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类溶菌酶2 等五个新基因的克隆和功能研究 中文摘要 ( 由于生物基因组进化中的保守性，具有某一功能的基因在不同物种之间常具 有一定的同源性，种问差异越小，同源度越高；另外，来自同一物种的基因家族 成员之间由于功能或结构上的相似，也具有一定的同源性。因此利用这种基因间 的同源性，有目的的克隆基因家族新成员，是一种适合于在经费较少的实验室进 行新基因克隆的有效策略，它对后续的基因功能研究具有承先启后的提示式指导 作用：本研究以若干已知具有重要功能的基因的c d n a 为信息探针，采用“同源 筛选”的策略进行基因克隆，分离和鉴定了5 个分别与代谢、免疫、转录调控、 蛋白修饰及细胞生长等功能相关的新基因。它们分别是小鼠硅酸甘油酸变位酶城 。型p g a m l ) 、些型( p g a m 2 ) 、拳姿菌酶圣l y z 2 ) 、垂鱼劈酸鳗酶调节亚l 基( j d p p 3 月2 ) 和肝癌衍生生长因子2 ( h d g f 2 ) 。 瞵酸甘油酸变位酶( e c 5 4 2 1 ) ( p h o s p h a g l y c e r a t em u t a s e ，p g a m ) 是一种糖 分解酶。本研究利用同源筛选策略克隆了小鼠磷酸甘油酸交位酶的脑型( p g a m l ) 和肌型( p g a m 2 ) c d n a ( ：i 册号分别为a f 2 8 3 6 6 7 ，a f 0 2 9 8 4 3 ) 。p g a m le d n a 开 放阅读框为7 6 5 b p ，编码2 5 4 个氨基酸，p g a m 2c d n a 开放阅读框为7 6 2 b p ，编 码2 5 3 个氨基酸基因组序列分析p g a m 2 中含有三个外显子和两个内含子同 时还发现了p g a m l 的假基因p g a m l - p s l ，在g e n b a n k 注册号为a f 2 7 6 6 5 7 。 n o r t h e r n 杂交显示p g a m l 基因在脑和肾组织中高表达，在肝、胸腺、胃和心脏 组织呈中等表达，均有一个2 1 k b 的转录本。p g a m 2 基因在肌肉和睾丸组织中有 高表达，而在心脏和肺组织中度表达，转录本为1 o k b ，在所检测的其它六种组织 中没有表达。用r h 基因定位方法将p g a m l 和p g a m 2 分别定位于距d 1 9 m i t 5 2 和d li m i t l 2 9 位标1 1 6 1 6c r 及2 9 5 7c r 将分别载有这两种c d n a 开放阅读 框的重组质粒瞬时转染至c o s 7 细胞中进行酶活力检测，确定了p g a m l 和p g a m 2 的磷酸甘油酸变位酶活性 溶菌酶( l y s o z y m e ，l y z ) 是一种特异作用于微生物细胞壁的水解酶，广泛存 在于动植物和微生物中。8 0 年代以来溶菌酶已被广泛用于食品和医药工业。在 医学中有抗茵消炎，抗病毒和抑制肿瘤生长等功能。我们克隆了一个新的溶菌酶 同源基因l y z 2 ( g e n b a n k 注册号为a f l 3 9 5 4 3 ) ，其e d n a 长7 5 8 b p 包含一长 4 5 0 b p 的o r f ，编码1 4 8 个氨基酸残基p c g e n e 分析l y z 21 - 1 9 位氨基酸可 能为信号肽。n o r t h e r n 杂交结果显示l y z 2 仅在胎盘和脑组织中有可检测的转录 本，大小约0 9 k b 。通过和基因纽序列比较将l y z 2 基因定位在1 0 号染色体。 将l y z 2 和y z 稳定转染至c h o 细胞，以细胞表达上清作用金黄葡萄球菌， 溶壁微球菌，铜绿假单孢菌，白色念珠球菌和枯草杆菌悬液，结果显示在所检测 的5 种菌株中，l y z 对溶壁微球菌的溶菌活性最高，l y z 2 对白色念珠球菌的溶 菌活性最高。分别用含有抗生素并口不合抗生素的l y z 2 与l y z 作用细菌悬液， 一鲞查堕竺! ! 墨尘堑墨苎竺圭竺皇兰堂竺至 结果表明，抗生素对l y z 和l y z 2 的溶菌活性影响有所不同。 钙调磷酸酯酶3 ( p p p 3 ，p r o t e i np h o s p h a t a s e3 ) 是参与多种细胞功能调节的 多功能信号酶。我们在人e s t 库中拼接了与小鼠p p p 3 r 2 基因高度同源序列 p p p 3 月2 ，并用引物延伸方法确定了其转录起始点，在g e n b a n k 登录号为 a f l 4 5 0 2 6 。p p p 3 r 2 c d n a 长1 0 5 8 b p ，编码1 7 0 个氨基酸残基。引物延伸结果显 示尸p 丹r 2 基因有4 个转录起始点。该基因与大鼠及小鼠p p p 3 r l 的氨基酸水平 的一致性分别高达8 2 9 和8 0 5 。表达谱分析显示p p p 3 r 2 仅在睾丸组织中 存在一条高表达的1 0 k b 和一条低表达的4 0 k b 的转录本，在成熟精子中也检 测到p p p 3 r 2 基因的表达。对基因组结构分析结果显示，尸p p 3 尺2 基因没有内 含子其基因上游没有t a t a 框存在，而是富含g c ，可能是其存在散在转录 起始点的原因。s o u t h e m 结果显示p p p 3 r 2 在基因组中仅存在一个拷贝，睾丸 组织基因组d n a 中p p p 3 尺2 上游所检测的g c 位点存在部分去甲基化，而脑， 肌肉和脾脏基因组d n a 中此g c 位点甲基化。p p p 3 r 2 基因上游g c 位点部 分去甲基化可能是组织特异表达的原因之一。r h 定位系统将该基因精确定位 于9 q 2 2 的d 9 s 1 7 6 和d 9 s 2 7 1 问。 肝癌衍生生长因子( h e p a t o m a d e r i v e dg r o w t hf a c t o r ，h d g f ) 可以促进成纤维 细胞的d n a 合成。我们从人e s t 数据库中拼接并从人睾丸c d n a 丈库中扩增 克隆出一条长1 4 2 3 b p 的c d n a 序列，注册号为a f l1 0 6 4 2 。该c d n a 第1 2 5 7 3 6 b p 为开放阅读框，编码2 0 3 个氨基酸。具有h d g f 家族保守的h a t h 功能 域及核定位序列( n l s ) 。用g f p 融合蛋白技术发现h d g f 2 多数分布于细胞 核中。 n o r t h e r n 结果显示，h d g f 2 仅在人脑，心脏和睾丸组织中表达一个约 2 5k b 的转录本，其它组织中未检测到。在脑的不同部位中，h d g f 2 的表达略 有差异。在所检测的细胞株中均表达h d g f 2 ，但是在单核细胞株r a 讧中表达量 较低。在肝癌组织中，h d g f 2 的表达较癌旁组织标本中高。通过r h 定位方法， 将h d g f 2 定位在染色体1 5 q 2 5 ，距s h g c 一6 3 4 7 61 7 c r 。用带有h i s t a 2 的载体 原核表达h d g f 2 蛋白，经s d s p a g e 电泳后，结果显示，h d g f 2 蛋白大小 约为2 3 k d ，与预测的分子量大小一致。将带有h d g f 2c d n a 的表达载体 p c d n a 3 转染入c h o 细胞株中，结果表明该基因对c h o 细胞的d n a 合成有抑 、 制作用。i 关键词：同源筛选v 新基因，功能 一查堡苎竺! 兰兰尘塑墨里竺垒竺童兰堡竺查 a b s t r a e t b a s e do nt h ec o n s e r v a t i o no f g e n o m ei ne v o l u t i o n ，g e n e si nd i f f e r e n ts p e c i e sw i t h t h es a m ef u n t i o no f t e ns h a r eh o m o l o g yw i t hd i f f e r e n td e g r e e s t h em o r es i m i l a rt h e t w o s p e c i e sa r e ，t h eh i g h e rh o m o l o g yt h ec o u n t p a r t si nt h e s p e c i o u ss h a r e s i n a d d i t i o n ，t h em e m b e r si nt h es a m eg e n ef a m i l yo f s p e c i ea l s os h a r es o m eh o m o l o g y b e c a u s eo ft h es i m i l a r i t yo ft h es t r u c t u r eo rf u n c t i o n ，s o ，u s i n gt h i sh o m o l o g y a m o n g g e n e st oc l o n en e wm e m b e r so fg e n ef a m i l i e sb e c o m e sa ne f f i c i e n tw a yi nt h el a b s w i t hl i m i t e d f u n d s a n di ti si n s t r u c t i v ei n p a v i n gaw a yt of u n c t i o n a ls t u d i e so n h u m a ng e n e s i nt h i s s t u d 弘t h ee d n as e q u e n c e so fs e v e r a lk n o w ng e n e sw i 山 i m p o r t a n tf u n c t i o n sw e r eu s e d a si n f o r m a t i o np r o b e st om a k e h o m o l o g ys c r e e n ，a n d5 n o v e l g e n e s ，w h i c hm a yr e l a t e d t o t r a n s c r i p t i o n ，s i g n a lt r a n s d u c t i o n ，p r o t e i n m o d i f i c a t i o na n di m m u n e ，r e s p e c t i v e l y ，w e r ec l o n e da n di d e n t i f i e d t h e s eg e n e sa r e m o u s e p h o s p h 0 9 1 y c e r a t e m u t a s eb r a i n t y p e ( p g a m l ) ， m u s c l e t y p e ( p g a m 2 ) ， l y s o z y m e - l i k eg e n e2 犯y z 2 ) ，p r o t e i np h o s p h a t a s er e g u l a t o rs u b u n i t ( t e s t i s t y p e ) 妒p p 3 r 2 、a n dh e p a t o m a - d e r i v e dg r o w t hf a c t o r2 ( h d g f 2 ) p h o s p h o g l y c e r a t em u t a s e ( e c 5 4 2 1 ) ( p g a m ) i s ag l y c o l y t i c e n z y m e t w o m o u s ec d n a se n c o d i n gt h en o n m u s c l e s p e c i f i co rb r a i ni s o f 0 1 t i i ( p g a m l ) a n dt h e m u s c l e s p e c i f i ci s o f o r m ( p g a m 2 ) o fp h o s p h 0 9 1 y c e r a t em u t a s e ( p g a m ) w e r ei s o l a t e d a n d c h a r a c t e r i z e d ( g e n b a n k a c c e s s i o nn o a f 2 8 3 6 6 7 ，a f 0 2 9 8 4 3s e p a r a t e l y ) 。p g a m l c o n t a i n sa7 6 5 b po p e nr e a d i n gf r a m e ( o r f ) c o d i n gf o ra2 5 4 r e s i d u ep r o t e i nw h i l e p g a m 2c o n t a i n sa7 6 2 b po r fc o d i n gf o ra2 5 3 一r e s i d u ep r o t e i n t h ep a r t i a lg e n o m i c s e q u e n e eo fp g a m 2 w a sd e t e r m i n e d ，w h i c hs h o w e dt h a tm o u s ep g a m 2c o n s i s t e da t l e a s tt h r e ee x o n sa n dt w oi n t r o n s i na d d i t i o n ，ap s e u d o g e n eo fp g a m l ，p g a m l - p s l ， w a si d e n t i f i e df r o mm o u s eg e n o m i cs e q u e n c e ，a n dt h eg e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e ri s a f 2 7 6 6 5 7 n o r t h e r nb l o ta n a l y s i ss h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o np a t t e r n so fp g a m la n d p g a m 2w e r ed i s t i n c t p g a m lw a se x p r e s s e da sa2 1 一k bt r a n s c r i p th i g h l yi nb r a i na n d k i d n e ya n dm o d e r a t e l yi nl i v e r ，t h y r o i d ，s t o m a c h a n dh e a r t ，w h e r e a s p g a m 2w a s e x p r e s s e da sa1 0 一k bt r a n s c r i p th i g h l yi nm u s c l e ，t e s t i sa n dm o d e r a t e l yi nh e a r ta n d l u n g ，b u tw a sn o td e t e c t a b l ei nt h eo t h e r6t i s s u e se x a m i n e d p g a m la n dp g a m 2 w e r e a s s i g n e d t o1 1 6 1 6c rf r o md 1 9 m i t 5 2a n d2 9 5 7c rf r o md 11 m i t l 2 9 r e s p e c t i v e l y b y r a d i a t i o n h y b r i dm e t h o d t r a n s f e c t i n gt h e e d n af r a g m e n t sc o n t a i n i n gt h ee n t i r e o r f so ft h e s et w oc d n a si n t oc o s 7c e l l sf o rt r a n s i e n te x p r e s s i o nr e s p e c t i v e l y ，a n d p r o v i n g t h ev a l i d i t yo f m o u s e p g a m l a n d p g a m 2 c d n a sw e r e p o r th e r e l y s o z y m ei ss p r e a di np l a n t ，a n i m a la n dm i c r o o r g a n i s m b e s i d e st h ef u n c t i o no f l y s i sa n dd i g e s t i o n ，i th a sa l s ob e e nf o u n di nr e c e n ts t u d i e st h a tl y s o z y m eh a st h e a c t i v i t y o ft u m o r i n h i b i t i o n f o r l y s o z y m e c a l lb e u s e da s f o o d p r o t e c t o r a n d a n t i b a c t e r i a lr e a g e n t ，i th a si m p o r t a n tv a l u ei nb o t hi n d u s t r ya n dm e d i c a ls c i e n c e w e c l o n e da n o t h e rg e n el y z 2 ( a f l 3 9 5 4 3 、h o m o l o g yw i t hl y z t h ec d n ai s7 5 8 b p c o n t a i n i n g4 5 0 一b po r f w h i c hc o d i n g1 4 8a m i n oa c i d s t h ep r e d i c tm o l e c u l a rw e i g h i s1 6 5 9 8 ，a n d1 - 1 9a m i n oa c i do f l y z 2i sa p o s s i b l es i g n a t u r ew i t ht h ea n a l y s i sw i t h 3 类溶菌酶2 等五个新基因的克隆和功能研究 p c g e n e n o r t h e m a n a l y s i sd e t e c t 三y z 2i so n l ye x p r e s s e di np l a c e n t aa n dt e s t i sw i t h t h et r a n s c r i p t i o no f0 9 k b l y z 2i sm a p p i n gt oc h r o m o s o m e1 0w i t ht h ea n a l y s i si n g e n b a n k s t a b l et r a n s f e c tl y z 2a n dl y zi n t oc h o a n dt e s tt h e s u p e r n a t e n t b a e t e r i o l y s i st om i c r o c o c c u sl y s o d e i k t i c u s ，s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s ，c a n d i d aa l b i c a n s ，b a c m h s s u b t i l i s ，p s e u 如m o n a sa e r u g i n o s a t h er e s u l ts h o wt h a tt h el y z l y s i sm i c r o c o c c u sl y s o d e i k t i e u s b e s ta n dl y z 2l y s i sc a n d i d aa l b i c a n sb e s ta m o n gt h et e s tb a c t e r i a s a n t i b i o t i cc a ne f f e c tt h e a c t i v i t yo f l y z 2 a n dl y z p r o t e i np h o s p h a t a s e s ( p p p ) a r es i g n a lt r a n s d u c t i n ge n z y m e st h a td e p h o s p h o r y l a t e c e l l u l a r p h o s p h o p r o t e i n s w e c l o n e dar e g u l a t o r y l i k es u b u n i to fh u m a np r o t e i n p h o s p h a t a s e 3 g e n e ( p p p 3 r 2 ) ( a c c e s s i o nn o a f l 4 5 0 2 6 ) a n dc h a r a c t e r i z e d t h e g e n o m i es e q u e n c ea n d i t sm o l e c u l a rg e n e t i cf e a t u r e s p p p 3 r 2c o n t a i n sa5 2 3 b po p e n r e a d i n g f l a m e c o d i n g f o ra17 0 一r e s i d u e p r o t e i n w a sc l o n e da n d m a p p e d t o e h r o m o s o m e9 qb e t w e e nd 9 s 1 7 岳d 9 s 2 7 9 a n a l y s i si t sg e n o m i cs e q u c n c cs h o w e d m a tn oi n t r o ni np p p 3 r 2a n dt h e 5 - f l a n k i n gr e g i o n c o n t a i n ss e r i a lm o t i ff o r t r a n s c r i p t i o n n o r t h e mr e s u l t s h o w e dt h a ti ti s m e r e l yh i g he x p r e s s e d i nt e s t i s s o u t h e r nb l o t t i n gs h o w e dt h a tt h et i s s u es p e c i f i ce x p r e s s i o no fp p p 3 r 2i sd u et ot h e d e m e t h y l a t i o no f i t sp r o m o t e r r e g i o n i nt e s t i s h e p a t o m a d e r i v e dg r o w t hf a e t o r ( h d g f ) c a ns t i m u l a t et h eg r o w t ho ff i b r o b l a s t s ， h e p a t o m ac e l l sa n de n d o t h e l i a lc e l l s i nt h i sp a p e r w ec l o n e dc d n a o fan e wm e m b e r o fh d g f f a m i l yb y “h o m o l o g o u ss c r e e n i n g ”s t r a t e g ya n dn a m e i th d g f 2 fg e n b a n k a c c e s s i o nn u m b e ri sa f l 1 0 6 4 2 ) c d n ao fh d g f 2c o n t a i n s1 4 2 3 b pa n dc o d e s2 0 3 a m i n oa c i d sw i t hh a t hr e g i o n i th a sab i p a r t i t en u c l e a rl o c a l i z i n gs i n a l ( n l s ) s e q u e n c ea n dt r a n s f e e t i o no fg r e e nf l u o r e s c e n tp r o t e i n ( g f p ) 一t a g g e dh d g f 2 e d n a s h o w e dt h a th d g f 2i s e x p r e s s e d i nn u c l e a rn o r t h e mb l o t a n a l y s i s s h o w st h a t h d g 刀i s e x p r e s s e dp r e d o m i n a n t l yi nt h et e s t i s ，b r a i n ，h e a r t ，a n dc a n n o td e t e c t e di n o t h e rt i s s u e n od i s t i n c td i f f e r e n c ew a sd e t e c t e di nd i f f e r e n tp a r t so fh u m a nb r a i n h d g f 2w a se x p r e s s e di na l lt h ee e l l l i n ew ed e t e c t b u tt h ee x p r e s s i o ni sv e r yi o wi n e e l l1 i n ea 3 7 5a n dr a j i t h ee x p r e s s i o nj sal i t t l eh i g h e ri nt u m o rt i s s u et h a nn o n t u m o rt i s s u e h d g f 2w a sm a p p e dt oc h r o m o s o m e1 5 ，r e g i o nq 2 5w i t hr hp a n e l ， w i t ht h ed i s t a n c e1 7 c rt os h g c 6 3 4 7 6 e x p r e s s i o nh d g f 2i be c o i l s h o w e dt h a t h d g f 2i sa b o u t2 2 k da n dc o n s i s t e dw i t h e x p e c t a t i o n w h e n h d g f 2w a s t r a n s f e c t e di n t oc h 0c e l ll i n ew i t ht h ev e c t o rp c d n a 3 d n ad u p l i c a t i o nw a s d e p r e s s e d k e y w o r d s ：h o m o l o g o u ss c r e e n i n g ，n e wg e n e ，f u n c t i o n 4 苎二主：! ：墨壁竺兰竺堕壅竺竺竺型塑些型竺! ! 坠圭堡：墨璺查竺塑竺苎垄堡兰! 小 第一章 鼠磷酸甘油酸变位酶脑型和肌型 的c d n a 克隆、基因定位及酶活力检测 5 第一章小鼠磷酸甘油酸变住酶脑型和肌型的e d n a 克隆，基因定位和酶活力检测 中文摘要 磷酸甘油酸变位酶( e c 5 4 2 1 ) ( p h o s p h a g l y c e r a t em u t a s e ，p g a m ) 是一种糖分 解酶它在2 ，3 一二磷酸甘油酸的协同下，将3 一磷酸甘油酸转变为2 一磷酸甘油 酸。p g a m 有两种单体，一种为脑型( p g a m l ) ，分布在大多数组织中，一种为 肌型( p g a m 2 ) ，仅存在于成体骨骼肌和心肌中。目前已知p g a m 2 与发育和肌 肉僵直等某些疾病有关 本研究利用同源筛选策略克隆了小鼠磷酸甘油酸变位酶的脑型( p g a m l ) 和 肌型( p g a m 2 ) c d n a ( 注册号分别为a f 2 8 3 6 6 7 ，a f 0 2 9 8 4 3 ) 。p g a m lc d n a 开放 阅读框为7 6 5 b p ，编码2 5 4 个氨基酸，p g a m 2c d n a 开放阅读框为7 6 2 b p ，编码 2 5 3 个氨基酸。预测的小鼠p g a m l 、p g a m 2 蛋白与人p g a m l 、p g a m 2 蛋白的同 源性分别高达9 7 和9 0 。将p g a m 2 的部分基因组序列进行了分析，p g a m 2 中 含有三个外显子和两个内含子同时还发现了p g a m l 的假基因p g a m l - p s l 。该 片段与p g a m l c d n a 有9 4 同源性，没有内含子，并有若干碱基的变化，其 中在阅读框内有无义突变，在g e n b a n k 注册号为a f 2 7 6 6 5 7 。n o r t h e r n 杂交显 示p g a m l 基因在脑和肾组织中高表达，在肝，胸腺，胃和心脏组织呈中等表达， 均有一个2 1 k b 的转录本。p g a m 2 基因在肌肉和睾丸组织中有高表达，而在心脏 和肺组织中度表达，转录本为1 o k b ，在所检测的其它六种组织中没有表达用 r h 基因定位方法将p g a m l 和p g a m 2 分别定位于距d 1 9 m i t 5 2 和d 1 i m i t l 2 9 位 标1 1 6 1 6c r 及2 9 5 7c r 。将分别载有这两种c d n a 开放阅读框的重组质粒瞬 时转染至c o s 7 细胞中进行酶活力检测，结果显示转染p g a m l 和p g a m 2 的c o s 7 细胞中p g a m 的活性分别是仅转染空载体的c o s 7 细胞的2 2 和2 5 倍。 关键词：p g a m l ，p g a m 2 ，组织表达谱，瞬时转染，r h 定位 6 第一章小鼠磷酸甘油酸变位酶脑型和肌型的e d n a 克隆，基因定位和酶活力检测 a b s t r a c t p h o s p h o g l y c e r a t em u t a s e ( e c 5 4 2 1 ) ( p g a m ) i st h eg l y c o l y t i ce n z y m et h a t c a t a l y z e s t h e c o n v e r s i o no f 3 - p h o s p h o g l y c e r a t e i n t o 2 - p h o s p o g l y c e m t eu s i n g 2 , 3 b i s p h o s p h o g l y c e r a t e a sac o f a c t o r i nm a m m a l i a n t i s s u e s ，p h o s p h o g l y c e r a t e m u t a s ee x i s t sa sad i m e ro ft w od i s t i n c t3 0 一k ds u b u n i t s i e b r a i nf o r i l l ( a l s ok n o w n a s p g a m l ) ，w h i c hi se x p r e s s e du b i q u i t o u s l y ，a n dm u s c l ef o r m ( a l s ok n o w na sp g a m 2 ) ， w h i c hi s o n l ye x p r e s s e di na d u l ts k e l e t a lm u s c l ea n dc a r d i a cm u s c l e p g a m 2i s i n v o l e di nt i s s u ed e v e l o p m e n ta n ds o m ed i s e a s e t w om o u s ec d n a s e n c o d i n gt h en o n m u s c l e s p e c i f i co rb r a i ni s o f o r m ( p g a m i ) a n dt h em u s c l e s p e c i f i ci s o f o r m ( p g a m 2 ) o f p h o s p h o g l y c e r a t em u t a s e ( p g a m ) w e r e i s o l a t e da n d c h a r a c t e r i z e d ( g e n b a n k a c c e s s i o nn o a f 2 8 3 6 6 7 ，a f 0 2 9 8 4 3 s e p a r a t e l y ) 。p g a m i c o n t a i n sa7 6 5 b po p e n r e a d i n gf l a m e ( o r f ) c o d i n gf o r a 2 5 4 - r e s i d u ep r o t e i nw h i l ep g a m 2c o n t a i n sa7 6 2 b po r fc o d i n gf o ra2 5 3 一r e s i d u e p r o t e i n t h ed e d u c e dp r o t e i n so f m o u s ep g a m l a n d p g a m 2 a r eh i g h l ys i m i l a rt ot h o s e o fh u m a na n dr a t ( 9 3 s i m i l a r i t y ) t h ep a r t i a lg e n o m i cs e q u e n c eo f p g a m 2w a s d e t e r m i n e d ，w h i c hs h o w e dt h a tm o u s ep g a m 2c o n s i s t e da tl e a s tt h r e ee x o n sa n dt w o i n t r o n s i na d d i t i o n ，ap s e u d o g e n eo f p g a m i ，p g a m l - p s l ，w a si d e n t i f i e df r o mm o u s e g e n o m i cs e q u e n c e t h i ss e q u e n c eh o m o l o g o u st o m o u s ep g a m ie d n a ( 9 4 i d e n t i t y ) a n d l a c k si n t r o n sa n dh a ss e v e r a ln u c l e o t i d ec h a n g e sc o m p a r e dt op g a m le d n a a l s ot h e r ew a sa n i n f r a m es t o pc o d o n ，t h eg e n b a n ka c c e s s i o nn u m b e ri sa f 2 7 6 6 5 7 n o r t h e r nb l o ta n a l y s i s s h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o np a t t e r n so f p g a m la n dp g a m 2w e r ed i s t i n c t p g a m lw a s e x p r e s s e da sa2 1 - k bt r a n s c r i p th i g h l yi nb r a i na n dk i d n e ya n dm o d e r a t e l yi nl i v e r ， t h y r o i d ，s t o m a c ha n dh e a r t ，w h e r e a sp g a m 2w a se x p r e s s e da s a1 0 - k b t r a n s c r i p t h i g h l yi nm u s c l e ，t e s t i sa n dm o d e r a t e l y i nh e a r ta n d l u n g ，b u t w a sn o td e t e c t a b l ei nt h e o t h e r6t i s s u e s e x a m i n e d p g a m l a n dp g a m 2w e r ea s s i g n e dt o116 16c rf r o m d 1 9 m i t 5 2a n d2 9 5 7e rf r o md 11 m i t l 2 9r e s p e c t i v e l y ，b yr a d i a t i o nh y b r i dm e t h o d t r a n s f e c t i n gt h ee d n af r a g m e n t sc o n t a i n i n gt h ee n t i r eo r f so f t h e s et w oc d n a s i n t oc o s 7c e l l sf o rt r a n s i e n te x p r e s s i o nr e s p e c t i v e l y ，t h ee n z y m ea c t i v i t i e so fm o u s e p g a m ia n dp g a m 2 w e r ed e t e c t e dt ob e2 2t o2 5t i m e so ft h o s eo fc o s 7c e l l sa n d c o s 7c e l l st r a n s f e c t e dw i t hv e c t o r ，p r o v i n gt h ev a l i d i t yo fm o u s ep g a m ia n dp g a m 2 c d n a sw e r e p o r th e r e k e yw o r d ：p g a m i ，p g a m 2 ，t i s s u ee x p r e s s i o np a t t e r n ，g e n em a p p i n g t r a n s i e n t e x p r e s s i o n 7 墨二! ：! ：墨壁竺兰兰璧壅竺竺壁型童些兰竺! 堕! 圭堡：墨璺查竺查竺兰生竺型 前言 磷酸甘油酸变位酶( e c 5 4 2 1 ) ( p g a m ) 是一种糖分解酶。它在2 ，3 一二磷酸 甘油酸的协同下，将3 一磷酸甘油酸转变为2 一磷酸甘油酸。此外，它还可以进 行2 ，3 一二磷酸甘油酸的合成并具有2 , 3 一二磷酸变位酶( b p g p ) 的活性 ( f o r e i l l g i l m o r ea n dw m s o n ，1 9 8 9 ) 。在哺乳动物中，p g a m 以二聚体形式存在 p g a m 一种单体为脑型( b 型，也称p g a m l ) ，分布于大多数组织中( o m e n n a n d c h e u n g ，1 9 7 4 ) ；另一种为肌型( m 型，也称p g a m 2 ) ，仅在成体骨骼肌和心肌中表 达。因此，p g a m 共有三种形式：主要分布于骨骼肌的同源二聚体m m 和主要 分布于肝、肾和脑组织的同源二聚体m m ；还有一种异源二聚体m b ，主要分布 于心脏中( 0 m e r u la n dc h e u n g ，1 9 7 4 ；o m e n na 1 1 dh e r n l o d s o n ，1 9 7 5 ) 。此外一种存在 于红细胞中的相似蛋白二磷酸甘油酸变位酶d p g a m ( d i p h o s p h o g l