（环境科学专业论文）极端酸性矿山废水中微生物群落组成及多样性.pdf

谭资良：极端醢性矿山废水中微生物群落组成及多样性 细菌类群总共有8 个) ，它们是n i t r o s p i r a 、a l p h a p r o t e o b a c t e r i a 、b e t a p r o t e o b a c t e r i a 、 g a m m a p r o t e o b a c t e r i a 、d e l t a p r o t e o b a c t e r i a 、f i r m i c u t e s 和a c i d o b a c t e r i a 。在l 41 个被分析的克隆子中，有1 0 4 个( 占整个文库的7 3 8 ) 在系统发育上归入剑 l e p t o s p i r i l l u m 属类群1 1 1 ( 为新发现的具有铁离子氧化能力的微生物类群) ；3 0 个在系统发育卜属于p r o t e o b a c t e r i a ，其中一半的克隆子( 1 5 个) 与具有铁离子 还原能力的a i p h a p r o t e o b a c t e r i a 成员表现十分相近的系统发育关系，其它的克隆 子在系统关系e 分布存b e t a p r o t e o b a c t e r i a 、g a m m a p r o t e o b a c t e r i a ( 各6 个克隆子) 和具有硫酸根和铁还原能力的d e l t a p r o t e o b a c t e r i a ( 3 个克隆子) 细菌类群内：最 后的4 个克隆_ 二分布在f i r m i c u t e s 和a c i d o b a c t e r i a 两个类群，克隆子数分别为3 和1 个。文库中大约一半的序列型( 代表大部分的1 6 sr d n a 克隆子) 归入到 = = 前仅有少数纯培养或根本没有纯培养而仅有环境序列的细菌类群内。此外，文库 中发现个新的序列型( l c a l l 6 ) 。 ( 2 ) 考虑到尾矿a m d 中具有如此特殊的微e 物群落( 类群t i i 占优势) 组 成，我们进一步对a m d 产生的源头一酸化尾矿( p h1 9 ) 中微生物的多样性进 行了研究，以期对这两个酸化环境中微生物的组成及结构进行比较。l 1 b s h u f f 统计分析结果表明，尾矿与尾矿a m d 之问微生物群落组成及多样性存在明显差 异。尾矿中可培养的微l 物包括a t e r r o o x i d a n s 、l e p t o s p i r i l l u m 斥r r i p h i l u m 和 s “帕b a c i l l u sm o n t s e r r a l e n s l s 等自养铁氧化细菌以及a c i d i p h i l i u mc r y p t u m 嗜酸异 养菌。1 6 sr r n a 克隆文库分析结果表明，该环境微生物多样性较低，在分析的 1 4 2 个克隆予巾，绝大部分( 13 5 个克隆子) 在系统发商e 归入到古细菌 t h e r m o p l a s m a l e , | 5 一目，其中1 2 8 个克隆子( 占整个文库的9 0 ) 与f e r r o p l a s m a a c i d i p h i l u m 1 6 sr r n a 基因序列的相似性达9 8 4 9 9 7 ；4 个克隆子也归为 f e r r o p l a s m a 属，它们在系统发育树上最靠近的序列为不可培养的占细菌克隆予 ( a n th 4 ，在西班牙t i n t or i v e r 中被检测到) ，序列相似性为9 6 9 ；其余3 个古细 菌克隆了存发f 等树上分别位于c p t a s m a 和d p l a s m a 两个分枝。分子方法电检测到 三砖 勿h i l u m 的存在。 ( 3 ) 此外，我们还对云浮硫铁矿露天采矿场a m d ( p h2 6 2 9 ) 中微生物 群落组成、结构及多样性进行了系统地研究。采用末端限制性片段长度多态2 鬯分 析方法( t e r m i n a lr e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m ，t - r f ，p ) 剥1 i 同季节 中山入学博卜学位论文 和空f 叫的七个a m d 样品( 大塘a m d 春夏秋冬的样品分别h js 4 s p r 、s 4 s u m 、 s 4 a u t 和s 4 w i n 表示：夏季人塘a m d 四个不同位点的样品分别用s 1 s u m 、 s 2 s u m 、s 3 s u m 和s 4 s u m 表示) 的群落结构进行了研究。结果表明，七个样 品( 荧光标记的p c r 产物) 经过内切酶t l a e l l l 酶切后，经测序仪检测m 术的限 制性片段( t - r f s ) 在大小和数量上表现出明显差异。主成分( p c a ) 和聚类分 析将它们分成- 个不同的组：第一组为s 4 s p r ，第二维为s 1 s u m ，第三组为 s 2 s u m 、s 3 s u m 、s 4 s u m 、s 4 a u t 和s 4 w i n 。在上述分析结果的基础上，我 们对3 个具有明显微生物结构差异的样品( s 4 s p r 、s 4 s u m 和s i s u m ) 进行了 深入地系统发育多样性分析。同样地，l i b s h u f f 分析表明，构建的三个克隆文 库极不相似( p 0 0 5 ) 。在s 4 s p r 文库中，共检测到2 0 个序列型，其中一半的 序列型在系统发育上分布在b e l a p r o l e o b a c t e r i a 、d e l t a p r o t e o b a c t e r i a 、n i t r o s p i r a 和a r c h a e a 四个类群，它们代表的克隆子占整个文序的8 0 以上( 分别为2 7 2 、 2 0 8 、8 8 和2 6 4 ) 。这些序列型与其它a m d 不境中的克隆子( 7 f u i 3 1 2 、 b a 7 1 、a s 6 ) 及铁氧化细菌( l j e r r o d i a z o t r o p h u mu b a l ) 、铁氧化古细菌 ( f e r r o p l a s m aa c i d i p h i l u m ) 在系统关系上1 分相近。此外还检测到一些真核生物的 序列( 序列型为s 4 s p r 一5 2 ) 。存s 4 s u m 义库中，共检测剑1 9 个序列型，其中 14 个在系统发育上归入g a m m a p r o t e o b a c t e r i a 、b e t a p r o t e o b a c t e r i a 和 d e l t a p r o t e o b a c t e r i a 三个类群。文库巾相对丰度最高的类群为g a m m a p r o t e o b a c t e r i a ，陔类群的微生物占到整个文库的5 0 ，与氧化业铁硫卡t 菌( a t 加r r o o x i d a n s ) 具有一t - j ) q 目近的系统发育关系；其它的序列刑主要。，克隆子t u i 3 。1 2 ( 属于b e t a p r o t e o b a c t e r i a ) 和a s 6 ( 植于d e l t a p r o t e o b a c t e r i a ) 表现出较高的序 列相似性。l j 前两个文库不唰，s 1 s u m 文库中数量上占优势的微生物类群为 b e t a p r o t e o b a c t e r i a 。尽管检测剑的1 7 个序列型r r | 只有3 个存系统发育关系上届 r 此类群，但是它们代表的克隆子可以占到整个文库的6 5 7 ，主要与克隆子 。1 u i 3 1 2 在系统关系卜最为接近。接下来丰度较高的类群依次为 d e l t a p r o t e o b a c t e r i a 、n i t r o s p i r a 、候选门( 包括t m 7 和w s 6 ) 和a r c h a e a 。上述 二个a m d 义库中还检测到8 个新的序列型，它们分别是s 4 s p r 1 1 1 、s 4 s u m 2 0 、 s 4 s u m 4 4 、s 4 s u m 1 3 0 、s 4 s u m 1 4 0 、s 1 s u m 一1 6 、s 1 s u m 一1 9 和s 1 s u m 1 0 5 。 由_ 】这些序列型与已获得的纯培养或环境序列系统关系较远，它们可能代表新的 谭贵照：极端酸性矿山废水中微生物群落组成及多样性 物种。 奉论文研究结果表明，三个典型a m d 环境中微生物群落组成及多样性叫屁 4 i 同。由于在每个文库中均检测到大量与铁离子氧化有关的微生物存在，这些微 生物对a m d 的产生有直接的贡献。l e p t o s p i r i l l u m 属类群i i l 所代表的微生物以 及f p a c i d i p h i l u m 和三f e r r i p h i i u m 可能是导致乐昌尾矿a m d 产生的关键微q 三物 类群；而a t f e r r o o x i d a n s 、f p a c i d i p h i l u m 则可能对云浮硫铁矿中f e s 2 的氧化和 a m d 的产生起最主要的贡献。本研究进一步拓展了a m d 、以及极端酸性尾矿 环境中微生物多样性的认识。相关的研究成果对于a m d ( 或酸化) 的控制具有 一定的理论和现实意义。 关键词：酸性矿山废水，尾矿，嗜酸微生物，微生物多样性 1 6 sr r n a 1 6 sr d n a v 中山大学博j j 学位论文 m i c r o b i a lc o m m u n i t yc o m p o s i t i o na n d d i v e r s i t yi n e x t r e m ea c i dm i n ed r a i n a g ee n v i r o n m e n t s n a m e ：g u i - l i a n gt a n s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rc h o n g y ul a n m a j o r ：e n v i r o n m e n t a ls c i e n c e a b s t r a c t a c i dm i n ed r a i n a g e ( a m d ) a n da c i d i cm i n et a i l i n g sa r et w om a i nt y p e so f e x t r e m e l ya c i d i ce n v i r o n m e n t s ( p h 3 o ) a tp r e s e n tt i m e ，d u e t om o m e n t o u s s i g n i f i c a n c ei nt h e o r e t i c a la n da p p l i e da s p e c t s ( s u c ha st h ee n v i r o n m e n t a lg e n o m e s a n a l y s i s ，m e c h a n i s ma n dc o n t r o lo ft h ea m dp r o d u c t i o n ) ，t h es t u d yo fm i c r o b i a l c o m m u n i t yc o m p o s i t i o na n dd i v e r s i t yi na m de n v i r o m n e n t sh a sa l r e a d yb e c o m ea f b c u so fs t u d yi ne n v i r o n m e n t a lm i c r o b i o l o g y a l t h o u g hm a n yr e s e a r c h e sh a v eb e e n c a r r i e do u t b yu s i n gm o l e c u l a r b a s e dm e t h o d s ，t h eu n d e r s t a n d i n go fm i c r o b i a l d i v e r s i t y i na m de n v i r o n m e n t si ss t i l l l i m i t e d ，a n d e v e ns o m ek n o w l e d g eo f a c i d o p h i l i cm i c r o o r g a n i s m sr e s p o n s i b l ef o rt h ep r o d u c t i o no fa m da r em i s t a k e n i n p a r t i c u l a r ，s t u d yo fm i c r o b i a ld i v e r s i t yi na c i dm i n et a i l i n g s ( ap r i m a r ys i t ef o rt h e p r o d u c t i o no fa m d ) h a sr e c e i v e d l i t t l ea t t e n t i o n ，a n dk n o w l e d g eo fm i c r o b i a l d i v e r s i t yi ns u c hn i c h e sw a so b t a i n e dm a i n l yv i ac u l t i v a t i o n d e p e n d e n tm e t h o ds of a r i nt h i s s t u d y , ac o m b i n a t i o no fc u l t i v a t i o n - d e p e n d e n ta n dc u l t i v m i o n i n d e p e n d e n t a p p r o a c h e sw a su s e dt oc h a r a c t e r i z et h em i c r o b i a lc o m m u n i t yc o m p o s i t i o na n d d i v e r s i t yi nt h r e ed i f f e r e n ta m de n v i r o n m e n t sw h i c hf r o ml e c h a n gp b z nm i n e t a i l i n g s ( l e c h a n gc i t y ，g u a n d o n g ) a n dy u n f up y r i t em i n e ( y u n f uc i t y , g u a n g d o n g ) w ea i m e dt oi m p r o v et h ed i v e r s i t yu n d e r s t a n d i n go fa c i d o p h i l i cm i c r o o r g a n i s m s 雌贵良 极端酸件矿废水中微牛物群落组成及多样性 p o p u l a t i n g i nt h e s ea c i d i ca m de n v i r o m e n t s a n o t h e r o b j e c t w a st od i s c u s s p r e l i m i n a r i l yt h et y p e so fo r g a n i s m sr e s p o n s i b l ef o rt h ep r o d u c t i o no fa m di ns u c h e n v i r o n m e n t s t h em a i nr e s u l t sf r o mt h i ss t u d ya r ep r e s e n t e da sf o l l o w s ： ( 1 ) t h er e s u l t so fm i e r o b i a ld i v e r s i t yi nl e c h a n gm i n er a i l i n g s - a s s o c i a t e da m d ( p h2 0 ) s u g g e s t e dt h a ta c i d o p h i l i cb a c t e r i ai s o l a t e dw e r er e s t r i c t e dt oi s o l a t e sr e l a t e d t oa c i d i t h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n sa n d a c i d i p h i l u mc r y p t u m b yc o n t r a s t ，c l o n i n ga n d p h y l o g e n e t i ca n a l y s i so f16 sr r n ag o n er e v e a l e dt h a tt a i l i n g sa m dh a r b o r e daw i d e r a n g eo fp h y l o g e n e t i c a l l yd i v e r s em i c r o b e s ，a l t h o u g hl o wi nt o t a lt a x o n o m i c a l l y d i s t i n c tg r o u p s w i t ht h ee x c e p t i o no fo n el i n e a g en o td e t e c t e d ，s e v e no ft h ee i g h t m a j o rb a c t e r i a ll i n e so fd e s c e n tp r e v i o u s l yd e t e c t e di nv a r i o u sa c i d i ce n v i r o n m e n t s h a v eb e e nd e t e c t e d o f t h e1 4 1c l o n e se x a m i n e d ，1 0 4w e r ep h y l o g e n e t i c a l l ya f f i l i a t e d w i t ht h er e c e n t l y d i s c o v e r e d ，i r o n o x i d i z i n gl e p t o s p i r i l l u mg r o u pi l lw i t h i nt h e n i l m , w i r a at o t a lo ft h i r t yc l o n e sw e r ea f f i l i a t e dw i t ht h ep r o t e o b a c t e r i a ，h a l fo f w h i c hb e l o n g e dt oo r g a n i s m sr e l a t e dt oa l p h a p r o t e o b a c t e r i as p e c i e sc a p a b l eo ff e r r i c i r o nr e d u c t i o n o t h e rc l o n e sw e r eg r o u p e dw i t hb e t a a n dg a m m a p r o l e o b a c t e r i a ( s i x c l o n e se a c h ) ，a n de v e nw i t hd e t t a p r o l e o b a c t e r i a ( t h r e ec l o n e s ) ，as u b d i v i s i o nw i t h a n a e r o b i cs u l f a t eo rm e t a l ( i r o n ) r e d u c t i o na st h ep r o m i n a n tp h y s i o l o g i c a lt r a i to fi t s m e m b e r s f i n a l l y ，f o u rc l o n e sw e r ec l u s t e r e dw i t h i nt h ef i r m i c u l e sa n dt h e a c i d o b a c t e r i ag r o u p a p p r o x i m a t e l yh a l fo ft h es e q u e n c et y p e sr e p r e s e n t i n gt h e m a j o r i t yo ft h et o t a lc l o n e sf e l li n t ol i n e a g e st h a ta r ep o o r l yr e p r e s e n t e db yc u l t u r e d o r g a n i s m so ra r es of a rr e p r e s e n t e db yo n l yaf e we n v i r o n m e n t a ls e q u e n c e s o n en e w s e q u e n c et y p e ( l c a i1 6 ) w a si n d e n t i f i e d ( 2 ) g i v e ns u c hu n i q u em i c r o b i a ld i v e r s i t yi nt a i l i n g s - a s s o c i a t e da m d ，w e s u b s e q u e n t l ye x a m i n e dm i c r o b i a lc o m p o s i t i o ni l lt a i l i n g s ( p h1 9 ) u s i n ga b o v e c o m b i n a t e da p p r o a c h e s ，a i m i n gi nc o m p a r i n gc o m p o s i t i o nd i f f e r e n c e sb e t w e e nt w o l i b r a r i e s l i b s h u f fs t a t i s t i c so f1 6 sr d n ag e n es u q u e n c e sf r o mt w ol i b r a r i e s s u g g e s t e dm i c r o b i a lc o m m u n i t yc o m p o s i t i o nd i f l b r e ds i g n i f i c a n t l y i n t a i l i n g s ， a c i d o p h i l i cb a c t e r i a ，s u c h a s i r o n - o x i d z i n ga t f e r r o o x i d a n s ，l e p t o a p i r i l l u m f e r r i p h i l u m ，s u l j o b a c i l l u sm o n t s e r r a l e n s i sa n dh e t e r o t r o p h i ca c i d i p h i l u mc r y p t u m w e r er e a d i l yi s o l a t e d c o n v e r s e l y ，c l o n i n ga n dp h y l o g e n e t i ca n a l y s i so f16 sr r n a v 1 中山大学博1 学位论文 g e n er e v e a l e dt h a tt a i l i n g sp o s s e s s e dl o wm i c r o b i a ld i v e r s i t y 1 3 2o u to f1 4 2c l o n e s e x a m i n e dw e r ef i r m l yp o s i t i o n e di nt h eo r d e rt h e r m o p l a s a m a l e s a m o n go ft h e m ， 12 8c l o n e s ( 9 0 o ft h el i b r a r y ) s h a r e dh i g hs e q u e n c es i m i l a r i t y ( 9 8 4 - 9 9 7 ) w i t h f e r r o p l a s m aa c i d i p h i l u m a n o t h e rf o u rc l o n e sw e r ea l s oa f f i l i a t e dw i t ht h eg e n u s f e r r o p t a s m a s h o w i n g9 6 9 s i m i l a r i t yw i t hm a th 4 ac l o n er e c o v e r e df r o mt i n t o r i v e ri ns p a i n o t h e rt h r e ec l o n e sf e l lw i t h i nc p l a s m aa n dd p l a s m a ，t h es e q u e n c e s c l o s e l yr e l a t e dt ol f e r r o o x i d a n sw e r ed e t e c t e dv i am o l e c u l a rm e t h o d ( 3 ) i na d d i t i o n ，w ee x a m i n e dt h em i c r o b i a lc o m m u n i t yc o m p o s i t i o n ，s t r u c t u r ea n d d i v e r s i t yi na m de n v i r o n m e n t s ( p h2 6 2 9 ) i ny u n f up y r i t e m i n eb yu s i n g c u l t i v a t i o n - i n d e p e n d e n ta p p r o a c h f i r s t l y ，t e r m i n a l r e s t r i c t i o nf r a g m e n t l e n g t h p o l y m o r p h i s m ( t - r f l p ) a n a l y s i sw a su s e dt oc o m p a r et h ed i f f e r e n c e so fs e v e na m d s a m p l e sf r o mf o u rs e a s o n s ( s a m p l e s ：s 4 s p r 、s 4 s u m 、s 4 a u i a n ds 4 w 1 n ) a n d f o u r s a m p l i n gs i t e s ( s a m p l e s ：sis u m 、s 2 s u m 、$ 3s u ma n ds 4 s u m ) t h er e s u l t s i n d i c a t e dt h a td i f f e r e n c e se x i s t e db e t w e e ns e v e ns a m p l e si nt e r m so ft h en u m b e r sa n d s i z e so fh a e i i i d i g e s t e dt - r f s p r i n c i p a lc o m p o n e n t sa n a l y s i s ( p c a ) a n dc l u s t e r a n a l y s i s s h o w e dt h a tm i c r o b i a lc o m m u n i t ys t r u c t u r eo ft h e s es a m p l e sc o u l db e c l a s s i f i e di n t ot h r e eg r o u p s ：( i ) s 4 s p r ；( i i ) s 1 s u m ；( i i i ) s u m s 2 ，s 3 s u m ，s 4 s u m ， s 4 a u ta n ds 4 w i n b a s e do nt h er e s u l t so ft - r f l pa n a l y s i s ，t h r e er e p r e s e n t a t i v e s a m p l e s ( s 4 s p r ，s 4 s u ma n ds 1s u m ) w e r ec h o s ea n dt h e i rm i c r o b i a lc o m m u n i t y c o m p o s i t i o n w a s s u b s e q u e n t l y c h a r a c t e r i z e dv i am o l e c u l a r b a s e d a p p r o a c h a c o m p a r i s o nw i t hl i b s h u f fa n a l y s i s o ft h e s el i b r a r i e sr e v e a l e dt h a tm i c r o b i a l c o m m u n i t yc o m p o s i t i o nd i f f e r e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 0 5 ) t h er e s u l tw a sc o n s i s t e n t w i t ht h o s eo ft - r f l pa n a l y s i s i ns 4 s p rl i b r a r y ，2 0s e q u e n c et y p e sw e r ed e t e c t e d ， h a l fo fw h i c hw e r ep h y l o g e n e t i c a l l ya f f i l i a t e dw i t hb e t a p r o t e o b a c t e r i a ，d e l t a 。 p r o t e o b a c t e r i a ，n i t r o s p i r aa n da r c h a e a ，r e p r e s e n t i n g2 7 2 ，2 0 8 ，8 8 ，2 6 4 o f l i b r a r y r e s p e c t i v e l y c l o n es e q u e n c e sr e t r i e v e ds h a r e dh i g hs e q u e n c es i m i l a r i t yw i t h o t h e ra m dc l o n e ( t u i 3 1 2 ，b a 7 1a n da s 6 ，r e c o v e r e df r o mn e wz e a l a n da n di r o n m o u n t a i n ，r e s p e c t i v e l y ) a n d 印a c i d i p h i t u m ，a ni r o n - o x i d i z i n ga r c h a e a o n ，e u k a r y o t i c s e q u e n c e s ( r e p r e s e n t e db ys e q u e n c et y p es 4 s p r 一5 2 ) w e r e a l s of o u n d i ns 4 s u m l i b r a r y ，at o t a lo f19s e q u e n c et y p e sw e r er e c o v e r e d ，1 4o fw h i c hw e r ep h y l o - v i l 谭贵良极端酸肚矿山废水中微生物群落组成及多样性 g e n e t i c a l l yp o s i t i o n e d i n g a m m a p r o t e o b a c t e r i a ，b e t a p r o t e o b a c t e r i a a n dd e l t a p r o t e o b a c t e r i a ti t o w e v e r , t h em o s td o m i n a n tb a c t e r i a lp o p u l a t i o n sw e r ew e l lp l a c e d i ng a m m a p r o t e o b a c t e r i a ，w i t hc l o s e s ta f f i l i a t i o nt oc u l t i v a t e da t f e r r o o x i d a n s o t h e r s e q u e n c et y p e s w e r e c l o s e l y r e l a t e dt oc l o n et u i 3 1 2 f a f f i l i a t e dw i t hb e t a p r o t e o b a c t e r i a ) a n da s 6 ( d e l t a p r o t e o b a c t e r i a ) i nc o n t r a s t ，b e t a p r o t e o b a c t e r i ag r o u p c o m p r i s e dt h el a r g e s tp o r t i o ni ns ls u m l i b r a r y a l t h o u g ho n l y3s e q u e n c et y p e sw e r e f o u n di nt h i sg r o u p ，t h ec l o n e sb yr e p r e s e n t e dc o m p r i s e d6 5 ，7 o f l i b r a r ya n ds h o w e d h i g h e rs e q u e n c es i m i l a r i t yw i t hc l o n et u i 3 1 2 o t h e ra b u n d a n ts e q u e n c e sf e l lw i t h i n d e l t a p r o t e o b a c t e r i a ，n i t r o s p i r a ，c a n d i d a t ed i v i s i o na n da r c h a e a ，r e s p e c t i v e l y i n t h r e el i b r a r i e sa b o v e ，e i g h t s e q u e n c et y p e s ：s 4 s p r - 111 s 4 s u m 2 0 ，s 4 s u m 4 4 ， s 4 s u m - 1 3 0 ，$ 4 s u m 1 4 0 ，s 1 s u m 一1 6 ，s 1 s u m 一1 9a n ds l s u m 1 0 5w e r ef o u n dt o h a v ed i s t a n t l yp h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i pw i t hc u l t i v a t e do r g a n i s m so re n v i r o n m e n t s e q u e n c e s t h u s ，t h e yl i k e l yr e p r e s e n t e dn e wg r o u p s & o r g a n i s m s t h ep r e s e n ts t u d ys u g g e s t e dt h a tm i c r o b i a lc o m m u n i t yc o m p o s i t i o na n dd i v e r s i t y d i f f e r e ds i g n i f i c a n t l yb e t w e e nv a r i o u sa m de n v i r o n m e n t sf r o ml e c h a n ga n dy u n f u s a m p l i n gs i t e s l i k e w i s e ，l o wm i c r o b i a ld i v e r s i t yh a sb e e nr e v e a l e di nt h e s ee x t r e m e l y a c i d i c e n v i r o n m e n t s ，w h i c h a r ec o n s i s t e n tw i t ht h o s ef o u n di no t h e ra m d e n v i r o n m e n t s ，i no u rs t u d y , m a n ys e q u e n c e sd e t e c t e dw e r e c l o s e l yr e l a t e d t o i r o n o x i d i z i n g b a c t e r i aa n da r c h a e a g i v e nt h a t t h e y h a v es u c hh i g hr e l a t i v e a b u n d a n c ei ne n v i r o n m e n t s ，i tw a st h u sr e a s o n a b l et oa s s u m et h a tt h em e m b e r s0 1 、 l e p t o s p i r i l l u mg r o u p1 1 1w i t h i nn i t r o s p i r ap l u sf pa c i d i p h i l u ma n dl ? e r r i p h i l u m w e r ep r o b a b l yk e ym i c r o o r g a n i s m sr e s p o n s i b l et ot h ep r o d u c t i o no fa m di nl e c h a n g m i n er a i l i n g s i nc o n t r a s t 、a tf e r r o o x i d a n sa n df p ，a c i d i p h i l u ml i k e l y p l a yc r i t i c a l r o l e si no x i d a t i o no f p y r i t ea n dt h eg e n e s i so f a m di ny u n f up y r i t em i n e o v e r a l l ，t h e p r e s e n ts t u d y e x t e n d so u rk n o w l e d g eo ft h e b i o d i v c r s i t y o fm i c r o o r g a n i s m s p o p u l a t i n gh i g h l ya c i d i ca m da n dm i n et a i l i n g se n v i r o n m e n t s ，a n dr e l a t e dr e s u l t s o b t a i n e dw i l lh e l pi nc o n t r o l l i n gt h ep r o d u c t i o no f a mdi nl h t u r e k e y w o r d s ：a c i dm i n ed r a i n a g e ；m i n et a i