免疫层析快速诊断技术.pdf

Lateral-Flow Diagnostic Technology 免疫层析快速诊断技术 -Tom Bacon (PM-BIODOT), GENE(SH Office) Tom Bacon, Gene Co.,LTD.2 Tel胶体金技术起源及现状 起源:1971年,Faulk 和Taytor引入 现状: 1.层析法(Lateral-Flow) 2.渗滤法(Through) 3.免疫金电镜 胶体金的作用: 指示剂指示剂 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.3 Tel层析法技术优势:简单现场快速 1.打开包装取出试纸条2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内） Tom Bacon, Gene Co.,LTD.4 Tel与常规诊断方法相比： 优点优点缺点缺点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 定量问题 灵敏度问题 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.5 Tel技术应用 类别类别应用领域应用领域检测的物质检测的物质 人类医学人类医学各级医院,血站,CDC,防疫 站,诊断中心；家庭自检； 商检系统；边检口岸；公 安系统. 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等） 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等） 女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH) 毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒） 农牧业农牧业畜牧兽医站, 商检系统,边 检口岸,农牧类院系和研究 所 传染病（禽流感,兽瘟疫等） 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 环境环境环保监测部门,研究机构有害物质超标 食品安全食品安全食品安全检测中心,各监管 部门 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.6 TelElements 原理 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.7 Tel试纸条组成结构 测试线测试线 （T线）线） 控制线（控制线（C线）线） 胶体金垫胶体金垫 吸水滤纸吸水滤纸样品垫样品垫 NC膜（硝酸纤维素膜）膜（硝酸纤维素膜） 层析方向层析方向 PVC底板底板 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.8 Tel检测原理视频演示 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.9 Tel免疫层析法检测原理分类介绍 （双抗体夹心） （以HCG检测为例） Tom Bacon, Gene Co.,LTD.10 Tel免疫层析法检测原理分类介绍 （竞争反应） （以吗啡检测为例） Tom Bacon, Gene Co.,LTD.11 Tel免疫层析法检测原理分类介绍 （应用proteinA金标） （以HIV检测为例） Tom Bacon, Gene Co.,LTD.12 TelTECHNOLOGY 技术 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.13 Tel技术分项 抗原抗体生物原料 标记技术 NC膜与溶液喷点 胶体金垫与溶液喷点 样品垫 吸水纸 粘性底板 干燥方法 溶液体系分析 装配切条包装 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.14 Tel抗体 Antibody 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 特异性:亲和层析柱 浓度: 浓缩 溶解液:不含盐,例如PB 抗原抗体生物原料 抗原 Antigen 偶联抗原物质: BSA, OVA等 毒品检测来源: 合成抗原 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.15 Tel标记技术 Conjugate 容器硅化处理 金颗粒制备 (负电) 颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm. 蛋白质最适用量测定:盐析法 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.16 TelNC膜与溶液喷点-NC膜 NC膜的性能 NC膜的选择 爬速(?秒/4cm)对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Whatman/S&S,Millipore,Sartorius) Tom Bacon, Gene Co.,LTD.17 TelNC膜与溶液喷点-喷点溶液 Dispensing (喷点演示:BIODOT XYZ系列喷点仪器) CT线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 CT线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接 触划点(FL1000XY喷头)工艺比较 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.18 TelTom Bacon, Gene Co.,LTD.19 Tel胶体金垫与溶液喷点 胶体金垫 1.材料选择 2.糖的作用 3.缓冲溶液的作用 喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头) Tom Bacon, Gene Co.,LTD.20 Tel样品垫 材料选择 各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSAPVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.21 Tel吸水纸 吸水效率 进口与国产纸的差异 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.22 Tel粘性底板 原理作用 供应商的选择 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.23 Tel干燥方法 Dry 干燥方法的比较 1.冷冻干燥法 2. 烘箱 3.烘房 温湿度的控制 1.温度对蛋白的影响 2.湿度的控制办法 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.24 Tel溶液体系分析 各环节缓冲溶液的选择与统一 盐的作用 表面活性剂的作用 糖的作用 大分子蛋白的作用 其他作用物质 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.25 Tel装配切条包装Lamination 装配 切条 (演示:BIODOT CM4000切条机) 刀的维护与清洁 底板选择(胶的影响) 包装 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.26 Tel常见技术问题解决方案 Troubleshooting Tom Bacon, Gene Co.,LTD.27 Tel解决问题的办法 批号记录 替换分析 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.28 Tel原料效价降低 保存办法 反复复融的影响 细胞株的退化 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.29 Tel标记问题 兔抗标记 标抗原 盐 标记沉淀保护剂金颗粒 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.30 Tel层析问题 标记复合物的颗粒沉积 活性剂 糖的作用 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.31 Tel灵敏度问题 源头:抗原抗体免疫反应 材料问题NC膜 附加物质的解决办法 假阳性的解决 批内批间差 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.32 Tel长期保存 试纸失活 加速稳定实验的设计与操作 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.33 Tel实验研究的时间安排 上游 抗原抗体的制备 中游 材料选择比较 (包括上游产品和其他原料) 下游 成品调试 工作接口的设计 Deadline的制定 关键步骤: 原料效价标记选膜点样调试 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.34 Tel学术论文的构成 一般情况 综述 抗体制备 实验材料的选择 化学物质的组合调试 与其他方法检测结果比较 建议 对标记技术的探索 结果检测方式的探索 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.35 TelManufacture 生 产 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.36 Tel研发到生产的连接问题 实验室工艺到生产的转化要点 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.37 Tel生产流程表 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.38 Tel人 生产瓶颈:装条包装 技术人员架构 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.39 Tel机仪器设备 层析柱 离心机,磁力搅拌器,移液枪,加热仪器 BIODOT喷点切条仪器(生产设计) 封口大包 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.40 Tel料 来源批检 半成品库的设计 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.41 TelSOP操作 批号制度 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.42 Tel工作环境 生产区的建设人流,物流 半成品库流转的重要性 功能房间的构成与设计 配液喷点干燥贴膜切条包装 清洁度,湿度温度控制 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.43 TelQA设计 QC控制点的设计 检测手段问题 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.44 TelDeveloping 发展方向 Tom Bacon, Gene Co.,LTD.45 Tel标记技术的探索标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电