（遗传学专业论文）人类inos基因启动子1026ca多态的功能研究.pdf

目录 恻嬲辨 y 17 6 苦褂芗 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要5 二、英文缩略语1 0 三、论文 论文一，1 1 前言1 1刚舌1 l 材料与方法1 3 实验结果2 9 讨论3 9 结论4 1 论文二4 2 前言4 2日u 舌4 z 材料与方法4 4 实验结果4 6 讨论5 1 结论5 6 四、本研究创新性的自我评价5 7 五、参考文献j 5 8 六、附录 综述6 7 在学期间科研成绩8 2 致谢8 3 个人简介8 4 中文论著摘要 人类i n o s 基因启动子1 0 2 6 c a 多态的功能研究 前言 一氧化氮合酶包括：神经型一氧化氮合酶( n n o s ) 、诱导型一氧化氮合酶 ( i n o s ) 和内皮型一氧化氮合酶( e n o s ) 。其中，i n o s 在正常生理状态下不表 达或表达量极低，只有诱导后才大量表达，因此i n o s 基因表达调控对n o 的产生 至关重要。i n o s 基因在原发性高血压发生中发挥重要作用，一方面i n o s 可通过 产生n o 引起血管平滑肌细胞舒张降低血压，另一方面还通过n o 衍生物一过氧 亚硝酸盐阴离子( o n 0 0 ) 发挥促高血压作用。 本课题组前期研究中，通过高血压高发区连锁分析发现1 7 号染色体上的微卫 星d 1 7 s 1 8 7 8 与高血压存在连锁。进一步病例对照人群和家系研究证实，i n o s 基 因启动子1 0 2 6 c a 多态与高血压发生相关，其中1 0 2 6 c 等位基因及1 0 2 6 c c 基因 型是高血压发生的独立危险因素。此外对i n o s 启动子1 0 2 6 c a 多态的初步功能 研究发现，1 0 2 6 位点存在转录因子y y l 反应元件，1 0 2 6 c a 多态影响了 ： y y l d n a 结合模式以及i n o s 启动子萤光素酶报告基因重组体p l 17 3 c a - l u c 的转 录活性，并推测可能继而通过影响n o 的产生导致一1 0 2 6 c c 的高血压易感风险升 高。然而，y y l 是如何影响i n o s 启动子，1 0 2 6 c a 多态对i n o s 基因转录的确 切功能，以及多种高血压相关因子调控i n o s 转录活性的效应和具体机制尚不明 确。 材料与方法 一、实验材料 1 、细胞系：人喉鳞癌细胞( h e p 2 ) ，人胃癌细胞( b g c 8 2 3 ) ，非洲绿猴肾 ( c o s 7 ) ，小鼠巨噬细胞( r a w 2 6 4 7 ) ； 2 、载体：萤火虫荧光素酶报告载体、海肾荧光素酶表达载体、y y l 表达及 r n a 干扰载体、n f i c 野生型及突变型表达载体、c j u n 表达载体、雌激素受体表 达载体、糖皮质激素受体表达载体、盐皮质激素受体表达载体、p 3 0 0 野生型及突 变型表达载体； 3 、w e s t e r n 印迹杂交相关试剂及试剂盒； 4 、基因克隆及萤光素酶报告基因检测相关试剂及试剂盒； 5 、d n a 蛋白质结合实验、免疫共沉淀、电泳泳动迁移实验( e m s a ) 及染色 质免疫沉淀( c h i p ) 相关试剂及试剂盒； 6 、r e a l t i m ep c r 相关试剂及试剂盒； 7 、细胞刺激因子：细胞因子混合物( i f n - 7 、i l 1 1 3 和t n f a ) 、丁酸钠、雌 二醇、地塞米松、醛固酮、转化生长因子b l 、胰岛素样生长因子i i 和胰岛素。 二、实验方法 1 、i n o s 启动子萤光素酶报告基因载体构建及检测：利用在线软件进行i n o s 启动子转录因子预测分析，构建系列截短的萤光素酶报告基因重组体，应用双荧 光素酶检测系统检测启动子的活性，鉴定i n o s 基因关键转录调控区； 2 、应用d n a 蛋白质结合实验、免疫共沉淀、e m s a 和c h i p 方法鉴定i n o s 启动子一1 0 2 6 c a 多态位点d n a 蛋白质复合物组成，各转录因子相互作用，及 d n a 结合亲和力； 3 、共转染转录因子及激素受体表达载体，应用萤光素酶报告基因系统，检 测y y l 、n f i 和a p 1 对i n o s 基础启动子活性的影响；以及雌二醇、地塞米松、 醛固酮、转化生长因子b 1 、胰岛素样生长因子i i 和胰岛素在i n o s 转录调控中的 作用； 4 、r e a l t i m ep c r 方法检测y y l 、n f i 和a p 1 过表达对细胞因子混合物诱 导后删m r n a 表达的影响； 5 、丁酸钠刺激，以及共转染野生型突变型p 3 0 0 表达载体，检测乙酰化在 蝴表达调控中的作用。 结蟹 皇日卜 1 、系列截短的萤光素酶报告基因活性检测发现i n o s 启动子1 1 7 3 b p 一1 0 3 2 2 b p 的1 4 1 - b p 片段可能为负性转录调控区；含有一1 0 2 6 c a 多态位点的1 6 一b p 片段 ( 1 0 3 2b p 1 0 1 6b p ) 为i n o s 基因转录的关键正性调控区。 2 、转录因子预测分析发现，除y y l 外，i n o s 启动子1 0 2 6 c a 位点还存在 另两个转录因子n f i 和a p 1 ，d n a 蛋白质结合实验显示，1 0 2 6 c a 位点存在由 y y l ，n f i 和a p 1 组成的蛋白质复合物，其中y y l 与1 0 2 6 c 优势结合，而n f i 与1 0 2 6 a 优势结合，免疫共沉淀结果提示a p 1 和n f i 之间存在相互作用，n f i 和y y l 之间也可能存在相互作用，而a p 1 和y y l 之间可能无直接的相互作用。 3 、e m s a 实验证实n f i 能与1 0 2 6 a 特异性直接结合，而a p 1 与1 0 2 6 a 之 间的结合可能是间接的，c h i p 实验显示细胞内n f i 和y y l 与含有1 0 2 6 c a 位点 i n o s 启动子结合，且y y l 与1 0 2 6 c 结合亲和力较强，n f i 与1 0 2 6 a 结合亲和力 较强。 4 、通过y y l 和n f i 过表达及y y l 的r n a 干扰后检测p 1 1 7 3 c a - l u c 和 p 1 0 3 2 c a - l u c 转录活性，发现y y l 和n f i 抑制i n o s 基础启动子活性，该负性调 控作用受正性转录调节因子a p 1 的影响；其中，y y l 的抑制作用明显强于n f i 。 5 、r e a l t i m ep c r 结果显示，细胞因子混合物( i f n 吖、i l 1 p 和t n f a ) 显 著诱导b g c 8 2 3 细胞i n o s 表达，y y l 、n f i 或a p 1 单独过表达对i n o s 的诱导 表达影响不明显，而a p 1 n f l 或a p 1 y y l 联合过表达均抑制i n o s 的诱导表达， 且a p 1 y y l 的抑制作用明显强于a p 1 n f l 。 6 、转录因子预测分析显示i n o s 基因启动子1 2k b 序列中还存在一个t a t a b o x 、n f r b c e b p 、c e b p 、s p l 以及多个糖皮质激素和雌激素反应元件； 7 、体外培养b g c 8 2 3 、h e p 2 、c o s 7 和r a w 2 6 4 7 细胞发现，p l1 7 3 c a 1 u c 转录活性在不同细胞系中差异明显，而1 0 2 6 c a 在不同细胞系中均影响i n o s 启 动子活性。 8 、类固醇激素( 雌二醇、地塞米松、醛固酮) 刺激及其受体过表达实验结果 显示，雌激素下调p 1 1 7 3 a 1 u c 转录活性依赖于雌激素受体，醛固酮及盐皮质激素 受体有上调p 1 1 7 3 a 1 u c 转录活性的趋势，而地塞米松及糖皮质激素受体对 p 1 1 7 3 a 1 u c 转录活性无明显作用；此外，p 1 1 7 3 c 1 u c 转录活性不受这些激素的影 响。 3 9 、应用去乙酰化酶抑制剂丁酸钠刺激，以及乙酰转移酶辅助因子p 3 0 0 的过表 达实验，发现丁酸钠处理可显著降低p 1 1 7 3 c 1 u c 和p 1 1 7 3 a 1 u c 的转录活性，且对 p 1 1 7 3 a 1 u c l 拘抑制作用较强；而共转染野生型p 3 0 0 ) 舌p 1 1 7 3 c - l u c 和p 1 1 7 3 a l u c 转录 活性无显著变化；提示由丁酸钠介导的乙酰化修饰可能抑制删镳因的基础启动 子活性。 1 0 、应用血压调节因子( t g f 1 3 1 、i g fi i 和胰岛素) 处理h e p 2 细胞后p 1 1 7 3 c a 1 u c 转录活性均无明显改变，1 0 2 6 c a 多态的作用仍很显著，提示人i n o s 基因 1 2k b 启动子可能不是这些血压调节因子的直接作用靶点。 结论 l 、i n o s 启动子1 0 2 6 c a 多态位点所在1 6 b p 片段是基础转录活性的关键调 控区，该位点d n a 蛋白质复合物包括y y l 、n f i 和a p 1 ，其中y y l 和n f i 直 接结合d n a ，而a p 1 间接结合d n a ； 2 、y y l 和n f i 与1 0 2 6 c a 位点的结合亲和力存在差异，y y l 与1 0 2 6 c 优势 结合，n f i 与1 0 2 6 a 优势结合； 3 、y y l 和n f i 均抑制i n o s 基础启动子转录活性，且y y l 的作用明显强于 n f i ，在细胞因子诱导后，a p 1 厂y y l 对i n o s 基因m r n a 转录的抑制效应明显强 于a p 1 n f i ； 4 、i n o s 基因启动子可能存在多个转录因子反应元件，其中的雌激素反应元 件( e i 迮) 可能在雌激素下调i n o s 启动子转录活性中起重要作用； 5 、1 0 2 6 c a 多态对i n o s 启动子活性的影响在多种细胞系中趋势一致，但其 作用效应存在一定的种属特异性；多种刺激因素也没有影响1 0 2 6 c a 多态对转录 调控作用的趋势； 6 、乙酰化修饰对i n o s 基因转录调控发挥重要作用，特别是丁酸钠对i n o s 启动子转录活性的明显抑制作用值得进一步研究。 关键词 诱导型一氧化氮合酶；转录调控；阴阳1 ；核因子i ；高血压 4 英文论著摘要 f u n c t i o n a li d e n t i f i c a t i o no ft h e 1026cnctlonai d e n t i l i c a t i o no lthe|kta p o l y m o r p h i s mi nt h eh u m a ni n o sp r o m o t e r i n t r o d u c t i o n n i t r i co x i d es y n t h a s e sf n o s ) i n c l u d et h r e ei s o f o r m s ，t h en e u r o n a lt y p e ( n n o s ) ， t h ei n d u c i b l et y p e ( i n o s ) ，a n dt h ee n d o t h e l i a lt y p e ( e n o s ) i nt h en o r m a lc o n d i t i o n , i n o sd o e sn o te x p r e s so re x p r e s s e sa tav e r yl o wl e v e l ，h o w e v e r , al a r g ea m o u n ta f t e r i n d u c t i o n ，t h e r e f o r e ，t h er e g u l a t i o no fi n o se x p r e s s i o nh a v ei m p a c to nt h en o p r o d u c t i o n i n o sg e n ep l a y sa ni m p o r t a n tr o l e i nd e v e l o p m e n to fe s s e n t i a l h y p e r t e n s i o n ，w h i c hm a ye x h i b i ta l la n t i - h y p e r t e n s i v ee f f e c tt h r o u g hr e l a x a t i o no f v a s c u l a rm u s c l ec e l l sb yn o ，o ra p r o h y p e r t e n s i v ee f f e c tt h r o u g ho x i d a t i v es t r e s sb y e x c e s so ft h en od e r i v a t i v ep e r o x y n i t r i t eo n 0 0 - i nt h ep r e v i o u ss t u d y , w eh a v el i n k a g eb e t w e e nc h r o m o s o m e17m i c r o s a t e l l i t e d17 s18 7 8a n dh y p e r t e n s i o ni nah y p e r t e n s i o np r e v a l e n c er e g i o n f u r t h e rc a s e - c o n t r o l p o p u l a t i o na n df a m i l y - b a s e ds t u d yd e m o n s t r a t e dt h ea s s o c i a t i o nb e t w e e nt h e - 10 2 6 c a v a r i a n to ft h eh u m a ni n o s p r o m o t e ra n ds u s c e p t i b i l i t yt oh y p e r t e n s i o n , a n df o u n dt h a t t h e 10 2 6 ca l l e l ea n d 10 2 6 c cg e n o t y p ew e r e i n d e p e n d e n t r i s kf a c t o r s f o r h y p e r t e n s i o n m o r e o v e r , f u n c t i o n a li n v e s t i g a t i o no ft h e 一10 2 6 c ap o l y m o r p h i s mi nt h e h u m a ni n o sp r o m o t e rr e v e a l e dt h a t 一10 2 6 c aa l t e r e dt h ey i ny a n g1 ( y y 1 ) - b i n d i n g p a r e m , a n dt r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t y o ft h ei n o sp r o m o t e r r e p o r t e rc o n s t r u c t s p l17 3 c a - l u c ，r e s u l t i n gi ni n c r e a s e dr i s kf o rh y p e r t e n s i o nt h r o u g hr e d u c e dn o p r o d u c t i o n h o w e v e r , h o wy y lc o n t r i b u t st ot h ei n o sp r o m o t e r , t h ef u n c t i o no f 一10 2 6 c ap o l y m o r p h i s mo ni n o st r a n s c r i p t i o n , a sw e l la s t h ee f f e c to fv a r i o u s h y p e r t e n s i o n - r e l a t e df a c t o r so ni n o st r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yr e m a i n e du n c l e a r m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 5 m a t e r i a l s 1 c e l ll i n e s ：h u m a ne p i d e r m o i dc a n c e rc e l l ( h e p 2 ) ，h u m a ng a s t r i cc a r c i n o m ac e l l ( b g c 8 2 3 ) ，a f r i c a ng r e e nm o n k e yk i d n e yc e l l ( c o s - 7 ) ，a n dm o u s em a c r o p h a g ec e l l ( r a w 2 6 4 7 ) ； 2 v e c t o r ：p g l 3 - b a s i c ，p r l - t k ，p c m v - y y l ，p b s u 6 - y y l ，p c d n a 3 1 - n f i c ， p c d n a 3 1 - n f i c d b d ，p c d n a 3 1 - j u i l ，e x p r e s s i o n v e c t o r sf o re s t r o g e n ，g l u c o c o r t i c o i d ， a n dm i n e r a l o c o r t i c o i dr e c e p t o r , p 3 0 0 w , a n dp 3 0 0 m ； 3 r e a g e n t sa n dk i t sf o rw e s t e r nb l o t ； 4 r e a g e n t sa n dk i t sf o rg e n ec l o n i n ga n dl u c i f e r a s er e p o r t e ra s s a y ； 5 r e a g e n t sa n dk i t sf o rd n a b i n d i n ga s s a y , c o - i m m u n o p r e c i p i t a t i o n ( c o - i p ) ， e l e c t r o p h o r e s i sm o b i l i t y s h i f ta s s a y ( e m s a ) ，a n dc h r o m a t i ni m m u n o p r e c i p i t a t i o n ( c h i p ) ； 6 r e a g e n t sa n dk i t sf o rr e a l - t i m er t - p c r ； 7 s t i m u l ii nc e l lc u l t u r e ：c y t o m i x ( i f n 吖，i l 一11 3 ，a n dt n f 一0 【) ，s o d i u mb u t y r a t e ， e s t r a d i o l ，d e x a m e t h a s o n e ，a l d o s t e r o n e ，t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - 1 31 ，i n s u l i n - l i k e g r o w t hf a c t o ri i ，a n di n s u l i n m e t h o d s 1 c o n s t r u c t i o ni n o sp r o m o t e rl u c i f e r a s er e p o r t e r sa n da s s a y ：t r a n s c r i p t i o n f a c t o r si nt h ei n o sp r o m o t e rw e r ea n a l y z e du s i n go n l i n er e s e a r c hp r o g r a m ；as e r i e so f t r u n c a t e dl u c i f e r a s er e p o r t e rc o n s t r u c t sw e r eg e n e r a t e da n da s s a y e du s i n gd u a l - g l o l u c i f e r a s es y s t e mt oi d e n t i f yt h ek e yr e g u l a t o r yr e g i o no ft h ei n o sg e n e 2 d n a b i n d i n ga s s a y , c o i m m u n o p r e c i p i t a i o n , e m s aa n dc m pw e r ep e r f o r m e d t oi d e n t i f yt h ec o m p o n e n t so fd n a - p r o t e i nc o m p l e xi n t h ei n o s - 10 2 6 c a p o l y m o r p h i s m , t h e i n t e r a c t i o nb e t w e e nt h e s e t r a n s c r i p t i o nf a c t o r s ，a n d t h e i r d n a - b i n d i n ga f f i n i t y 3 c o t r a n s f e c t i o no fe x p r e s s i o nv e c t o r sf o rt r a n s c r i p t i o nf a c t o r sa n ds t e r o i d h o r m o n er e c e p t o r s ，a n dl u c i f e r a s er e p o r t e ra s s a yw e r ep e r f o r m e dt od e t e c tt h ee f f e c t s 6 o fe s t r a d i o l ，d e x a m e t h a s o n e ，a l d o s t e r o n e ，t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - 1 31 ，i n s u l i n - l i k e g r o w t hf a c t o ri i ，a n di n s u l i no nr e g u l a t i o no f t h ei n o s t r a n s c r i p t i o n 4 r e a l - t i m ep c rw a su s e dt oe v a l u a t et h ei m p a c to fo v e r e x p r e s s i o no fy y1 ， n u c l e a rf a c t o ri ( n f i ) ，a n da c t i v ep r o t e i n - 1 ( a p 一1 ) o nc y t o m i xi n d u c e di n o sm r n a e x p r e s s i o n 5 s t i m u l a t i o nu s i n gs o d i u mb u t y r a t e ，a n dc o t r a n s f e c t i o no fp 3 0 0 wa n dp 3 0 0 m e x p r e s s i o nv e c t o r s w e r ec o n d u c t e dt od e t e c t t h ee f f e c to fa c e t y l a t i o no ni n o s e x p r e s s i o n r e s u l t s 1 t r u n c a t e dl u c i f e r a s er e p o r t e r sa s s a yd e m o n s t r a t e dt h a ta141 一b ps e g m e n tf r o m 1 1 7 3b pt o - 1 0 3 2b pi nt h ei n o s p r o m o t e rw a sap o t e n t i a ln e g a t i v er e g u l a t o r yr e g i o n , a n da16 - b ps e g m e n tf r o m 10 3 2b pt o - 1016b pw a sak e yp o s i t i v er e g u l a t o r yr e g i o n f o ri n o st r a n s c r i p t i o n a lr e g u l a t i o n 2 t r a n s c r i p t i o n f a c t o r s p r e d i c t i o n r e v e a l e dt h a tb e s i d e sy y l ，t w on o v e l t r a n s c r i p t i o n f a c t o r sn f ia n da p 1w e r el o c a t e di nt h ei n o sp r o m o t e rl o c u s ； d n a - b i n d i n ga s s a ys h o w e dt h a tap r o t e i nc o m p l e xf o r m e db yy y l ，n f i ，a n da p - 1 e x i s t e di n 1 0 2 6 c a , y y ld o m i n a n t l yb o u n dt o 一1 0 2 6 c ，a n dn f id o m i n a n t l yb o u n dt o 一10 2 6 a ；c o - i m m u n o p r e c i p i t a t i o nd e m o n s t r a t e da ni n t e r a c t i o nb e t w e e na p 一1a n dn f i ，a p o s s i b l ei n t e r a c t i o nb e t w e e n n f ia n dy y l ，b u tn od i r e c ti n t e r a c t i o nb e t w e e na p - 1a n d y y l 3 e m s ad e m o n s t r a t e das p e c i f i cb i n d i n go fn f it o - 10 2 6 a ，a n ds u g g e s t e da i n d i r e c tb i n d i n go f a p - 1t o - 1 0 2 6 a ；c h i pa s s a yc o n f i r m e dt h eb i n d i n go fy y lo rn f i t oi n o sp r o m o t e re n c o m p a s s i n g - 10 2 6 c ai nc e l lc u l t u r e ，w h e r e i nt h eb i n d i n ga f f i n i t y o f y y lt o - 10 2 6 c ，a sw e l la st h eb i n d i n ga f f i n i t yo f n f it o 一10 2 6 aw e r ed o m i n a n t 4 t r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t ya s s a y o fp l17 3 c a - l u ca n dp 10 3 2 c a - l u ca f t e r o v e r e x p r e s s i o no fy y la n dn f i ，o ry y lr n a i n t e r f e r e n c es h o w e dt h a ty y la n dn f i i n h i b i t e di n o sb a s a lp r o m o t e ra c t i v i t y , a n dt h en e g a t i v er e g u l a t o r ye f f e c t sw e r e 7 i n f l u e n c e db yt h ep o s i t i v er e g u l a t o ra p - 1 ，w h e r e i nt h ei n h i b i t o r ye f f e c to fy y lw a s m o r ep o t e n tt h a nn f i 5 r e a l t i m ep c rr e s u l t ss h o w e dt h a tt h ec y t o m i x ( i f n 吖，i l - 18a n dt n f - a ) s i g n i f i c a n t l yi n d u c e dt h ei n o se x p r e s s i o ni nb g c 8 2 3c e l l s ，t h ei n d e p e n d e n te f f e c to f y y l ，n f i ，a n da p 一1 o nt h ei n o si n d u c e d - e x p r e s s i o nw a sn o tm a r k e d ，h o w e v e r , o v e r e x p r e s s i o no f a p 一1 n f lo ra p l y y lp o t e n t l yi n h i b i t e di n o si n d u c e d - e x p r e s s i o n ， w h e r e i nt h ei n h i b i t o r ye f f e c to f a p 一1 y y lw a sm o r ed o m i n a n tt h a n a p - 1 n f l 6 p r e d i c t i o no ft r a n s c r i p t i o nf a c t o rd e m o n s t r a t e dt h a t at a t a b o x ， n f r , b c e b p 、c e b p , s pl ，a n ds e v e r a le s t r o g e na n dg l u c o c o r t i c o i dr e s p o n s i v e e l e m e n t se x i s t e di nt h e1 2k bi n o sp r o m o t e r 7 t h et r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yo fp l17 3 c a - l u cs i g n i f i c a n t l yd i f f e r e da m o n g b g c 8 2 3 ，h e p 2 ，c o s - 7 ，a n dr a w 2 6 4 7c e l l s ，h o w e v e r , t h ei n f l u e n c eo f 一10 2 6 c ao n t h ep r o m o t e ra c t i v i t yw a st h es a m ei nd i f f e r e n tc e l ll i n e s 8 s t e r o i dh o r m o n e s ( e s t r a d i o l ，d e x a m e t h a s o n e ，a n da l d o s t e r o n e ) t r e a t m e n ta n d o v e r e x p r e s s i o no ft h e i rr e c e p t o r ss h o w e dt h a te s t r a d i o ld o w n r e g u l a t e dp l17 3 a - l u c t r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yi nar e c e p t o r - d e p e n d e n tw a y , a l d o s t e r o n ea n dm i n e r a l o c o r t i c o i d r e c e p t o rh a dat e n d e n c yo fp l17 3 a - l u cu p r e g u l a t i o n ，w h e r e a sd e x a m e t h a s o n ea n d g l u c o c o r t i c o i dr e c e p t o rd i dn o ta f f e c tt h ep l17 3 a - l u ct r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t y ；m o r e o v e r , t h e s eh o r m o n e sd i dn o ti n f l u e n c et h et r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yo f pl17 3 c l u c 9 c e l ls t i m u l a t i o n u s i n gd e a c e t y l a s e i n h i b i t o rs o d i u m b u t y r a t e a n d o v e r e x p r e s s i o n o fp 3 0 0s h o w e dt h a ts o d i u m b u t y r a t em a r k e d l y r e d u c e dt h e t r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t i e so f p l l 7 3 c l u ca n dp 1 1 7 3 a l u c ，a n dt h ei n h i b i t i o nw a sm o r e s i g n i f i c a n tf o rp 1 1 7 3 a - - l u ct h a nf o rp 1 1 7 3 c - - l u c ；w h e r e a st h et r a n s c r i p t i o na c t i v i t i e so f p l 1 7 3 c a - l u cd i dn o ta l t e ra f t e rc o t r a n s f e c t i o no fe x p r e s s i o nv e c t o r sf o rp 3 0 0 ， i n d i c a t i n gt h es o d i u mb u t y r a t e m e d i a t e da c e t y l a t i o nm a yi n h i b i tt h ei n o sb a s a l p r o m o t e ra c t i v i t y 10 s t i m u l a t i o no fh e p 2c e l l su s i n gb l o o dp r e s s u r er e g u l a t o r s ( t g f 一1 31 ，i g fi i ， a n di n s u l i n ) d i dn o ts i g n i f i c a n t l ya l t e rt h ep l17 3 c a l u ct r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t y , w h i l e 8 t h ee f f e c to f - 10 2 6 c ar e m a i n e dm a r k e d ，s u g g e s t i n gt h e1 2k bh u m a ni n o s p r o m o t e r m a yn o td i r e c tt a r g e to ft h e s eb l o o dp r e s s u l er e g u l a t o r s c o n c l u s i o n 1 t h ei n o sp r o m o t e r 10 2 6 c ap o l y m o r p h i s mw a sl o c a t e di na16 一b pk e y r e g u l a t o r yr e g i o nf o rb a s a lt r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t y , w h e r e i ne x i s t e dap r o t e i nc o m p l e x f o r m e db yy y l ，n f ia n da p 一1 ；t h ed n a - b i n d i n go f y y la n dn f iw a sd i r e c t ，w h e r e a s t h ed n a b i n d i n go f a p 1w a si n d i r e c t 2 y y la n dn f ib o u n dt o 一10 2 6 c aw i t hd i f f e r e n t b i n d i n ga f f i n i t y , y y l d o m i n a n t l yb o u n dt o 一10 2 6 c ，a n dn f id o m i n a n t l yb o u n dt o 10 2 6 a 3 b o t hy y1a n dn f ii n h i b i ti n o sb a s a lp r o m o t e ra c t i v i t y , a n dt h ei n h i b i t o r y e f f e c to fy y lw a sm o r e p o t e n t t h a n n f i ；t h e a p 一1 y y li n h i b i t e dt h e c y t o k m i x - i n d u c e di n o sm r n ae x p r e s s i o nm o r em a r k e d l yt h a na p - 1 n f i 4 s e v e r a lt r a n s c r i p t i o nf a c t o rr e s p o n s i v ee l e m e n t sm a ye x i s ti nt h ep r o m o t e r , i n w h i c ht h ee s t r o g e nr e s p o n s i v ee l e m e n t ( e r e ) p l a yav i