肿瘤的个体化医疗ppt课件.pptx

cobasEGFR基因突变检测,肿瘤的个体化医疗（PHC）Atailoredapproachtoimprovetreatmentoutcomes,肿瘤的个体化医疗（PHC）Atailoredapproachtoimprovetreatmentoutcomes,cobas肿瘤学基因突变检测用于检测癌基因的DNA碱基变化,cobasz480产品介绍cobasEGFR突变检测介绍cobasEGFR的分析性能,目录,实时荧光定量PCR仪发展简史罗氏不断打破记录将创新的PCR技术推向市场,KaryMullis发明PCR技术,罗氏获得全球PCR专利权,罗氏分子系统发明实时定量PCR仪,LC480II上市,LC480上市,cobasz480上市,罗氏推出COBASAmplicorPCR诊断行业金标准,cobasz480性能特点一检测结果可靠，让您对实验充满信心,温度均一性达+/-0.1，确保结果准确可靠cobasz480开创性的使用了Therma-BaseTM半导体热循环技术，热量通过蒸发和冷凝传递加快加热和散热的速度，解决了传统半导体技术的边缘效应采用银质板座，导热能力优于其他金属实现了完美的定量准确性和重复性,并成功实现了最新基因扫描技术(HRM),对2倍浓度差异的分辨率明显用SYBRGreenI检测病毒DNA模板2倍梯度稀释，从1.00E6到977拷贝/反应,优异的灵敏度，重复性和分辨率可检测单拷贝基因孔间检测的重复性（CV）0.15%97%置信度区分1,000与2,000拷贝的差异,cobasz480性能特点一检测结果可靠，让您对实验充满信心,cobasz480检测线性范围宽广质粒DNA以10倍梯度稀释，每个浓度9个重复，结果显示cobasz480具有宽广的动力学范围,最广的检测线性范围可检测11010个拷贝,cobasz480性能特点一检测结果可靠，让您对实验充满信心,cobasz480性能特点二快速高效，节约工作时间,cobasz480升降温速度达4.4/秒，连续可调，是同类板式定量PCR中速度最快的，可在60分钟内完成40个PCR循环消除了加热模块的边缘效应，因此节省了ROX荧光校正的过程,cobasz480性能特点三同时满足开放性通道UDF及IVD罗氏原装试剂检测,cobasz480产品介绍cobasEGFR突变检测介绍cobasEGFR的分析性能,目录,肺癌与EGFR突变率的流行病学中国EGFR突变率远高于欧美国家,排名第一的恶性肿瘤，中国每年新发70万NSCLC死亡率高，中位生存期仅为3个月，五年存活率仅为15%缺乏早期诊断，70%晚期晚期对化疗敏感性差，30%有效目前特罗凯和易瑞沙是一种EGFR酪氨酸酶抑制剂(TKIs)，是为肺癌患者延长生存期的靶向治疗药物，患者的耐受性和生活质量都要高于传统的化疗,TKI治疗对EGFR突变的患者有效中国EGFR突变率远高于欧美国家,EGFR突变高发人群：东亚人群、女性、腺癌、不抽烟者中国NSCLC患者中EGFR突变率约40%！,EGFR在NSCLC的突变率大部分报告的突变点位于外显子19和21,1JnnePAandJohnsonBE.ClinCancerRes2006;12:4416s4420s;2COSMICdatabase(v54),http:/sanger.ac.uk,accessedAugust2011.,19%EGFRmutation1,88.2%EGFRmutationsinexons19and21,检测EGFR突变的临床意义全球三大肿瘤突变会指南均强调检测EGFR突变19和21的重要性,2011NCCN中文版推荐所有NSCLC患者进行检测,cobasEGFR突变检测的应用很好预测TKI药物对NSCLC患者的疗效,首个获得美国FDA批准的EGFR突变检测!,cobasEGFR突变检测的特点全球突变覆盖范围最广,激活性突变(TKI敏感性)：19缺失，21点突变，18点突变,耐药性突变(TKI耐药性)：外显子20突变,cobasEGFR-等位基因特异扩增(ASA，Allele-specificenzymaticamplification)更宽广的突变点覆盖和更高的灵敏度,第一步：等位基因特异扩增可选择性扩增目标序列，只与突变DNA的3端特异结合为了减少假阳性率，引物做了进一步的修饰，从而与野生型DNA结合会极不稳定可实现多条突变序列同时扩增第二步：通过实时荧光PCR检测突变DNA链上结合有特异的探针，该探针中含有一个荧光基团和淬灭基团，在PCR扩增过程中，当扩增链延伸至探针时，探针脱落后产生荧光信号。具不同的荧光信号的探针可以用来检测不同的突变类型,cobasEGFR突变检测的特点报告所有临床相关的突变种类,激活性突变16外显子19缺失外显子21L858R外显子18G719X,耐药性突变79外显子20T790M外显子20插入外显子20S768I,1MokTMetal.NEnglJMed2009;361:947957;2MaemondoMetal.NEnglJMed2010;362:23822388;3RosellRetal.NEnglJMed2009;361:958967;4LynchTJetal.NEnglJMed2004;350:21292139;5JackmanDMetal.ClinCancerRes2009;15:52675273;6MaheswaranSetal.NEnglJMed2008;359:366377;7BalakMNetal.ClinCancerRes2006;12:64946501;8RosellRetal.ClinCancerRes2011;17:11601168;9WuJ-Yetal.ClinCancerRes2008:14:48774882.,cobas肿瘤学分子检测自动分析结果，减少人为误差,EURTAC临床研究使用cobasEGFR检测筛选突变的患者,2012ASCO（芝加哥）大会上，罗氏报告了EURTAC临床研究中入组的患者使用cobasEGFR检测后的临床结局情况。采用cobasEGFR检测确认存在突变的患者，与将化疗作为一线治疗的人群相比，使用特罗凯治疗的人群平均生存期明显延长.(9.7个月VS5.4个月),EURTAC临床研究cobas检测更加准确、快速、可靠,无效率方面，cobasEGFR检测比sanger测序法更低（8.8%VS15.6%）cobasEGFR检测与焦磷酸测序的相关性很高（96.3%）cobasEGFR检测24h内出结果，但sanger测序法3天后才出结果,cobasz480产品介绍cobasEGFR突变检测介绍cobasEGFR的分析性能,目录,决定检测结果准确的因素,方法众多方法优点/缺点,样本样本制备时质量和数量的不确定性-肿瘤百分比-突变百分比-抑制剂,实验室操作步骤的不一致会导致不同结果,试剂多种试剂,质量不一,仪器与结果解读检测平台分析与报道,IVD检测的基本要求cobasEGFR在试剂盒说明书中报告了性能表现数据,1cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,临床验证,标准化程序,对FFPET样本的灵敏度,重复性,试剂稳定性,定义的限度和质控,符合IVD的要求,交叉反应,干扰试验,cobasEGFR的分析性能高灵敏度和可靠性,cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,1RobisonK.BriefBioinform2010;11:524534;2KoshibaMetal.PathResPract1993;189:6672;3cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,FFPE样本的挑战FFPE中的DNA被降解,新鲜组织标本,FFPE样本,DNA被降解,DNA被降解和破坏低量的可扩增DNA检测突变面临挑战,福尔马林固定石蜡包埋,cobasEGFRMutationTest在底突变水平FFPE中，被临床证明的灵敏度,cobasEGFR的高灵敏度可检测到FFPET样本中5%的突变,1cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,来自质粒的完整DNA,在DNA含量0.78ng/孔时，即使突变率为5%，也可以准确检出,来自FFPET样品的被降解DNA,在DNA含量为50ng/孔时，即使突变率为5%，也可以准确检出,Confidential,交叉反应性和干扰cobasEGFR显示对突变检测无交叉反应性和干扰,肺相关微生物（肺炎链球菌和流感嗜血杆菌）,1cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,甘油三酯和血红蛋白,Confidential,cobasEGFR的高重复性正确检出率为98%（188/192）,1cobasEGFRMutationTest.CE-IVDPackageInsert.RocheMolecularSystems,Inc.,USA.2011.,cobasEGFR与sanger测序比较cobas检验敏感性高于sanger测序,Sanger测序获得5个不一致的结果，3个倾向于cobas检验Sanger测序报告为野生型的1个样品由454测序报告为突变型Sanger测序报告为突变型的2个样品由454测序报告为野生型,MD：检测出突变MND：未检测出突变,各PCR方法比较,等位基因特异性扩增（ASA）-又称扩增阻碍突变系统(ARMS)利用PCR引物的3端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等位基因特异性PCR扩增引物。ASA或ARMS的特点是：“仅是引物选择靶序列阶段”“只有在引物3碱基与模板配对时才能出现PCR扩增带，野生型的不扩增”,关于ARMS方法ARMS和ASA为同一类方法,厦门艾德,不同的只是后期的荧光激发方式,cobas肿瘤突变检测与艾德比较cobas灵敏度高于艾德试剂,cobas比厦门艾德多检测出20个位点，灵敏度有了很大的提升，因而：使更多的患者获得及时而正确的治疗为临床提高用药国内临床实验数据：cobas和艾德的符合率为93%结果通过测序验证后，104例样本中，cobas比艾德多检出6个突变1例20-Ins12376，艾德说明书有，但没检测到1例20-Ins12378，艾德说明书有，但没检测到1例20-Ins13558，艾德说明书没有该位点1例19-Del13556，艾德说明书没有该位点2例19-Del，艾德没有检测到,红色的为艾德缺少的位点,*选自cobasEGFR临床试验,检测报告对比,G&O产品的关键信息,Thankyouforyourattention,Roche