示这两种形式的m y ox 的表达可能具 有组织特异性，但是这两种形式的m y ox 是如何被转录调控的，依然不是很 清楚。 f u l l - l e n g t hm y o l 0 _ 2 加k d e 一1 7 4 09 7 91 1 m1 5 1 7 2 0 s 8 m o t o r日c c 睢s t 蹦 m y t h 4 f e r m 哆蛐5 u t rd 竺紫! 疆! ! - u 滋珊h 圈 一”4 3 蚰h , t t r o n s p i 捌o u to ff u t e - n g t hn n s c r i l x c o m m o n3 u t r ； 二一”广一a 、 、j 一 ； 百 a 1 t e r n a t e e x o n withl怆i。躲pe：s穆t嘲_ph翻啊_myt_h4h_fe豳rm誉ji5u t ro fh e a d l e s s 5b - 。躲：穆1 豳豳豳卜圈豳蠢 一h e a d l e s sm y o l 0 一1 6 5k d a 。 图2 肌球蛋白x 基因的简明图谱和全长无头两种形式的肌球蛋白x 的不同转录 模式。 ，! 小鼠m y ox 基因存在第1 5 号染色体上，基因组序列全长为1 9 11 1 k b ，该基 因由4 1 个外显子和4 0 个内含子组成。在数据库w w w e n s e m b l o r g 中，给出了 全长和无头两种形式m y ox 的转录体( 图3 ) ，其中m y ox - 0 0 1 为全长，m y o x 0 0 4 为无头。 j j j _ 为m bb ，8 m b 为6 0 m bb g 2 m b2 56 4 m bb6 g “i b 为6 8m bb j q h b2 ，j 乏l 冬一7 4 h 1 1 0 罱。l o l ， 叫删【it1 1 i h 啊i = 1 p r o t e i nc o d i n a rit _1 1 i i l l 啊n j 无头m y o i o m p 0 1 0 州p母一篮 ， c 、i 东北师范大学硕士学位论文 是不含启动子的对照，纵坐标r e l a t i v el u c i f e r a s ea c t i v i t y 表示相对于对照b a s i c 荧光素酶活性增加的倍数。 4 m y ox 截短突变启动子的荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定 为了找出核心启动子活性区，我们分别对全长和无头m y 0x 启动予上游2 k b 进行了从5 端开始的截短突变。我们分别设计了5 端突变的引物，f m1 0 0 0 f 、 f m5 0 0 f 、h m1 0 0 0 f 、h m5 0 0 f ( 表1 ) ，分别以报告基因质粒p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 为模板，扩增启动子序列，并将其成功地连入了 p g l 3 b a s i c 空载体，成功构建了p g l 3 f m ( - 9 5 3 + 3 1 4 ) 、p g l 3 一f m ( - 1 8 5 + 3 1 4 ) 和 p g l 3 h m ( 一6 4 5 + 3 2 7 ) 、p g l 3 - h m ( - 1 5 8 + 3 2 7 ) 四种荧光素酶报告质粒。通过 n h e i m l u i 和x h o i 进行双酶切，分别得到了1 0 0 0 b p 和5 0 0 b p 左右大小的带( 图 9 ) ，酶切载体片段和插入片段大小一致，且测序结果正确。 m1234 1 0 0 0 5 0 0 图9 双酶切鉴定图。m ：d l 2 0 0 0 ：1 ：p g l 3 f m ( - 9 5 3 + 3 1 4 ) ：2 p g l 3 一f m ( - 1 8 5 + 3 1 4 ) ； 3 ：p g l 3 - h m ( 6 4 5 + 3 2 7 ) ；4 - p g l 3 - h m ( - 1 5 8 + 3 2 7 ) 。 5 m y ox 启动子的截短突变分析 我们将含有荧光素酶报告基因的报告质粒p g l 3 - f m ( 9 5 3 + 3 1 4 ) 、 p g l 3 f m ( 18 5 + 31 4 ) 和p g l 3 - h m ( 一6 4 5 + 3 2 7 ) 、p g l 3 一h m ( - 15 8 + 3 2 7 ) 瞬时转染进 2 9 3 细胞内，检测他们的启动子活性，转染效率可由海。肾荧光素酶活性进行判断 1 7 东北师范大学硕士学位论文 ( 图1 0 ) 。从图1 0 中可以看出p g l 3 一f m ( - 1 8 5 + 3 1 4 ) 和p g l 3 h m ( 1 5 8 + 3 2 7 ) 都具 有较高的启动子活性，表明核心启动子区可能这区间。 a 广=刁圆ngi3一fm(1835+314)ii l l3 - _ _ - _ _ 一 _ 、 【_ i 1 毡j p g i 3 - f m ( - 9 5 3 + 3 1 4 ) 匕= = 丁面g t z - f m ( 1 8 5 + 31 4 ) 巳盈皿g l 3 c o n t r o l 团p g l 3 b a s i c b 匕= = = = = ：= = = = 工五口p g i 3 h m ( 16 6 7 + 3 2 7 ) 匕= = = = = = 回p g l 3 h m ( - 6 4 5 + 3 2 7 ) 一 = = 丁五口p g l 3 - h m ( 15 8 + 3 2 7 ) e 团团p g l 3 c o n t r o l 团p g i 3 b a s i c 0i 02 0 柚 的6 0 7 0 8 0 l r e l a t i v el u c i f e r a s ea c t i v i t y 图9 全长和无头m y ox 启动子进行截短突变后启动子活性的检测。a ：全长m y o l o 5 上游2 k b 截短突变后的启动子活性检测。b ：无头m y o l o5 上游2 k b 截短突 变后的启动子活性检测。横坐标表示不同的突变体，纵坐标表示荧光素酶活性在 不同的细胞系内相对于对照增加的倍数。所用的细胞系为2 9 3 。 6 m y ox 启动子在不同哺乳动物细胞中的活性检测 我们将含有荧光素酶报告基因的报告基因质粒p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和 p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 分别瞬时转染进不同的细胞系中，包括n e t , 2 9 3 ，h e l a 、 n i h 3 t 3 ，g n l1 ( 图1 1 ) 。转染效率可由海肾荧光素酶活性进行判断。从荧光素酶 活性测定结果来看，p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 的活性在各个细胞系中的活性都普遍 较高，而p g l 3 a m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 的活性相对较低，尤其是在n i h 3 t 3 和g n ll 两 种细胞系中。说明全长形式m y 0x 的启动子活性较高，且没有组织特异性，而 无头形式的m y 0x 的启动子活性较弱，且在不同的细胞系中差别较大。在2 9 3 1 8 r 、 东北师范大学硕士学位论文 和h e l a 细胞中，p g l 3 一h m ( - 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 的活性相对于对照都高出l o 倍以上，具 有一定的启动子活性，但是在n i h 3 t 3 和( n i l 中，p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 的活 性相对于对照只高出2 倍左右，启动子活性很弱。 6 0 誊5 0 h 曼器4 0 望= 三：3 0 里= 童2 0 1 0 篮 0 l u cif e r a s er e p o r t e ra s s a y 2 9 3 h e l a3 t 3n l tg n l l c e l l1 i n e s b a s i c p g l 3 - f m ( - 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 口p g l 3 一h m ( - 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 图1 1 全长和无头形式的m y ox 启动子在不同的细胞中活性检测。横坐标表示不 同的细胞系，纵坐标表示荧光素酶活性在不同的细胞系内相对于对照增加的倍 数。 1 9 东北师范大学硕士学位论文 讨论 肌球蛋白x ( m y o s i nx ，m y ox ) 是1 9 9 4 年在牛蛙的内耳中发现的，是迄今 为止研究较少的非传统型肌球蛋白之一，广泛分布在哺乳动物各种组织当中且表 达量较低。n o r t h e r n b l o t 结果表明m y ox 在睾丸、肾脏、胰腺、卵巢、甲状腺、 脑垂体腺、肺、胃、肝脏、结肠、小肠、胎盘和脑的大部分区域中均有较高水平 的表达；在前列腺、唾液腺、肾上腺、脾脏、乳腺和气管中有中等水平的表达； 在心脏、骨骼肌、主动脉、子宫和膀胱中表达水平很低。但在所有检测的组织样 品中均有所表达。在过去的几年里，对m y ox 的研究主要集中在对全长形式的 m y ox 的功能探讨上。m y ox 全长对于丝足的形成和延伸以及丝足内的物质运 输起到非常关键的作用。除了全长形式的m y ox ，最近研究表明，在大脑发育 过程中还表达另一种分子量为1 6 5 k d a 左右的无头形式的m y ox ，这种蛋白缺少 全长形式m y ox 的头部结构域，但包含所有的尾部结构域。同一个基因在不同 的发育阶段和生理状态下，可以通过选择不同的转录起始位点或可变剪接，产生 不同的蛋白，这在脊椎动物中非常常见。通过对全长和无头这两种m y ox 转录 体的分析，我们发现他们在转录起始位点上并没有通过简单的剪切全长m y ox 而得到无头形式，相反无头形式第一个外显子处于全长形式的内含子之中( 图 3 ) 。 随着小鼠基因组数据库的不断完善，基因表达调控数据库也不断丰富，这 为研究基因的表达调控机制提供了很好的平台。我们分别选取全长和无头m y ox 基因o r f ( 蛋白编码框) 的5 侧翼区2 0 0 0 b p ，进行了生物信息学的分析。其中 w w w g e n o m a t i x d e 给出了无头形式m y ox 可能的启动子区域。而且无头形式的 第一个外显子所在的内含子非常大，通常情况下内含子较大标志着可能存在调控 瞬时表达的元件。全长的m y ox 基因具有一个典型的i i 型启动子，于- 4 6 b p 处有 一个t a t a - b o x ，并且在转录起始位点上游有明显的c p 6 岛存在。t a t a b o x 对 决定一个基因转录的起始位点非常重要。无头的m v ox 基因虽然在+ 6 7 b p 处也 有一个t a t a b o x ，但是一般认为当t a t a - b o x 位于转录起始位点上游，才具有 1 0 11 j，、f f o 东北师范大学硕士学位论文 活性。c p g 岛也是基因转录的调控序列，小鼠基因组中约有1 5 5 0 0 个c p g 岛， 其中一半存在于所有组成型表达的管家基因中，另一半出现在组织特异性调控基 因的启动子中。未甲基化的富含c p g 岛也是转录的必要条件，但是无头m y ox 转录起始位点上游却没有明显的c p g 岛的存在。因此我们推测全长和无头的 m v 0x 可能是选择了不同的转录起始位点，且无头形式的启动子活性较弱。 紧接着我们分别构建了全长和无头m y 0x5 侧翼区2 0 0 0 b p 的报告基因质粒 p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) ，分别在2 9 3 细胞中检测了它们 的启动子活性。发现fp g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 具有非常明显的启动子活性， p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 也具有明显的启动子活性，但是相对于全长形式较弱。通 过截短突变我们找到了分别找到了他们的核心启动子区可能存在的区域，全长的 核心启动子区在1 8 5 b p - + 3 1 4 b p 之间，无头的在1 5 8 b p - + 3 2 7 b p 之间。最后我们又 在不同细胞系中检测了他们的启动子活性，我们发现无论是在正常组织细胞、肿 瘤细胞、还是神经细胞中，p g l 3 f m ( 1 8 3 5 + 3 1 4 ) 和p g l 3 h m ( 1 6 6 7 + 3 2 7 ) 都具 有启动子活性，但是无头的启动子活性较弱。 无头形式的m v ox 是最近在大脑发育过程中发现的，但是这种蛋白在神经 发生中的功能仍不是很清楚。本实验通过对他们启动子的研究，初步认识了无头 形式m y 0x 的转录调控机制，为进一步研究其功能奠定了基础。 2 l 东北师范大学硕士学位论文 参考文献 1 s e l l e r sj 1 re ta 1 jmu s c l ere sc e l l mo t i l ，1 9 9 6 ，1 7 ：7 2 2 2 m o o s e k e r ，m s ，a n dc h e n e y ，r e ( 1 9 9 5 ) u n c o n v e n t i o n a lm y o s i n s a n n u r e v c e l l d e v b i 0 1 1 1 ，6 3 3 6 7 5 3 3m e r m a l l ，v ，p o s t ，p l ，a n dm o o s e k e r ，m s ( 1 9 9 8 ) u n c o n v e n t i o n a lm y o s i n si n c e l lm o v e m e n t ，m e m b r a n et r a f f i c ，a n ds i g n a lt r a n s d u c t i o n s c i e n c e2 7 9 ，5 2 7 5 3 3 4 a n d e r s o n ，d w ，e ta 1 ，t h em o t o ra n dt a i lr e g i o n so fm y o s i nx v & r ec r i t i c a l f o rn o r m a ls t r u c t u r ea n df u n c t i o no fa u d i t o r ya n dv e s t i b u l a rh a i rc e l l s h u mm o l g e n e t 。2 0 0 0 9 ( 1 2 ) ：p 1 7 2 9 - 3 8 5 l i a n g ，y ，e ta 1 ，c h a r a c t e r i z a t i o no ft h eh u m a na n dm o u s eu n c o n v e n t i o n a lm y o s i n x vg e n e sr e s p o n s i b l ef o rh e r e d i t a r yd e a f n e s sd f n b 3a n ds h a k e r2 g e n o m i c s ，1 9 9 9 6 1 ( 3 ) ：p 2 4 3 5 8 6 l i u ，x z ，e ta 1 ，i d e n t i f i c a t i o no fan e wm u t a t i o no ft h em y o s i nv i ih e a dr e g i o n i nu s h e rs y n d r o m et y p e1 h u mm u r a t 。1 9 9 7 1 0 ( 2 ) ：p 1 6 8 7 0 7 g i b s o n ，f ，e ta 1 ，at y p ev iim y o s i ne n c o d e db yt h em o u s ed e a f n e s sg e n es h a k e r 一1 n a t u r e 。1 9 9 5 3 7 4 ( 6 5 1 7 ) ：p 6 2 - 4 8 s o l c ，c k ，e ta 1 ，m o l e c u l a rc l o n i n go fm y o s i n sf r o mb u l l f r o gs a c c u l a rm a c u l a ： ac a n d i d a t ef o rt h eh a i rc e l la d a p t a t i o nm o t o r a u d i t o r yn e u r o s c i ，1 9 9 4 1 ：p 6 3 - 7 5 9 y o n e z a w a ，s ，e ta 1 ，m o u s em y o s i nx ：m o l e c u l a ra r c h i t e c t u r ea n dt i s s u e e x p r e s s i o na sr e v e a l e db yn o r t h e r nb l o ta n di ns i t uh y b r i d i z a t i o na n a l y s e s b i o c h e m b i o p h y sr e sc o m m u n ，2 0 0 0 2 7 1 ( 2 ) ：p 5 2 6 3 3 1 0 b e r g ，j s ，e ta 1 ，m y o s i n x ，an o v e lm y o s i nw i t hp l e c k s t r i nh o m o l o g yd o m a i n s ， a s s o c i a t e sw i t hr e g i o n so fd y n a m i ca c t i n jc e l ls c i 2 0 0 0 1 1 3p t1 9 ：p 3 4 3 9 5 1 1 1 h o m m a , k ，s a i t o ，j ，i k e b e ，r a n di k e b e ，m ( 2 0 0 1 ) m o t o rf u n c t i o na n d r e g u l a t i o no fm y o s i nx j b i 0 1 c h e m 2 7 6 ，3 4 3 4 8 3 4 3 5 4 1 2 r o g e r s ，也s a n ds t r e h l e r ，e e ( 2 0 0 1 ) t h et u m o r - s e n s i t i v ec a l m o d u l i n - 1 i k e p r o t e i ni sas p e c i f i c1 i g h tc h a i no fh u m a nu n c o n v e n t i o n a lm y o s i nx j b i 0 1 c h e m 2 7 6 ，1 21 8 2 1 21 8 9 1 2 i s a k o f f ，s j ，c a r d o z o ，t ，a n d r e e v ，j ，l i ，z ，f e r g u s o n ，k m ，a b a g y a n ， r ，l e m m o n ，m a ，a r o n h e i m ，a a n ds k o l n i k ，e y ( 1 9 9 8 ) i d e n t i f i c a t i o na n d a n a l y s i so fp hd o m a i n c o n t a i n i n gt a r g e t so fp h o s p h a t i d y l i n o s i t o l3 一k i n a s eu s i n ga n o v e li nv i v oa s s a yi ny e a s t e m b oj 1 7 ，5 3 7 4 5 3 8 7 1 3 m a s h a n o v ，g i ，t a c o n ，d ，p e c k h a m ，m a n dm o ll o y ，j e ( 2 0 0 4 ) t h es p a ti a l a n dt e m p o r a ld y n a m i c so fp l e c k s t r i nh o m o l o g yd o m a i nb i n d i n ga tt h ep l a s m am e m b r a n e m e a s u r e db yi m a g i n gs i n g l em o l e c u l e si n1i v em o u s em y o b l a s t s j b i 0 1 c h e m 2 7 9 ， 1 5 2 7 4 1 5 2 8 0 1 4 w e b e f ，k l ，s o k a c ，a 也，b e r g ，j s ，c h e n e y ，r e a n db e m e n t ，扎( 2 0 0 4 ) am i c r o t u b u l e b i n d i n gm y o s i nr e q u i r e df o rn u c l e a ra n c h o r i n ga n ds p i n d l ea s s e m b l y n a t u r e4 31 3 2 5 - 3 2 9 1 5 b e r g ，j s a n dc h e n e y ，r e ( 2 0 0 2 ) m y o s i n - xi sa nu n c o n v e n t i o n a lm y o s i nt h a t 1tf0 ，j 0 i 王_ 产 f t t 东北师范大学硕士学位论文 u n d e r g o e si n t r a f i l o p o d i a lm o t i l i t y n a t c e l lb i 0 1 4 ，2 4 6 2 5 0 1 6 3s o u s a 。a d a n dc h e n e y ，r e ( 2 0 0 5 ) m y o s i n x