（发酵工程专业论文）樟芝深层液态发酵及其三萜类化合物的研究.pdf

摘要 摘要 樟芝，别名牛樟菇和牛樟芝，是一种属于非褶菌目多孔菌科、只长于台湾的担子菌。 由于其具有很好的生物活性，在台湾地区非常出名。研究表明樟芝具有十分广泛的生物 活性，如保肝，抗乙肝表面抗原，抗氧化，抗癌等。本论文对实验室保藏的樟芝菌株进 行了分子生物学鉴定，并观察了其生物学特性；以三萜类化合物为主要目标，对樟芝摇 瓶培养条件进行了优化；对樟芝菌丝体进行了扩大培养并对发酵产物中的活性成分进行 成分分析、提取富集和保肝活性评价。 采用的序列分析，对实验室保藏的樟芝菌种进行了鉴定。通过与n c b i 数据库进行 比对，确认该菌株的1 8 sr d n a 和i t sr d n a 与樟芝模式菌株一致。进一步对该樟芝菌 株的生物学特性进行了研究，并观察了樟芝深层培养过程中的产孢子情况。 建立了香草醛高氯酸显色法用于测定樟芝三萜类化合物含量。通过实验确定最佳 反应条件为：待测试样加热挥去溶剂，然后加入o 3m l 新制的5 香草醛冰醋酸溶液 及1 0m l 高氯酸试剂，在6 0 恒温水浴加热2 0r a i n ，冷却至室温，摇匀，在5 5 0n i 1 波 长处测定，该显色反应灵敏度高，稳定性、重现性好。 以樟芝三萜产量为目标，通过单因素实验优化了樟芝摇瓶培养条件。优化后的培养 条件：接种方式采用孢子接种法，接种量为1 5 3 x 1 0 5 个m l ，温度为2 6 ，摇瓶转速为 1 0 0r p m ，初始p h 为4 5 ，发酵时间为1 2d 。优化后的培养基组成( g l ) ：葡萄糖2 0 0 ， 蛋白胨1 0 0 ，m g s 0 4 为1 0 ，k h 2 p 0 4 为2 0 ，麸皮2 0 。在单因素实验的基础上，对显著 影响樟芝生物量和三萜产量的培养基组成进行了r c c d 优化实验，并将实验结果采用 b p 人工神经网络进行训练，进一步采用遗传算法得到a n n 模型中的最佳条件：接种孢 子数为1 0 9 x 1 0 5 个m l ，葡萄糖浓度为3 2 9 3e , l ，蛋白胨浓度为2 8 1g l ，黄豆粉浓度 为2 0 1g l 。摇瓶培养1 2d 的樟芝胞内三萜产量最高可达6 3 1 4m g l 。经实验验证，得 到樟芝三萜产量为5 5 8 9 士2 4 3m g l ，与预测值相比，误差为11 4 8 。较优化前的2 5 2 2 m e , r e 提高了1 2 1 6 。 研究了香樟树枝和树叶不同提取物对摇瓶培养樟芝生物量和三萜含量的影响。香樟 石油醚提取物和乙酸乙酯提取物均能提高樟芝菌丝体中三萜的含量。其中以香樟树枝石 油醚提取物( p e s ) ( o 0 5g l ) 对樟芝三萜含量的提高作用最显著，三萜含量达到2 3 2 0 m g g ，比对照组提高了3 0 7 8 。通过g c m s 分析，从p e s 中共鉴定了3 9 种化合物， 主要为萜类化合物( 2 8 种，5 0 8 6 ) ，包括单萜类化合物9 种( 3 0 5 7 ) ，倍半萜1 9 种 ( 2 0 2 9 ) 。进一步考察了p e s 中所含的l 芳樟醇，蘑菇醇，桉树脑，樟脑，樟烯，a 松萜，0 【松油醇，7 萜品烯，反式石竹烯等化合物对樟芝生物量、三萜含量和产量的影 响，发现a 松油醇对樟芝菌丝体三萜含量、三萜产量均有促进作用。q 松油醇能够促进 樟芝挥发性萜类化合物的产生，可能通过影响萜类化合物合成途径提高樟芝萜类物质产 量。 在摇瓶培养的基础上，对樟芝菌丝体进行了5l 发酵罐扩大培养，并考察了搅拌转 速、接种量对樟芝三萜产量的影响。结果表明，较优的搅拌转速为5 0r p m ，较优的孢子 接种量为1 0 1 0 + r n l 。樟芝菌丝体发酵培养7d 可以获得最大的生物量( 6 5 1g l ) ， 摘要 在生长8d 后胞内三萜产量达到最大( 4 8 9 0m g l ) 。 对5l 发酵罐培养所得的樟芝菌丝体深层发酵产物的成分进行了较为全面的分析。 结果表明：樟芝发酵产物含有钾、钙、钠、镁、铁、锰、锌、铜等8 种矿物质元素。樟 芝菌丝体、孢子粉和发酵液中饱和脂肪酸的相对含量分别为5 5 3 2 ，5 8 6 2 和6 0 7 9 ， 包括棕榈酸和硬脂酸。不饱和脂肪酸相对含量分别为4 3 1 5 ，4 0 5 2 和3 9 1 8 ，包括 棕榈油酸，油酸，亚油酸和亚麻酸。樟芝发酵产物中共检测到1 8 种氨基酸，菌丝体和 孢子粉的1 8 种氨基酸总量分别为2 6 4 9g 1 0 0 9 和3 0 5 6g 1 0 0 9 ，其中谷氨酸含量最高。 樟芝胞内多糖和胞外多糖均由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，但是三种单糖在不同多糖 中的比例不同。 分别在发酵液和菌丝体中分析得到4 9 种和5 5 种挥发性化合物，其中包括2 2 种醇 类化合物、8 种酮类化合物、7 种醛类化合物、2 3 种酯类化合物、5 种萜烯类化合物、3 种芳香族化合物。樟芝发酵产物的总体香味主要为蘑菇香，水果香和花香。樟芝的蘑菇 味主要由c 8 脂肪族化合物贡献，包括3 辛醇，1 辛烯3 醇等。一些内酯类物质，比如7 - 辛内酯和】，癸内酯等，对樟芝发酵产物所具有的水蜜桃香味贡献较大。另外，一些萜烯 类和萜醇类化合物( 如t - 杜松醇、l 芳樟醇等) 所具有的植物香味对樟芝发酵产物的香 味也具有不同程度的贡献，其中以l 芳樟醇( 柑橘味) 的香气强度较大。 在单因素实验的基础上利用响应面法确定了樟芝胞内三萜提取的最优工艺参数。最 终确定樟芝三萜提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度8 6 ，提取温度7 5 。c ，液固比3 7 ，提 取次数2 次。在此条件下樟芝三萜得率理论最大值3 2 3 。同时对乙醇提取樟芝胞内三萜 的动力学进行了研究。根据f i c k 第二定律导出的数学模型与樟芝胞内三萜实际提取过程 较为一致，l n c j ( c c ) 与时间t 具有良好线性关系，表明樟芝菌丝体三萜类化合物的溶 出速度由孔内扩散控制。 研究了大孔树脂富集樟芝胞外三萜的工艺。通过静态和动态吸附性能的比较，筛选 出对樟芝胞外三萜类化合物吸附性能较好的大孔树脂心1 6 ，并优化了其对三萜类化 合物的分离条件：被分离样品溶液的p h 为6 0 ，溶液中三萜类化合物的初始浓度为0 9 7 m g m l ，流速为2m l m i n ，解吸附溶剂为乙醇。大孔树脂对于樟芝胞外三萜的吸附主要 是通过范德华力、辅以氢键作用而进行的。通过方程拟合，证明大孔树脂对三萜类化合 物的吸附为单层吸附。且吸附过程中，温度升高会减少吸附量。 建立酒精性肝损伤细胞模型并对樟芝发酵产物的保肝作用进行了评价。结果表明， 樟芝发酵产物中对酒精性肝细胞损伤具有保护作用的物质主要存在于菌丝体中，菌丝体 乙醇提取物和水提取物均具有保护酒精性肝细胞损伤的作用。樟芝菌丝体醇提物( 2 5 p g m l ) 和水提物( 2 0 0 t g m l ) 处理酒精性肝损伤细胞4 8h 后，细胞存活率分别提高 为5 7 7 1 和6 3 6 0 ，与乙醇诱导组相比具有显著性差异。 关键词：樟芝，深层培养，三萜类化合物，保肝，成分分析，优化 a b s 仃a c t a b s t r a c t a n t r o d i ac a m p h o r a t a ，an e wb a s i d i o m y c e t ei nt h ep o l y p o r a c e a e ( a p h y l l o p h o r a l e s ) d i s t r i b u t e do n l yi nt a i w a n i sw e l lk n o w ni nt a i w a nu n d e rt h en a m e “n i u c h a n g k u o r “n i u - c h a n g c h i h ”d u et oi t sp o t e n tb i o l o g i ca c t i v i t i e s i n v e s t i g a t i o n sr e v e a l e dt h a ta n t r o d i a c a m p h o r a t ah a se x t e n s i v eb i o l o g i c a la c t i v i t i e s ，s u c ha sh e p a t o p r o t e c t i v ee f f e c t ，a n t i h e p a t i t i s bs u r f a c ea n t i g e n ，a n t i o x i d a t i o na n da n t i c a n c e ra c t i v i t i e s i nt h i ss t u d y , t h ea n t r o d i a c a m p h o r a t as t r a i np r e s e r v e di nt h el a bw a si d e n t i f i e db ym o l e c u l a rb i o t e c h n o l o g y , a n d o b s e r v e do ni t sb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s t 1 1 ec u l t u r ec o n d i t i o no fa n t r o d i ac a m p h o r a t aw a s o p t i m i z e dt oi n c r e a s et h et r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o n m e a n w h i l e ，t h eb i o a c t i v ec o m p o n e n t so f a n t r o d i ac a m p h o r a t ac u l t u r e db y5lf e r m e n t o rw e r ee x t r a c t e da n da n a l y z e d f u r t h e r m o r e ， t h ep r o t e c t i v ee f f e c to fc o m p o n e n t so fa n t r o d i ac a m p h o r a t ai ns u b m e r g e dc u l t u r eo n e t h a n 0 1 i n d u c e dl i v e ri n j u r yw a se v a l u a t e d 丑l ea n t r o d i ac a m p h o r a t as t r a i np r e s e r v e di nt h el a bw a si d e n t i f i e db ya n a l y z i n gi t s18 s r 【) n aa n di t sr d n as e q u e n c e s m 1 e nc o m p a r e dw i t ht h ed a t ai nt h en c b id a t a b a s e i ti s c o n f o r m e dt h a tt h ep r e s e r v e ds t r a i nw a sa n t r o d i ac a m p h o r a t a m e a n w h i l e t h eb i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c so ft h es t a i nw e r ee v a l u a t e d ，a n dt h ea n t h r o c o n i d i ap r o d u c e di ns u b m e r g e d c u l t u r ew e r eo b s e r v e d ： 乃es p e c t r o p h o t o m e t r i cq u a n t i t a t i v em e t h o dw a se s t a b l i s h e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to f t o t a lt r i t e r p e n o i do fa n t r o d i ac a m p h o r a t ai ns u b m e r g e dc u l t u r eb yu s i n gv a n i l l i n - p e r c h l o r i c a c i da st h ed e v e l o p e r t h er e a c t i o nc o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e d t a k i n go l e a n o l i ca c i da st h e s t a n d a r d ，5 v a n i l l i n a c e t i ca c i d ( o 3m l ) a n dp e r c h l o r i ca c i d ( 1m l ) a st h ed e v e l o p e r ，a f t e r b e i n gi n c u b a t e da t6 0 0 cf o r2 0r a i nt h eo dv a l u eo fs a m p l es o l u t i o nw a sd e t e r m i n e da t5 5 0 n l n 田：l i sm e t h o do p e r m e dc o n v e n i e n t l y a n dt h er e s u l tw a ss t a b l ea n dr e p e a t a b l e i no r d e rt oi n c r e a s et h et r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o n t h ec u l t u r ec o n d i t i o no fa n t r o d i 口 c a m p h o r a t aw a so p t i m i z e db ym e t h o do fo n e v a r i a b l e a t a t i m e t h eo p t i m i z e dr e s u l tw a s s h o w e da sf o l l o w i n g ：i n o c u l 啪、i t hs p o r e sa t1 5 3 10 3c e l l m l t e m p e r a t u r eo f2 6o c r o t a t i o ns p e e do f10 0r p m ，i n i t i n a lp ho f4 5 ，c u l t u r i n gf o r1 2d t h eo p t i m i z e dm e d i u mw a s g l u c o s e2 0 0g l ，p e p t o n e 10 0 g l ，m g s 0 41 0g l ，k h 2 p 0 42 0g l ，b r a n2 0g l f u r t h e r m o r e ，t h ev a r i a b l e st h a ts i g n i f i c a n t l ya f f e c t e dt h eb i o m a s sa n dt r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o n o fa n t r o d i ac a m p h o r a t aw e r eo p t i m i z e db yr c c d a n dt h er e s u l t sw e r et r a i n e db yb p a r t i f i c i a ln e u r a ln e t w o r k ( a n n ) g e n e t i ca l g o r i t h mw a su s e dt oo b t a i nt h eo p t i m a lr e s u l t s ： i n o c u l u mo f1 0 9 x 1 0 c e l y m l ，g l u c o s eo f3 2 9 3g l ，p e p t o n eo f2 8 1g l ，s o y b c a nf l o u ro f 2 01 g l 1 1 1 ep r e d i c t e dt r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o nw a s6 3 1 4m g ，l t h ee x p e r i m e n t a lr e s u l t s h o w e dt h a tt h et r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o nu n d e rt h eo p t i m a lc u l t u r ec o n d i t i o nr e a c h e dt o 5 5 8 9 士2 4 3m g l 、析md i f f e r e n c e11 4 8 a sc o m p a r i n gt ot h ep r e d i c t e dd a t a i tw a si n c r e a s e d t o2 21 6 a sc o m p a r e dw i t ht h ep r e o p t i m i z e dy i e l d2 5 2 2m e i e f f e c t so fe x t r a c t sf r o ms t e r na n dl c a v eo fc i n n a m o m u mc a m p h o r ao nt h e b i o m a s s t r i t e r p e n o i dy i e l da n dt r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o no fa n t r o d i ac a m p h o r a t aw e r ee v a l u a t e d p e t r o l e u me t h e ra n de t h y la c e t a t ee x t r a c to fs t e ma n dl c a v eo fc i n n a m o m u mc a m p h o r ac o u l d p r o m o t et h et r i t e r p e n o i dy i e l do fa n t r o d i ac a m p h o r a t a 0 0 5g lp e t r o l e u me t h e re x t r a c to f g i a b s t r a c t s t e mo fc i n n a m o m u mc a m p h o r a ( p e s ) s h o w e dt h e 伊e a t e s ta c t i v i t y t h et r i t e r p e n o i dy e i l d r e a c h e dt o2 3 2 0m e d g ，i n c r e a s e d3 0 7 8 a sc o m p a r et ot h ec o n t r 0 1 at o t a lo f3 9c o m p o u n d s w e r ei d e n t i f i e di nt h ep e sb yg c m s ，h e r e i n t o ，t e r p e n o i d s ( 2 8k i n d s ，5 0 8 6 ) i n c l u d i n g9 m o n o t e r p e n o i d s ( 3 0 5 7 ) a n d19s e s q u i t e r p e n o i d s ( 2 0 2 9 ) w e r et h em a i nc o m p o u n d s f u r t h e r m o r e ，e f f e c to fd i f f e r e n tc o m p o u n di np e so nt h eb i o m a s s ，t r i t e r p e n o i dy i e l da n d t r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o no fa n t r o d i ac a m p h o r a t aw a se v a l u a t e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a t a - t e r p i n e o lc o u l dp r o m o t et h ey i e l da n dp r o d u c t i o no ft r i t e r p e n o i d sa n dv o l a t i l et e r p e n o i d so f a n t r o d i ac a m p h o r a t a ，a n di n f l u e n c e dt h eb i o s y n t h e s i sp a t h w a yo ft e r p e n o i d si na n t r o d i a c a m p h o r a t a e f f e c t so fr o t a t e s p e e d a n di n o c u l u mo nt h e t r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o no fa n t r o d i a c a m p h o r a t aw e r ee v a l u a t e di n5lf e r m e n t o r t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h eo p t i m a lr o t a t es p e e d w a s5 0r p m ，a n dt h eo p t i m a li n o c u l u mw a s1 0 xl0 5s p o r e s m l t h eb i o m a s sr e a c h e dt ot h e h i g h e s t ( 6 51 l ) a t7 t hd a y , w h i l et h et r i t e r p e n o i dp r o d u c t i o nr e a c h e dt oh i g h e s t ( 4 8 9 0 ) a t 8 t h d a y 、， t h ef e r m e n t e dp r o d u c to fa n t r o d i ac a m p h o r a t ac u l t u r e db y5lf e r m e n t o rw a sa n a l y z e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a ta n t r o d i ac a m p h o r a t ac o n t a i n e d8k i n d so fm i n e r a l s r e l a t i v e c o n t e n t so fs a t u r a t e df a t t ya c i di nm y c e l i a , s p o r ea n dc u l t u r eb r o t hw e r e5 5 3 2 ，5 8 6 2 a n d 6 0 7 9 ，r e s p e c t i v e l y a n df o ru n s a t u r a t e df a t t ya c i dw e r e4 3 15 ，4 0 5 2 a n d3 9 18 ， r e s p e c t i v e l y at o t a lo f18a m i n oa c i d sw e r ed e t e c t e di nm y c e l i a ( 2 6 4 9 lo o g ) a n ds p o r e s ( 3 0 5 6g 1 0 0 9 ) a m o n gw h i c hg l u t a m i ca c i dw a st h eh i g h e s t b o t hi n t r a c e l l u a rp o l y s a c c h a r i d e s ( i p s ) a n de x t r a c e l l u a rp o l y s a c c h a r i d e s ( e p s ) i na n t r o d i ac a m p h o r a t aw e r ec o m p r i s e do f m a n o s e ，g l u c o s ea n dg a l a c t o s eb u ti nd i f f e r e n tp r o p o r t i o n at o t a lo f4 9a n d5 5k i n d so fv o l a t i l ec o m p o u n d sw e r ei d e n t i f i e di nt h ec u l t u r eb r o t ha n d m y c e l i ao fa n t r o d i ac a m p h o r a t ai ns u b m e r g e dc u l t u r e ，r e s p e c t i v e l yi n c l u d i n g2 2a l c o h o l s ，8 k e t o n e s ，7a l d e h y d e s ，2 3e s t e r s ，5t e r p e n eh y d r o c a r b o n sa n d3a r o m a t i c s t h eo v e r a l lf l a v o ro f t h ea n t r o d i ac a m p h o r a t ai ns u b m e r g e dc u l t u r ew a sd o m i n a t e db ym u s h r o o m l i k e ，f r u i t ya n d f l o w e r yi m p r e s s i o n s t h ei m p r e s s i o n m u s h r o o m l i k e w a sm a i n l ya t t r i b u t e dd u et oas e r i e so f c sa l i p h a t i cc o m p o n e n t s ，i n c l u d i n g3 - o c t a n o l ，1 - o c t e n - 3 一o l ，( e ) - 2 - o c t e n - 1 - o l ，3 - o c t a n o n e ， 1 - o c t e n - 3 一o n ea n d 1 - o c t e n 一3 一y l a c e t a t e s e v e r a ll a c t o n e ss u c ha s y - o c t a l a t o n e a n d y - u n d e c a l a c t o n ew e r ea c c o u n t e df o rt h ep e a c h l i k ef r u i t yo d o ro fs u b m e r g e d l yc u l t u r e d a n t r o d i ac a m p h o r a t a f u r t h e r m o r e ，s e v e r a lf l o w e r - l i k eo d o r a n t sw e r ep i c k e du pi nv a r i o u s i n t e n s i t i e sd u r i n gt h eg c - oi n v e s t i g a t i o no ft h ec u l t u r eb r o t h ，w i t hl l i n a l o o l 百v i n gt h e s t r o n g e s ti m p a c t t h ee x t r a c t i o no ft o t a lt r i t e r p e n o i d si nt h em y c e l i ao f 彳刀护d 击口c a m p h o r a t aw a so p t i m i z e d b yt h em e t h o do fo n e v a r i a b l e a t - a - t i m ea n dr e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g y ( r s m ) t h e o p t i m a lc o n d i t i o n sf o rt h ee x t r a c t i o no ft o t a lt r i t e r p e n o i d si n c l u d e dt h ef o l l o w i n gp a r a m e t e r s ： e t h a n 0 18 6 ，e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r e7 5 。c ，l i q u i d s o l i dr a t i o3 7 ，a n de x t r a c t i o nt w i c e t h e p r e d i c t e dy i e l do ft r i t e r p e n o i d sw a s3 2 3 f u r t h e r m o r e t h ef i c k ss e c o n dl a wo fd i f f u s i o n w a su s e dt oe s t a b l i s h t h ek i n e t i c se q u a t i o no fe x t r a c t i n gt r i t e r p e n o i d sp a r a m e t e r sf r o m m y c e l i ao fa n t r o d i ac a m p h o r a t a t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ek i n e t i c so nt h ee x t r a c t i o no f t r i t e r p e n o i d sa 孕e e dw i t ht h ef i r s t - o r d e rr a t ee q u a t i o n , a n dt h er a t e - d e t e r m i n i n gs t e pf o r e x t r a c t i o nw a st h ed i f f u s i o no ft r i t e r p e n o i d st h r o u g ht h eh o l e si np a r t i c l e s a b s t r a c t 刀玲t r i t e r p e n o i d si nt h ec u l t u r eb r o 纺w e r ea d s o b e db ym a c r o p o r o b sr e s i n 。c o m p a r e d w i t hs t a t i ca n dd y n a m i ca b s o r p t i o np e r f o r m a n c e m a c r o p o r o u sr e s i nx a d 16w a ss e l e c t e dt o a d s o r bt h es t e r o i d sf r o mc u l t u r eb r o t h f u r t h e r m o r e ，t h ec o n d i t i o n so fm a c r o p o r o u sr e s i nf o r a d s o r b i n gt h ef u n g a ls t e r o i d sf r o mf e r m e n t a t i o nb r o t hw e r eo p t i m i z e d n l ep ho fs o l u t i o no f 6 0 ，t h ei n i t i a ls t e r o i dc o m p o u n dc o n c e n t r a t i o no f0 9 7m g m l ，w i t haf l o wr a t eo f2m l m i n ， d e s o r p t i o ns o l v e n to fe t h a n 0 1 m a c r o p o r o u sr e s i nc o m p o u n d sf o rt r i t e r p e n o i da d s o r p t i o n t h r o u g hv a nd e rw a 甜sf o r c e ，s u p p l e m e n t e db yt h er o l eo ft h eh y d r o g e nb o n d t h ef i t t i n g e q u a t i o np r o v e st h a tt h em a c r o p o r o u sr e s i na d s o r bt r i t e r p e n o i db ys i n g e r - l a y e ra d s o r p t i o n i n t h ep r o c e s so fa d s o r p t i o n t h et e m p e r a t u r e , v i i ld e c r e a s et h ea d s o r p t i o ne 街c i e n c y t h eh e p a t o p r o t e c t i v ee f f e c t so ft h ee x t r a c t so fa n t r o d i ac a m p h o r a t ai ns u b m e r g e dc u l t u r e o ne t h a n 0 1 i n d u c e dl i v e re e l li n j u r yw e r ee v a l u a t e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a te t h a n o le x t r a c t a n dw a t e re x t r a c to fm y c e l i ap o s s e s s e dt h ep o t e n th e p a t o p r o t e c t i v ee 腩c t t h es u r v i v a lr a t eo f e t h a n o l - t r e a t e dl i v e rc e l l si n c u b a t e dw i t he t h a n 0 1e x t r a c t ( 2 5b g m l ) a n dw a t e re x t r a c t ( 2 0 0 肛g r n l ) f o r4 8hi n c r e a s e dt o 57 71 a n d6 3 6 0 r e s p e c t i v e l y , w h i c hw a ss i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n tw i t ht h a to ft h eg r o u pt r e a t e de t h a n o la l o n e k e y w o r d s ：a n t r o d i ac a m p h o r a t a ，s u b m e r g e dc u l t u r e ，t r i t e r p e n o i d s ，h e p a t o p r o t e c f i v e ， c o m p o n e n ta n a l y s i s ，o p t i m i z a t i o n v 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南 大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料与我一同工作的同志 对本研究所做的4 主4 - , r 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意 签名： 日 期- 一牵! ! ：兰一 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定： 江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印，缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文， 并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致 保密的学位论文在解密后也遵守此规定 签名： 第一章绪论 1 1 樟芝简介 1 _ 1 1 樟芝的彤态 第一章绪论 樟芝，又名牛樟芝或牛樟菇，属于担子菌纲、非褶菌目、多孔科、多年生担子苗， 只生长在台湾地区的牛樟树( c i n n a m o m u mc a m p h o r a ) 腐朽树干的内壁，有着台湾“森 林红宝石”的美誉。作为台湾特有物种，历史上樟芝长期放人们作为解酒保肝的传统药 方，用于治疗肝脏疾病食物和药物所引起的中毒症状以及腹泻，腹痛，高血压，皮肤 发痒和肿瘤疾病等。然而，作为一种新物种，樟芝直到1 9 9 0 年才被报道。此后，樟芝引 起丁公众的极大关注。由于樟芝强烈的寄主专一性、自然界数量稀少、怠好的生物活性， 导致樟芝的价格也水涨船高，目前被称为是全世界最昂贵豹野生真菌，市价高达每公斤 1 5 0 0 0 美元。价值远高于灵芝、人参、冬虫夏草等传统药材，因此可说是药材中的王中 之王。 樟芝分布于台湾桃园、苗栗、南投、高雄、台东等地海拔4 5 0 - 2 0 0 0 m 之闯的山脉， 其生长期为每年的六月到十月份。樟芝子实体味苦，具有强烈的樟树香气，外形为板状 或钟状，无柄( 圈1 1 ) 。子实体初期新鲜时呈现橘红色、橘褐色，老熟时会渐渐转变 为棕褐色，之后变为黑色。子实体表面有微细绵密的菌孔( o4 06m m ) ，管口小，圆 形至角形，呈深红色，内有孢子。樟芝菌丝体分为骨架菌丝( s k e l e t a lh y p h a e ) 及营养菌 丝( g e a e r a 矗v eh y p h a e ) ，骨架菌丝直径约为45m ，营养菌丝直径约为2 - 35p i n ，且具 有锁状联合( c l a m p ) ，其担子柄( b s i d i a ) 呈现棍棒状，长约0 30 50 1 u n x l 2 1 4 岫。 担袍子( s p o r e s ) 的型态为平滑无色的透明微弯柱型，大小约为垂1 5 2g m x 35 - 50 脚口 3 1 。 圉1 - i 牛樟树( a ) 和樟芏子舞体( b ) f i gl - t c i n n a r a o m u mk c m e h i r a e ( a ) a n d a n t r o d i ac o m p h o r a r a f r u i t i n g b o d i e s ( b ) 江南大学博士学位论文 1 1 2 樟芝的分类与命名 樟芝的分类与命名是相当具有戏剧性的，至今多个拉丁学名已被用来描述该种真 菌。樟芝新种最早发表于1 9 9 0 年，当时被归到灵芝属( g a n o d e r m a ) ，命名为g a n o d ( ? r m a c a m p h o r a t u mm z a n g & c h s u 4 1 。后来经由研究发现其型态特征与灵芝属明显不同， 推断原因是灵芝属的孢子污染了模式标本【5 1 。1 9 9 5 年，张东柱等人针对樟芝子实体外观、 气味、生长速率与孢子显微结构作了记述，认为樟芝的形态特征较符合薄孔菌属 ( a n t r o d i a ) ，所以将樟芝以新种发表并将其学名命名为a n t r o d i ac i n n a m o m e at t c h a n g & w n c h o u 【6 】。1 9 9 7 年，吴声华等人经过研究发现此前两个学名描述的是同一种真菌， 因此于整合前二次的文献，依照国际植物命名规则( i n t e m a t i o n a lc