（制糖工程专业论文）苦瓜抗氧化活性成分的研究.pdf

广两大学硕士学位论文莆瓜抗氧化活性成分的研究 苦瓜抗氧化活性成分的研究 摘要 从天然的植物中获得抗氧化的低毒高效经济药剂是世界开发保健食品 和新药剂的重要研究方向，它避免了西药不去根、复发率高、作用环节单 一、有不良反应等缺点。苦瓜具有治疗糖尿病，抗病毒，抗肿瘤等功效， 因此预示着苦瓜具有某种抗氧化作用，而其抗氧化作用在国内外的研究较 少，在国内外最新研究报道中，尚不能清晰明确的指出其有效成分。如果 能将苦瓜中具有高活性的单一组分提取出来并鉴定其结构，无疑对于天然 抗氧化剂的开发具有重要意义。本课题的主要研究内容及结果如下； 1 、对苦瓜中抗氧化活性物质的提取条件进行研究，研究了乙醇对苦瓜 的浸提效果，通过单因素试验确定合适的因素，确定其最佳条件为：5 0 0 9 新鲜苦瓜，用乙醇作溶剂，常温下在料液比分别为l ：3 的条件下浸提4 8 h ， 分两次浸提。 2 、以乙醇和水按不同比例混合对鲜苦瓜浸提的提取物的p o v 值测定 结果比较表明4 0 乙醇为苦瓜抗氧化物的浸提剂。 3 、根据试管预测实验结果，初步推断苦瓜的4 0 乙醇提取物的抗氧化 有效成分主要为酚类和黄酮类物质，且依据苦瓜提取物多酚含量的多少与 、 其抗氧化能力大小的关系，可以推断浸提物多酚含量的多少与其抗氧化畿 力的大小有相关关系。 4 、为了更好地分离纯化抗氧化物质，从h 1 0 3 、a b 罐、a d s 一8 、a d s 1 7 、 广西大学碗上学位论文若瓜抗氧化活性成分的研究 s 罐、 ) _ 2 0 这6 种树脂中筛选出h 1 0 3 树脂，其最大吸附量为6 4 1 6 6 7m g g 湿树脂，吸附率、解析率分别为9 5 5 3 、9 2 7 2 ，且其在室温，吸附液p h 值为中性，上样初始浓度为8 一1 3 m m l ，洗脱速度为l - 2 m l m i n 时对苦瓜 多酚的分离效果最好。 5 、用4 0 乙醇浸提苦瓜后的浸提样，通过洗脱大孔树脂h l0 3 和凝胶 树脂s e p h a d e x l h - 2 0 得到的洗脱样，再通过四种不同的体系( 猪油、羟自 由基、亚硝酸盐、d p p h ) 研究苦瓜抗氧化物质的抗氧化活性，结果表明凝 胶树脂二次纯化的洗脱样品的抗氧化性能明显都高于大孔树脂初次纯化的 样品，且其中以二次纯化的水洗脱样品的抗氧化性能最好，而且其抗氧化 性能已接近于v 。故要提高其抗氧化活陛还需对其进一步的纯化。 6 、对a a ( 凝胶树脂对苦瓜抗氧化物纯化的水洗脱液冷冻干燥品) 样 品进行试管预测试验，并进行紫外扫描，结果表明a a 样品是酚类和黄酮 类物质，含有酚羟基。 7 、经过红外光谱检测分析显示，a a 样品可能含有一丁、芳醚键、缔合 的氢键、一c h 2 一、伯醇和羰基。通过定性定量分析测得a a 样品( 0 5g ) 中 的总黄酮含量，其结果为o 0 3 7g ，占a a 样品的7 4 ；总酚含量，其结果 为o 4 3 3 6 9 ，占a a 样品的8 6 7 2 。 8 、经过高效液相检测分析显示，a a 样品可能舍有没食子儿茶素、儿 茶素、表儿茶素。 关键词：苦瓜提取分离纯化大孔树脂凝胶树脂抗氧化活性 广两大学硕士学位论文 苦瓜抗氧化活件成分的研究 s t u d yo na n t l 0 x i d a n ta c t i v l t yo f m o m o r d i c ac h a r a n t i al a b s t r a c t i h ea i l 石o x i d i z e d 龇b s t a n c e sw h i c hi sm el o wp o i s o n o u sa n dh i 曲1 y e f r e c t i v ee c o n o m i c a lm e d i c a m e n t 丘d mm en a n i r a lp l a i l ti ss op o p u l a ra l io f 幽e w o d d ，t h e ya v o i d em es h o n c o m i n g o f n o te m d i c a t i n g ，k 曲r a t er e i 印，a f f b c t i l l g t ob eu i l i t 8 啦n o th a v i n g9 0 0 dm s p o n d sa n ds oo no f t i l ew e s t e mm e d i c i n e t h e b a l s 锄p e a rt r e a t sd i a b e t e s ，肌t i v i m s ，a 1 1 t i - t l l m o ra n d s o o n ，t 1 1 e r e f b r e i n d i c a t i n gi th a ss o m ek i n d so fa n t i - 0 x i d a t i o n ，b u ti 协蚰t i - o x i d a t i o nr e s e a f c hi s f e wi nd o m e s t i ca n df o r e i g n ，n e w e s tr e a r c hi i lt 1 1 ed o m e s 廿ca n df o r e i g ni s r e p o r t e d 吐1 a t 、es t i uc o u l dn o tb ec l e a ro f i t se f r e c t i v ec o 瑚p o n e n t i fw ec a n w i m d r a w 山eh i 曲一a c t i v i t yc o m p o n e n t 丘o m 1 0 m o r d i c ac h a r a n t i al a n d 印p r a i s e 山e i rs t m c t i l r et h a tw e l lb es i g n i 丘c a n c et 0d e v e l o p m e n to fm en a m r a l o x i d a t i o ni n h i b i t o r t h i st o p i cm a i nr e s e a r c hc o m e ma n dr e s u l t 嬲f o l l o w s ： 1 、t h ee x t m c 幽gr e s u ho f t i l ee t i l y la l c o h o lw a ss t i l d i e do nb ym es i n g l e f a c t o rw e9 0 tm eb e s te x 仃a c t i n gc o n d i t j o nw 船：1 1 1 e5 0 0 9 舶s hb a l s 锄p e a r ， e x 廿 l c t i n g 谢山m ee t l l y la l c o h o la n du n d e rm e n o 加1 a lt e m p e r a t 【l r ei nt h er a t eo f m a t e r i a la n df l u i dw 鹤l ：3 ，s o a k sf b r4 8h o u 侣，d i v i d e st w ot i m e s n t 广西大学硕十学位论文苦瓜抗氧化活什成分的研究 2 、t h ep o vo f t h e 舶s hb a l s a r np e a rw a sd e t e n n i e da i l dc o m p a r e db yt h e d i 艉r e n tp r o p o n j o no ft h ee t l l y la l c o h o la n dt h ew a t e rw h i c hi n d i c a t e4 0 e t h y l a l c o h o lf o rt h eb e s ts o a k i n g 3 、a c c o r d i n gt o 1 er e s u h ，i n “i a l i y i n f e rt h ea n t i o x j d a t i o ne f f e c t i v e c o m p o n e n to f t h eb a l s a i np e a rb y4 0 e t h y la i c o h o lm a h l l yf o rt h ep o l y p h e n 0 1 s a n dt h ef l a v o n e ，a l s ob a s i i 瞎o nm er e l a t i o no f t h ec o n t e n to f p o l y p h e n o la n dt h e a b i l i t ) ro f8 i i 廿o ) ( i d a t i o n ，i n f e rm a tm ec o n t e mo fp 0 1 y p h e n 0 1a r i dm ea b i l i 够o f a m i o ) 【i d a 石o nh a dt 1 1 er e l a t i o r l 4 、t l l eh 1 0 3m a c r o p o 甘o u sr e s i nw 弛吐l eb e s te 仃e c tw 孵f o u n db y 仕屺 a d s o 印t i v ee ) ( p e r i m e mo f s i xm a c r o p o r o u sr e s i nh 1 0 3 、a b 一8 、a d s 一8 、a d s - 1 7 、 s - 8 、 口2 0 ，t 1 1 er e s u l ti 1 1 d i c a t e dt i l a ti t sb i g g e s ta d s o q ) t i v ec a p a c 姆i s6 4 1 6 6 7 m g ，gw e tr e s i i l ，u l er a t eo f a d s o 叩t i o na 1 1 dd e s o r p t i o nr e s p e c t i v e l yi s9 5 5 3 a n d 9 2 7 2 ，a l s oi nt h er o o mt e m p e r a t u r e ，m ep hv a l u eo fa d s o r p t i o nn u i di sm e n e u t r a l i t ya n dm em i t i a ld e n s i 移i s8 1 3 m i i l l ，m es p e e do fe l u t h 培i s l - 2 m l 面nw h i c hi sm eb e s tt os e p a r a t eo f t h eb a l s a mp e a rp o l y p h e n 0 1 5 、n es 锄p l ew l l i c hw a ss o a k e db y4 0 劬y la l c o h o le l u t 吨t h r o u 曲恤 h 1 0 3m 解r o p o r o u sr e s i na l l d 虹圮s e p h a d e x l h - 2 0 ，n l e nt h ea m i o x i d a ma c t i v 毋 w a ss t u d i e db yf o u rd i 位r c n ts y s t e m s ( 1 a r d ，h y d r o x y 缸er a d i c a l ，n 0 2 一，d p p h ) ， f i 删l yi n d i c a t e dt i l ea n t i o x i d a n ta c t i v 毋o f 也es e c o n dp u r i n c a t i o ns 锄p l eb y s e p h a d e x l h - 2 0w 雒o b v i o u s l yh i 曲e rt h a l l 血ep r i m a r yp u r i f i c a t i s 咖p l eb y h 1 0 3m a c r o p o r o u sr e s i t l ，a l s on 塘a m i o ) ( i d a l l ta c t i v n yi st h eb e s tb yt l l ew a t e ro f t h es e c o n dp u r i f i c a t i 0 咀s a m p l eb ys 印h a d e x l h - 2 0 ，m o r e o v e ri t sa n t i - o x i d a t i o n 广两大学硕十学位论文 苦瓜抗氧化活性成分的研究 s u s c e p t i b i l 时a p p r o a c h e di nv c t h e r e f b r em n l l e rp u r i f i c a t i o nc a ne n h 眦c ei t s 锄t i o x i d i z e da c t i v i t y 6、t h e s 锄p l e a a ( t h e w a t e ro f p u r i f i c a t i o ns 锄p l eb y s e p h a d e x l h - 2 0 ) w e r ei d e n t i f i e db ym em e a n so fp r e t e s tt i l b ea 【l d t i l eu v s p e c 伽l n li n d i c a t e dm a i n l yh a dt h ep o l y p h e n o l sa n dt 1 1 ef l a v o n e ，h a dt h ep h e n o l h y d r o x y l 7 、a f t e rt h ei n 也删s p e c t n l me x a m i 册t i o na l l a l y s i s ，t 1 1 es a m p l ea a p o s s i b i yh a dn l eb e n 巧l ，t h e 舶g r a n te n l e rl i t l k a g e ，t h ea s s o c i a t i o nh y d m g e n b o n d ，c h 2 - ，m ep r i m a r ya l c o h o la n dn ”c a r b o n y lt h m u 曲t h eq u a l i t a t i v e q 啪t i t a t i v ea n a l y s i s ，t 1 1 et 0 协ln a v o n ec o n t e n to fs a 1 p l ea a w a so 0 3 7ga n dm e r a t ew 船7 ，4 ；m et o t a lc o n t e mo fp 0 1 y p h e n o l sw 船0 4 3 3 6 9a n dm em t ew a s 8 6 7 2 。 8 、a 船r h i 曲p e r f b m a r i c el i q i dc h m m a t o g r a ma n a l y s i sd e m o n s t r a t i o n ，l e a as a m p l ep o s s i b l yi i l c l u d e dt l l eg a i ln u tc a f r e i n e ，m ec a b i n e ，m et a b 】e c a 船i 1 1 e 。 k e yw o r d s ：m o m o r d i c ac h a r a n t i al ；e x t r a c t i o n ； s 印a r a t i o n a n d p 谢f i c 砒i o n ；m a c r o p o p o u sr e s i n ；s e p h a d e ) ( l h - 2 0 ；a n t i o x i d a n ta c t i v 时 v 广两大学硕十学位论文苦瓜抗氧化活性成分的研究 1 1 苦瓜的研究进展 第一章绪论 苦瓜( m o m o r d i c a c l l 8 r 锄t i al ) 是葫芦科( c u c u r b i t a c e a e ) 苦瓜属植物，性苦、寒，主要 生长在亚洲、亚马逊河、东非和加勒比海一带，在全世界的许多地方例如巴西、中国、 印度等苦瓜的种植既被当作食用又被当作药用，通常具有治疗糖尿病，抗病毒，抗肿瘤， 抗艾滋病，抗白血病，抗菌，抗氧化，抗生育，抗蠕虫，抗湿疹，抗溃疡，降血糖，堕 胎，通经，抗疟，牛皮癣【i 。1 等功效。这些功能都预示着苦瓜具有某种抗氧化作用。因 此近年来，尤其是苦瓜的抗氧化的作用日益受到各国学者的关注。 1 1 1 化学成学研究嘲 近年来，科研人员对苦瓜的成分进行了深入的研究。目前已知苦瓜的根、茎，叶、 花、果实及种子皆可供药用。从果实中提取的成分有权建新( 1 9 9 1 ) 提取了植物胰岛素 ( p l a i l t 珏l 询，苦瓜脑苷( m o m o r c e r e b m s i d e ) ，大豆脑苷( s o y a c c r e b r o s i d c ) ，苦瓜亭 ( c h a r 叫h n ) ，尿嘧啶( u r a c i l ) ，肖志艳( 2 0 0 0 ) 提取了b 谷甾醇( b - s i l o s 咖1 ) ，常风岗( 1 9 9 5 ) 口】提取了植物蛋白质( 由1 7 种氨基酸组成) 、苦瓜素甙f 1 、g 、i ( m o - m o r d i c o s i d e f l 、g 、 d 和胡萝h 甾醇( d a u c o s 睁f i 。1 ) 。从种子中提取的成分有n g t b e ta 1 ( 1 9 8 6 ) h l 提取了胰岛素 多肽，宫原由美( 1 9 8 1 ) 发现了苦瓜甙a 、b 、c 、d ( m o m o r d i c o s i d e a 、b ，c 、d ) ，苦 瓜凝集素( m o m o r d i c ac h a r a n t i a l e c 血) ，苦瓜抑制剂( m o m o r d i c ac h a r a n t i a i nh i b i t o r ) ，y e u n g hw - e ta i ( 1 9 8 6 ) 提取了核糖体失活蛋白( 鼬b o s o m ei n a c 吐v a t i n gp m t e 岫，o k 矗b eh e t a 1 ( 1 9 8 0 ) 提出了蚕豆甙( v i c i n e ) ，谢慧嫒( 1 9 9 8 ) 发现了海藻糖( m y c o 嘲，氨基酸， b o u 血b a i 盯a s 斌a 1 ( 1 9 9 5 ) 州提取了抗病毒蛋白m a p 3 0 ( m o m o r d i c a a 埘h i vp r 0 缸n o f 3 0 k d ) ，p 蛋白等。 广西大学硕十学位论文苦瓜抗氧化活件成分的研究 1 1 2 药理作用研究2 l 1 1 2 1 降低血糖作用 1 1 2 1 1 降低正常动物的血糖。正常家兔灌胃苦瓜浆汁后，可使血糖明显降低；苦瓜皂 甙能降低大鼠血糖，实验采用给药前后自身对照方法，大白鼠灌胃苦瓜皂甙，每天1 次， 连续5 天，结果高剂量组( 6 0 9 生药m 曲6 只大鼠，给药前血糖为8 4 2 士1 4 4 m m o l 几，给 药后血糖为6 8 2 士2 0 2 m m o 儿，给药后与给药前比较，p o 0 5 。中剂量组( 4 0 9 生药k g ) 1 0 只火鼠，给药| 血糖为8 7 4 士1 5 3 m m o l ，l ，给药后为5 5 2 士o ，8 4 m m o l l ，给药前后比 较，p o 0 0 1 。低剂量组( 2 0 9 生药，k g ) 1 0 只大鼠，给药前血糖为8 8 3 士1 5 9 m m o 儿，给 药后为6 5 3 士o ，7 5 m m o l ，i 。，给药前后比较，p ( 0 o l ，显示出苦瓜皂甙对正常大白鼠具 有降血糖作用，苦瓜租提物对正常小鼠也有降血糖作用，每只小自鼠皮下注射2 7 n 8 c l 盐析后，苦瓜粗提物l m i ( 1 5 m g ，m l ) ，于注射后2 、4 、6 、8 、1 2 、2 4 小时测定小鼠的血 糖，并与皮下注射生理盐水i m “只的空白对照组比较，结果，苦瓜组小鼠在给药后2 小时血糖开始降低，6 1 2 小时降低明显，2 4 小时又回升到接近正常水平，生理盐水水 组小鼠无降f f f i 糖作用。 1 1 2 1 2 降低糖尿病动物模型的血糖。四氧嘧啶性糖尿病家兔，灌服苦瓜浆汁后，使血 糖明显降低，苦瓜皂甙能降低四氧嘧啶性糖尿病大鼠的血糖，在建立糖尿病大鼠模型的 基础上，灌胃苦瓜皂甙4 0 9 生药k g 给予治疗，对照组用优降糖3 m g 瓜g ，结果苦瓜皂甙 治疗组给药前血糖为1 4 1 8 士3 5 6 o l 几，给药后降为5 9 3 士1 2 9 n m m l 几，给药前后 比较，p o 0 0 1 ；优降糖组给药前血糖为1 3 o l 士1 9 l i m n o i 几，给药后为4 8 8 士1 1 n 】i i l o i l ， 给药前后比较，p 乙酸乙酯，正己烷 乙醚。这是由于这些有机 溶剂的极性不同，它们对苦瓜抗氧化性物质的溶解度不同，所提取的抗氧化物质的总量 和种类也就不同，导致了不同有机溶剂提取液的抗氧化能力不同。其中甲醇提取物的抗 氧化效果相当明显，其p o v 值在第八天时也只有4 7 ，0 3 m 眺g ，与v c 第八天的p o v 值 ( 3 8 5m g ，k 曲相差不大，效果相当。从而可见苦瓜抗氧化活性成分在极性溶剂中的溶出量 比较大。但在这些有机溶剂中，乙醇无毒廉价，乙酸乙酯毒性很小，可作食品添加剂的 提取溶剂，正已烷的抽提效果较差，其它几种虽然抽提效果还可以，但都毒性大，不可 作食品添加剂的提取溶剂。而且从表1 1 可见用乙醇作提取剂，其回收率也比较高。综 合考虑，选取乙醇作浸提剂。 2 2 2 不同提取时间下的苦瓜抗氧化浸提物对猪油的抗氧化性能的影响 使用不同提取时问下的苦瓜抗氧化浸提物，加入到新鲜炼制的猪油试样中并同 2 1 2 2 2 法测定p 0 v 值，其结果见表2 3 。 广西大学硕士学位论文 苫瓜抗氧化活件成分的研究 表2 3 不同提取时间苦瓜抗氧化提取物的猪油p o v 值 1 a b2 3t h cp o vv a l u eo f d i 仟b r e n t l i m ee x n a c t i o ni n1 8 r d 从表2 - 3 可见，在室温下提取4 8 h ，提取物对猪油的抗氧化效果最佳，因此采用总 提取时问为4 8 h 。 2 2 3 不同料液比的苦瓜抗氧化浸提物对猪油的抗氧化性能的影响 使用不同料液比的浸提物，加入到新鲜炼制的猪油试样中并同2 1 - 2 2 3 法测定p o v 值，其结果见表2 - 4 。 表2 4 不同料液比苦瓜抗氧化提取物的猪油p o v 值 t 曲2 4 t h e p o v v a l 0 fd i f 艳陀m 删吐o o f m a t e a l 明d n u i d e ，c 【m c t i o n n l a r d 从表2 - 4 可见，在室温下料液比为l ：3 时提取4 8 h ，提取物对猪油的抗氧化效果最 佳，因此采用总料液比为i ：3 。 2 2 4 不同浸提次数的苦瓜抗氧化浸提物对猪油的抗氧化性能的影响 使用不同浸提次数的浸提物，加入到新鲜炼制的猪油试样中并同2 1 2 2 4 法测定 p 0 v 值，其结果见表2 5 。 广西大学硕士学位论文苦瓜抗氧化活性成分的研究 表2 5 不同浸提次数苦瓜抗氧化提取物的猪油p o v 值 t a b2 5t h ep o vv 翻u eo f d i 梳r e l nn u m b e fo f t i m e sf o re x 仃a c l j o ni nl a r d 从表2 - 5 可见，常温下料液比为1 ：3 分2 次浸提4 8 h ，提取物对猪油的抗氧化效果 最佳，冈此采用浸提次数为2 次。 2 2 5 水及不同浓度的乙醇的苦瓜抗氧化浸提物对猪油的抗氧化性能的影响 以v c 做对照，用2 1 1 2 ，2 5 法测定水、4 0 乙醇、7 0 乙醇和无水乙醇浸提物的p o v 值，并计算备浸提物的提取率，结果见表2 - 6 和表2 7 。 表2 6 不同溶肌时苦瓜抗氧化物提取的提取率 1 a b 撕t b c 豫t i oo f d i 腩化ms o l v e i i t 鼢删i o n 9 广西大学硕l 学位论文 苦瓜抗氧化活忤成分的研究 表2 7 添加不同溶剂提取苦瓜抗氧化物的猪油p o v 值 t 曲2 71 1 l ep o vv a l o f d j 肺陀n is o l v e n te 州r a c t i o ni nl a r d 从表2 - 6 及表2 - 7 可以看出，苦瓜水及不同浓度的乙醇提取物的抗氧化效果都非常 明显，其抗氧化能力依次为4 0 乙醇 无永乙醇 7 0 乙醇 水提取物，从表可见4 0 乙 醇提取物在第9 天时p o v 值为4 1 2 2 m 眺g 与v c 的p o v 值( 3 5 5 m g m g ) 相当，而与2 2 1 的甲醇浸提物相比，其p o v 值均低，从而可见苦瓜用4 0 乙醇提取时，其抗氧化效果 显著，并且其回收率也比较高。综合考虑，选用4 0 乙醇作为提取苦瓜抗氧化物的浸提 剂。 2 2 6 不同用量的4 0 乙醇的苦瓜抗氧化浸提物p o v 值的测定 测定添加不同用量4 0 乙醇的苦瓜抗氧化提取物的猪油试样的p o v 值，方法同 2 1 2 2 6 ，其结果见表2 - 8 。由表2 - 8 可见，在5 0 9 猪油里添加0 1 9 的4 0 乙醇提取物的 抗氧化效果最好，在第十天时其p o v 值只有3 3 r 3 3m g m g ，而苦瓜提取物在按o 0 4 9 - o 0 6 9 添加时效果最差，不过抗氧化效果都比较明显。因此，选用的添加量为5 0 9 猪油里加o 1 9 的4 0 乙醇提取物。 广西大学碳士学位论文 苦瓜抗氧化活件成分前研究 表284 0 乙醇的苦瓜抗氧化提取物的不同添加量的猪油p o v 值 t a b2 一st h e p o v v a l u e o f a d d j n g i n t h ed i 黼e n tq u 锄t 时o f 4 0 甜l y la l c o h o le x 们c t i o n 2 2 74 0 乙醇的苦瓜浸提物抗氧化成分定性测定 苦瓜中抗氧化物质能被水、乙醇、乙醚和正己烷等极性相差很大的溶剂提取，可见 它也是一种多组分物质。其活性组分是值得深入研究的问题，而目前国内外的资料尚未 见报道，在此对其抗氧化成分进行初步定性测定，并进行紫外扫描，结果见表2 3 和图 2 7 。 表2 - 34 0 己醇的苦瓜抗氧化提取成分的定性测定实验 1 曲2 - 3q l i 诅t i v ed e t e r “n a t i o ne x p e n m 锄to ns 锄p l e 所加的试剂所显的塌色 1 f e c b 2 f e c l 3 1 k f “c n k 饱和溴水 高锰酸钾溶液 硼氧化钠 1 0 n a o h h 2 s 0 4 1 a l c b 锌粉+ h c l 蓝绿色 蓝色 溴水褪色 高锰酸钾溶液褪色 无变化 深黄 淡黄 亮黄 红色 其紫外扫描图见图2 7 ，可见4 0 乙醇提取物在紫外区域的2 1 3 m 和2 6 0 m 有明显 广西大学硕士学位论空苦瓜抗氧化活性成分的研究 的吸收峰，并结合上述的显色特征，可以看出，4 0 乙醇粗提物呈现酚类物质的特征反 应畔“l ，表明丰r 提物中含有酚类物质。 图2 7苦瓜4 0 * 乙醇粗提物的紫外扫描图 f j g2 - 71 1 l eu vs 弦c 仃u mo f 4 0 毗h y la l c o h o i 咖吐 黄酮类化合物能与某些金属离子产生络合反应，而且还能与某些较强的还原剂发生 颜色反应。因此可以根据黄酮类化台物的一些特性对其进行定性鉴定。通过上述试管显 色反应，与黄酮类化合物的特征颜色对比嘲，其结果基本符合，表明粗提物中含有黄酮 类物质。 2 2 8 水及不同浓度的乙醇的苦瓜抗氧化浸提物多酚含量的测定 按上述2 ，l _ 2 4 的方法测得水及不同浓度的乙醇浸提物多酚含量，其结果见表2 - 4 。 表2 - 4 水及不同浓度的乙醇的苦瓜抗氧化浸提物多酚含量 恸t h e p o l y p h e i l o lc 咖t e i i to f t i l e 既h a c t i 册b y 廿m w a l e r 锄dt h ed 髓r e n tc 珊c 即帅6 0 n0 fe l h y l 甜c o h o l 苦瓜抗氧化物质的提取溶剂 多酚含鼋( m g 幢) 水 4 0 乙醇 7 0 乙醇 1 0 0 乙醇 1 3 9 5 1 8 1 5 1 4 6 3 1 6 ，7 8 由上表可见，多酚的含量依次为4 0 乙醇 无水乙醇 7 0 乙醇 水提取物，而其抗 氧化能力的大小也依次是4 0 乙醇 无水乙醇 7 0 乙醇 水提取物，因此可以推断浸提 广西大学硕十学位论文苦瓜抗氧化活性成分的研究 物多酚含量的多少与其抗氧化能力的大小有相关关系。 2 3 本章小结 1 、从鲜苦瓜的不同有机溶剂浸提物的p o v 值测定结果比较表明，以甲醇的提取物 所表现的抗氧化能力最好，其它依次是无水乙醇、乙酸乙酯、正已烷、乙醚，它们的提 取效果都比较好。但其甲醇和无水乙醇的抗氧化效果显著，与v c 相差不大，且乙醇价 格低廉无毒，所以初步选定乙醇为浸提剂的考虑对象。 2 、试验了乙醇对苦瓜的浸提效果，通过单囚素试验确定合适的凼素，确定其最佳 条件为：5 0 0 9 新鲜苦瓜，用乙醇作溶剂，常温下在料液比分别为l ：3 的条件下浸提4 8 h ， 分两次浸提。 3 、以乙醇和水按不同比例混合对鲜苦瓜浸提的提取物的p o v 值测定结果比较表明 提取苦瓜抗氧化物质最合适的溶剂是乙醇水溶液，醇的浓度4 0 最妥，并且其抗氧化效 果非常显著，与v c 相当，而且比甲醇和无水乙醇的p o v 值均低，综合考虑，选取4 0 乙醇为苦瓜抗氧化物的浸提剂。 4 、以不同用量的4 0 乙醇的苦瓜提取物添加到猪油中，其结果表明在5 垤猪油里 添加o 1 9 的4 0 乙醇提取物的抗氧化效果最好。 5 、根据实验结果，初步推断苦瓜的4 0 乙醇提取物的抗氧化有效成分主要为酚类 和黄酮类物质。 6 、依据苦瓜提取物多酚含量的多少与其抗氧化能力大小的关系，可以推断苦瓜浸 提物多酚含量的多少与其抗氧化能力的大小有相关关系。 7 、从实验可见，对苦瓜抗氧化作用的研究有很大的应用前景，而且其抗氧化效果 显著因此有很大的研究价值，因此有必要对其抗氧化的成分进行进一步的深入研究。 广西大学硕1 学位论文苦瓜抗氰化活忤成分的研究 第三章大孔树脂对苦瓜抗氧化物质吸附分离实验 3 。1 材料与方法 3 1 1 试验材料 3 1 1 1 主要试剂 新鲜苦瓜4 0 乙醇浸提浓缩的初提液 h 1 0 3 非极性南开大学化工厂 a b 8 弱极性南开大学化工厂 a d s 一8 中极性南开大学高分子研究所 a d s - 1 7 极性南开大学高分分子研究所 s 8 极性南开大学化工厂 h p 2 0 非极性北京绿百草公司。 单宁酸上海试剂生化试剂二厂 实验所用试剂均为分析纯 3 1 1 2 主要设备 r e 5 2 a a 型真空旋转蒸发器 s h b l 循环水式多用真空泵 u v - 1 6 0 1 p c 型紫外分光光计 f c 2 0 4 电子天平 回旋式振荡器 上海泸西分析仪器厂的层析柱 h l - 2 d 恒流泵 z f - i 型三用紫外分析仪 广西大学硕b 学位论文苦瓜抗氧化活性成分的研究 3 1 2 试验方法 3 1 2 1 苦瓜抗氧化提取物中多酚含量的测定 3 1 2 1 1 标准曲线制定【6 7 j 准确称取单宁酸标准样o 0 5 0 0 昏用蒸馏水溶解，然后定容至1 0 0 0 m l ，摇匀，得浓 度为o 0 5 m m l 。再分别取o m l ，0 5 m l 。1 】1 】l 。2 m l ，4 m l ，6 m l 8 m l ，1 0 m l 上述 单宁酸标准溶液，放入盛有7 0 m l 水的1 0 0 m l 容量瓶中，加入福林一丹尼斯试剂5 0 0 | 1 1 l 及饱和碳酸钠l o 0 0 m l ，然后加水至刻度，允分混匀，3 0 1 1 1 i n 后，以空白作参比，在波 长7 6 0 1 1 m 处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，1 0 0 m l 溶液中单宁酸的毫克数为横坐标 绘制标准曲线，其标准回归方程为y = o 6 2 5 5 x + o 0 0 3 8 ，r 2 = o 9 9 7 4 。 3 1 2 1 2 苦瓜抗氧化提取样液中多酚含量的测定 吸取1 m l 苦瓜初提液( 4 0 乙醇浸提5 0 0 9 新鲜苦瓜浓缩定容5 0 m l 的苦瓜初提液) ， 同上述3 1 2 1 1 的方法显色后，在波长7 6 0 n m 处测定吸光度，计算其多酚的量。 3 1 2 2 树脂的预处理 把上述h 1 0 3 、a b 8 ，a d s 8 、a d s 1 7 、s 8 、h p 2 0 这6 种树脂用蒸馏水浸泡后， 经5 盐酸和5 氢氧化钠酸碱重复处理2 次后，然后用蒸馏水洗至中性，最后再用乙醇 充分浸泡溶胀后，用蒸馏水充分淋洗至无明显乙醇气味。室温放置，即得。 装柱：以乙醇湿法装柱，乙醇冲柱，再以大量蒸馏水冲去乙醇，排挣气泡即可。 3 1 2 3 苦瓜多酚吸附量、吸附率的测定 准确称取经3 1 2 1 3 的方法预处理的湿树脂各1 0 9 ，置于1 0 0 m l 三角瓶中，精密 加入5 0 m l 吸附原液( 5 0 哩新鲜苦瓜4 0 乙醇浸提) ，室温下置回旋式振荡机上以1 0 0 次 觚n 的振荡频率振荡2 4 h ，充分吸附后滤过，并按3 i 2 1 2 方法测定，其吸附量、 吸附率计算公式为： ( 原液浓度吸附液浓度) 溶液体积 吸附量= 吸附率= 湿树脂质量 ( 原液浓度- 吸附液浓度) x 溶液体积 原液浓度溶液体积 l o o 广西大学碗十学位论史 苫瓜抗氧化活忤成分的研究 3 1 2 4 苦瓜多酚解吸率的测定 将上述3 1 2 1 4 吸附饱台后过滤得到树脂放入原柬所在的三角瓶中，加入5 0 m l 7 0 乙醇解吸液，以1 0 0 次m j n 的振荡频率振荡解吸2 4 h 厉按3 1 2 i2 方法测定，其解吸 率计算公式为： 解吸液浓度 解吸率( ) =1 0 0 原液仞始浓度- 平衡浓度 3 l 2 5 吸附动力学过程 按照3 1 2 1 4 的方法测定6 种树脂在t 时刻f 卢1 h 、2 h 、3 h 、4 h 、5 h 、6 h 、7 l l 、8 m 时的吸附量q t ( m 晚湿树脂) ，以q | 对t 作图，得吸附动力学曲线。 3 1 2 6h 1 0 3 树脂吸附分离的工艺优化 从吸附液的p h 值、吸附液的初始浓度、脱附的流速对h 1 0 3 树脂吸附分离的工艺 进行考察与优化。 3 2 结果与讨论 3 2 1 各种树脂对苦瓜多酚的吸附与解析 将按上述3 1 2 3 、3 1 2 4 的方法测定6 种不同树脂对苦瓜多酚的静态吸附与解吸情 况，其结果见表3 - 1 。由表可见h 1 0 3 树脂对苦瓜多酚的吸附效果最好，其解吸效果也 很好。 表3 1六种不同型号树脂的吸附效果 t 曲3 - 1a d s o 啊i v ee 舶a0 f s i xm a c r o p 0 倒峪他s m 广西大学硕l 学位论文苦瓜抗氧化活忤成分的研究 3 2 2 吸附动力学过程 在有充分时间吸附的情况r ，有些树脂可能有相近的饱和吸附量，但各树脂理化性 质和结构不同，其吸附动力学过程各异。因此按3 1 2 ，5 的方法作图得吸附动力学曲线见 图3 1 。结合图3 一l 和表3 1 可见h 1 0 3 树脂对苦瓜多酚的吸附和解析效果最好，因此选 用h 1 0 3 树脂对苦瓜多酚的分离进行进一步工艺优化。 7 0 函6 0 露5 0 逞4 0 菩 栅2 0 藿1 0 0 一曲s 一1 7 一 广- l n 0 5 一日 一站 卜 d s 8 t ) 图3 - 1 树脂对苦瓜多酚的吸附动力学曲线 f 谵3 - 1ma d s o r p 廿o nd y n a i n i c sc u r v eo f 化s i nf b rb a l s 枷p b 盯p o l y p h e n o l 3 2 3h 1 0 3 树脂吸附分离的工艺优化 一般认为影响吸附脱附效率的主要因素有吸附液浓度，脱附液流速、吸附温度及口h 值，对于实际生产过程，通常的温度变化对吸附效果影响不大，实际吸附过程的温度控 制也不易实施的。本实验只就吸附液的p h 值、吸附液的初始浓度、脱附的流速进行实 验考察与优化。 3 2 3 1p h 值对苦瓜多酚吸附量的影响 精确量取经3 1 2 2 预处理的h 1 0 3 树腊2 0 9 ，分成4 等分，分别装入4 个l o o m l 三 角瓶中，加入5 0 i i l l 的初提液( 5 0 0 9 新鲜苦瓜4 0 乙醇浸提浓缩定容) ，并调节p h 值 分别为2 、4 、6 、8 后，室温下振荡2 4 h ，充分吸附后，滤过，并根据3 1 2 1 2 方法测定， 计算得图3 2 。由图可见，p h 值在一定范围内对树脂吸附量的影响不大。因此在吸附和 分离过程中使用中性介质。 广西太学顾t 学位论文苦瓜抗氧化括忤成分的研究 6 4 1 6 6 8 6 d 1 6 6 7 墨6 4 1 6 6 6 等6 4 1 6 6 5 型叭6 6 4 皆刚1 6 6 3 6 4 1 6 6 2 6 4 1 6 6 1 2468 p h 值 图3 2p h 值对苦瓜多酚吸附量的影响 f i g3 2e 胁o f p h 0 na d s o 唧i v em l eo f 托s i n 3 2 3 2 上样初始浓度对苦瓜多酚吸附量的影响 精确量取经3 1 2 2 预处理的h 1 0 3 树脂2 0 9 ，分成4 等分，分别装入4 个1 0 0 i n l 三 角瓶中，加入5 0 1 n l 吸附原液，原液的浓度分别为2 7 m 咖l 、5 3 m g ，m l 、8 ，o m 咖l 、 l o 7 m g ，m l 、1 3 3 m 咖l ，室温下振荡2 4 h ，充分吸附后，滤过，并根据3 1 2 1 2 方法测 定，计算得图3 - 3 。由图3 3 可见，h 1