（农产品加工及贮藏工程专业论文）基因工程法制备乳源性降血压肽及其活性研究.pdf

学位论文版权使用授权书 江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致， 允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入中国 学位论文全文数据库并向社会提供查询，授权中国学术期刊( 光盘版) 电子杂 志社将本论文编入中国优秀博硕士学位论文全文数据库并向社会提供查询。 论文的公布( 包括刊登) 授权江苏大学研究生处办理。 本学位论文属于不保密叫。 学位论文作者签名： 吝云葛 指导教 历l f 年6 月抑e l 面导、 日 基因工程法制备乳源性降血压肽 及其活性研究 s t u d i e ：o i lp r e p a r a t i o no fm i l k - d e r i v e d i e s0 np r e p a r a t i o no fm i l k - d e r i v e d 一 一 一 a n t i h y p e r t e n s i v ep e p t i d e sw i t hg e n ee n g m e e n n g m e t h o da n di t sb i o l o g i c a la c t i v i t y 专 姓 2 0 1 1 年6 月 江苏大学硕士学位论文 摘要 高血压病是人类最常见的慢性疾病之一，在全世界都有较高的发病率。据卫 生部2 0 0 9 年数据显示，我国居民高血压患病率持续增长，现有高血压患者估计 达2 亿人。高血压发病机理比较复杂，没有统一的观点，相关研究发现抑制血管 紧张素转移酶( a c e ) 的活性可以有效的降低高血压患者的血压。但目前临床上 广泛使用的化学合成类a c e 抑制剂药物，长期服用后副作用明显。而来源于食 物蛋白的a c e 抑制肽因其食源性及无副作用的特点引起了人们的极大关注，成 为目前多肽研究的热点之一。 乳蛋白不仅是膳食蛋白质的重要来源，来源于乳蛋白的生物活性肽的也备受 关注。乳源性生物活性肽按功能可分为降血压肽、类吗啡活性肽、抗菌肽、免疫 活性肽等。目前乳源性降血压肽制备的方法主要有蛋白质酶水解法和发酵法，但 都存在天然原料高活性降血压肽含量低、水解产物复杂、分离纯化环节多、产量 低和产品成本高等问题，严重制约了降血压肽的产业化。利用基因工程技术生产 降血压肽不受原料来源限制，生产周期短，下游分离纯化工艺简单，是克服上述 困难、进行大规模生产的重要途径，具有广阔的应用前景。 具有高活性的乳源蛋白酶解产物通常为多肽混合物，包含了多种具有不同作 用机理的高活性多肽成分，利用工程菌仅仅表达其中单一活性肽可能达不到很好 的降血压效果。本研究将含两种具有不同作用机理的乳源性降血压肽( c e l l 2 ( p h e - p h e - v a l - a l a p r o - p h e p r o g l u v a l - p h e - g l y - l y s ) 和c e l 7 ( a l a - l e u p r o - m e t - h i s - n e - a r g ) ) 的3 串联基因克隆至p e t - 3 0 a 载体，将重组的p e t - 3 0 a 载体转入大 肠杆菌b l 2 1 ，获得能表达降血压肽重组蛋白的工程菌。 在工程菌胞内表达的重组蛋白以不溶性的包涵体存在，只有经过充分的细胞 破碎，才能进行有效的提取。对细胞破碎方法进行了研究，发现探索得到的超声 辅助法明显优于传统的n i 柱亲和纯化法。得出最佳的纯化工艺为：反复冻融破 碎细胞5 次，然后将破碎处理的菌体加入3m l 细胞裂解缓冲液i 使菌体重悬浮， 超声破碎2m i n ，8 0 0 0r p m 离心后取沉淀。将沉淀重悬浮于4 。c 、1 0m l 细胞裂 解缓冲液i i ，室温放置5m i n ，4 。c 、8 0 0 0r p m 离心后取沉淀。将沉淀悬浮于1 0m l 去杂液，室温放置5m i n ，进行超声处理3 0s ，4 。c 、8 0 0 0r p m 离心后取沉淀，即 为纯化后的重组蛋白。 基因工程法制备乳源性降血压肽及其活性研究 麦胚是小麦加工的廉价副产品，其蛋白质含量达3 0 左右，并且含有较多疏 水性氨基酸，适合工程菌发酵表达富含疏水性氨基酸的重组降血压肽。本研究以 麦胚水解物作为发酵培养基的基础原料，确定适合工程菌生长和融合蛋白表达的 麦胚培养基配方，并在此培养基的基础上优化诱导条件。优化后的培养基配方为： 酵母粉质量分数0 5 ，麦胚酶解物质量分数2 ，葡萄糖质量分数0 5 ，n a c i 质量分数0 5 。在优化后的培养基基础上最佳的工程菌i p t g 诱导条件为：诱导 温度为3 2 ，诱导起始o d 6 0 0 为1 4 ，诱导时间为1 0h 。在优化后的培养基和诱 导条件下，纯化的包涵体含量达到5 3 5m g l ，比2 x y t 进口培养基的表达量提高 了1 8 。 对纯化的重组蛋白，加入肠激酶酶解去除n 端的h i s 融合标签，切下的h i s 融 合标签利用n i 柱亲和吸附去除，制得去融合标签的串联多肽。将所得到的串联 多肽溶液加入胰蛋白酶，酶切后释放出降血压肽单体，通过截留分子量7 0 0 0d a 的透析袋去除肠激酶和胰蛋白酶，透过液经浓缩后用c e l l u f i n eg h - 2 5 柱脱盐 得到纯化的乳源性降血压肽，经检测c e l l 2 和c e l 7 混合多肽的表达量为0 1 4g l 。 对乳源性降血压肽的稳定性和活性进行了研究，研究得出乳源性降血压肽的 i c 5 0 值为0 0 1 2g l ，活性高于文献报道的c e l l 2 和c e l 7 单一成分的活性，并且具有 良好的抗肠道消化酶消化的能力，且经过蛋白酶消化后活性还略有上升。此外， 乳源性降血压肽还具有良好的热稳定性、耐酸碱性，处理3 h 其a c e 抑制活性仍为 初始值的8 1 以上。原发性高血压大鼠动物实验显示，高剂量组( 0 8g k g ) 在一 次性灌胃6h 后，收缩压下降值达至1 j 3 2m m h g 左右，阳性对照( 卡托普利) 血压 下降至3 8m m h g ，说明乳源性降血压肽对原发性高血压大鼠良好的降血压效果。 关键词：乳源性降血压肽；工程菌；发酵；生物活性 江苏大学硕士学位论文 a b s t r a c t h y p e r t e n s i o ni so n eo ft h em o s tc o m m o nh u m a nc h r o m ed i s e a s e ，w h i c hh a sh i l 曲 i n c i d e n c ei nt h ew o r l d a c c o r d i n gt od a t e so fc h i n a t sm i n i s t r yo fh e a l t hi n2 0 0 9 ，t h e n u m b e ro fh y p e r t e n s i v ep a t i e n t sw i t hs u s t a i n e dg r o w t hw a se s t i m a t e d2m i l l i o na t p r e s e n t t h ep a t h o g e n e s i so fh y p e r t e n s i o n i sc o m p l e xw i t hn ou n i f i e dv i e w ，b u t t h r o u g ht h er e s e a r c hf o u n dt h a ti n h i b i t i n ga c t i v i t yo fa n g i o t e n s i n c o n v e r t i n ge n z y m e ( a c e ) c a ne f f e c t i v e l yd e c r e a s et h eb l o o dp r e s s u r eo fh y p e r t e n s i v ep a t i e n t s b u tn o w c h e m i c a ls y n t h e s i sa c ei n h i b i t o r sd r u g s ，w h i c hw e r eu s i n gw i d e l y ，c o u l dc a u s es o m e o b v i o u ss i d e e f f e c ti nl o n g - t e r mu s e r s r e c e n t l y ，f o o d p r o t e i n - d e r i v e da c ei n h i b i t o r s w i t ht h ec h a r a c t e r i s t i c so ff o o d d e r i v e da n dw i t h o u ts i d ee f f e c t sw e r eg a i n e dg r e a t a t t e n t i o n ，h a db e c o m eah o t s p o ti np e p t i d er e s e a r c h d a i r yp r o t e i ni s n i li m p o r t a n ts o u r c eo fd i e t a r yp r o t e i n ，a n dm i l k - d e r i v e d b i o a c t i v ep e p t i d e s ( m b p ) a l s oh a v eb e e nc o n c e r n e d a c c o r d i n gt ot h em b pc a nb e d i v i d e di n t oa n t i h y p e r t e n s i v ep e p t i d e s 岬) ，m o r p h i n ea c t i v ep e p t i d e s ( m a p ) ， a n t i m i c r o b i a lp e p t i d e s ( a m p ) ，i m m u n ea c t i v ep e p t i d e ( t a p ) ，e t c a tp r e s e n t ，t h e p r i m a r yp r e p a r a t i o n m e t h o d so fm i l k - d e r i v e da n t i h y p e r t e n s i v ep e p t i d e s ( p e p t i d e sa r ep r o t e i nh y d r o l y s i s i n ga n df e r m e n t a t i n g ，b u tt h e r ea r es o m ed r a w b a c k si n t h et w om e t h o d sm e n t i o n e da b o v e ：t h ec o n t e n to fh i l 曲一a c t i v ep e p t i d ew a sl o wi n n a t u r a lr a wm a t e r i a l ，p r o t e i nh y d r o l y s a t e sw e r ec o m p l e x ，p u r i f i c a t i o nn e e d e dm a n y s t e p s ，l o wp r o d u c t i o n a n dh i 曲c o s t ，t h a t s e r i o u s l y r e s t r i c t e dt h ea i - i p s i n d u s t r i a l i z a t i o n p r o d u c i n ga h pb yu s i n gg e n e t i ce n g i n e e r i n gt e c h n o l o g yw a sr a w m a t e r i a ls o u r c el i m i t l e s s ，l o wc o s ta n ds i m p l ep r o c e s s i o no fd o w n s t r e a mp u r i f i c a t i o n ， w h i c hc a no v e r c o m ep r o b l e m so ft r a d i t i o n a lm e t h o d sa n dh o l db r o a da p p l i c a t i o n p r o s p e c t si nl a 唱e - s c a l ep r o d u c t i o n u s u a l l ym i l kh y d r o l y s a t ew i t hh i g h l ya c t i v ep r o t e i nc o n t a i n sv a r i e t ya c t i v e p e p t i d e s 谢t hd i f f e r e n t m e c h a n i s m so fa c t i o n ，j u s te x p r e s s i n gas i n 酉eb i o a c t i v e p e p t i d em a yn o tr e a c ht h eb e s te f f e c t i nt h i ss t u d yt h e3t a n d e mg e n eo ft w om a h p ( c e l l 2 ( p h e p h e v a l a l a p r o p h e p r o g l u - v a l p h e g l y l y s ) a n dc e l 7 ( a l a - l e u - p r o m e t - h i s i l e a r g ) ) w i t hd i f f e r e n tm e c h a n i s m sw a sd e s i g n e da n dc l o n e dt op e t - 3 0 a n l 基因工程法制备乳源性降血压肽及其活性研究 c a r r i e r ，t h e nt h er e c o m b i n a n tp l a s m i dw a sc l o n e di n t oec o l ib l 2 1t oc o n s t r u c tt h e r e c o m b i n a n te c o l iw h i c hc a ne x p r e s st h ep r o t e i nc o n t a i n i n gm a h p ( c e l l 2a n d c e b ) t h er e c o m b i n a n tp r o t e i ne x p r e s s e db ye s c h e r i c h i ac o l ie x i s t si ni n c l u s i o nb o d y ， w h i c hc a l lb ee f f e c t i v e l ye x t r a c t e do n l ya f t e rs u f f i c i e n tc e l ld i s r u p t i o n t h eo p t i m i z e d m e t h o do fc e l ld i s r u p t i o nw a s r e p e a t e df r e e z e - t h a w i n g5t i m e s o nt h eb a s i so fc e l l d i s r u p t i o n ，r e c o m b i n a n tp r o t e i nw a sp u r i f i e db yh y p e r a c o u s t i ca u x i l i a r yt or e m o v e i m p u r i t yp r o t e i n ，t h e r e s u l t ss h o wt h a tt h e o p t i m i z e dp u r i f i c a t i o nm e t h o do f r e c o m b i n a n t p r o t e i n w a sb e t t e rt h a n p u r i f i e db yn i - c o l u m ns i g n i f i c a n t l y ，t h e o p t i m i z e dp u r i f i c a t i o nm e t h o d sw a s ：t h ed i s r u p t e dc e l l sw a sr e s u s p e n d e dw i t h3m l o f c e l l d i s r u p t i n gb u f f e ri ，a n dd i s r u p t e db ys o n i cd i s r u p t i o na t4 c2m i n a n di n s o l u b l e f r a c t i o n sw a sh a r v e s t e db y8 0 0 0r p mc e n t r i f u g a t i o na t4 ca n dr e s u s p e n d e dw i t h1 0 m lo fc e l l - d i s r u p t i n gb u f f e r ，p l a c e di nr o o mt e m p e r a t u r ef o r5m i na n di n s o l u b l e f r a c t i o n sw a sh a r v e s t e db y8 0 0 0r p mc e n t r i f u g a t i o n ，p l a c e di nr o o mt e m p e r a t u r ef o r5 m i n i n s o l u b l ef r a c t i o n sw a sp u r i f i e db y3 0ss o n i cd i s r u p t i o na n dh a r v e s t e db y8 0 0 0 r p mc e n t r i f u g a t i o na t4 0 c w h e a te m b r y oi sc h e a pb y - p r o d u c to fw h e a tp r o c e s s i n g ，c o n t a i n s3 0 p r o t e i n r i c hi nh y d r o p h o b i ca m i n oa c i d s ，i ss u i tf o re c o l ic u l t i v a t i n gt oe x p r e s sa h pw i t h h i 曲l e v e lo fh y d r o p h o b i ca m i n oa c i d s t h ef e r m e n t a t i v em e d i u mb a s e do nw h e a t g e r mh y d r o l y s a t ea n di p t g - i n d u c i n gc o n d i t i o n so fe s c h e r i c h i ac o l ib l 2 1 - m f 3 a 3 w e r es t u d i e d ，t h eo p t i m a lc u l t u r em e d i u mw a s y e a s te x t r a c t0 5 ，w h e a tg e r m h y d r o l y s a t e2 0 ，g l u c o s e0 5 a n ds o d i u mc h l o r i d e0 5 ；t h eo p t i m a lc o n d i t i o n s w e r e - c u l t i v a t i o na t3 2 c ，i n d u c t i o na to d 6 0 0 = 1 4a n dp o s t i n d u c t i o ne x p r e s s i o nf o r 1 0 h u n d e rt h ea b o v ec o n d i t i o n s ，t h et a r g e tf u s i o np r o t e i ne x p r e s s e di ni n s o l u b l e i n c l u s i o nb o d i e sr e a c h e d5 3 5m 叽w a s1 8 h i g h e rt h a n2 x y tf e r m e n t a t i v e m e d i u m t h eh i s t a go fp u r i f i e dr e c o m b i n a n tp r o t e i nw a sc u tb ye n t e r o k i n a s ea n d r e m o v e db yn i - c o l u m n ，t h ee l u a t e ( p u r i f i e dm u l t i m e r i cu a m ) w a s h y d r o l y s e db y t r y p s i n a f t e rf i l t e r e dt h r o u g ha7 0 0 0k d ad i a l y s i st u b e ，t h ee l u e n t ( c o n t a i n i n gm i x t u r e o fm o n o m e r i cc e l l 2a n dc e l 7 ) w a ss e p a r a t e da n dc o l l e c t e d t h ee l u a t ew a sd e s a l t e d i v 江苏大学硕士学位论文 b yg e l l u f i n eg h - 2 5 t h ev o l u m e t r i cp r o d u c t i v i t yo fm a h p ( c e l l 2a n dc e l 7 ) w a s r e a c h e d0 1 4g l t h ea c t i v i t ya n ds t a b i l i t yo fm a h p ( c e l l 2a n dc e b ) w e r es t u d i e d ，t h er e s u l t s h o w e dt h a ti c 5 0o ft h em a h pw a s0 0 1 2g lh i g h e rt h a na n y o n eo ft h ec e l l 2a n d c e l 7r e p o r t e di nt h el i t e r a t u r e t h er e s u l ta l s os h o w e dt h a tt h em a - i ph a dg o o d r e s i s t a n c et og a s t r o i n t e s t i n a ld i g e s t i v ee n z y m e s ，a n dt h ea c t i v i t yw a si n c r e a s e ds l i g h t l y a f t e rp r o t e a s ed i g e s t i o n i na d d i t i o n ，t h em a h pa l s oh a dg o o da c i d ，a l k a l i n ea n d t h e r m a ls t a b i l i t y ，a f t e r3h t r e a t m e n t ，t h em a h p s t i l lk e p t8 0 a c t i v i t ya tl e a s t i nv i v o t e s ts h o w e dt h a tc l e a rd e c r e a s ei ns y s t o l i cb l o o dp r e s s u r e ( s b p ) a f t e rb e i n ga d m i n i s t e d t os p o n t a n e o u s l yh y p e r t e n s i v er a t s ( s h r ) ，i nt h eh i g hd o s eg r o u p ( 0 8g k gm 越口) t h es b pd e c r e a s ew a sr e a c h e d3 2m m h gi n6 ha f t e ri r r i g a t i o n ，c o m p a r e dw i t h3 8 m m h g i np o s i t i v ec o n t r o lg r o u p ( 2 0m g k gc a p t o p r i l ) k e y w o r d s ： m i l k - d e r i v e d a n t i h y p e r t e n s i v ep e p t i d e s , e n g i n e e r i n gb a c t e r i a ； f e r m e n t a t i o n ：b i o a c t i v i t y v 基因工程法制备乳源性降血压肽及其活性研究 江苏大学硕士学位论文 目录 摘要i a b s t r a c t h i 第一章绪论1 1 1 高血压病及其危害。1 1 2 降血压肽对高血压病的治疗机理。1 1 2 1 蛇e 抑制剂作用机理1 1 2 2a c e 抑制肽其他作用机理。3 1 3 国内外乳源性降血压肽研究进展3 1 3 1 乳源性降血压肽制备方法4 1 3 1 发酵法生产降血压肽4 1 3 2 酶水解法生产降血压肽4 1 3 3 基因工程法制备乳源性降血压肽5 1 4 工程菌制备食品降血压肽研究中存在的问题6 1 5 本研究的立项意义。6 1 5 1 立题依据和研究意义6 1 5 2 主要研究内容7 参考文献8 第二章降血压肽工程菌的构建。1 2 2 1j ；i 言1 ：1 2 2 实验材料1 2 2 2 1 菌株、质粒和d n a 1 2 2 2 2 主要材料与试剂。1 3 2 2 3 培养基和常用溶液配制1 3 2 2 3 1 培养基。1 3 2 2 3 2 凝胶电泳用试剂1 3 2 2 3 3 其他常用溶液。1 4 2 2 4 主要仪器设备1 4 2 3 实验方法1 4 2 3 1目的的基因设计和合成1 4 2 3 1 1 乳源性降血压肽c e l l 2 和c e l 7 串联多肽序列设计1 4 2 3 1 2 乳源性降血压肽c e l l 2 和c e l 7 串联多肽基因的设计1 5 2 3 2 p u c l 8 - c e i 1 2 7 质粒的提取1 5 2 - 3 3 目的d n a 的双酶切1 6 2 3 4 表达载体p e t - 3 0 a 的双酶切1 6 2 3 5 酶切产物的琼脂糖凝胶电泳和d n a 胶回收。1 7 2 3 6 目的基因的克隆与测序1 7 2 3 6 1 表达载体p e t 3 0 a c e i 1 2 , 7 构建1 7 2 3 6 2 大肠杆菌感受态细胞的制备。1 8 2 3 6 3 连接产物的转化1 8 2 3 6 4 表达载体p e t 3 0 a c e i 1 2 , 7 菌落p c r 鉴定1 8 2 3 6 5 表达载体p e t 3 0 a c e i - 1 2 ，7 测序1 9 2 3 6 6 含p e t 3 0 a c e i 1 2 ，7 的b l 2 1 工程菌构建1 9 2 3 6 7 重组载体构建流程图。1 9 v 基因工程法制备乳源性降血压肽及其活性研究 2 4 结果和讨论2 0 2 4 1 p u c l 8 c e i 1 2 , 7 双酶切电泳图2 0 2 4 2 p e t 3 0 a c e i 1 2 ，7 菌落p c r 鉴定。2 1 2 4 3 p e t 3 0 a c e i 一1 2 ，7 基因测序。2 1 2 5 本章小结2 2 参考文献2 3 第三章工程菌的表达和重组蛋白的纯化2 4 3 1i ；i 言2 4 3 2 实验材料2 4 3 2 1 菌株2 4 3 2 2 主要试剂。2 4 3 2 3 培养基和常用溶液配制。2 5 3 2 3 1 培养基2 5 3 2 3 2t r i n c e s d s p a g e 电泳试剂2 5 3 3 2 3 包涵体超声纯化缓冲液2 5 3 3 实验方法2 6 3 3 1 工程菌诱导表达。2 6 3 3 2 反复冻融法破碎细胞2 6 3 3 3 酶法破碎细胞2 7 3 3 4 超声波辅助纯化重组蛋白2 7 3 3 5 利用n i 柱亲和纯化细胞破碎液上清液中重组蛋白2 8 3 3 6 利用n i 柱亲和纯化细胞破碎液沉淀中重组蛋白2 8 3 3 7 重组蛋白脱盐2 8 3 3 8 电泳样品制备2 9 3 3 9t r i c i n e s d s p a g e 电泳2 9 3 4 结果与分析2 9 3 4 1 细胞破碎方法比较2 9 3 4 2 重组蛋白纯化3 0 3 5 本章小结3 1 参考文献3 2 第四章工程菌发酵培养基及发酵条件的优化试验。3 3 4 1 i ；l 言3 3 4 2 材料与方法3 3 4 2 1 菌种3 3 4 2 2 培养基3 3 4 2 3 主要生化试剂3 3 4 2 4 试验设备3 4 4 3 试验方法3 4 4 3 1 脱脂麦胚酶解物的制备3 4 4 3 2 种子活化3 4 4 3 3 工程菌诱导表达( 2 y t 培养基) 。3 4 4 3 4 工程菌诱导表达( 麦胚培养基) 3 4 4 3 5 包涵体纯化3 5 4 3 6 蛋白纯度检测3 5 4 3 7 蛋白含量测定。3 5 v 江苏大学硕士学位论文 4 3 7 1 标准曲线制作方法。3 5 4 3 7 2 未知样品的测定3 5 4 4 结果与讨论3 6 4 4 1 蛋白质标准曲线的测定3 6 4 4 2 重组蛋白的表达和纯化分析3 6 4 4 3 氮源单因素实验3 7 4 4 4 碳源单因素实验3 8 4 4 6 生长曲线测定4 0 4 4 7 工程菌诱导条件优化结果4 1 参考文献4 3 第五章乳源性降血压肽的活性和稳定检测。4 4 5 1 弓l 言z “ 5 2 实验材料4 4 5 2 1菌种4 4 5 2 2 实验动物4 4 5 2 3 主要材料及试剂4 4 5 2 4 培养基和常用溶液配制4 5 5 2 5 实验仪器。4 5 5 3 实验方法4 6 5 3 1 乳源性降血压肽的酶切制备方法4 6 5 3 2 乳源性降血压肽的体外消化实验研究4 6 5 3 3乳源性降血压肽的热稳定性研究4 6 5 3 4 乳源性降血压肽的酸碱稳定性研究4 6 5 2 5 乳源性降血压肽a c e 抑制率的检测4 6 5 3 6 乳源性降血压肽动物实验。4 7 5 4 实验结果与分析4 7 5 4 1 乳源性降血压肽的表达量4 7 5 4 2 乳源性降血压肽的a c e 抑制活性4 7 5 4 3 乳源性降血压肽的体外消化试验4 7 5 4 4 乳源性降血压肽热稳定性试验4 8 5 4 5 乳源性降血压肽酸、碱稳定性试验4 9 5 4 5 乳源性降血压肽初步动物试验4 9 5 5 本章小结5 0 参考文献5 l 1 结论5 3 2 创新5 4 3 展望5 4 致谢5 5 在学期间发表的学术论文及其他科研成果5 6 i x 江苏大学硕士学位论文 1 1 高血压病及其危害 第一章绪论 高血压病( h y p e r t e n s i v ed i s e a s e ) 是全球人类最常见的慢性病，在全世界都 有较高的发病率，是一种以动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病，常引起 心、脑、肾等重要器官的病变并出现相应的后果。2 0 0 9 年中国高血压防治指 南中将高血压水平定义为收缩压大于1 4 0m m h g ，据2 0 0 9 年数据显示我国居 民高血压患病率持续增长，现有中国高血压患者的估计为2 亿人。心脑血管病死 亡居我国居民死亡原因首位，而心脑血管病的发生和死亡一半以上与高血压有 关，9 0 的高血压患者的血压未得控制，而控制高血压是防治心脑血管病的关键， 所以当前形势非常严峻【1 1 。 高血压病的病因和发病机制很复杂，近年的研究虽有较大进展，但仍未完全 清楚。对于高血压患者及易患人群，不论是否已接受药物治疗，均需进行非药物 治疗并持之以恒，包括提倡健康生活方式，消除不利于心理和身体健康的行为和 习惯，达到控制高血压以及减少其他心血管疾病的发病危险，对于较严重的高血 压病一般要进行药物治疗1 2 - - 5 1 。 1 2 降血压肽对高血压病的治疗机理 1 2 1a c e 抑制剂作用机理 血管紧张素转移酶( a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n ge n z y m e ，a c e ，e c3 4 1 5 1 ) 是一种 含锌的糖蛋白，类似于羧肽酶是一种膜结合的二肽羧基外切酶，能催化多肽底物 从羧基端水解脱去二肽单位1 6 1 。a c e 作为一种多功能酶，在体内肾素血管紧张 素系统( r e n i n a n g i o t e n s i ns y s t e m ，r a s ) 和激肽释放酶激肽系统( k a l l i k r e i n k i n i ns y s t e m ，k k s ) 中对血压的调节起着重要作用【7 叫，如图1 1 所示。 r a s 系统是调节